Anda di halaman 1dari 26

I.

ANTECEDENTE

El 24 de marzo de 1989, un petrolero de mas de 300 metros de eslora, llamado Exxon Valdez y cargado son un milln y medio de barriles de crudo, navegaba bordeando la costa de Alaska. Haba salido horas antes del puerto de Valdez con rumbo a california para depositar su carga en una refinera de la Exxon. Una inexplicable cadena de errores cometidos por el guardacostas, el capitn y su tercero llevo al barco hasta los arrecifes de Blight. Aunque intentaron evitarlos, no fue posible y el barco se incrusto en uno de ellos, produciendo as una enorme grieta de casco y derramndose parte del crudo . La baha de Prince William se cubri con mas de 30 000 toneladas de crudo (40 000 segn otras fuentes) que pocos das despus afectaron a amas de 1 000 km de la costa. Veinte aos antes, quiz no el primer accidente de este tipo, pero si el que provoco un aldabonazo imprtate en la opinin publica, fue el del petrolero Torrey Canyon al suroeste de Cornwall, Inglaterra. Entonces, como en 1989, como ahora en 2003, las medidas que se tomaron para minimizar el vertido (en aquel caso utilizaron de detergentes y bombardeo del barco) fueron terriblemente controvertidas y finalmente, una buena parte de la cosa britnica , incluso de la Bretaa francesa, fue seriamente afectada. Y ya en aquellos aos sesenta, la idea de que la biodegradacion del petrleo vertido en un accidente se poda mejorar con la adiccin de nitrgeno y fosforo inorgnico haba aparecido en los crculos cientficos. Uno de sus principales impulsores (Ronald Atlas) acabo tiempo despus trabajando en la limpieza de las cosas de Alaska tras el vertido del Exxon Valdez. En efecto, lo cierto es que esta tecnologa comenz definitivamente a llamar la atencin en los aos sesenta, por entonces reducida a experimentos de laboratorio o a pequeas demostraciones en el campo. Sin embargo, otro famoso accidente, el de Amoco Cadiz en 1978, supuso un nuevo impulso a la investigacin. A partir de entonces, el numero fracaso comenz a disminuir y a finales del ochenta, la comunidad cientfica ya tenia la certeza de que si no la mejor, si era una buena manera de enfrenarse a los efectos de los vertidos de petrleo. El ltimo y ms importante impulso vendra meses despus del accidente del Exxon Valdez

II.

PETRLEO Y COMPOSICIN

El petrleo es un fluido natural mezcla de hidrocarburos y otros componentes minoritarios que se forman bajo la superficie terrestre como consecuencia de la descomposicin de organismos marinos y, en menor medida, de organismos terrestres que han sido arrastrados al mar. Estos restos se mesclan con arena fina y limos y se depositan en cuencas marinas tranquilas. A medida que van acumulndose depsitos adicionales, la presin sobre los situados ms bajos se multiplica por varios miles y la temperatura aumenta varios cintos de grados. El cieno y la arena se litifican y se transforman en esquistos y areniscas, los carbonatos precipitados y los restos de capazones se convierten en caliza y los tejidos blandos de los organismos muertos se convierten en petrleo y gas natural. En este proceso se pueden distinguir tres etapas diagnesis, catagnesis y metagenesis. La primera ocurre hasta una temperatura de 50 60C, produciendo queroseno que es el precursor del petrleo. Dependiendo fundamentalmente de la temperatura, el queroseno evoluciona hacia petrleo o gas natural en las fases de catagenesis o metagenesis, respetivamente. Un vez formando el petrleo, fluye hacia arriba atraves de la superficie terrestre al ser su densidad menor que las arenas y las rocas. Con frecuencia el petrleo se queda atrapado entre una capa impermeable, formando un deposito en el que los fluidos se segregan dependiendo de su densidad. As, el petrleo se suele encontrar por debajo de una atmosfera de gas y flotando en el agua. El gas natural esta compuesto por metano y etano. El metano es el mas ligero de todo los hidrocarburos y es bastante en ambientes anaerbicos. Es producido por un grupo de bacterias llamadas metanogenicas y forma los depsitos de gas natural. Este compuesto puede ser eliminado por bacterias metanotroficas. En cuanto a su composicin, el petrleo es una mezcla compleja de hidrocarburos aromticos, naftalenicos y parafinicos. La proporcin vara segn su origen. Existen muchas clasificaciones del petrleo, la mayora enfocados a su valor comercial. Aqu se clasificaran por su composicin qumica, propiedad que, a la postre, esta relacionad con s valor comercial. No obstante, a lo largo del capitulo se harn referencias a otras definiciones. Si se tienen en cuanta todos los posibles ismeros y que las fracciones mas pesadas del petrleo (asfalto) llegan a tener cadenas de mas de 20 C, resulta obvio concluir que el petrleo es una mezcla muy compleja. Ese echo, como se vera mas adelante, es clave a la hora de entender su biodegradacin. Adems de hidrocarburos, el petrole contiene azufre, nitrgeno, metales pesados y otra serie de constituyentes en menor proporcin. Desde un punto de vista tcnico es muy importante el contenido total de hidrocarburos de un petrleo (TPH), y que es una medida

