rea: Serologa

Objetivos:
Realizar los exmenes correspondientes en sangre para detectar e identificar una infeccin en el paciente. En orina, analizarla qumica, fsica y microscpicamente, de tal manera que se confirmen o descarten padecimientos que involucran el funcionamiento del tracto urinario.

Introduccin:
Serologa
El trmino serologa se refiere tanto al estudio de reacciones generales antgeno-anticuerpo en un entorno de laboratorio, como al exmen de sangre especfico realizado para probar la presencia de anticuerpos. Un exmen serolgico se realiza para determinar el tipo de sangre de un paciente y para detectar e identificar una infeccin, dndole a la serologa aplicaciones en los campos de la salud y la criminologa. Relacin antgeno-anticuerpo El sistema inmunitario de nuestro cuerpo produce anticuerpos cuando detecta elementos dainos, llamados antgenos. Un antgeno es una sustancia ajena al cuerpo que el sistema inmunolgico reconoce como una amenaza (Algunos ejemplos de antgenos son las toxinas de las bacterias y los virus, as como los agentes qumicos externos perjudiciales para la salud). Cuando el cuerpo detecta antgenos se induce una respuesta inmunitaria con la formacin de anticuerpos, como forma de defensa. Los anticuerpos, tambin denominados inmunoglobulinas, son usados por el sistema inmunolgico para identificar y neutralizar estas sustancias extraas al cuerpo. Los anticuerpos los sintetizan un tipo de leucocito llamado linfocito B. La estructura principal de todos los anticuerpos es muy parecida, estn formados por una protena con una tpica forma de Y. Pero tienen en los extremos una pequea regin de la protena que es altamente variable (en el dibujo de color azul). Esto permite una gran variabilidad, de tal manera que el sistema inmune es capaz de crear millones de anticuerpos distintos, cada uno con un extremo ligeramente distinto. Esta parte de la protena se denomina regin hipervariable. Cada una de estas variantes de anticuerpo se puede unir a un antgeno distinto. Cuando un anticuerpo reconoce un antgeno complementario se une a l y lo marca para que sea atacado por otras clulas del sistema inmunitario.

La gran diversidad de anticuerpos que puede fabricar nuestro cuerpo se explica por las combinaciones al azar de un conjunto de genes que codifican los distintos sitios de unin de los anticuerpos a los antgenos. Estos genes tambin sufren mutaciones aleatorias, lo que genera una diversidad an mayor. Las reacciones ms importantes entre antgeno y anticuerpo son las siguientes:

I. Precipitacin. Se produce entre antgenos y anticuerpos solubles que al unirse forman agregados insolubles de ambas molculas que precipitan. Por ej floculacin.

Mecanismo de precipitacin de un antgeno soluble y un anticuerpo 2. Aglutinacin. En este caso, los anticuerpos se dirigen contra los antgenos que se encuentran en la superficie de ciertas clulas. El anticuerpo se combina con los antgenos de superficie y forma aglomerados. Normalmente se utilizan glbulos rojos (hemaglutinacin) o partculas de ltex.

Aglutinacin Hemaglutinacin directa

La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemaglutinacin producida cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. Esta tcnica se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos sanguneos y Rh Hemaglutinacin indirecta

Se basa en el principio de la inhibicin de la hemaglutinacin. Para su realizacin se precisan glbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma sustancia que se desea detectar o cuantificar. Si estos glbulos rojos son puestos en presencia de anticuerpos preparados frente a dicha sustancia se producir su aglutinacin. Por el contrario, cuando se aade un suero problema que contiene la sustancia a cuantificar entonces los anticuerpos se unirn a dicha sustancia y no a los glbulos rojos. En este caso no se producir la hemaglutinacin. Por tanto, aglutinacin (+) indica

ausencia de la sustancia a estudiar, y aglutinacin (-) indica presencia de la misma. La medida de gonadotrofina corinica (HCG) para el diagnstico de embarazo puede realizarse por esta tcnica.

3. Enzimoinmunoensayo. La identificacin de los complejos Ag-Ac, se hace mediante el empleo de enzimas, bien unidas al antgeno, o bien unidas al anticuerpo (tambin se conoce como test de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)) .Puede ser directo o no competitivo, constando de los siguientes pasos: a) Se tapiza la placa con el anticuerpo especfico frente al antgeno a determinar. b) Se aade la muestra con el antgeno. c) Se adiciona el anticuerpo secundario marcado con la enzima que en presencia de su sustrato da un producto coloreado soluble, este producto es cuantificado mediante el lector de ELISA e indirecto o competitivo, se diferencia del caso anterior en que se aaden los anticuerpos, previamente incubados con la muestra, los anticuerpos que no se han unido a los antgenos de la muestra lo harn a los antgenos de los pocillos Como enzimas se suelen utilizar la peroxidasa, la galactosidasa o la glucosa oxidasa. Esta tcnica se utiliza para la medida de hormonas, antgenos de la hepatitis y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas concentraciones.

4.Fijacin del complemento: Como hemos visto en captulos anteriores, el complemento posee la capacidad de unirse a los complejos antgeno anticuerpo (fijacin). Esta capacidad es aprovechada en la prueba de fijacin del complemento. Metodolgicamente, la prueba se desarrolla en dos fases, una primera que es una reaccin antgeno anticuerpo en un medio lquido y una segunda consistente en la adicin de complemento, una hemolisina dependiente de complemento y eritrocitos. Si se ha producido reaccin antgeno-anticuerpo, es decir, si el suero analizado contena anticuerpos frente al antgeno, el complemento queda fijado y no puede activar la hemlisis de los glbulos rojos.

