87925013PT

Prticas em
Cromatografa de ons
Uma Introduo
Monografa
Metrohm Pensalab Instrumentao Analtica Ltda.
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Prticas em Cromatografia de ons 1

Prticas em
Cromatografia de ons
Uma Introduo
2 edio
Eng. Claudia Eith
Prof. Dr. Maximilian Kolb
Qumico Achim Rumi
Prof. Dr. Andreas Seubert
Dr. Kai Henning Viehweger (Editor)
Monografia Metrohm
Todos os direitos reservados a Metrohm, incluindo traduo.
Impresso pela Metrohm Ltda., CH-9101 Herisau, Sua.
8.792.5013PT 2006-07
2 Monografia Metrohm
ndice
1. Os autores ............................................................................................................................................5
2. Introduo.............................................................................................................................................6
3. Seo terica........................................................................................................................................7
3.1. A histria e a importncia da cromatografia de ons ................................................................... 7
3.2. Teoria da Cromatografia .............................................................................................................. 9
3.2.1. Divises da cromatografia e terminologia ............................................................................ 9
3.2.2. Conceitos tericos para a descrio do processo cromatogrfico..................................... 12
3.3. Princpios bsicos da cromatografia de ons (CI) ...................................................................... 16
3.3.1. Terminologia e classificao em CL................................................................................... 16
3.3.2. Troca inica ........................................................................................................................ 17
3.3.3. Formao de par inico...................................................................................................... 18
3.3.4. Excluso de ons ................................................................................................................ 18
3.4. Modelos de reteno em cromatografia de ons ..................................................................... 19
3.4.1. Modelos de reteno em cromatografia de nions ............................................................ 19
3.4.2. Modelos de reteno em cromatografia de ctions ........................................................... 24
3.5. Sistemas de deteco em cromatografia de ons.................................................................... 27
3.5.1. Mtodos de deteco eletroqumica................................................................................... 27
3.5.2. Mtodos espectroscpicos de deteco ............................................................................ 31
3.6. Fases estacionrias em cromatografia de ons ....................................................................... 32
3.6.1. Viso geral das fases estacionrias comuns ..................................................................... 32
3.6.2. Fases estacionrias para cromatografia de nions............................................................ 34
3.6.3. Fases estacionrias em cromatografia de ctions ............................................................. 35
3.6.4. Trocadores de ctions baseados em slica gel .................................................................. 35
3.6.5. Trocadores de ctions baseados em polmeros orgnicos................................................ 35
3.6.6. Trocadores de ctions peliculares...................................................................................... 35
3.6.7. Fases estacionrias em cromatografia de excluso inica................................................ 36
3.6.8. O significado da capacidade dos trocadores de ons......................................................... 36
3.7. Eluentes em cromatografia de ons ......................................................................................... 37
3.7.1. Cromatografia de nions .................................................................................................... 37
3.7.2. Cromatografia de ctions.................................................................................................... 40
3.7.2.1. Cromatografia de ctions de ons alcalinos, alcalino-terrosos e amnia com deteco de
condutividade.......................................................................................................................................... 40
3.7.2.2. Cromatografia de ctions de ons metal de transio e alcalino-terrosos com deteco pela
derivatizao ps-coluna e fotomtrica................................................................................................... 40
3.7.2.3. Cromatografia de excluso de ons............................................................................................ 42
4. Seo prtica......................................................................................................................................43
4.1. Informaes sobre a parte prtica ............................................................................................. 43
4.2. Experimentos abrangendo a teoria da cromatografia de ons................................................ 47
4.2.1. Experimento 1 Cromatografia de ons com e sem supresso ........................................ 47
4.2.2. Experimento 2 Capacidade das colunas de separao.................................................. 51
4.2.3. Experimento 3 Seletividade das colunas de separao.................................................. 54
4.2.4. Experimento 4 Limites de calibrao, deteco e determinao na cromatografia de ons
...................................................................................................................................................... 60
Experimento 4a Determinao de nions com supresso qumica .......................................... 61
4.2.5. Experimento 5 Alterao da seletividade com o auxlio de teres coroa (18 Crown-6) . 64
4.2.6. Experimento 6 Alterao da seletividade pela utilizao de agentes complexantes...... 67
4.2.7. Experimento 7 Tcnica de pr-concentrao.................................................................. 72
4.3. Experimentos para a determinao de nions ....................................................................... 75
4.3.1. Experimento 8 nions em gua potvel .......................................................................... 75
4.3.2. Experimento 9 nions em etanol e destilados (licores) .................................................. 79
4.3.3. Experimento 10 nions em alface................................................................................... 85
4.3.4. Experimento 11 cido fosfrico em refrigerantes tipo cola........................................... 88
4.3.5. Experimento 12 cidos orgnicos em vinho ................................................................. 93
4.3.6. Experimento 13 Contaminantes em borato determinao de cloretos e sulfatos em
solues de brax......................................................................................................................... 98
4.3.7. Experimento 14 Determinao de nions em gua efluente........................................ 104
4.3.8. Experimento 15 Fluoreto em creme dental ................................................................... 108
4.3.9. Experimento 16 nions em acar refinado branco e mascavo................................... 111
4.3.10. Experimento 17 Contaminantes em perxido de hidrognio ...................................... 115
4.4. Experimentos para a determinao de ctions .................................................................... 121
4.4.1. Experimento 18 Metais alcalinos e metais alcalino-terrosos em gua potvel............. 121
4.4.2. Experimento 19 Determinao de metais de transio................................................. 125
Experimento 19a Determinao de metais de transio com um eluente contendo cido
tartrico, cido ctrico, etilenodiamina e acetona ....................................................................... 126
4.4.3. Experimento 20 Contaminantes em slica gel determinao de ons clcio e magnsio
.................................................................................................................................................... 131
4.4.4. Experimento 21 Cosmticos e proteo contra corroso: determinao de etanolaminas
e metais alcalinos ....................................................................................................................... 134
4.4.5. Experimento 22 Metais alcalinos e metais alcalino-terrosos em vinho......................... 138
5. Literatura citada............................................................................................................................... 142
1. Os autores
Claudia Eith
Estudou Qumica na Fachhochschule em Aalen; realizou trabalhos prticos na rea de anlise de
gua potvel e efluentes em Adelaide (Austrlia). Desde 2000 desenvolve trabalhos na diviso de
Pesquisa e Desenvolvimento da Metrohm Ltda.
Maximilian Kolb
Estudou Qumica na Technical University em Munique, com nfase em pesquisas na rea de catlise
homognea. Gerenciou o setor de qualidade da Diviso Pblica de guas em Traunstein por cinco
anos. Desde 1982, professor na Fachhochschule em Aalen; reas de trabalho: tecnologia e
controles ambientais e quimiometria.
Achim Rumi
Estudou Qumica no Swiss Federal Institute of Technology (ETH), Zurique, Sua. Desde 2005
Especialista de Produto IC na Metrohm Ltda.
Andreas Seubert
Estudou Qumica na Hannover University; promoo em 1990: Anlise de ultratraos em metais
refratrios altamente puros com separao de traos da matriz por Cromatografia de ons;
habilitao em 1995: Aplicaes em linha da Cromatografia Lquida acoplada a Espectrometria
Atmica em anlise elementar. De 1998 a 2000: Professor temporrio em Qumica Analtica na
Kassel University. Desde maro de 2000 Professor de Qumica Analtica na Philipps University em
Marburg.
Kai Henning Viehweger
Estudou Qumica na Hamburg University; tese na rea de anlise inorgnica; promoo na rea de
pesquisa em sistemas ecolgicos marinhos e em esturios. Desde 1996, no Setor de Marketing na
Metrohm Ltda. Gerncia internacional do centro de competncia em cromatografia de ons.