de la calidad del petrole, si bien es un parmetro que tambin resulta til para predecir su biodegradabilidad y seguir la eficacia con que se esta produciendo la biodegradacin del mismo. Un petrleo es de mejor calidad cuanto mayor sea su TPH. El petrole se procesa normalmente antes de su uso mediante tcnicas de destilacin y modificacin dando lugar a derivados con distinta composicin. Eso origina una nueva clasificacin de los componentes del petrleo diferente a la qumica, aunque, evidentemente, una y otra estn relacionadas. Los componentes que no son hidrocarburos presentes en el petrleo tiene una gran influencia en su valor comercial y biodegradabilidad, por lo que a continuacin e trata de la manera que afecta cada uno. a) Azufre (<0,5 - 5% en el petrleo crudo) Esta presente en forma de tioles, dibenzotiofenos, tiofenos o cidos sulfonicos, azufre elemental y cidos sulfhdrica. La presencia de azufre en el petrleo es perjudicial, ya que su combustin produce lluvia acida. El azufre inorgnico se puede retirar con relativa facilidad por mtodos fsicos- qumicos, pero el orgnico es muy difcil, hasta el puente de hacer que no sea rentable utilizar un determinado petrleo. Desde la perspectiva de la biotecnologa ambiental, es decir de la biodegradabilidad, existen datos que arecen contradictorios en cuanto al efecto que tiene el azufre orgnico del petrleo. Por otra, se sabe que cuando el petrleo se degrada, aumenta su contenido en azufre. Esto ultimo es indicativo de que se estn degradando preferentemente fracciones no azufradas, lo cual no contradice la utilizacin de parte del azufre por las bacterias ya que el contenido en azufre en carbono y adems, el hidrocarburo es utilizado por las bacterias como fuente de energa. b) Compuesto nitrogenados (<0.25 0.8 % en el petrleo crudo) El nitrgeno que se encuentra en el petrleo es de tipo orgnico y se localiza mayoritariamente en compuestos aromatices tipo piridina y en heterociclos aromticos como el indol. Estos compuestos son txicos debido al carcter mutagenico de algunos de sus congneres. Adems, su combustin produce xidos de nitrgeno, que junto con los azufre provoca lluvia acida. Entre los derivados del petrleo se encuentran las gasolinas, dad la importancia del uso de los combustibles fsiles para el transporte, en los ltimos aos se ha puesto un gran

inters en promover un cambio en la composicin de las gasolinas para evitar algunos de los efectos negativos de las mismas sobre el medio ambiente y la salud humana. A este fin responde la reduccin y posterior prohibicin de los aditivos plomadas, as como la limitacin de los compuestos aromticos y se han introducido nuevos aditivos oxigenados para adecuar el octanaje de las gasolinas. Gracias al empleo de estos aditivos se han bajado las emisiones de compuestos orgnicos voltiles, xidos de nitrgeno y otros compuestos txicos. El mas empleado de estos ha sido el metil tert-butil eter (MTBE), seguido por el etanol y otros de uso mas limitado como el metanol, ter- butil alcohol (TBA), el pert- amil metil eter (TAME) o el diisopropil eter (DIPE). El MTBE tiene la ventaja de su bajo coste y su fcil produccin. La degradacin anaerbica de hidrocarburos saturados lineales requiere tambin un primer paso de activacin. El oxidante que emplean las bacterias anaerbicas para activar los hidrocarburos suele ser fumarato. Una vez activado el alcano, una serie de oxidantes, deshidrataciones e hidraciones permite a dichas bacterias utilizar el hidrocarburo como fuente de carbn y de energa. Dicho proceso se esquematiza.

Imagen1. Estructura qumica de los compuestos mayoritarios del petrleo.

III. III.1.

BASES BIOQUIMICAS Y GENTICAS DE LA DEGRADACION DE PETROLEO Bases bioqumicas

Por su composicin, el petrleo resalta e una excelente fuente de carbono y energa. Es decir, es un buen combustible para los microrganismos al igual que lo es para la industria. Lo que ahora se estudia son las rutas bioqumicas por las que las bacterias lo utilizan. La biodegradacin de los hidrocarburos ocurre mayoritariamente en condiciones aerbicas. La degradacin anaerbica, que es minoritaria aunque no despreciable, se pens durante mucho tiempo que no era posible. Ello es debido a que la degradacin anaerbica es mucho ms lenta que la aerbica y tardo en describirse. Adems, se supuso que si exista una degradacin anaerbicas no podran formarse depsitos petrolferos, y que estos habran sido consumidos a lo largo de los periodos geolgicos por accin bacteriana. Hasta finales del siglo XX no empezaron a describirse procesos de biodegradacin anaerobios, con nitrato, sulfato y Fe(III) como oxidantes. Para explicar que las bolsas petrolferas resistentes no se hayan degradado a lo largo de tiempo existente varias teoras. Una es que el petrleo se genera a grandes temperaturas por tanto se encuentra depositado en un medio prcticamente estril (paleoesterilizacion). A ello se suma que para que el petrleo se degrade en condiciones anaerbicas se necesitan oxidantes como el nitrato o el sulfato, que pueden ser limitantes dada la enorme masa de las bolsas de petrleo. Sea su biodegradacion anaerbica o aerbica, las bacterias necesitan un comburente para oxidar los hidrocarburos. Este es el oxigeno en aerbicos y nitrato, sulfato o Fe (III) en anaerobiosis. Los hidrocarburos son qumicamente muy inertes degradacin. a) Hidrocarburo Alifticos La degradacin de hidrocarburos alifticos saturados es un proceso que ocurre preferentemente en condiciones de aerobiosis. La ruta consiste en la oxidacin del grupo es necesario un primer paso de

activacin que los hacen mas hidrofilicos susceptibles de posteriores reacciones de