Pruebas serolgicas Dependiendo de la reaccin Ag-Ac que ocurra entre el suero y los respectivos reactivos, algunas de las pruebas serolgicas son: VDRL: El VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) es una prueba de sangre que se encarga de medir los anticuerpos que aumentan cuando se tienen infecciones ocasionadas por treponemas, es decir, la sfilis. La sfilis es una enfermedad venrea causada por el Treponema pallidum, que invade las mucosas intactas o la piel en reas de abrasiones. El contacto sexual es la forma ms comn de transmisin. La deteccin y tratamiento de la enfermedad en sus estadios tempranos es fundamental a fin de

evitar complicaciones graves como sfilis cardiovascular, neurosfilis y sfilis congnita. El diagnstico de esta enfermedad sufre la carencia de un mtodo para cultivar el microorganismo en medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la enfermedad en los que no se observan lesiones epidrmicas. Sin embargo, desde el comienzo de la infeccin aparecen en el suero del individuo infectado ciertas sustancias denominadas "reaginas", que reaccionan con antgenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clnicos son por lo tanto los procedimientos ms rpidos y tiles disponibles para diagnstico de sfilis. Fundamentos del mtodo Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una floculacin visible en microscopio. Las reacciones inespecficas se evitan con el empleo de antgeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina caracterstica de la tcnica USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra. Valores normales Un examen negativo es normal y significa que no se detectaron anticuerpos contra la sfilis. La prueba de deteccin es ms probable que sea positiva en la sfilis secundaria y latente. Durante la sfilis primaria y terciaria, el resultado del examen puede ser falso negativo. Significado de los valores anormales El examen con resultado positivo puede indicar que usted tiene sfilis. Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen ms especfico para la sfilis. La capacidad del examen VDRL para detectar sfilis depende de la etapa de la enfermedad, se acerca al 100% durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas ms tempranas y tardas. Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo, como: VIH Enfermedad de Lyme Ciertos tipos de neumona Malaria Lupus eritematoso sistmico Tratamiento: El tratamiento de la sfilis se realiza con Penicilina. En caso de que exista alergia a la penicilina se utilizaria Doxiciclina, Eritromicina o Azitromicina. Valoracin de respuesta al tratamiento

Para valorar la respuesta al tratamiento se realiza la serologa luetica no treponmica (RPR) a los 6 y a los 12 meses. Si se ha producido una respuesta favorable al tratamiento ocurrir que la prueba se negativiza o que disminuyan los ttulos por los menos a la cuarta parte de la dilucin. Si no ocurre nada de lo anterior, es decir, no ha habido una respuesta favorable al tratamiento habra que pensar en que ha tenido lugar una nueva reexposicin e infeccin o que el tratamiento terapeutico ha fracaso, de modo que la actitud a tomar en esta situacin es volver a administrar el tratamiento. Antigenos Febriles: Las salmonellas se consideran patgenos entricos obligados. Los alimentos y el agua contaminados son los mecanismos de transmisin. La enfermedad puede presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos rganos o fiebre tifoidea. La Brucelosis se presenta en la mayora de los casos con anorexia, fiebre, decaimiento y escalofros, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes como son las seas y neuropsquicas. A pesar de que el mtodo definitivo para establecer la etiologa de estas enfermedades es a travs del aislamiento del agente patgeno, esto resulta difcil debido a que la investigacin se realiza frecuentemente en perodos tardos de la enfermedad y luego de una terapia antibitica. Por este motivo es de gran importancia diagnostica la deteccin de los anticuerpos especficos producidos en el curso de cada una de estas patologas. Una prueba aislada es de escaso valor, siendo necesarias 2 o mas pruebas seriadas a fin de poner en evidencia cambios en el ttulo de anticuerpos. Fundamentos del mtodo El suero del paciente se pone en contacto con antgenos especficos. En este caso se utilizan suspensiones de Salmonellas o Brucellas muertos. Si la muestra contiene los anticuerpos correspondientes se producir una aglutinacin visible macroscpicamente. PCR-ltex directo: La Protena C Reactiva (PCR) es una protena termolbil que no atraviesa la barrera placentaria y cuya movilidad electrofortica se encuentra entre las zonas de las y globulinas. Su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacridos C de los pneumococos. Es una de las llamadas protenas de fase aguda y se incrementa en suero, en una gran variedad de enfermedades inflamatorias o como respuesta a necrosis tisular. Su determinacin es importante debido a que aumenta rpidamente al comienzo de la enfermedad, 14 a 26 horas luego de la inflamacin o injuria tisular y desaparece en la etapa de recuperacin, apareciendo slo durante la fase activa del proceso inflamatorio. La PCR se encuentra comnmente aumentada en: artritis reumatoidea activa, infecciones virales, tuberculosis, fiebre reumtica activa, infarto agudo de miocardio, etc. Tambin se la puede hallar luego de una operacin quirrgica y en gran porcentaje luego de transfusiones sanguneas. La