2. Introduo
Examinar coisas que no se revelam por si mesmas sempre um desafio. As razes para isto variam
desde uma simples curiosidade at uma real necessidade de sobrevivncia. H vrias formas de se
desvendar estes mistrios. A forma mais simples usando os sentidos humanos: audio, tato,
olfato, paladar e viso. Nos primrdios, os alquimistas gostavam de usar estes cinco sentidos. por
isso que sentimos um sabor azedo quando provamos cidos e, o bromo tem seu nome derivado de
bromos, ftido em Grego. A olho nu, uma soluo de cromo mostra-se colorida, sendo desta forma
associada ao termo Grego chroma, ou seja, cor. Os alquimistas tambm expressavam seus
sentimentos com insultos tais como you kobold para cobalto, cuja presena causou aos nossos
ancestrais grande dificuldade na produo de ferro.
Muitas vezes, componentes presentes em diversos tipos de materiais no podem ser vistos
diretamente. Eles esto to fortemente misturados que os sentidos humanos no so capazes de
identific-los. neste momento que a anlise utilizada. possvel extrair informao precisa de
uma mistura indefinida de componentes, a qual no pode ser obtida apenas pelos sentidos humanos.
Embora o organismo seja repleto deles, os sentidos humanos no podem identific-los diretamente.
Estamos falando dos ons, aqueles tomos ou molculas carregados eletricamente que so parte
integral de praticamente toda matria viva ou morta. Os ons so responsveis pela transferncia de
informao atravs dos nervos, pela garantia de que a digesto ocorrer, de que a presso
sangunea est correta e de que h oxignio suficiente no sangue. Os ons produzem sal no mar,
controlam sua sede e os constituintes inicos so usados como alimento por todos os seres vivos
desde as bactrias at os seres humanos.
O conhecimento sobre os tipos e nmero de ons presentes no ambiente nos ajuda a entender as
interaes ecolgicas e bioqumicas. Caso as concentraes inicas em um determinado alimento
sejam conhecidas, isto nos permitir saber se o alimento seguro para o consumo ou no.
H diferentes formas de se determinar os ons qualitativamente (pelo tipo) e quantitativamente (pela
quantidade). Cada parte da informao importante. Um mtodo usado para a obteno desta
informao a cromatografia de ons. Basicamente, cromatografia significa escrever em cores. Em
anlise qumica clssica isto significa a separao de substncias, de acordo com suas cores, e sua
determinao, pela observao visual. Apesar de nem todos os ons serem caracterizados por cores
visveis, o termo mantido, mas outros mtodos de deteco so usados hoje em dia.
A cromatografia de ons um membro da grande famlia de mtodos cromatogrficos. Basicamente,
ela pode ser usada para determinar qualquer on que carregue uma ou mais cargas. No passado, a
cromatografia de ons ou CI era um mtodo muito dispendioso, mas hoje em dia, tem um preo bem
mais favorvel. Por isso, ela se tornou uma ferramenta analtica poderosa e universal, sendo fcil de
usar.
Esta monografia Prticas em Cromatografia de ons demonstrar que a IC no apenas um
assunto abstrato ou somente terico, mas que ela pode fornecer respostas rpidas para os
problemas do dia-a-dia tais como: A gua potvel est adequada para os bebs consumirem? Qual
a quantidade de nitrato que h no espinafre? Um determinado efluente causa poluio ambiental?
Visto que, um trabalho analtico prtico exato quase impossvel sem uma base terica, esta
monografia tambm contm informaes detalhadas em uma seo terica.
Prticas em Cromatografia de ons tem como objetivo, no apenas fornecer conhecimentos sobre
os princpios bsicos da CI, mas tambm uma viso geral dos princpios cromatogrficos. Alm disso,
a cromatografia pode proporcnionar muitos feitos: satisfazer a curiosidade cientfica e assugurar uma
sobrevivncia saudvel em um ambiente poludo.
3. Seo terica
3.1. A histria e a importncia da cromatografia de ons
Os primrdios da Cromatografia de ons (CI) ou, mais precisamente da cromatografia de troca inica,
remetem-se metade do sculo passado. Entre 1935 e 1950, os conhecimentos sobre trocadores
inicos e suas aplicaes foram consideravelmente expandidos pelo Projeto Manhattan. Nos anos
50 e 60, foram desenvolvidos modelos tericos para a compreenso do fenmeno de troca inica e
da cromatografia de ons, nos quais esta monografia se baseia. Detectores para fluxos contnuos
foram usados nos anos 70; isto permitiu um salto na mudana da cromatografia de baixa-presso
para a de alta-eficincia.
Tabela 1. Histria dos trocadores de ons e da cromatografia de ons, a tcnica analtica baseada na
troca inica
O termo cromatografia de ons foi criado em 1975 por Small, Stevens e Baumann com a introduo
da deteco por condutividade combinada com um mtodo qumico de reduo da condutividade;
subseqentemente, foi usada por um longo tempo como um nome comercial patenteado para fins de
marketing. Enquanto isso, o termo abreviado Cromatografia de ons se estabeleceu como o termo
especfico para os mtodos de cromatografia de formao de pares inicos, excluso inica e troca
inica, includos sob a cromatografia lquida de alta eficincia - CLAE (HPLC, do ingls: High
Performance Liquid Chromatography) [1]. Hoje, a tcnica CI aplicada na determinao de nions
enquanto os mtodos de espectrometria atmica, comumente usados para a determinao de
ctions, so raramente teis para a determinao dos nions eletronegativos do quinto ao stimo
grupo do sistema peridico.
A rea de aplicao mais importante da cromatografia de nions, hoje, a investigao de rotina dos
sistemas aquosos; isto de vital importncia na anlise de gua potvel [2,3,4,]. A CI tambm
usada para a anlise das espcies de elementos em complexos ou elementos aninicos, isto ,
principalmente para resolver problemas de relevncia ambiental. O terceiro campo de aplicao da
cromatografia de nions o controle de ultratraos em processamento de reagentes ultrapuros
requeridos principalmente na indstria de semicondutores.
Hoje, os trocadores de ons, normalmente usados na CLAE (HPLC), consistem de partculas esfricas
de polmero com um dimetro de aproximadamente 5 a 15 m. Vrios mtodos so usados para
anexar os chamados grupos ncoras na superfcie deste polmero; estes so usados como
espaadores entre o polmero bsico e os grupos funcionais efetivos. Estes grupos funcionais
normalmente consistem de ons amnio quaternrio, os quais so quimicamente anexados aos
grupos ncoras. O nmero total de grupos funcionais conhecido como a capacidade de troca; isto
uma caracterstica bsica dos trocadores de ons.
Materiais de empacotamento, disponveis comercialmente para cromatografia de nions, apresentam
natureza de baixa capacidade com capacidades de troca de 50 a 100 mol por coluna de separao.
CL
CLAE
Desta forma, as principais aplicaes requerem o uso de detector de condutividade, o qual usado
universalmente devido sua sensibilidade, e de eluentes que tenham a mais baixa condutividade
possvel (background ou sinal de fundo). Trocadores aninicos de baixa capacidade permitem o uso
de solues aquosas de NaOH ou de tampo carbonato muito diludas, cuja condutividade pode ser
reduzida at mesmo pelo recurso da supresso qumica [2,4].
Em cromatografia de nions, so usados hoje em dia principalmente os grupos funcionais do Tipo I
(trimetilamnio ou TMA) e do Tipo II (dimetiletanolamnio ou DMEA). Visto que a interao mais
significativa entre a fase estacionria e os nions do analito acontece no grupo funcional, isto significa
que sua estrutura tem uma influncia decisiva no comportamento seletivo dos materiais de
empacotamento. De acordo com o conhecimento atual, a polaridade dos grupos funcionais, a qual
pode ser controlada por um nmero de resduos hidroxietila (-CH
2
CH
2
OH) no nitrognio quaternrio,
de particular importncia [2,4].
O termo cromatografia de ons inclui todas as separaes de espcies inicas dentro da
Cromatografia com deteco em fluxo contnuo e independente de limitaes em equipamentos [5].
A CI tem sido o mtodo escolhido, dentre os disponveis em anlise aninica, graas grande
variedade de colunas de separao, sistemas de eluio e detectores que hoje esto mais
disponveis. A razo para isto que existem poucos processos de separao de nions; estes so
raramente disponibilizados para fins prticos, enquanto que os mtodos gravimtricos e volumtricos
so limitados pela sua sensibilidade e seletividade. Mesmo com o desenvolvimento espetacular da
cromatografia gasosa desde 1965 ela no apresentou grandes vantagens para os nions, visto que
estes no so volteis. Desta forma, precisavam ser primeiramente derivatizados, mas a
sensibilidade deste mtodo no foi suficiente para atender a demanda que existe hoje em anlise de
traos [6]. Para a anlise de ctions, existem alternativas de espectrometria atmica que possuem
alta eficincia (exemplo, ICP-AES/MS), portanto, o valor da cromatografia de ctions
consideravelmente menor quando comparado com o da cromatografia de nions. No entanto, a
cromatografia de ctions tem alcanado grande importncia na anlise de metais alcalinos e alcalino-
terrosos, na determinao de nitrognio amoniacal (anlise em gua potvel) e na especiao de
compostos inicos, em combinao com detectores de elementos especficos. Os trabalhos de
Haddad e Weiss [2,4] oferecem uma boa viso geral das aplicaes de CI em vrios setores.
3.2. Teoria da Cromatografia
3.2.1. Divises da cromatografia e terminologia
Cromatografia um mtodo fsico-qumico para separar misturas de substncias. O efeito de
separao baseado na distribuio entre duas fases: uma fase estacionria e a segunda uma
fase mvel que flui em uma determinada direo [7,8]. As tcnicas cromatogrficas so divididas de
acordo com os estados fsicos das duas fases mencionadas:
Figura 1 Diviso dos mtodos cromatogrficos de acordo com os estados fsicos das fases
estacionria e mvel.
Uma adicional diferenciao dos mtodos cromatogrficos pode ser feita de acordo com os
processos bsicos que ocorrem durante a separao, tais como adsoro ou distribuio; ou de
acordo com o tipo de procedimento utilizado (cromatografia planar ou por coluna) [9].
Parmetros de reteno
Se uma mistura de substncias for submetida separao cromatogrfica, um equilbrio de
distribuio formado entre as fases estacionria e mvel para cada componente individual. As
substncias s podem ser separadas com sucesso quando os coeficientes de distribuio D dos
componentes diferirem suficientemente uns dos outros. D definido como a relao entre as
concentraes de uma substncia A na fase estacionria (ndice
S
) e na fase mvel (ndice
M
):