metilo terminal hasta carboxilo, convirtindose as un compuesto hidrfobo en un acido grao que se puede asimilar por B-oxidacin. La oxidacin es secuencia, pasado de metilo a alcohol, aldehdo, y finalmente acido que queda activado en forma de acil-coenzima A. el primer paso requiere oxigeno molecular y esa catalizado por la alcano oxidasa. No siempre la oxidacin inicial ocurre en un carbono terminal de la molcula. El produce final es acetil-CoA. Los microorganismos capaces de llevar a cabo estas reacciones son nocardia, pseudomona y mycobacterium. La degradacin de anaerbica de hidrocarburos insaturados lineales requiere tambin un primer paso de activacin. El oxidante que emplean las bacterias anaerbicas para activar los hidrocarburos suele ser fumarato. Una vez activado el alcano, una serie de oxidaciones, deshidrataciones e hidraciones permiten a dichas bacterias utilizar el hidrocarburo como fuente de carbono y de energa. b) Hidrocarburo aromticos La degradacin de compuestos aromticos naturales en condiciones aerbicas. En este contexto concreto cabe descarta que los hidrocarburos aromticos son uno de los componentes de petrleo que presenta mayo persistencia en el medio ambiente debido a su estabilidad. El petrleo contiene cantidad variables de hidrocarburos aromticos simples, como el benceno o el tolueno, y policiclicos (PAH) que son los ms txicos. La degradacin de muchos compuestos aromticos transcurre a travs de los intermediarios catecol y protocatecuato, que posteriormente son atacados por dioxigenasas. De esta forma se generan intermediarios del ciclo de krebs tales como succinato, acetil- CoA y piruvato. En condiciones anaerbicas tambin se ha descrito la activacin de aminocidos aromticos con fumarato, al igual que ocurre con los alifticos.

III.2.

Bases genticas:

En este apartado se comentaran brevemente los genes y operones que codifican las enzimas estudiadas anteriormente as como su regulacin. Es de destacar que, como en otras rutas catablicas, genes responsables de la degradacin de algunos componentes del petrleo se encuentra localizados en plsmidos. Desde un punto de vista histrico merece destacar dos hitos. El primer es que fueron los plsmidos catablicos relacionados con la degradacin de hidrocarburos los primeros que se descubrieron y dieron luz a la posibilidad de expansin horizontal de las rutas metablicas (plsmidos SAL y OCT, en 1972-73). El segundo, muy importante para la biotecnologa, es que a expansin de rutas catablicas relacionadas con la biodegradacin de petrleo mediante plsmidos fue la base de la primera patente que se hizo de un ser vivo. Este acontecimiento va mas all de lo meramente anecdtico, ya que la batalla legal que gano Chakrabarty en el tribunal Supremo de los Estados Unidos en 1980 sent un precedente que abri las puertas de nuevas patentes y permito en buena medida el desarrollo de una nueva industria, la Biotecnologa. La patente Chakrababarty se baso en la construccin de una bacteria del gnero Pseudomonas en la que se introdujeron cuatro plsmidos, de los cuales al menos dos se mantienen establemente, y que codifican la degradacin de varios componentes del petrleo. Todos los plsmidos eran naturales, y tambin la bacteria, pero el resultado es algo: que no acurre accidentalmente en la naturaleza y, por tanto se considero que era susceptible de patentarse.

Cuadro1. Tipos de plasmido

a) El plsmido TOL (pWWO) de pseudomonas confiere a esta bacteria la capacidad de degradar toluenos y xilenos. Hay dos operones separados fsicamente: el operon upper que es e responsable de la degradacin de tolueno/xileno hasta benzoato/toluato y el operon meta que transforma esos compuestos en piruvato y acetaldehido a travs de catecol. Como protenas reguladoras actan XyIS y XyIR. b) El plsmido NAH7, que tambin se ha encontrado en otra estirpe de pseudnimas, es capaz de degradar naftalenos. En este caso los genes se agrupan en dos operones independientes: la ruta upper se encarga de la degradacin de c) El plasmido OTC de peseudomonas oleovoran degrada alcanos liveanos (6-13 C) que van sufriendo una oxidacion desde alcohol, aldehidoy acido pasando a formar pare de metabolismo de cidos grasos. La protena reguladora es AikS, activador en presencia de alcanos. IV. DISPERSIN DE CONTAMINANTES EN SUELOS Y ACUFEROS.

Una vez que ha ocurrido un derrame de contaminantes en el suelo, los fenmenos de capilaridad y gravedad los conducen hacia las aguas subterrneas, por ello, se hace necesario entender la forma del transporte. En trminos generales, el comportamiento de los contaminantes est en funcin de sus caractersticas fisicoqumicas en las que se incluyen principalmente densidad, solubilidad, viscosidad, adems de las caractersticas del medio que los rodea como son: el tipo de suelo, adsorcin, permeabilidad, tamao de las partculas, contenido de humedad y de materia orgnica, succin, profundidad del nivel del agua entre otros. Los factores climatolgicos como la temperatura y las precipitaciones pluviales tambin tienen influencia; todos los fenmenos fisico-qumicos definen el tamao y distribucin de la pluma de contaminacin en una zona. De acuerdo a su densidad, los compuestos orgnicos se clasifican en dos grupos: aquellos cuya densidad es menor a la del agua se denominan ligeros; mientras que a los que poseen una densidad mayor a la del agua se les conoce como densos.