determinacin de PCR no slo indica la intensidad de la enfermedad sino tambin la respuesta del paciente a un tratamiento dado. Fundamentos del mtodo Se detecta en suero por reaccin con un anticuerpo especfico adsorbido sobre un soporte inerte de ltex. La PCR se une a los anticuerpos adsorbidos produciendo la aglutinacin de las partculas de ltex. Artritest directo: La artritis reumatoidea es un sndrome crnico de etiologa desconocida, caracterizado por una inflamacin inespecfica y generalmente simtrica de las articulaciones, que a veces evoluciona hacia la destruccin de las estructuras articulares y periarticulares. En la articulacin enferma se observa un engrosamiento de la membrana sinovial con formacin de pliegues y proliferacin de linfocitos. Estas clulas, que forman folculos linfoides, son las responsables de la sntesis de factores reumatoideos (FR) y otras inmunoglobulinas. Fundamentos del mtodo El factor reumatoideo de tipo IgM se detecta en presencia de gamma-inmunoglobulina o fraccin II de Cohn (que en este caso es el antgeno) adsorbida sobre un soporte inerte de ltexpoliestireno. Este antgeno se une a los FR (anti-IgG) produciendo una aglutinacin de las partculas de ltexpoliestireno, visible macroscpicamente. Toxotest HAI La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa generalmente benigna y asintomtica del hombre y de los animales, cuyo agente etiolgico es el Toxoplasma gondii, parsito intracelular obligado de distribucin mundial. Cuando la infeccin por T. gondii se adquiere durante la gestacin, existe un alto riesgo de infeccin en el feto, pudiendo provocar abortos o lesiones graves que son ms severas cuanto ms precoz sea la contaminacin materna. Las determinaciones serolgicas son las ms convenientes y certeras para el diagnstico de la toxoplasmosis y debe establecerse: a) la seroconversin de negativo a positivo, b) un aumento en el ttulo de anticuerpos y c) la presencia de IgM especfica que indicara infeccin activa. Fundamentos del metodo Toxotest HAI se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos anti-T. gondii de producir aglutinacin en presencia de glbulos rojos sensibilizados con antgenos citoplasmticos y de membrana del parsito. El empleo de ambos tipos de antgenos incrementa la sensibilidad del mtodo permitiendo la deteccin precoz de la infeccin. Tanto la presencia de anticuerpos heterfilos como la aparicin de IgM, caractersticas del perodo agudo de la parasitosis, se investigan empleando tratamiento con 2-mercaptoetanol (2-ME) y eritrocitos no sensibilizados para control y absorcin de heterofilia. Los anticuerpos heterfilos se absorben con eritrocitos no

sensibilizados. En los sueros de pacientes con infeccin aguda tratados con 2-ME, se observa una cada del ttulo en porlo menos dos diluciones comparados con los mismos sueros sin tratar con 2ME. Chagatest HAI La enfermedad de Chagas es una infeccin parasitaria producida por el Trypanosoma cruzi. El diagnstico de laboratorio depende del estado en el cual se encuentre la enfermedad. Durante la fase aguda, el diagnstico se efecta directamente mediante la comprobacin de los parsitos en sangre o por mtodos inmunolgicos que detecten anticuerpos especficos. Durante la fase crnica, se pueden usar mtodos inmunolgicos como la reaccin de aglutinacin de ltex, hemaglutinacin, aglutinacin directa, inmuno fluorescencia y ltimamente ELISA. Fundamentos del metodo La hemaglutinacin indirecta (HAI), tambin llamada hemaglutinacin reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos (que en este caso son anti-T. cruzi) de producir aglutinacin especfica en presencia de glbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antgenos. En el suero existen anticuerpos inespecficos (heterfilos) que son capaces de aglutinar glbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con GR no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento con 2mercaptoetanol. HBsAg ELISA: La hepatitis B es una enfermedad viral del hgado causada por el virus de la hepatitis B (HBV). Puede cursar en forma asintomtica, o como un proceso agudo o crnico. En los casos ms graves puede derivar en cirrosis heptica y carcinoma hepatocelular primario. Se transmite principalmente por contacto parenteral, percutneo, o sexual. Tambin se ha observado transmisin perinatal y horizontal. El HBV est constituido por una nucleocpside que contiene el ADN asociado a protenas core y una envoltura cuyo principal componente es una protena conocida como antgeno de superficie (HBsAg). El HBsAg generalmente aparece 6 semanas despus de la exposicin al HBV y persiste durante 4-14 semanas. Est presente durante el periodo de incubacin, antes de la aparicin de la enfermedad clnica y puede ser detectado en sangre 2 a 8 semanas antes de la aparicin de ictericia o de evidencias bioqumicas de disfuncin heptica. As, el HBsAg es un primer indicador de infeccin por el HBV. La hepatitis B crnica se define como la presencia del HBsAg en sangre durante ms de 6 meses. La deteccin del HBsAg es importante para el diagnstico de las hepatitis agudas y crnicas, el control de portadores en bancos de sangre y unidades de dilisis, de trasplantados y gestantes y para el control de preparados de sangre y derivados destinados a transfusiones. Fundamento del mtodo: HBsAg ELISA es un metodo inmunoenzimatico directo tipo sandwich. Los pocillos de la policubeta estan recubiertos con anticuerpo de cobayo anti-HBs (anti-HBsAg) que actua como anticuerpo de

captura. La muestra se incuba en uno de los pocillos. Si la misma contiene HBsAg, este formara un complejo con el anticuerpo unido a la placa. El material no unido se elimina por lavado. En el siguiente paso se agrega el anticuerpo de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa, que se unira con los complejos anticuerpo antigeno formados previamente. El conjugado no unido se remueve por lavado. Posteriormente se agrega una solucin conteniendo tetrametilbencidina y perxido de hidrogeno. En los casos en que el HBsAg este presente en la muestra, se desarrolla color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reaccion con acido sulfurico.

 HIV La palabra Sida corresponde a las iniciales Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida. El Sida es un estado avanzado de la infeccin causada por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH). El VIH es un virus que ataca preferentemente al sistema de defensas del organismo, alterando y destruyendo lentamente este sistema inmunitario y, muy especialmente, los denominados linfocitos T4 o linfocitos CD4. Hasta ahora se conocen dos tipos:

VIH 1: distribuido por todo el mundo, con mayor virulencia. VIH 2: se encuentra fundamentalmente en frica Occidental, al parecer es ms difcil de transmitir y con mayor perodo de incubacin.