M
S
A
[A]
[A]
D = (1)
As substncias que possuem maiores coeficientes de distribuio D sero retidas mais fortemente do
que aquelas com D menores. O procedimento de separao cromatogrfica mostrado na forma de
um cromatograma, no qual um sinal de um detector registrado em funo do volume (ou do tempo)
de eluio da fase mvel. Isto significa que ele corresponde ao perfil de massa ou concentrao em
funo do tempo. O sinal detectado deve ser proporcional concentrao do analito no final do
processo de migrao [8]. Como demonstrado na Equao 2, o tempo de reteno ou tempo de
reteno bruto t
R
de uma substncia na fase estacionria obtido pela adio do tempo de
reteno lquido t
S
, o qual corresponde ao tempo de reteno real no processo de migrao, e o
tempo de corrida na fase mvel sem qualquer interao, o tempo morto t
M
.
M S R
t t t + = (2)
Devido formao de canais, processos de difuso ou irregularidades no equilbrio adquirido entre as
fases estacionria e mvel, algumas partculas podem passar atravs da fase estacionria mais
lentamente ou mais rapidamente do que esperado pelo tempo de reteno lquido t
S
. Isto significa
que um cromatograma no consiste de um nmero infinito de sinais discretos, mas idealmente de
picos Gaussianos (vide Figura 2).
Lquido
Fase Mvel
F
a
s
e

E
s
t
a
c
i
o
n
r
i
a

Lquido
Lquido
Gasoso
Slido
CSL
CLL CLG
CSG
Figura 2
Cromatograma de
eluio de uma
separao por
cromatografia de ons
com indicao dos
parmetros mais
importantes.
Figura 3
Distribuio
Gaussiana com as
quantidades mais
importantes.
Como resultado de processos de difuso, os quais aumentam em importncia conforme aumento do
tempo de residncia na fase estacionria, a largura do pico de uma substncia aumenta com o
aumento do tempo de reteno. Este fenmeno caracterstico de todos os mtodos
cromatogrficos.
Conforme foi mencionado, sob circunstncias ideais, um pico em um cromatograma mostra a
distribuio Gaussiana. A Figura 3 mostra um exemplo da distribuio Gaussiana.
A largura na metade da altura do pico conhecida como largura-mdia b
0,5
e corresponde a uma
varincia o de 2,354-vezes a distribuio. A largura da base w definida como a distncia entre os
pontos de interseco das tangentes inclinadas com o eixo y, a qual a mesma que a varincia 4-
vezes da funo de Gauss. Ambas as quantidades so parmetros de medida do desempenho de
uma coluna de separao cromatogrfica e, com uma forma de pico ideal, podem ser usadas para
calcular o nmero de pratos tericos.
Analito 1
Analito 2
Sinal
rea
Alt ura
Resoluo
Formao de
Cauda
Tempo mort o
Tempo d e reteno, analit o n
Tempo d e reteno l quido
Fat or d e reteno
Fat or d e assimet ria
Resoluo
Coef ici ent e de sel etivi dade
Tempo ou volume
Si nal
Tempo ou
vol ume
Variaes da forma ideal de pico podem ser descritas pelo chamado fator de assimetria T. Isto
definido pela relao entre as distncias A e B medidas entre a linha vertical central e as inclinaes
da distribuio a 10% de sua altura (vide Figuras 2 e 3) e pode ser calculado por:
A
B
T = (3)
Para picos perfeitamente Gaussianos, T = 1. Para valores de T maior que 1, o pico apresentar
cauda, enquanto que para valores menores, uma deformao frontal. Na prtica, a inteno
adquirir um fator de assimetria de T = 0,9 a 1,1.
Fator de reteno, seletividade e resoluo
Como o tempo de reteno bruto t
R
depende muito das condies cromatogrficas, somente sob
condies definidas que ele caracterstico para uma substncia em particular e, portanto, pode ser
usado para identificao qualitativa. Se introduzirmos uma constante adimensional, o fator de
reteno k; conseguiremos comparar diferentes sistemas cromatogrficos. Esta constante fornece
informao mais precisa sobre quanto tempo a mais uma substncia permanece na fase estacionria
do que na fase mvel [8]. O fator de reteno matematicamente definido como o produto do
coeficiente de distribuio D pela proporo entre os volumes das fases estacionria e mvel ou
como a proporo entre o tempo de reteno lquido e o tempo morto. Com um clculo envolvendo o
comprimento L do caminho de migrao e a velocidade linear u da fase mvel tambm possvel
definir o fator de reteno (Equao 4).
1 -
L
t u
t
t
=
V
V
D = k'
R
M
S
M
S