La densidad determina los procesos de transporte en el acufero, por ejemplo: los ligeros tienden a formar una capa en forma de nata en el nivel fretico y se mueven horizontalmente en la direccin del flujo del agua subterrnea, tal y como lo hacen las gasolinas, aceites y el petrleo crudo; en cambio los densos migran hacia la base del acufero creando una columna a partir de la cual pueden viajar en la direccin del flujo de agua subterrnea contaminando el acufero, sus representantes son los Bifenilos Policlorados. Para formarse el modelo conceptual de un derrame, su migracin y dispersin; se hace el anlisis del esquema que aparece

Image1. Contaminacin suelo y de acufera

V.

BIODEGRADACION HIDROCARBURO DEL PETROLEO

La actividad de lo microrganismos es fundamental en el proceso de biorremedacion; su habilidad para degrada compuestos orgnicos y su capacidad de degradar los contaminantes presentes en el suelo, sugieren su importancia en los procesos naturales de recuperacin de suelos contaminados, beneficiando la calidad ambiental la capacidad de degradacin de los microrganismos. La comunidad microbiana presentes en los suelos contaminados tienden a estar dominadas por aquellas bacterias que pueden sobrevivir a la toxicidad presente en el ambiente siendo capaces de utilizar al hidrocarburo para vivir. Se ha demostrado que una gran variedad de bacterias, mohos y levaduras pueden oxidar hidrocarburo, utilizndolos como donadores de electrones. Muchas bacterias que se han aislado de los suelos que reciben petrleo son capaces de utilizar los hidrocarburos gaseosos etano, propano y butano, pero no el metano. El metano, el hidrocarburo ms sencillo, es degradado por un grupo especializado de bacterias llamadas bacterias metanotroficas; pero estos microrganismos no oxidan hidrocarburos de mayor nmero de tomos de carbono. Los microrganismos degradadores de diversos compuestos pueden aislarse de suelos de cultivo, bosques o praderas. El crecimiento microbiano o el tamao y productividad de una comunidad estn limitados por factores biolgicos y ambientales tales como: el numero de microrganismos presente en el suelo, la temperatura ambiental, la disponibilidad de oxigeno, y las concentraciones de nutrientes; especialmente oxigeno, fosforo, y hierro. Teniendo condiciones apropiadas los microrganismos se multiplican y compiten por el espacio. La cantidad de espacio disponible en el suelo disponible por lo general no esta limitada, pero hay un numero limitado de microrganismo hbitats apropiados que contienen nutrientes, oxigeno, etc., para que produzcan la oxidacin significativa de los hidrocarburos es necesario la presencia de oxigeno; en estas condiciones es posible que haya mas competencia por espacio utilizable que por espacio total, entonces si la proporcin del rea superficial y el volumen del suelo con los adecuados hay mas rea disponible para la colonizacin y por ende, el ataque por enzimas degradadoras es mayor y los contaminantes se descomponen acelera durante el rango de temperatura mas que

apropiado para la biorremediacion se presentes entre 20C y 40C , a la que se intensifica la actividad enzimtica de los microrganismos, acelerando al mximo los proceso de biodegradacin. La biodegradacin de compuesto requiere la de oxidacin de sustratos por oxigenasas, siendo necesario la presencia de oxigeno molecular en el medio. La concentracin de oxigenacin es una variable limitante para las fases de biodegradacin de lo hidrocarburos; si el contenido de oxigeno es muy bajo algunas proporciones del medio pueden volverse anaerbicos y afectar de manera negativa la biodegradacin. La oxigenacin del suelo permite la volatilizacin de los compuestos txicos. Los gneros de bacterias y hongos ms comunes, degradadoras de hidrocarburo son: BACTERIAS HONGOS Acinetobacter Arspergillus Artobacter Fusarium Brevibacterium Cladosporium Micrococcus Mucor Pseudmona Rhodotorula Strptomyces Sacharomycos Vibrio Trichorderma Cuadro2. Bacterias y hongos que degradan hidrocarburo

El termino hidrocarburo total de petrleo TPH . Se usan para descubrir una gran familia de varios cientos de compuestos qumicos originarios de petrleo crudo. Los TPM son una mezcla de compuestos qumicos compuestos principalmente por carbono o hidrogeno, y que hay sido divididos en grupos llamados fracciones de hidrocarburos de petrleo por eso es que la concentracin TPH es utilizado para establecer niveles de recuperacin de suelos o aguas contaminadas con petrleo mediante diferentes mtodos. La misma muestra analizada por diferentes mtodos pueden producir diferentes valores de TPH, por lo que es importante saber como se realizar cada determinacin. Entre los tipos de mtodos para medir TPH tenemos:

Mtodo que miden la concentracin de TPH: los mas comunes son cromatografa de gases, espectrometra infrarroja, anlisis gravimtrico e inmunoensayo

Mtodo que miden la concentracin de un tipo petrleo, cromatografa de gases, cromatografa de lquido de alto rendimiento y cromatografa de capa delgada.

Mtodo que mide concentracin de constituyentes individuales de petrleo: miden BTEX y PAM.