Sintomas: Los sntomas del VIH dependen en gran medida de la fase de la infeccin. Cuando una persona resulta infectada por el VIH, el virus invade un tipo de leucocito denominado CD4 . El recuento de

clulas CD4 mide el nmero de clulas CD4 en la sangre y es un buen indicador del estado de salud general y de la progresin del VIH. Cuanto menor sea el nivel de CD4, mayor es el riesgo de infeccin (Los adultos sanos tienen un recuento de CD4 que oscila entre 500 y 1450 clulas/mm; un recuento inferior a 500 significa que el sistema inmunitario est daado.) Fases del VIH Segn el recuento de clulas CD4, se distinguen tres fases de la infeccin por VIH:

Fase asntomtica (recuento de clulas CD4 > 500/mm): aun cuando la mayora de las personas no muestra ningn sntoma del VIH en esta fase, la infeccin puede estar activa en el sistema inmunitario. Fase sintomtica (recuento de clulas CD4 entre 200 y 499/mm). En esta fase, el recuento de clulas oscila entre 200 y 499. La persona puede experimentar nuevos sntomas del VIH o infecciones oportunistas, como bronquitis. SIDA (recuento de clulas CD4 < 200/mm): en esta fase de la enfermedad, la mayora de las personas ha desarrollado infecciones oportunistas o un tipo de cncer (sarcoma de Kaposi, linfoma , y cncer cervical ) que indican la progresin del VIH a SIDA.

Infecciones oportunistas Los sntomas del SIDA son bsicamente el resultado de enfermedades que no suelen desarrollarse en individuos con sistemas inmunitarios sanos. La mayora de estas enfermedades son infecciones causadas por bacterias, virus, hongos y parsitos que normalmente son controladas por los elementos del sistema inmunitario que daa el VIH. Las llamadas infecciones oportunistas, que se aprovechan de la debilitada salud de los pacientes, son habituales en sujetos con SIDA. El VIH afecta prcticamente a cada rgano del sistema. Los enfermos de SIDA tambin tienen un mayor riesgo de desarrollar diversos tipos de cncer como el sarcoma de Kaposi, el cncer cervical y cnceres del sistema inmunitario conocidos como linfomas. Adems, suelen tener sntomas sistmicos de infeccin como fiebres, sudores nocturnos, glndulas hinchadas, escalofros, debilidad y prdida de peso. Algunos ejemplos de infecciones "oportunistas" son: Neumona debida al Pneumocystis jiroveci (antes conocido como Pneumocystis carinii) Tuberculosis Esofagitis debida a una infeccin fngica (p.ej., Candida) o viral (p.ej., herpes simple o citomegavirus) Diarrea crnica tras infeccin por bacterias o parsitos Meningitis causada por una infeccin por criptococos definicin

Pruebas:

Las principales pruebas para detectar la presencia o existencia del virus VIH son las siguientes: Tcnicas de Cribado: Estos mtodos reconocen una reaccin o respuesta inmune por parte del paciente. Se basan en tcnicas de cribar y confirmar.

EIA/ELISA: estas tcnica para cribar, frecuentemente son las ms usadas, se efectan obteniendo una muestra o cultivo a travs de las que se determina la presencia del anticuerpos. Un resultado negativo de esta prueba significa que no se hallaron, pero si es positiva, para confirmar un diagnstico se repetir la prueba y en caso de ser positiva por segunda vez, se proceder a realizar una prueba de confirmacin. OraSure: mediante una muestra de clulas extrada de la boca (encima de las encas) se analiza la presencia de los anticuerpos del VIH con una tecnologa similar a la prueba ELISA, pero con la desventaja de ser mucho ms costosa. Tcnicas de Confirmacin

Western Blot (WB): Para confirmar y verificar este primer test (EIA/ELISA), se lleva a cabo esta prueba, que determinar la presencia de anticuerpos mediante el estudio de una muestra de sangre o saliva. Si el resultado es positivo, se puede confirmar la presencia del VIH. IFI/IFA: Esta prueba es una alternativa a la anterior, por tanto, tambin sirve para confirmar que los resultados de la prueba ELISA son fiables. Se detecta la presencia de anticuerpos en la muestra de clulas obtenida del paciente y, a diferencia de la prueba Western Blot, esta puede ser mucho ms rpida, sencilla y asequible. RIPA: esta tcnica est limitada a laboratorios por su alta dificultad de aplicacin, no obstante los resultados obtenidos gozan de una especificidad y sensibilidad mayores a los anteriores. Inmunocromatografica: llamada tambin prueba rpida. Es la ms usada y tambin detecta anticuerpos. Pruebas realizadas en el laboratorio: Por aglutinacin pasiva de partculas para detectar anticuerpos anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2 Principio del procedimiento Se produce mediante el uso de un soporte de partculas de gelatina sensibilizadas con antgenos HIV-1 y HIV-2 inactivados, en forma separada. La prueba se basa en el principio que las partculas sensibilizadas se aglutinan por la presencia de los anticuerpos anti-HIV-1 y anti-HIV-2 en plasma/suero humano. Inmunocromatogrfica: Fundamento

Se trata de una prueba cualitativa para la deteccin de anticuerpos IgG contra el virus de la inmunodeficiencia humana 1 (VIH tipo 1) as como VIH tipo 2 en el suero humano o en el plasma.

Tratamiento: Desde la aparicin del TARGA (terapia antirretroviral de gran actividad) en 1996, los infectados por el VIH han experimentado mejoras en su estado de salud general y en su calidad de vida. De hecho, dado que ha aumentado la esperanza de vida de los enfermos de SIDA en aquellos pases en los que el uso del TARGA est extendido, el nmero de personas que viven con el SIDA ha aumentado notablemente. En Amrica del norte y en Europa occidental y central, el uso del TARGA mantuvo relativamente bajo el nmero de muertes relacionadas con el SIDA (30.000) en 2005. Objetivos del tratamiento El tratamiento del VIH tiene cuatro objetivos principales:

Aumentar la esperanza de vida del paciente y su calidad de vida. Evitar que el VIH progrese al reducir la carga viral a niveles indetectables. Devolver el sistema inmunitario a su estado normal y mantenerlo as. Reducir el riesgo de transmisin del VIH a otras personas.