= (4)
Para valores pequenos de k, uma substncia elui prximo ao tempo (ou volume) morto do sistema
cromatogrfico; isto significa que a separao pobre. Se o k for muito grande significa que, embora
a separao seja boa, a um longo tempo de residncia no caminho de migrao e o pico torna-se
mais largo. Idealmente, o fator de reteno deve estar entre 2 e 5.
Duas substncias sero adequadamente separadas apenas se seus fatores de reteno diferirem um
do outro significativamente. O coeficiente de seletividade o, tambm conhecido como o fator de
separao relativa, uma medida da capacidade de separao de duas substncias e definido
como segue:
(5)
Se duas substncias no podem ser separadas, ento o = 1 e a coeluio ocorre. Quanto maior o
valor de o, melhor a separao. Entretanto, se o aumenta, o tempo requerido para a separao
tambm aumenta, sendo que na prtica, os coeficientes de seletividade so ideais quando so
prximos de 1.5 [10].
O coeficiente de seletividade no descreve a qualidade do processo de separao. A resoluo R,
entretanto, considera tanto as posies relativas dos picos, bem como suas larguras-mdias b
0.5
ou
larguras da base w, como pode ser visto na Equao 6.
(6)
Se a diferena entre os tempos de reteno de dois picos for grande em relao das larguras da
base ou larguras-mdias, ento a resoluo boa. No caso de uma simetria de pico ideal, duas
substncias podem ainda ser identificadas com R = 0,5. Para separao qualitativa, R deve ser de,
pelo menos, 1 (separao com 4o); para quantificao, uma resoluo de R = 1,2 a 1,5 requerida
[25]. Resolues de R > 2 (separao com 8o) so evitadas devido ao longo tempo de anlise
envolvido.
3.2.2. Conceitos tericos para a descrio do processo cromatogrfico
O modelo dos estgios tericos de separao
O modelo dos estgios tericos de separao derivado do processo de destilao e usado para
descrever separaes cromatogrficas [11]. Ele divide a fase estacionria em sees discretas,
estgios ou pratos tericos de separao, nos quais, a princpio, um equilbrio infinitamente rpido e
completamente reversvel entre as fases estacionria e mvel alcanado. A performance
(eficincia) de um sistema cromatogrfico , portanto, caracterizada por um nmero maior possvel de
estgios tericos de separao.
O nmero de pratos tericos N pode ser determinado diretamente do cromatograma pela utilizao
da varincia o, a largura da base w ou a largura-mdia b
0.5
, e calculado como se segue [12]:
2
R
2
0,5
R
2
R
t
=
b
t
(2) ln 8 =
w
t
16 = N |
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
|
.
|
\
|
o
(7)
Ao invs do nmero de pratos tericos, a Altura Equivalente ao Prato Terico (HETP) pode
tambm ser usada para descrever a eficincia da separao.
(8)
Das Equaes 5 a 8, pode ser visto que uma fase estacionria com um grande nmero de pratos
tericos pode ainda separar duas substncias, mesmo que seus fatores de reteno no sejam to
diferentes. As equaes tambm permitem o clculo do nmero de pratos tericos, os quais so
necessrios para resolver um problema de separao.
O modelo de estgios tericos de separao pode ser usado para explicar a ocorrncia de sinais
Gaussianos na cromatografia se for assumido que, devido aos processos de fluxo e difuso, apenas
um equilbrio incompleto e finitamente rpido alcanado entre as fases estacionria e mvel. Isto
resulta em um processo de alargamento do pico, visto que uma zona estreita contendo a substncia,
no incio do caminho de migrao, torna-se, claramente, mais larga com o aumento do tempo de
residncia na fase estacionria.
O clculo do nmero dos pratos tericos, de acordo com a Equao 7, assume que a forma do pico
ideal; entretanto, isto raramente ocorre na realidade. Com picos de formas assimtricas, o clculo
deve ser realizado de acordo com o mtodo momentneo [13]. A Equao 9 inclui o fator de
assimetria T e produz valores aproximados.

(9)
Um nmero de pratos efetivos n, que representa a real eficcia de separao mais precisamente do
que o nmero de pratos tericos N corrigido pelo fator de reteno k e obtido de:

(10)
A teoria dinmica (teoria de Van Deemter)
A decisiva fragilidade do modelo de estgios tericos de separao que a destilao e a
cromatografia so baseadas em dois processos fsico-qumicos fundamentalmente diferentes. Alm
disso, nenhuma hiptese foi feita sobre a influncia de parmetros importantes, que sejam
experimentalmente acessveis e que no afetam o tipo ou qualidade da fase estacionria em si
[14,15]. Estes poderiam ser:
- Vazo da fase mvel
- Dimetro das partculas da fase estacionria
- Espessura dos filmes superficiais no material de empacotamento.
1,25 + T
b
t
41,7 = N
2
0,5
R
(
2
k'+1
k'
N = n |
.
|
\
|

Alm disso, quantidades tais como os coeficientes de difuso nas fases estacionria e mvel, a
temperatura ou o volume do detector na cromatografia lquida so muito importantes para a eficincia
da separao.
A teoria dinmica desenvolvida por van Deemter , em princpio, uma extenso do modelo de
estgios tericos de separao, a qual no leva em considerao as condies limitantes no-ideais
[16]. As seguintes suposies so feitas:
- no h alcance espontneo ou desimpedido de equilbrio
- h transporte de massa atrasado nas fases estacionria e mvel
- no h vazo homognea da fase mvel sobre a completa seo cruzada da coluna
- h ocorrncia de difuso de espalhamento e formao de canais na fase estacionria
- h difuso longitudinal independente da velocidade da fase mvel e diretamente proporcional
ao tempo de reteno no caminho
A relao entre os efeitos dinmicos mencionados acima e a altura equivalente a um prato terico
dada pela equao de van Deemter.
(11)
Os trs termos A, B e C dependem, de diferentes maneiras, da vazo u da fase mvel. Os termos A
e B descrevem o completo transporte de massa atravs da fase estacionria; o termo C
determinado pela interferncia no alcance do equilbrio entre as fases estacionria e mvel.
O Termo A descreve a difuso circular em contra-fluxo, a qual pode ser considerada como sendo
uma causa do alargamento do pico devido a um efeito multi-vias. Este termo tambm conhecido
como o fator de empacotamento e, independente da vazo linear u da fase mvel, pelo menos em
uma primeira aproximao. A seguinte relao se aplica ao termo A:

p
d 2 A = (12)
Na Equao (12), d
P
o dimetro mdio de partculas na fase estacionria, descreve a
irregularidade estatstica do empacotamento; este deveria ser o mais homogneo possvel e consistir
de partculas uniformes.
u C
u
B
A HETP + + =
O Termo B descreve a difuso longitudinal a favor ou contra a direo do fluxo da fase mvel. de
particular interesse quando colunas capilares so usadas em cromatografia gasosa (CG), uma vez
que os coeficientes de difuso em gases so maiores em 4 a 5 potncias de dez do que em lquidos.
B calculado como sendo o produto do coeficiente de difuso na fase mvel D
M
e o fator labirinto , o
qual descreve a porosidade da fase estacionria.
M
D 2 B = (13)
Como a importncia da difuso diminui com o aumento da vazo da fase mvel, isto significa que B
inversamente proporcional a u.
O Termo C conhecido como o termo de transferncia de massa. O atraso na transferncia de
massa entre as fases estacionria e mvel, geralmente, tem a maior influncia sobre o alargamento
do pico. A interferncia no alcance do equilbrio entre as fases estacionria e mvel aumenta com o
aumento de u, e por isso que h uma proporcionalidade direta para com a vazo linear. Atrasos na
transferncia de massa resultam de um coeficiente de difuso D
S
muito pequeno na fase estacionria
em comparao com a fase mvel. O termo C pode ser consideravelmente reduzido por caminhos de
difuso curtos e processos de transferncia rpidos. Isto pode, principalmente, ser alcanado pela
localizao dos poros na superfcie, para que apenas um pouco se estenda para o interior da fase
estacionria. O termo C de transferncia de massa calculado como segue:
( )
S
2
D
dp
k' + 1
k' 16
= C
t
(14)
A representao grfica da equao de van Deemter mostra uma curva hiperblica, da qual o valor
mnimo de vazo u para a mnima altura de prato (nmero mximo de pratos) pode ser determinada
(Figura 4).
Termo B
Termo A
Termo C
Vazo u
Figura 4 Representao dos termos individuais da teoria de van Deemter com a curva
mostrando o valor timo de vazo.
Mesmo a teoria dinmica baseada em aspectos ideais. Na realidade, os trs termos A, B e C s
so independentes um do outro em uma primeira aproximao, havendo uma influncia adicional da
vazo u na difuso circular em contra-fluxo (Termo A). O termo C pode ser diferenciado pela
utilizao dos termos C
M
e C
S
, os quais descrevem a transferncia de massa na fase mvel (C
M
) e da
fase estacionria (C
S
). por isso que a equao original de van Deemter tem sido modificada por
numerosas aplicaes em CLAE, CG e camada delgada [17,18].
Cromatografia lquida moderna
A cromatografia lquida (CL) deve ser considerada como o termo genrico para muitos mtodos
modernos de separao usando componentes no estado lquido. Ela pode ser usada para uma
grande variedade de substncias diferentes e caracterizada por sua excelente performance
analtica. A CL tambm inclui a cromatografia de ons (CI), que provavelmente o mais importante
mtodo de separao usado em qumica analtica moderna [3].
A CLAE um desenvolvimento subseqentemente lgico da cromatografia lquida clssica (CL). Na
CL clssica, introduzida por Tswett em 1906, colunas de vidro com dimetro de 1 a 5 cm e
comprimento de at 500 cm foram usadas; estas eram preenchidas com fases de separao
contendo partculas medindo de 150 a 200 m. Mesmo as separaes de substncias em misturas
simples freqentemente duravam horas com uma eficcia mdia de separao. Como resultado da
compreenso do processo cromatogrfico, o qual foi posteriormente desenvolvido (vide Equao 11),
tornou-se claro que o aumento na eficcia s poderia ser alcanado pela reduo do dimetro das
partculas da fase estacionria; entretanto, isto implicou em exigncias completamente novas para os
equipamentos usados em cromatografia.
Desde aproximadamente 1970, uma tecnologia especial e poderosa de instrumentos tornou-se
disponvel, a qual capaz de ultrapassar uma alta contra-presso de 10 a 50 MPa que ocorre quando
materiais de empacotamento com partculas de dimetro de 3 a 10 m e colunas de separao de
125 a 250 mm de comprimento por 4 mm de dimetro interno so usadas.
Como resultado da miniaturizao, a CLAE desenvolveu-se como um mtodo de separao
puramente analtico; em contraste, a CL clssica atualmente utilizada praticamente apenas para
fins preparativos. As vantagens da CLAE em comparao CL clssica so principalmente:
- excelente eficincia cromatogrfica
- processo de trabalho contnuo
- deteco on-line das substncias separadas
- alta sensibilidade e reprodutibilidade
- utilizao do tempo de reteno para identificao qualitativa das substncias
- menor tempo de anlise
Independente de sua rea de aplicao, um sistema CLAE consiste principalmente dos componentes
mostrados na Figura 5: a bomba de alta eficincia com estoque da fase mvel (eluente), injetor (para
introduo da amostra), coluna de separao e sistema de deteco (incluindo derivatizao,
aquisio e tratamento dos dados):
Eluente
Vl vula de injeo
Coluna de Separao
Loop de
Amostra
Condutividade
UV VI S
Amperometri a
Espectrometri a
atmica
Reator ps-
coluna/
derivatizao
Amostra
Detector
Bomba CLAE
Figura 5 Unidade de CLAE ou CI montada com os componentes mais importantes.
Com exceo da coluna de separao, a bomba o corao de qualquer sistema CLAE. Ela deve
transferir (bombear) o eluente to uniformemente e livre de pulsao quanto possvel, mesmo em
presena de alta contra-presso. Isto significa que tambm necessrio usar um injetor com loop
especial para a introduo da amostra. Uma vlvula de seis vias normalmente usada; ela capaz
de receber um volume definido da amostra na ala loop em presso padro e transferir para o
sistema CLAE operando em alta presso. A composio da fase mvel e o tipo de coluna de
separao devem ser adaptados ao problema analtico a ser resolvido. Isto tambm se aplica
seleo do sistema de deteco. Hoje, a aquisio e o tratamento de todos os dados so realizados
por computador. Esta montagem bsica de um sistema CLAE pode ser estendida conforme
necessrio para resolver um problema analtico particular.
Princpios de separao em CL
A CLAE pode ser diferenciada de acordo com diferentes interaes fsico-qumicas entre as
substncias da amostra e da fase estacionria. Embora, na realidade existam vrios mecanismos
diferentes responsveis pela separao eficiente [9], uma classificao geral de acordo com os
seguintes mecanismos de separao possvel:
- adsoro
- distribuio
- excluso por tamanho
- afinidade
- troca inica
- formao de par inico
- excluso inica
Cromatografia de adsoro definida por reaes interfaciais, nas quais substncias lquidas ou
gasosas so enriquecidas em uma fase slida. Vrios modelos esto disponveis fornecendo uma
descrio qualitativa e quantitativa dos processos de adsoro; aqui, ns apenas nos referimos
relevante literatura fsico-qumica [19]. Duas tcnicas diferentes so usadas. Em cromatografia de
fase normal, a fase estacionria geralmente a slica gel e, portanto, consideravelmente mais polar
do que a fase mvel (hidrocarbonetos). Em cromatografia de fase reversa CFR (ou RPC, em Ingls),
as condies so exatamente opostas. Por razes prticas, principalmente quando se refere ao
manuseio do eluente, a CFR mais utilizada atualmente [3,9].
Na cromatografia de distribuio, a fase estacionria um lquido, o qual imiscvel com a fase
mvel. A separao baseada nas diferentes solubilidades dos analitos nas duas fases. Em um caso
ideal, aplicada a lei de distribuio de Nernst. Este mecanismo de separao tem um importante
papel, particularmente em cromatografia gasosa quando capilares recobertos com lquidos de
separao so usados como fase estacionria. A cromatografia de distribuio tambm pode ocorrer
em CLAE se a slica gel modificada com hidrocarbonetos no-polares, ou seja, as chamadas fases
com grupo octadecil (ou octil) forem usadas como material de separao.
Cromatografia por excluso de tamanho (SEC, em Ingls) permite a separao de acordo com o
tamanho molecular como resultado de efeitos de seleo de partculas. Slica gel ou resinas de
polmero orgnico, com uma estrutura de poro definida, so usadas como fase estacionria. Analitos
menores podem se difundir nos poros e so retardados. Com o aumento do tamanho da molcula,
torna-se menor qualquer interao com os poros, at que com um certo tamanho, as molculas so
completamente excludas e praticamente eluem no volume morto. Este tipo de cromatografia muito
utilizado na anlise de polmeros e bioanlise.
Cromatografia de afinidade permite a separao de misturas de substncias pela seletividade ou
por foras de interao especficas. Interaes altamente especficas podem ser observadas entre
antgenos e anticorpos (princpio chave-fechadura), bem como entre enzimas e seus substratos
particulares. Na prtica, enzimas ou anticorpos so quimicamente imobilizados na fase estacionria.
Se houver um substrato ou antgeno correspondente na amostra, ento ocorre seu retardo com
extrema seletividade. por isso que a cromatografia de bioafinidade indispensvel para o setor de
anlise de princpios ativos (farmacologia).
Cromatografia de troca inica (CI) juntamente com as cromatografias por excluso inica e de par
inico esto descritas em detalhes na seo seguinte.
3.3. Princpios bsicos da cromatografia de ons (CI)
3.3.1. Terminologia e classificao em CL
Cromatografia de troca inica ou cromatografia de ons (CI) uma subdiviso da CLAE. De acordo
com a IUPAC, a cromatografia de troca inica definida como segue [7,8]:
Na cromatografia de troca inica, a separao baseada nas diferenas das afinidades de troca
inica dos analitos individuais. Se ons inorgnicos so separados e podem ser detectados por
detectores de condutividade ou por deteco por ultravioleta (UV) indireta, ento, esta tambm
chamada de cromatografia de ons.
Por vrias razes, esta definio uma escolha infeliz. A tcnica de deteco deveria ser
considerada separadamente do mecanismo de separao existente. Alm disso, uma limitao do
termo cromatografia de ons para ons inorgnicos difcil de ser entendida, visto que na prtica,
tanto os ons orgnicos como os inorgnicos podem ser separados e identificados simultaneamente
em qualquer sistema.
Uma definio antiga e mais geral mais adequada para definir a cromatografia de ons [20]:
Cromatografia de ons inclui qualquer separao cromatogrfica lquida rpida de ons em
colunas acopladas on-line com deteco e quantificao em um detector em fluxo.
Esta definio caracteriza a cromatografia de ons independente do mecanismo de separao e do
mtodo de deteco, ao mesmo tempo em que a distingue da troca inica clssica. Os seguintes
princpios de separao aplicam-se na cromatografia de ons:
- troca inica
- formao de par inico
- excluso inica
Os mtodos cromatogrficos so definidos pelo principal mecanismo de separao utilizado. Hoje, a
cromatografia de troca inica simplesmente conhecida como cromatografia de ons (CI), enquanto a
cromatografia de par inico e a cromatografia por excluso inica so consideradas como sendo
aplicaes mais especficas.
3.3.2. Troca inica
A cromatografia de troca inica (CI) baseada em uma reao qumica estequiomtrica entre os ons
de uma soluo e uma substncia slida contendo os grupos funcionais, que podem fixar ons como
resultado de foras eletrostticas. No caso mais simples em cromatografia de ctions, so grupos de
cido sulfnico; em cromatografia de nions, so grupos de amnio quaternrio. Teoricamente, ons
com mesma carga podem ser completa e reversivelmente trocados entre as duas fases. O processo
de troca inica leva a uma condio de equilbrio. O lado em que ocorre o equilbrio depende da
afinidade dos ons participantes em relao aos grupos funcionais da fase estacionria. A Figura 6
um diagrama esquemtico mostrando os processos de troca para ctions e nions. Os ons do analito
so chamados A, os ons do eluente competindo com eles para a troca so marcados com E.
Fase Mvel
Fase Estacionria
Troca Ani nica
A: ons do anali to
E: ons do eluente
Troca Catinica
Vazo
Figura 6 Diagrama esquemtico mostrando o processo de troca inica em cromatografia de
ons. Esquerda: troca catinica. Direita: troca aninica.
Aspectos termodinmicos do processo de troca inica
Trocadores de ons normalmente consistem de fases slidas em cuja superfcie so fixados os
grupos inicos. Por causa da condio de eletroneutralidade, h sempre um contra-on de carga
oposta nas proximidades do grupo funcional. O contra-on geralmente se origina da fase mvel e ,
portanto, tambm conhecido como on do eluente.
Se uma amostra for adicionada contendo dois ons A
-
e B
-
, ento estes brevemente substituem os
ons do eluente E
-
e so retidos na carga fixa antes que sejam de volta trocados pelo on do eluente.
Para a cromatografia de nions isto resulta nos seguintes equilbrios reversveis:
resina - N
+
R
3
E
+ A
resina - N
+
R
3
A
+ E
(15)
resina - N
+
R
3
E
+ B
resina - N
+
R
3
B
+ E
(16)
As diferentes afinidades de A
-
e B
-
para com os grupos funcionais significam que a separao
possvel. A constante de equilbrio K tambm conhecida como o coeficiente de seletividade e
calculada, como se segue, para o nion A
-
:
(17)
Pode-se assumir que a concentrao dos ons do eluente normalmente maior do que a dos ons do
analito por vrias potncias de dez, ento [E
-
] pode ser considerada como sendo uma constante nas
fases estacionria e mvel. Isto significa que o coeficiente de distribuio D
A
(Equao 1) e o fator de
reteno K
A
(Equao 4) podem ser calculados. Estritamente falando, tais clculos apenas so
permissveis se as concentraes na Equao 17 corresponderem s atividades; entretanto, este s
o caso para uma diluio infinita [19]. A princpio, as atividades dos ons na fase estacionria so
inacessveis [4]. Para os trocadores de ons de baixa capacidade mais freqentemente usados, os
quais s podem ser usados como fase mvel com eletrlitos bastante diludos, as atividades so
simplesmente desconsideradas. Tais estimativas to grosseiras no so mais vlidas para materiais
de empacotamento de alta capacidade (>200 mmol/g) e eluentes concentrados; isto mostra variaes
claras do comportamento ideal.
3.3.3. Formao de par inico
Com o auxlio da cromatografia de par inico possvel separar os mesmos analitos da mesma forma
que na cromatografia por excluso inica, mas o mecanismo de separao completamente
diferente. As fases estacionrias usadas so materiais de fase reversa como as que so usadas na
cromatografia de distribuio. O chamado reagente de par inico adicionado aos eluentes e este
consiste de surfactantes catinicos ou aninicos, tais como sais de tetraalquilamnio ou cidos n-
alquilsulfnicos. Juntamente com os ons do analito de carga oposta, os reagentes do par inico
formam um par de ons no carregado, o qual pode ser retardado na fase estacionria por interaes
hidrofbicas. A separao possvel devido s constantes de formao dos pares inicos e seus
diferentes graus de adsoro. A Figura 7 mostra um modelo simplificado de troca inica esttica, no
qual assumido que interaes com os analitos s ocorrem aps a adsoro do reagente do par
inico na fase estacionria.
Figura 7 Diagrama esquemtico mostrando o modelo de troca inica esttica em
cromatografia de par inico. O princpio de separao aplica-se tanto para nions como para ctions.
3.3.4. Excluso de ons
A cromatografia por excluso de ons principalmente usada para a separao de cidos ou bases
fracas [2,4]. Sua maior importncia a determinao de cidos fracos, tais como cidos carboxlicos,
carboidratos, fenis ou aminocidos. A Figura 8 mostra o princpio de separao, usando um cido
carboxlico RCOOH como exemplo.
Figura 8 Excluso de Donnan como o princpio de separao em cromatografia por excluso
de ons.
Reagent e do par inico
on do Eluente
Fase Mvel
on do Analito
Fase Estaci onria
Vazo
Membrana de Donnan
Fase Mvel
R COOH (Analito)
H
+
Cl
-
(Eluent e)
F
l
u
x
o