Para la medicin TPH en suelos contaminados por hidrocarburos de petrleo, el mtodo mas recomendable es el recomendado por la EPA () los resultados son expresados en miligramos de TPH por kilogramo de suelo. VI. VI.1. BIORREMEDIACION SUELO CONTAMINADO POR HIDROCARBURO Bioestimulacion in situ

El mtodo mas empleado cuando ocurren catstrofes por accidentes en el transporte de petrleo o de sus derivados, y, por tanto, al nico que nos referiremos. Como ya hemos explico, los hidrocarburos pueden constituir una excelente fuente de carbono para muchos microorganismos. De lo que se trata al aplicar esa tecnologa de la bioestimulacion es de equilibrar el carbono (hidrocarburo) con el resto de nutrientes y, si es posible, optimizar las condiciones ambientales. Se estimas que una proporcin razonable en peso C:N:P es 100:10:1, aunque esta puede variar dependiendo del residuo. Comparado con la formulacin de los medios de cultivo empleados en el laboratorio cabe resear que no es necesaria la adicin de micronutrientes, ya que estos suelen encontrarse en el suelo en las cantidades requeridas. Visto as, la bioestimulacion no varia conceptualmente de las tcnicas de abonado empleadas en agricultura. Cuando se aplica la bioestimulacion suele ser necesario fertilizar el suelo que se quiere descontaminar varias veces sucesivas. Ello es as porque si la cantidad de hidrocarburo vertido es muy grande la adicin de los fertilizantes necesarios de una sola vez podra resultar toxica. Conviene resalar que cuando se aade fertilizante, la segunda vez se observa un efecto mas drstico en la biodegradacion de hidrocarburos que tras la primera, al estar los microorganismos mejor adaptados a las nuevas condiciones y al haberse producido un

enriquecimiento selectivo de las estirpe degradadoras. A continuacin se detallan los aditivos que emplean en la bioestimulacion. Nitrgeno y fosforo. Estos dos elementos, en relacin con el carbono del petrleo, son la base para el diseo de un medio de cultivo que sirva de alimento a los microorganismos autctonos. El nitrgeno se puede aadir en forma oxidada (nitrato) o reducida (amonio de urea). El nitrato, adems de servir de fuente de nitrgeno para las bacterias, en las zonas poco aireadas puede ser el oxidante utilizado por las bacterias desnitrificantes para degradar hidrocarburos. Ambos factores hacen que su uso se prevea como muy adecuado. Sin embargo antes de su uso hay que tener en cuenta otros dos factores. En primer lugar que si la zona esta muy drenada, por ser muy solubles en agua la mayora de sus sales, el nitrato puede desaparecer con rapidez y no solo no tener efecto, sino que podra contaminar el acufero todava ms. En segundo lugar hay que tener en cuenta que puede ocurrir justo lo contrario si el nitrato queda atrapado por interacciones inicas al suelo. Carbono. Recientemente se ha propuesto la adicin de fertilizantes orgnicos para estimular la degradacin de hidrocarburos en el suelo. Parece en principio poco adecuado aadir mas carbono a un ecosistema que se encuentra sobresaturado de carbono. No obstante, los datos experimentales que existen son escasos y no cabe descartar de antemano esta tecnologa. Oligoelementos. No es necesario aadirlos al suelo. Agua. Despendiendo de las condiciones climatolgicas puede ser necesario regar el suelo. Ello se puede hacer a la vez que se fertiliza disolviendo en agua los compuestos a aplicar Surfactantes. El estado fsico en que se encuentre el petrleo es de enorme importancia en su biodegradacin. En los vertidos que se producen al mar, el petrleo tiende a expandirse sobre la superficie del agua formando una mancha. El oleaje lo ate con el agua formando una emulsin que favorece su degradacin, cosa que ocurre en mucha menor medida en el vertido del suelo. En cualquier caso, el la formacin de la emulsin es clave la presencia de surfactantes (detergentes o humectantes) bien sean

naturales o aadidos. Lo detergentes naturales, o biosurfractantes, los producen la enorme mayora de los microorganismos que degradan alguna fraccin del petrleo. Ello es ms importante cuanto mas insoluble en agua sea el hidrocarburo, ya que el primer paso para la degradacin es la biodisponiblidad. La adicin de dispersin exgenos para el tratamiento de vertidos se viene utilizado desde hace mucho tiempo pero con resultados variados. En 1967 se emplearon mas de 10 000 toneladas del detergente BP1002 (que contiene 12% de detergente noinico y 3% de estabilizante) para el tratamiento del vertido ocasionado por el hundimiento del petrleo Torrey Canyon en las costas Britanicas. Debido a la toxicidad del detergente empleado, e resultado fue que se agravo el problema y hubo un incremento considerable en la mortabilidad de la flora y fauna de la zona tratada. Adems, las zonas tratadas con el dispersante tardaron en recuperarse del vertido el doble del tiempo que las zonas no tratadas. Sin embargo, en las aguas francesas se empleo arcilla natural que contena acido esterico y se mostro mucho mas eficaz que el dispersante artificial. Desde entonces se han desarrollado dispersantes artificiales mucho menos txicos y eficaces, como el Corexit 9527 (desarrollado por la compaa Exxon) que se ha mostrado eficaz en varias ocasiones, como en el tratamiento del derrame del Exxon Valdez ocurrido en julio de 1989. Sin embargo, uno de los componentes conocidos del surfactante es 2-butoxietanol (del 10 al 40% en peso), compuesto que se sospecha que puede ser nocivo. El efecto de los dispersantes sobre la biodegradacin depende de la composicin del dispersante y del tipo de vertido, habindose encontrando efectos tanto positivo como negativos tras su uso.