Tipos de frmacos anti-VIH: En la actualidad existen ms de 25 frmacos antirretrovirales para ayudar a las personas con VIH a desarrollar una vida ms larga y ms sana. Normalmente se toma una combinacin de frmacos antirretrovirales para el VIH, lo que se conoce como terapia antirretroviral de gran actividad (TARGA). Estos frmacos se clasifican en 4 clases:

Inhibidores de la transcriptasa inversa anlogos de los nuclesidos (ITIN): los ITIN son la clase ms antigua de frmacos antirretrovirales. Bloquean la capacidad del VIH de copiar el ADN de una clula que necesita para realizar copias de s mismo. Tambin se conocen como anlogos de los nuclesidos, "nuclesidos" o "backbone". Inhibidores de la transcriptasa inversa no anlogos de los nuclesidos (ITINN): los ITINN bloquean la misma protena que los ITIN, aunque su composicin qumica es diferente. Si no se emplean en combinacin con un ITIN, el paciente desarrolla resistencia a ellos muy rpidamente. Inhibidores de la proteasa (IP): los IP bloquean la proteasa, una enzima que el virus del VIH necesita para multiplicarse. Como grupo, los IP son muy potentes y se toleran relativamente bien. Inhibidores de fusin (IF): los IF, que son la clase ms novedosa de ARV disponibles, impiden que el VIH se introduzca en las clulas sanas del cuerpo. El nico frmaco comercializado de esta clase debe administrarse mediante inyeccin subcutnea. hCG: La Gonadotrofina Corinica humana (hCG) es una hormona glicoproteica producida por la placenta en desarrollo poco despus de la fertilizacin. En el embarazo humano, la hCG puede detectarse tanto en orina como en suero ya a los 7-10 das de la concepcin. Los niveles de hCG continan aumentando muy rpidamente superando las 100 mIU/mL tras la falta del primer perodo menstrual y alcanzando el mximo en torno a 100.000-200.000 mIU/mL a las 10-12 semanas de embarazo. La aparicin de hCG en orina y suero poco despus de la concepcin y su posterior aumento rpido durante el principio de la gestacin convierten a esta hormona en un excelente marcador para la deteccin precoz de embarazo. Fundamento del mtodo La Prueba hCG de Embarazo en Un Solo Paso (Orina/Suero) es un inmunoensayo cromatogrfico rpido para la deteccin cualitativa de la Gonadotrofina Corinica humana en orina o suero, para el diagnstico temprano de embarazo. En la prueba aparecen dos lneas para indicar resultados. La lnea de prueba utiliza una combinacin de anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal anti-hCG fijado a la membrana para detectar selectivamente niveles elevados de hCG y otro anticuerpo monoclonal conjugado con oro coloidal dirigido a otro epitope de la hCG ( conjugado de color). La lnea de control est compuesta por anticuerpos policlonales de cabra anti-ratn y partculas coloidales de oro. El ensayo se realiza sumergiendo la prueba de anlisis en una muestra de orina o suero y observando la formacin de las lneas de color. La muestra migra por capilaridad a travs de la membrana para reaccionar con el conjugado de color. En las muestras positivas, la hCG presente reacciona con el anticuerpo especfico anti-hCG para formar un inmunocomplejo que luego capturado por otro anticuerpo monoclonal fijado a la membrana formando lnea de color en la regin de prueba de la membrana. La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado

negativo. Para servir como control del procedimiento, si la prueba se ha realizado correctamente, siempre deber aparecer una lnea de color en la regin de la lnea control.

Ionograma:
Un ionograma indica la concentracin de los diferentes iones en un lquido. En el caso del ionograma plasmtico, los principales constituyentes inicos de la sangre son analizados: sodio (Na), potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), cloro (Cl) y bicarbonatos (CO3) en el plasma. Sirve para: Detectar un desequilibrio hidroelectroltico que puede tener consecuencias en el metabolismo. La vigilancia de aportaciones hdricas por perfusin.

Sodio (Natremia) Hiponatremia El nivel de sodio en la sangre puede disminuir en los casos siguientes:

Consecuencia de un dficit de aportacin de sodio: prdidas digestivas y renales. Consecuencia de un aumento de la cantidad de agua (hiperhidratacin): insuficiencia cardaca, renal y heptica y edema. Hiponatremia por dilucin.

Hipernatremia El aumento del nivel de sodio en la sangre puede ser la consecuencia de:

Una disminucin de la cantidad de agua (deshidratacin): prdidas digestivas, disminucin de aportacin hdrica, prdida importante de agua y sudacin. Una sobrecarga de sodio.

Potasio (kaliemia) Hipokaliemia Una disminucin del nivel de potasio en la sangre puede encontrarse en las personas que:

Sufren de vmitos o de diarreas Toman medicamentos diurticos

Hiperkaliemia Un aumento del nivel de potasio en la sangre puede producirse en las personas que:

Toman suplementos de potasio Toman medicamentos del tipo antihipertensivos, antiinflamatorios, etc.

Calcio (calcemia) El calcio es determinante en la formacin, la mineralizacin de los huesos y para la transmisin de la transmisin nerviosa. Hipocalcemia Un nivel bajo de calcio en la sangre puede ser debido a:

Un defecto de absorcin del intestino Una carencia en vitamina D Una insuficiencia renal crnica El hipoparatiroidismo Un cncer medular de la tiroides

Hipercalcemia Un nivel demasiado elevado de calcio en la sangre puede ser debida a:

La osteoporosis El hiperparatiroidismo La menopausia Acromegalia Intoxicacin por la vitamina D Inmovilizacin prolongada

Cloro (cloremia) Hipocloremia El nivel de cloro en la sangre puede disminuir en los siguientes casos:

Consecuencias de un dficit de aportacin de sodio: prdidas digestivas (diarreas) y renales

Aumento de la cantidad de agua Sudor excesivo

Hipercloremia El nivel de cloro en la sangre puede aumentar en los casos siguientes:

Deshidratacin excesiva por sudacin, prdidas digestivas Sobrecarga de sodio Hipoparatiroidismo Cncer medular de la tiroides