Fase
Estacionria
Na cromatografia por excluso inica, um trocador de ctions completamente sulfonado, cujos grupos
de cidos sulfnicos so eletricamente neutralizados com prtons como contra-ons,
freqentemente usado como material de empacotamento. Em eluentes aquosos, os grupos funcionais
so hidratados. A camada de hidrato limitada por uma membrana (imaginria) carregada
negativamente (membrana de Donnan). Ela s atravessada por molculas no-dissociadas e no
carregadas como a gua. cidos carboxlicos orgnicos podem ser separados se cidos minerais
fortes, por exemplo, o cido sulfrico, forem usados como fase mvel. Devido s constantes baixas
de cido (valores pK
A
) dos cidos carboxlicos, eles esto presentes em forma completamente no-
dissociada em eluentes fortemente cidos. Eles podem passar atravs da membrana de Donnan e
serem adsorvidos na fase estacionria, enquanto os ons sulfato do cido sulfrico completamente
dissociado so excludos.
A Figura 9 mostra a dependncia tpica do volume de eluio de um cido em seu valor pK
A
para
separao por excluso de ons. Adsoro sobreposta (cidos carboxlicos de cadeia longa, H
2
S) e
os limites da faixa de trabalho prtico podem ser claramente reconhecidos. Em ltima instncia,
cidos carboxlicos so separados por causa de seus diferentes valores de pK
A
.
Volume de Eluio
F
o
r
a