VI.1.1. Bioventing o inyeccin de aire

La tcnica del bioventing es un tratamiento de biorrecuperacin de tipo in situ, consistente en la ventilacin forzada del suelo mediante la inyeccin a presin de oxgeno (aire) en la zona no saturada del suelo a travs de pozos de inyeccin. Debido a la aireacin del suelo se va a favorecer la degradacin de los hidrocarburos por dos motivos: por volatilizacin, facilitando la migracin de la fase voltil de los contaminantes, y por biodegradacin, ya que al incrementar la oxigenacin del suelo sevan a estimular la actividad bacteriana. Los factores a tener en cuenta en la aplicacin del bioventing o inyeccin de aire natural son: Se degradarn ms fcilmente las molculas ms pequeas (hasta C20), siendo ms fcilmente biodegradables los compuestos parafinados o de cadena lineal que los compuestos aromticos. En general, son favorables los compuestos de alta volatilidad (presin de vapor mayor de 10 mm de Hg a 20C). Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y ser lo ms homogneamente posible, con un valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2). El principal problema es la biodisponibilidad de los microorganismos. Cuanto menor es la solubilidad de los contaminantes menor ser la biodisponibilidad. Los aportes de oxgeno deben ser suficientes, as como la existencia de fuentes de carbono, aceptores de electrones y energa suficientes. No debe existir de producto libre en flotacin sobre el nivel fretico. Deben existir unas condiciones ptimas de pH (6 y 8), de humedad (12-30% en peso), potencial redox mayor de -50 mV, temperatura entre 0 y 40 C y los nutrientes del suelo en relacin N:P de 10:1. Necesidad de tiempos de actuacin cortos (meses) y coste medio-alto.

Imagen 2. Tecnica de bioventing

VI.2.

Ex situ

El tratamiento ex-situ de suelos, sedimentos y otros slidos contaminados con hidrocarburos se puede realizar en un variado nmero de procesos en fase slida y en fase lodo. Los procesos en fase slida son aquellos en donde el suelo se trata con un contenido de agua mnima. En el caso de los procesos en fase lodo se suspende el suelo en agua. Una ventaja de los procesos en fase slida es que las bajas velocidades de transferencia de materia permiten trabajar a niveles de contaminacin que seran txicos para los microorganismos si se realizaran en fase lquida. Por otro lado los sistemas slidos son capaces de sustentar el crecimiento de microorganismos que no desarrollan bien en fase lquida (hongos) y producen complejos enzimticos capaces de oxidar compuestos complejos. Los parmetros crticos a considerar en un tratamiento biolgico son: tipo y concentracin de contaminante, concentracin de microorganismos, concentracin de nutrientes, aireacin, condiciones macro ambientales, presencia de inhibidores y biodisponibilidad del contaminante.

VI.2.1. Biopilas La tcnica de biopilas es un tratamiento de biorrecuperacin de tipo ex situ en condiciones no saturadas, consistentes en la reduccin de la concentracin de contaminantes derivados del petrleo en suelos excavados mediante el uso de la biodegradacin. La tcnica consiste en la formacin de pilas de material biodegradable de dimensiones variables, formadas por suelo contaminado y materia orgnica (compost) en condiciones favorables para el desarrollo de los procesos de biodegradacin de los contaminantes. Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o bien de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireacin. En principio, las biopilas se pueden aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms eficaz en los compuestos de carcter ms ligero. Entre los factores que influyen en la aplicacin de las biopilas destacan: Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo en concentraciones menores a 50.000 ppm. Dada la necesidad de excavacin y posterior depsito del suelo contaminado, se requiere una superficie de trabajo relativamente grande cuyas dimensiones dependen del volumen de suelo a tratar. Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000 CFU/gramo de suelo), condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo), temperatura (10 y 45C).

Imagen 3. Tcnica de biopilas 6.2.2. Landfarming El LandFarming es aplicado sobre la superficie de un terreno previamente acondicionado, donde se colocan liners de polietileno de alta densidad (HDPE) y un sistema de recoleccin de lixiviados. Algunas veces se opta por colocar una cama de arena, para proteger el liner contra rasgaduras y evitar as la migracin del contaminante. El proceso consiste en el control de la degradacin del material contaminado, mediante la optimizacin de aquellas variables que afectan al sistema microbiolgico aplicando: Nutrientes, precursores enzimticos, emulsificantes - surfactantes, ajuste de pH y humedad, Inoculum de bacterias especializadas, y el establecimiento de un sistema aerbico. Una vez que todos estos aditivos se hayan aplicado, el suelo contaminado es aireado mecnicamente ( tractor con rastra o roto-till), lo que permitir una distribucin ms homognea, tanto de las sustancias adicionadas, poblacin microbiana y un incremento de la transferencia de oxgeno mediante la promocin de la difusin atmosfrica.

Imagen 4. Tcnica de landfarmnig 6.3. Degradacin natural

Es de considerable importancia econmica y ambiental, por ejemplo en sus aplicaciones la eliminacin de las mareas negras. Ya que el petrleo es rico en materia orgnica, los hidrocarburos que contiene son fcilmente atacados en condiciones aerbicas, es decir en condiciones de aire y humedad.