Magnesio El magnesio facilita las reacciones enzimticas del organismo, produce energa y tambin participa en la formacin del clavo plaquetario. Causas de la disminucin del magnesio El nivel de magnesio en la sangre puede disminuir en los casos siguientes:

Deportistas que se alimentan mal Personas de edad Personas que consumen demasiado alcohol Personas que sufren de problemas digestivos Personas que toman medicamentos diurticos

Causas del aumento de magnesio El nivel de magnesio en la sangre puede aumentar en personas que:

Sufren de insuficiencia renal Toman complementos a base de magnesio

Bicarbonatos Causas de la disminucin de los bicarbonatos El nivel de bicarbonatos en la sangre puede disminuir en personas que presentan las patologas siguientes:

Acidosis metablica

Cetoacidosis en el diabtico Estados de choque (acidosis lctica) Insuficiencia renal Insuficiencias hepticas severas Hiperventilaciones crnicas

Causas de la elevacin de los bicarbonatos El nivel de bicarbonatos en la sangre puede aumentar en personas que presentan las patologas siguientes:

Insuficiencias respiratorias crnicas Alcalosis metablicas por vmitos repetidos o diarreas

Uroanlisis: El uroanlisis puede revelar enfermedades que han pasado inadvertidas debido a que ellas no producen signos o sntomas llamativos. Los ejemplos incluyen diabetes mellitus, varias formas de glomerulonefritis, y las infecciones crnicas del tracto urinario. El dispositivo ms rentable para el anlisis de orina es un papel o tirita de plstico. Este sistema microqumico ha estado disponible durante muchos aos y ha permitido el anlisis cualitativo y semi-cuantitativo dentro de un minuto por observacin simple pero cuidadosa. El cambio de color que ocurre en cada segmento de la tira se compara a un cuadro de colores para obtener los resultados. Sin embargo, el doctor descuidado, tcnico, o ayudante es completamente capaz de leer mal o interpretar mal los resultados. El urianlisis microscpico requiere slo un microscopio de luz relativamente barato. Uroanlisis Macroscpico La primera parte de un urianlisis es la observacin visual directa. La orina normal, fresca es clara o amarillo oscura o mbar. El volumen de orina normal es 750 a 2000 ml/24hr. Turbiedad u opacidad puede ser causada por material celular excesivo o protenas en la orina o puede desarrollarse de cristalizacin o precipitacin de sales mantenida a temperatura ambiente o en el refrigerador. La aclaracin de la muestra despus del agregado de una cantidad pequea de cido indica que esa precipitacin de sales es la causa probable de turbidez. Un color rojo o rojocastao (anormal) podra deberse a colorantes de alimentos, comer remolachas frescas, una droga, o la presencia de hemoglobina o mioglobina. Si la muestra contuviera muchos glbulos rojos, estara tambin teida rojo. Anlisis Qumico de Orina

(Referencias ver anexo ) Uroanalisis microscpico: El examen microscpico para sedimento urinario es un procedimiento rutinario realizado por la gran mayora de los laboratorios clnicos. Es un examen fcil de ejecutar, sencillo, seguro, preciso, confiable y barato, que puede ser de gran ayuda diagnstica y pronstica en el estudio renal. Elementos formes identificables Los elementos del sedimento que debieran ser identificados mediante un examen microscpico de orina son los siguientes (ver Anexo ): Clulas epiteliales: Escamosas Del tbulo renal Urotelial o del epitelio de transicin Clulas sanguneas: Eritrocitos Leucocitos Cilindros: Bacterianos Hialinos Granulosos finos Granulosos gruesos

Creos Eritrocitarios Leucocitarios Microorganismos: Bacterias Parsitos Levaduras Cristales (Ver Anexo ): Uratos amorfos Fosfatos amorfos Oxalato de calcio Fosfato triple Acido rico Placas de colesterol Cistina Varios: Contaminantes Mucus Espermatozoides

Materiales y mtodos:
VDRL: (prospecto ver anexo )
Equipos y materiales: - Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de dimetro cada uno. - Micropipeta de 50 - Microscopio -Agitador Drogas: -Reactivo A : suspensin acuosa de antgeno de cardiolipina y lecitina purificados, en buffer fosfatos con cloruro de colina y EDTA de acuerdo a las indicaciones de la O.M.S. Muestra: Suero o plasma previamente centrifugada. Procedimiento: Con una micropipeta tomar muestra y colocarla en uno de los sectores de la placa de vidrio, luego con la ayuda de un gotero sobre sta poner una gota del reactivo (previamente bien agitado para no ocasionar errores posteriores) y llevar a un agitador por 4 min a 180 RPM. Una vez pasado el tiempo observar en el microscopio con un objetivo de 40 x la formacin o no de floculacin.

Antigenos febriles: (prospecto ver anexo )

Equipos y materiales: -Agitador - Placa de vidrio - Micropipeta de 50 -palillos mezcladores descartables Drogas: -Reactivos Antgenos Febriles Salmonella: - Antgenos Paratyphoid A (Salmonella, antgeno flagelar a).

- Antgenos Paratyphoid B (Salmonella, antgeno flagelar b). - Antgenos Typhoid H (Salmonella, antgeno flagelar d). - Antgenos Typhoid O (Salmonella, antgeno somtico D). Antgenos Febriles Brucella Muestra: Suero o plasma previamente centrifugado. Procedimiento: Con la ayuda de una micropipeta poner en 5 cuadriculas de la placa de vidrio una gota de la muestra. Con un gotero colocar una gota de cada reactivo previamente agitado sobre dichas cuadriculas evitando que toquen la gota de muestra, a continuacin agitar y homogeneizar bien. Llevar por dos minutos al agitador a 0,35 RPM. Retirar y observar a la luz, si es necesario, la formacin o no de aglutinacin.