d
o

c
i
d
o

/

p
K
A
Figura 9 Dependncia do volume de eluio sobre o valor pK
A
particular de cidos em
cromatografia por excluso de ons.
3.4. Modelos de reteno em cromatografia de ons
Em uma situao ideal, a reteno de um analito em cromatografia de ons s poderia ser
determinada por sua afinidade aos grupos funcionais do trocador de ons. Esta afinidade pode ser
descrita pela formulao de uma reao qumica, a reao de troca inica, e pode ser explicada pelo
uso da lei da ao das massas.
Os modelos de reteno descritos abaixo tentam predizer sobre o comportamento de reteno dos
analitos participantes sob condies cromatogrficas particulares, baseadas na lei da ao das
massas. Se os modelos resultantes so aptos a explicar observaes macroscpicas, ento, com sua
ajuda possvel, por exemplo, otimizar um sistema de eluio para um problema de separao
particular.
3.4.1. Modelos de reteno em cromatografia de nions
As seguintes observaes envolvem, inicialmente, apenas a eluio por deslocamento isotnico
como o mais simples mecanismo de eluio em cromatografia de ons. O exemplo real refere-se
cromatografia de nions, mas as mesmas consideraes aplicam-se similarmente cromatografia de
ctions. S quando agentes complexantes so adicionados aos eluentes, necessrio estender o
modelo de reteno; isto descrito na seo Modelo de reteno para eluio em presena de
agentes complexantes (captulo 3.4.2.).
Modelo de reteno para eluentes com um nion
Se a eletroneutralidade for assumida, ento o mais simples enfoque para um modelo de reteno
para deslocamento isotnico aquele em que um nico on eluente E
y
compete com um nion de
analito A
x
em relao aos grupos funcionais da fase estacionria [4]. A concentrao dos nions do
eluente E
y
permanece constante com o tempo (eluio isocrtica).
Os stios de troca em uma coluna de separao com uma capacidade Q so ocupados por nions do
eluente E
y
no incio do processo cromatogrfico. Se uma amostra contendo o on do analito A
x
for
adicionada, ento o seguinte equilbrio se estabelece entre a fase estacionria (ndice
S
) e a fase
mvel (ndice
M
):
y A
M
x
+ x E
S
y
y A
S
x
+ x E
M
y
(18)
De acordo com a lei da ao das massas, este equilbrio pode ser descrito por uma constante de
equilbrio termodinmico. Se as atividades dos ons participantes foram consideradas, ento a
seguinte constante de equilbrio termodinmico obtida:
x
E
y
A
x
E
y
A
x y
S
y x
M
x y
M
y x
S
E A,
y
S
x
M
y
M
x
S
y y
y y
] [E ] [A
] [E ] [A
K

=

(19)
Visto que as atividades dos ons participantes no podem ser determinadas nas fases estacionria e
mvel, a atividade na fase estacionria ignorada e assumida como 1.
Se para o nion do analito A
x
duas quantidades, o coeficiente de distribuio D
A
e o fator de reteno
K
A
, so agora introduzidas (captulo 3.2.1.),
M
S
A
[A]
[A]
D =
com
M
S
A A
V
V
D k' =
(20)
ento, incluindo estas quantidades e desprezando as atividades, a Equao 19 pode ser convertida
para:
x
y
S
y
M
y
S
M
A E A,
] [E
] [E
V
V
k' K
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
=
(21)
Como a concentrao dos ons do eluente E normalmente maior do que a dos nions do analito A
x
por vrias potncias de dez, uma boa estimativa pode ser obtida assumindo-se que todos os grupos
funcionais so ocupados por E
y
. Sob esta hiptese, a concentrao no-determinvel de E
y
na fase
estacionria pode ser substituda pelos parmetros mais facilmente acessveis de capacidade de
troca Q e carga do nion do eluente y:
y
Q
] [E
y
S
=
(22)
Isto significa que a Equao 21 pode ser convertida para:
x y
M
x y
S
M '
A E A,
] [E
y
Q
V
V
k K

|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
=
(23)
O fator de reteno K
A
do nion do analito A
x
pode facilmente ser obtido de um cromatograma. A
Equao 23 , portanto, resolvida para esta quantidade.
y
x
y
M
y
x
y
1
E A,
M
S '
A
] [E
y
Q
) (K
V
V
k

