Praktika/Prctica: Extraccin de ADN Izena/Nombre: Data/Fecha:

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KURTSOA/CURSO:
Biologa/biologia

OBJETIVOS
Generales
1. Aplicar los conceptos, leyes, teoras y modelos aprendidos a situaciones reales y cotidianas. 2. Utilizar con cierta autonoma destrezas investigativas, tanto documentales como experimentales (plantear problemas, formular y contrastar hiptesis, realizar experiencias, etc.), reconociendo el carcter de la ciencia como proceso cambiante y dinmico. 3. Desarrollar actitudes que suelen asociarse al trabajo cientfico tales como la bsqueda de informacin exhaustiva, la capacidad crtica, la necesidad de verificacin de los hechos, el cuestionamiento de lo obvio y la apertura ante nuevas ideas. 4. Explicar expresiones cientficas del lenguaje cotidiano segn los conocimientos biolgicos adquiridos, relacionando la experiencia diaria con la cientfica. 5. Comprender la naturaleza de la biologa y sus limitaciones, as como sus complejas interacciones con la tecnologa y la sociedad, valorando la necesidad de trabajar para lograr una mejora de las condiciones de vida actuales.

Especficos
1. El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta confirmar su estructura fabrilar. 2. A partir de la longitud enorme de las fibras tambin se confirma que en el ncleo el ADN se encuentra replegado. 3. Realizar una tincin especfica de ADN (con un colorante bsico) y observar al microscopio las fibras de ADN.

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FUNDAMENTO TERICO
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper la membrana plasmtica) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol etlico.

MATERIAL NECESARIO
Material general de laboratorio Dos vasos de precipitado. (250 ml) Una probeta Una varilla de vidrio Papel de filtro Un portaobjetos Un cubreobjetos. Microscopio. Mortero

Productos qumicos y reactivos Hgado de pollo. Detergente lquido para vajillas (Mistol) Zumo de pia. Alcohol etlico de 96. Un colador. Agua destilada. Azul de metileno.

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PROCEDIMIENTO
1. Elegir la muestra (medio higadillo de pollo) que va a proporcionar el ADN y cortarla en cuadraditos.

2. Triturar los trocitos de hgado en un mortero. Al triturar se rompen las membranas plasmticas y quedan los ncleos sueltos. 3. Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o pur. As se rompern muchas ms clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente.

4. Filtrar varias veces con el colador para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper. 5. Medir el volumen del filtrado con una probeta. 6. Aadir, a la probeta, la cuarta parte del volumen, anteriormente medido, de detergente. 7. Remover suavemente la mezcla hasta que esta quede homognea. 8. Aadir, a la probeta, la misma cantidad de zumo de pia que la que aadiste antes de detergente. 9. Remover la mezcla durante 5 minutos. 10. Verter la mezcla en un vaso de precipitados. (250 ml) 11. Aadir, poco a poco, la misma cantidad de alcohol que la que aadiste entes de zumo de pia; sin que se mezclen las dos partes. 12. Dejar reposar la mezcla cinco minutos.

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13. Introducir una varilla de vidrio en la parte del alcohol hacindola rotar, siempre, en la misma direccin, haciendo que se adhieran los filamentos blancos que se observan. 14. Pon una porcin de esos filamentos en un portaobjetos, y adele una gota de azul de metileno. 15. Cubre la preparacin con un cubreobjetos y obsrvala al microscopio con un objetivo de 40.

INFORME DE LABORATORIO
Felicidades! Acabas de completar la extraccin de ADN!
Ahora que has extrado exitosamente ADN, ests listo para contestar las siguientes preguntas. Por qu hemos utilizado detergente?

Para qu hemos utilizado el zumo de pia?

El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se han formado dos capas separadas, el ADN y el resto de materia orgnica tienden a separarse. Quin se queda en la capa acuosa, la del fondo? Y en la capa superior, el alcohol?

Qu es esa cosa pegajosa?

La cosa blanca y pegajosa es ADN puro o una mezcla de cidos nucleicos?

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Por qu decimos que el azul de metileno es un colorante especfico para el ADN?

Por qu crees que es necesario dejar libres los ncleos?

Al aadir un detergente se produce un medio hipertnico. Que efecto tiene dicho medio en las membranas del ncleo?

Explicacin cientfica

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La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solucin de lavavajillas ayudada por la accin del mortero es capaz de romper las membranas plasmtica y nuclear. Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN.

ADN en la interfase aguaalcohol

El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.