PCR: (ver prospecto anexo )

Equipos y materiales: -Agitador - placas de plstico o vidrio fondo negro - micropipeta de 50 - palillos mezcladores descartables. Drogas: -Reactivo A: suspensin de partculas de ltex-poliestireno sensibilizadas con anticuerpos anti-PCR. Muestra: suero o plasma previamente centrifugada. Procedimiento: Colocar sobre la placa de vidrio una gota de la muestra y, evitando que toque a la misma, una gota del reactivo. Homogeneizar bien y llevar a agitar por 2 min a 0,70 RPM. Observar la formacin o no de aglutinaciones.

Artritest directo: (ver prospecto anexo )

Equipos y materiales: -Agitador -Placa de plstico o vidrio fondo negro

-micropipeta de 50 -Palillos mezcladores descartables. Drogas: -Reactivo A: suspensin de partculas de ltex poliestireno de 0,20 micrones de dimetro, que tienen adsorbidas molculas termo agregadas de gamma-inmunoglobulina o fraccin II de Cohn. Muestra: suero o plasma previamente centrifugada. Procedimiento: Idem PCR, lo nico que vara es el reactivo utilizado.

Toxotest HAI: (ver prospecto anexo )

Equipos y materiales: -Policubetas con pocillos de fondo en U -Micropipeta de 75 y 25 -Estufa a 37C -Cinta de papel Drogas: -Diluyente HAI -Antgeno HAI: liofilizado de glbulos rojos de carnero sensibilizados con antgenos citoplasmticos y de superficie de T.gondii. -GR no sensibilizados: suspensin al 1% de eritrocitos de carnero no sensibilizados, para control y absorcin de heterofilia. -Control Positivo: suero inactivado conteniendo anticuerpos contra el Toxoplasma gondii. Muestra: suero o plasma previamente centrifugada. Procedimiento: Con la micro pipeta colocar 75 micro litros del diluyente en el primer pocillo y 25 en los dos restantes, luego proceder a colocar la misma cantidad (25) pero de la muestra en el pocillo 1. Realizar diluciones a partir del mismo (dilucin 1/2), pasando la micro pipeta al pocillo 2 (dilucin 1/4) y luego al 3 (dilucin 1/8) y desechar el tips. En el segundo poner 25 micro litros de GR no sensibilizados y en el tercero 25 del antgeno. Con cinta de papel tapar, agitar cuidadosamente y

llevar a la estufa por 1 hora. Retirar y observar lo ocurrido en cada pocillo. (Siempre se recomienda realizar una columna con el control positivo para comparar los resultados obtenidos)

Chagatest HAI: (ver prospecto anexo )

En este caso, el procedimiento es igual que en la toxo, lo nico que cambia es el Antigeno HAI, que en este caso pasa a utilizarse uno liofilizado de glbulos rojos de carnero sensibilizados con antgenos citoplasmticos de T. cruzi y el control positivo utilizado.

HIV: (ver prospecto anexo )

Por aglutinacin pasiva Equipos y materiales: -Policubetas con pocillos de fondo en U -Micropipeta de 75 y 25 -Estufa a 37C -Cinta de papel. Drogas: - Diluyente de suero (Lquido) -Partculas no sensibilizadas (Liofilizado): Preparacin liofilizada de partculas de gelatina coloreada. -Partculas sensibilizadas HIV-1 (Liofilizado): Preparacin liofilizada de partculas de gelatina recubiertas con antgeno HIV-1 inactivado. -Partculas sensibilizadas HIV-2 (Liofilizado): Preparacin liofilizada de partculas de gelatina recubiertas con antgeno HIV-2 inactivado. -Control positivo (Lquido): Preparacin lquida de suero de conejo inmunizado contra antgenos HIV-1 y HIV-2 inactivados. Muestra: suero o plasma previamente centrifugada. Procedimientos: Colocar 75 ul del diluyente de suero en el pocillo 1, y 25 ul en los pocillos 2, 3 y 4 con la ayuda de una micropipeta. Agregar 25 ul de la muestra en el pocillo #1 mezclar llenado y descargando la micropipeta 6 7 veces. Despus, transferir 25 ul de la solucin diluida del pocillo #1 al pocillo #2 Repetir la operacin de transferencia-mezcla para los pocillos #2, #3 y #4 para obtener una serie de soluciones en duplicado. Colocar 25 ul de partculas no sensibilizadas en el pocillo #2, 25 ul de

partculas sensibilizadas HIV-1 en el pocillo #3 y 25 ul de partculas sensibilizadas HIV-2 en el pocillo #4. Finalmente tapar con la cinta de papel, agitar cuidadosamente y llevar a estufa por 1 hora, retirar y observar (al igual que en el toxotest realizar un control positivo).

Inmunocromatogrfica: Equipos y materiales: -Tira de HIV Procedimiento: Colocar una gota de la muestra esperar unos 5 min y observar la tira.

hCG: (ver prospecto anexo )

Equipos y materiales: -Tira reactiva. Procedimiento: Con la flecha de la tira sealando hacia la muestra de orina o suero, sumergirla verticalmente al menos durante 10 o 15 seg hasta que se observe que comenz a subir por la misma. Retirar y colocar sobre una superficie plana, esperar unos minutos y observar los resultados.

Ionograma:
Equipos y materiales: -Analizador in selectivo - Servilleta de papel. En este caso, tomar el tubo con la muestra y cuando nos indique el equipo colocarla bajo la parte de aspiracin del mismo. Luego de unos segundos retirar el tubo, con una servilleta limpiar la el exceso de muestra, y esperar a que el equipo nos indique los resultados.

 Uroanlisis: (ver prospecto anexo )

Procedimiento: Tomar los frasquitos de orina y trasvasarlos a tubos de plsticos para una vez as colocarles las tiras de uroanlisis y poder analizarlas. Luego llevar los tubos a la centrfuga por unos 5 minutos, retirar y tirar el sobrenadante, el resto que pertenece a sedimentos colocar en un portaobjetos y observar en el microscopio con un objetivo de 40 x la presencia de microrganismos, bacterias etc.