Los principales organismos degradadores del petrleo son bacterias y levaduras y, en menor cuanta, hongos oxidantes de los hidrocarburos. Entre los organismos degradadores del petrleo destacan pseudomonas putida y oleovorans, la levadura del gnero Candida y diversos gneros de los hongos tales como aspergillus y fusarium. En los grandes derrames, las fracciones de hidrocarburos voltiles se evaporan con rapidez, dejando los componentes alifaticos y aromticos de cadena ms larga para ser atacados por los microorganismos que oxidan parte del petrleo hasta dixido de carbono. Experimentos con radioistopos muestran que el 80% de hidrocarburos son oxidados entre 6 meses y un ao desde el derrame. Los hidrocarburos de cadenas ms ramificadas y los policiclicos permanecen por ms tiempo. Cuando ocurre un vertido de un hidrocarburo en medio acuoso se diferencia tres etapas: a) Fase de expansin que tiene lugar tanto en superficie como en profundidad; en esta fase se produce una gran mortandad de organismo vivo. b) Fase de estabilizacin de los contaminantes que puede durar entre 6 meses y un ao dependiendo de la naturaleza de los contaminantes, de los ecosistemas y de las condiciones meteorolgicas. c) Fase de reconstitucin de una mancha de petrleo depender de la proporcin de componentes voltiles que tenga y de la temperatura del agua.

Imagen 5. Pseudomona bacteria que metaboliza hidrocarburos.

VII. 7.1

BIORREMEDIACION DEL AGUA CONTAMINADO POR HIDROCARBURO Recuperacin de producto libre o diesel del agua subterrnea

7.1.1 Sistema de Recuperacin de Producto A travs de este proceso se separa el agua del contaminante que se encuentra flotando en la superficie del agua subterrnea. Este sistema no requiere el uso de maquinaria especial o electricidad y recupera hasta 50 galones de agua diarios. Este sistema de recuperacin fue instalado en todos los pozos donde haba presencia de diesel flotando en el agua subterrnea. Una vez el producto es almacenado en el tanque, la A.E.E(Autoridad de Energa Elctrica), coordina su retirada y almacenamiento. PROYECTO PILOTO CIAPR El proyecto consisti en la construccin de cuatro pozos de inyeccin en un lugar contaminado. Se prepararon e inyectaron 50 galones de una solucin de nutrientes al pozo. Las muestras de agua se recolectaron a diversos niveles de profundidad para observar la dilucin de nutrientes en el agua subterrnea antes y despus de la inyeccin. Se analizaron las muestras del agua subterrnea en busca de la presencia de estos nutrientes. Basados en los resultados de la prueba piloto, se realiz una inyeccin de nutrientes a gran escala. Se utilizaron nueve pozos como centros de monitoreo durante todo el proyecto. El monitoreo consisti en recolectar muestras del agua subterrnea de los pozos sealados. Las muestras fueron recolectadas a diversos niveles de profundidad (10, 15 y 20 pies). Las mismas fueron analizadas para determinar las concentraciones de pH, conductividad, nitratos, nitritos, amonio, fosfato, hierro y microorganismos heterotrficos. 7.2 Biorremediacin In-Situ del agua subterrnea contaminada por hidrocarburo. 7.2.1 Sistema de Bioventilacin La bioventilacin es una biorremediacin in-situ que utiliza microorganismos endgenos para degradar contaminantes de las aguas subterrneas contaminadas.

Mediante esta tcnica, la actividad biolgica de la bacteria endgena se estimula por medio de la inyeccin de aire a travs de los pozos de ventilacin. Estos se instalan en varios puntos del rea contaminada, y a travs de ellos se inyectan nutrientes y soluciones especficas preparadas en laboratorio. Se cumplieron dos condiciones para aplicar el sistema de bioventilacin como tecnologa remediativa en este lugar (AEE). En primer lugar se determin que era posible la produccin y provisin de oxgeno a travs de la zona de las aguas contaminada. Luego se demostr que los microorganismos endgenos del lugartenan la capacidad de utilizar el oxgeno para biodegradar la contaminacin de hidrocarburos en una proporcin aceptable. Adems, fue necesario determinar la conductividad hidrulica y la permeabilidad intrnseca para saber cun efectivo sera el sistema de bioventilacin en el lugar afectado. BIOALIMENTACIN Para poder acelerar el proceso biorremediativo, se desarroll un consorcio de microorganismos degradadores de diesel bajo condiciones anaerbicas. Se cultivaron bacterias endgenas desnitrificadoras del lugar contaminado. Estas bacterias fueron enriquecidas con nutrientes en una solucin bioactiva, la cual fue inyectada a una profundidad de 14 y 18 pies en los pozos monitoreados. Los derrames de crudo provocan un desequilibrio al aumentar la cantidad de carbono, lo que descompensa los niveles de nitrgeno y fosfato, en esas condiciones metablicamente no se puede consumir el carbono. La biorremediacin de petrleo consiste en verter los mismos nutrientes que estn descompensados, fosfato, nitrgeno, en algunos casos biodesinfectantes, y dejar que los microorganismos que ya estn presentes hagan su trabajo, para recupera el equilibrio y regenerar el ambiente. 7.2.2 Biorremediacin anaerobia El monitoreo fue efectuado cada dos semanas para realizar los anlisis qumicos de las muestras de agua. Esta estrategia de bioestimular la degradacin bajo condiciones favorables a la respiracin anaerobia fue muy til. Los resultados de reduccin de diesel unidos a la evidencia de bioestimulacin anaerobia fueron consistentes con el estudio piloto CIAPR. Esta alternativa, que requiere de una implementacin cuidadosa, es muy prometedora para la restauracin. Se realiz adems una bioaumentacin, que consisti en la integracin de varios microorganismos para aumentar o incrementar la actividad biodegradativa en ese medio.

Tpico Pozo de Inyeccin para Biorremediacin Anaerobia

7.3

Biorremediacin del agua contaminada en la costa de la muerte, desastre de Prestige.