Resultados:
VDRL:
Reactivo A: Placa de vidrio: Micropipeta

Agitador

Muestras:

Interpretacin de resultados. a) Si las partculas observadas son en forma de filamentos cortos dispersos, el suero es no reactivo. (Negativo) b) Si las partculas se presentan agrupadas en flculos pequeos el suero es dbil reactivo. (Dbilmente positivo). c) Si las partculas se presentan agrupadas en flculos grandes el suero es reactivo. (Positivo).

De ser positivo se realiza disolucin de la muestra con solucin fisiolgica hasta que no se observen floculaciones.

Antgenos febriles:
Placa de vidrio con la muestra y los antgenos:

Interpretacin de los resultados 4+: todos los microrganismos aglutinan. 3+: aglutinan aproximadamente el 75%. 2+: aglutinan aproximadamente el 50%. 1+: aglutinan aproximadamente el 25%. Negativo: no aparece aglutinacin. En caso de un resultado positivo con alguno de los antgenos, se deben realizar diluciones hasta que no se observe aglutinacin con el mismo.

PCR:
Placas de fondo negro

Reactivo:

Interpretacin de los resultados Negativo: suspensin homognea. Positivo: aglutinacin que aparece dentro de los 2 minutos. Se califica de 1 a 4 +. En caso de ser positivo se realiza una dilucin mediante el agregado de 50 microlitros de solucin fisiolgica a la muestra, la cual se homogeniza y se va pasando de una casilla a otra mediante la utilizacin de la micropipeta. Luego se agrega el reactivo y se agita. Se realiza la disolucin hasta que no se observe aglutinacin. Ejemplo

 Artritest directo:
Placa de vidrio Reactivo

resultado negativo Interpretacin de los resultados Negativo: suspensin homognea. Positivo: aglutinacin que aparece dentro de los dos minutos. Se califica de 1 a 4 (+), siendo: 4+: aglutinacin franca

3+: moderada aglutinacin 2+: ligera aglutinacin 1+: aglutinacin dbil

Toxotest y chagatest HAI

Interpretacin de los resultados: No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botn o pequeo anillo de bordes regulares. Reactivo: formacin de una pelcula o manto que cubre el 50% o ms del fondo de los pocillos.

HIV:
Por aglutinacin pasiva

Interpretacin de los resultados Coloque la placa suavemente sobre el visor de placas (con luz indirecta), compare los patrones de aglutinacin con aquellos del control reactivo e interprete de acuerdo con los criterios presentados en la Tabla 3. Tabla 3. Interpretacin de los resultados

Inmunocromatogrfica:

Interpretacin de los resultados Los criterios para la interpretacin de la prueba se encuentran en la Tabla 2.

 hCG:

Interpretacin de los resultados

Ionograma:
Analizador ion selectivo

Interpretacin de resultados:

Valores normales Los resultados deben situarse entre:

135 y 145 mEq/l para el sodio, en el hombre, la mujer y el nio. 3,5 y 5 mmol/l para el potasio, en el hombre, la mujer y el nio. 90 - 100 mg/l para el calcio, en el hombre, la mujer y el nio. 95 y 105 mmol/l para el cloro, en el hombre, la mujer y el nio. 0,75 y 1 mEq/l para el magnesio, en el hombre, la mujer y el nio. 22 y 30 mmol/l para los bicarbonatos, en el hombre, la mujer y el nio.

Uroanlisis:

Conclusin:
Luego de haber estado las dos semanas en el rea de serologa puedo decir que aqu las prcticas realizadas se basan principalmente en la reaccin que ocurre entre el Ag-Ac. Tambin es necesario destacar que tanto para el Chagas como para el HIV es fundamental cerciorarse bien antes de confirmar dichas enfermedades. Que una prueba nos de positiva no nos puede asegurar que esa persona la posea por lo que se deben realizar otras para confirmarlo, como por ejemplo IFI, HAI o ELISA, que son unas de las mas utilizadas y confiables. Dichas pruebas, son de vital importancia realizarlas correctamente ya que las enfermedades que se analizan requieren un tratamiento que en cuanto antes esta se identifique es mejor para el paciente.

Glosario:
Heterfilos: Los anticuerpos heterfilos pueden ser definidos como un grupo de autoanticuerpos que reaccionan con mltiples antgenos, con baja afinidad; estas reacciones son inespecficas y estn presentes en pacientes con enfermedades autoinmunes como lupus, diabetes tipo 1, artritis reumatoidea etc., pueden reaccionar contra sus propias inmunoglobulinas; un ejemplo de este tipo de anticuerpos es el factor reumatoideo (IgM humana que tiene afinidad por IgG humana) Cribado: En su concepto ms amplio, se puede definir como la aplicacin de procedimientos de seleccin (cuestionario, examen fsico, test) a poblaciones de individuos aparentemente sanos con objeto de identificar, en la fase de latencia, a aquellos que pueden estar enfermos o que presentan un riesgo incrementado de padecer una determinada enfermedad porque presentan un determinado factor de riesgo. No es una prueba diagnstica definitiva y los individuos que han dado positivo deben someterse a pruebas de diagnstico para confirmar la enfermedad y, en su caso, ser sometidos a tratamiento. Floculacin: Proceso qumico mediante el cual, con la adicin de sustancias floculantes, se aglutinan las sustancias coloidales presentes en la solucin.

Bibliografa:
http://www.ehowenespanol.com/serologia-sobre_152382/ http://es.scribd.com/doc/4746199/SEROLOGIA-QUIMICA-CLINICA http://www.clinicadam.com/salud/5/003515.html http://www.diinsel.com/uroanalisis_uri_10p.html http://www.inspiraction.org/salud/sida/prueba-del-sida http://es.scribd.com/doc/15102984/TAREA-3-prueba-serologicas http://www.wiener-lab.com.ar/wienerw/vademecum.vsp