Apuesta por la biorremediacin para combatir el vertido del Prestige, Eduardo Ayesa, director de la Unidad de Ingeniera Medioambiental del Centro de Estudios e Investigaciones Tcnicas de Gipuzkoa, CEIT. El desastre accidentado del Prestige se el 13 de produjo cuando un buque petrolero monocasco result transitaba cargado con

noviembre de 2002,

mientras

77.000 toneladas de petrleo, frente a la costa de la Muerte, en el noroeste de Espaa, y tras varios das de maniobra para su alejamiento de la costa gallega, acab hundido a unos 250

km de la misma. La marea negra provocada por el vertido resultante caus una de las catstrofes medioambientales ms grandes de la historia de la navegacin, tanto por la cantidad de contaminantes liberados como por la extensin del rea afectada, una zona comprendida desde el norte de Portugal hasta las Landas de Francia. El derrame de petrleo del Prestige ha sido considerado el tercer accidente ms costoso de la historia; 1 la limpieza del vertido y el sellado del buque tuvieron un coste de 12.000 millones de dlares, segn algunos documentos,1 el doble que la explosin del Challenger pero por detrs de la desintegracin del Columbia y el accidente nuclear de Chernobyl. La biorremediacin como mtodo para combatir el vertido del buque Prestige en las costas gallegas. El tratamiento de biorremediacin consiste en estimular la eliminacin de la mancha de fuel mediante microorganismos que ya existen en el mismo vertido. "Mediante la adicin de nutrientes, se intenta aumentar la actividad de estos microorganismos. Se pueden inocular nuevos hongos o bacterias que estn especialmente preparados para degradar la mancha. Dice Eduardo Ayesa, "no podemos evitar que se ensucien las playas, pero a medio y largo plazo estas bacterias van degradando la mancha y, medioambientalmente es la solucin ms sostenible. " Experimentos en la Costa da Morte: Las bacterias podran acabar con el fuel del Prestige. El comisionado Xon Novoa inform, en conferencia de prensa, de que las investigaciones realizadas desde junio en las playas de Moreira y Cuo, en Muxa, confirman la "utilidad" de esta tcnica de limpieza, que consiste en potenciar la degradacin del petrleo por efecto de la naturaleza, en concreto, por la accin de bacterias. Novoa consider los resultados obtenidos hasta ahora como "esperanzadores", pero precis que habr que esperar para decidir su uso en otros espacios hasta que se conozcan las conclusiones de las pruebas realizadas. Est previsto que a mediados de septiembre se informe sobre los resultados de los experimentos en el Parque Nacional Illas Atlnticas, mientras que los equipos que trabajan en la Costa da Morte podran ofrecer ya un "protocolo de actuacin" a finales de noviembre Los resultados de la biorremediacin han sido muy alageos. Se han implementado con las tcnicas de "bioestimulacin", que consiste en facilitar a ciertas bacterias nutrientes, como nitrgeno y fsforo mezclados con agua.

Estos microorganismos "se comen" poco a poco el petrleo hasta,eliminarlo, una accin que requiere "meses, aunque pocos", agreg Llamas. Entre las pruebas realizadas, el investigador cit el "riego" en un acantilado de Cuo con abono comprado en Muxa y con agua que desvan de un regato prximo y que, en menos de un mes, ha logrado eliminar de las rocas parte del fuel. Tambin aludi a la posibilidad de "regar" nutrientes con cscara de mejilln, para que penetren con mayor facilidad entre el petrleo. Llamas concluy que la biorremediacin tiene como ventajas el respeto por la riqueza natural de la Costa da Morte y la diversidad de tcnicas, que permite llegar a zonas de difcil acceso.

OBJETIVO Desarrollo y descripcin de tcnicas de biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos, en donde nos enfocaremos a estudiar la capacidad de degradar hidrocarburos que poseen en su metabolismo algunos microorganismos. CONCLUSION Todas las tcnicas descritas sobre la biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos, no son cien por ciento eficaces, tambin se tiene que tomar encuentra que el proceso in situ presenta ms ventaja ecolgica y econmica sobre el proceso ex situ, ya que esta ltima requiere de traslado de la contaminacin al rea de tratamiento, para finalizar tenemos que mencionar a los principales protagonistas de esta tcnica que son microorganismos especficos para este tipo de problemas y se pueden ser autctonos o forneos ya que gracias a su metabolismos puede degradar los diferentes componentes del hidrocarburo y removerlos para la recuperacin del suelo. BIBLIOGRAFIA: FRANCISCO CASTILLO RODRIGUEZ, 2005. Biotecnologa ambiental, pag. 432- 440

SIRVINS, AY TRAMIER, 1993. La biodegradacion de los hidrocarburos, pag.46-48 MOROMISATO RIVAS, L.; NUEZ DEL PADRO ZARATE, 2008. TESIS: evaluacin de tcnicas de biorremediacion de suelos contaminados con hidrocarburos derivados de petrleo.

JOS LUIS RODRGUEZ GALLEGO, ARTICULO:La biorremediacion frente al vertido del Exxon Valdez

BIBLIOGRAFIA de la BIORREMEDIACION DEL AGUA CONTAMINADO POR HIDROCARBURO: EDUARDO AYESA, director de la Unidad de Ingeniera Medioambiental del Centro de Estudios e Investigaciones Tcnicas de Gipuzkoa, CEIT. USEPA. Biorremediacin de los desechos peligrosos. EPA 540-R-95-532. (1995). EWEIS, J et todo. Principios de biorrecuperacin. Ed. Mac Graw Hill. (1999).