|
|
.
|
\
|
=
(24)
Esta equao de suma importncia para cromatografia de nions, uma vez que ela fornece uma
relao quantitativa entre o fator de reteno K
A
e vrios parmetros, experimentalmente acessveis
tais como a concentrao do eluente e a capacidade de troca. Na prtica, uma verso logartmica da
Equao 24 usada por razes de clareza.
] [E log
y
x
log
y
Q
log
y
x
K log
y
1
k' log
y
M E A, A
u + + =
para
M
S
V
V
= u
(25)
Da Equao 25 pode ser visto que:
- Aumentando a concentrao do eluente [E
y
], a eluio se acelera,
o maiores fatores de reteno resultam de maiores constantes de equilbrio K
A,E
, maior
capacidade de troca Q e maior proporo fase-volume u.
- Analitos multivalentes A
nx
so retardados mais fortemente do que monovalentes A
x
,
o pelo menos enquanto a concentrao do eluente [E
y
] for relativamente baixa. Isto
tambm conhecido como eletro-seletividade.
- Eluentes multivalentes E
ny
tm uma capacidade de eluio maior do que monovalentes E
y
,
o a eluio de analitos multivalentes A
nx
mais fortemente influenciada por
concentraes elevadas de ons eluentes monovalentes E
y
do que daquela de
analitos monovalentes A
x
.
Como uma primeira aproximao, pode-se assumir que coeficientes de seletividade so
independentes de Q quando u constante; isto resulta na seguinte proporcionalidade:
(26)
Da Equao 26 pode ser visto que se a capacidade de troca Q for aumentada, ento a concentrao
do eluente [E
y
] deve ser aumentada proporcionalmente a fim de se obter fatores de reteno
constantes. por isso que fases de separao de baixa capacidade so, normalmente, usadas em
cromatografia de ons, uma vez que altas concentraes de eletrlitos tornariam o uso do mais
importante mtodo de deteco em cromatografia de ons, deteco por condutividade, praticamente
impossvel.
A fim de otimizar os problemas de separao, a concentrao do eluente [E
y
] freqentemente
variada. Se todos os outros parmetros presentes na Equao 25 permanecerem constantes, ento
isto pode ser simplificado para:
] [E log
y
x
C k' log
y
M 1 A
=
(27)
Uma apresentao grfica da Equao 27 origina uma linha reta com uma inclinao m = x/y e uma
interseo no eixo C
1
, que contm as quantidades Q, u e K
A,E
. Se um eluente aninico monovalente
for usado, ento m tambm conhecido como a carga efetiva. A Figura 10 mostra o resultado da
Equao 27 para vrias combinaes de nions do analito e de eluente diferentemente carregados.
Figura 10 Apresentao grfica da Equao 27 para vrias combinaes de nions do analito e
de eluentes diferentemente carregados [4].
A Equao 27 tem sido confirmada por numerosas publicaes; entretanto, sob a hiptese de que
materiais de separao de baixa capacidade e eluentes diludos tm sido usados.
Se a capacidade de troca Q variar enquanto os outros parmetros permanecerem constantes, ento
a Equao 25 pode ser simplificada para:
y
Q
log
y
x
C k' log
A
+ =
(28)
A representao grfica desta equao similar Figura 10, mas com uma inclinao positiva.
Investigaes cromatogrficas sobre a variao de Q foram realizadas em apenas uma ocasio, at
hoje, para a separao de ctions bivalentes. Isto tem mostrado que, em contraste s hipteses
prvias, o fator de reteno e os coeficientes de seletividade no podem ser considerados como
sendo independentes da capacidade de troca. Para a otimizao dos problemas de separao, est
claro que alm da concentrao do eluente [E
y
], a capacidade de troca Q tambm uma quantidade
importante.
As consideraes acima s se aplicam para um nion analito. Se dois nions diferentes A
x
e B
z
esto competindo por grupos funcionais, ento o seguinte se aplica para os coeficientes de
seletividade K
A,B
:
x z
S
z x
M
x z
M
z x
S
B A,
] [A ] [A
] [B ] [A
K

=
(29)
Considerando-se a Equao 20, a seletividade o primeiramente obtida
] [B ] [A
] [B ] [A
k'
k'
d
z
S
x
M
z
M
x
S
B
A
B A,

= =

(30)
e depois, converte-se nas Equaes 31 a e b,
|
|
.
|
\
|
+ =
S
M B
B A, A.B
V
V k'
log
z
z x
K log
z
1
log
(31a)
|
|
.
|
\
|
+ =
S
M A
B A, A.B
V
V k'
log
z
z x
K log
x
1
log
(31b)
as quais podem ser simplificadas para analitos com mesma carga (x = z):
B A, B A,
K log
z
1
d log =
(32) ou
A,B A,B
K log
x
1
d log =
(33)
Para a seletividade entre dois nions analitos similarmente carregados, isto significa que:
- apenas uma funo dos coeficientes de seletividade K
A,B
e das cargas z e x,
- com K
A,B
constante, a seletividade no depende da concentrao [E
y
] nem da constituio
qumica do nion eluente
Se A e B tm cargas diferentes, ento:
- o
A,B
depende do fator de reteno de um dos dois analitos,
- os dois fatores de reteno K
A
e K
B
no so independentes um do outro
Nas Equaes 31 a 33, particularmente interessante que as seletividades de dois nions,
inicialmente, no dependem da constituio qumica nem da carga do nion eluente, fazendo com
que a proporo fase-volume e o coeficiente de seletividade sejam constantes. Entretanto, na prtica,
uma alterao em o
A,B
pode ser alcanada pela variao de [E
y
], uma vez que dois analitos com a
mesma carga podem ter, todavia, propriedades qumicas diferentes, por exemplo, polarizabilidade e
hidratao; isto pode resultar em diferentes afinidades para com a fase estacionria. Entretanto, estas
interaes no so consideradas na derivatizao clssica.
Modelos de reteno para eluentes com vrios nions
As observaes prvias referem-se aos sistemas de eluio com apenas um nion eluente. Na
prtica, geralmente esto presentes vrias espcies eluentes, por exemplo, em tampes
carbonato/hidrogenocarbonato ou em cidos poliprticos tais como cido fosfrico, cuja dissociao
e, conseqentemente a distribuio de espcies, dependem fortemente do pH.
Mesmo em casos simples, nos quais nenhum dos nions eluentes participantes est envolvido no
equilbrio cido-base, a relao entre o fator de reteno K e a concentrao do eluente [E
] no
pode ser representada na forma de uma simples relao log-log, de acordo com a Equao 28. Isto
s seria possvel se a concentrao ou o poder de eluio dos outros nions eluentes fossem
ignorados; isto ento corresponderia ao modelo de reteno para eluentes monovalentes.
Na literatura, vrios modelos sobre eluentes polivalentes so descritos; estes esto brevemente
discutidos abaixo:
- modelo do equilbrio dominante [21]
- modelo da carga efetiva [22-24]
- modelo do eluente de mltiplas espcies [25, 26]
Se um eluente baseado em fosfato com H
2
PO
4
, HPO
4
2
e PO
4
3
, (ou H
2
P
, HP
2
e P
3
) e o on
analisado monovalente A
forem considerados, ento os seguintes equilbrios so formados:

+
S 2 M
P H A

+
M 2 S
P H A
; x
1
(34)

+
2
S 2
1
M
HP A

+
2
M 2
1
S
HP A ; x
2
(35)

+
3
S 3
1
M
P A

+
3
M 3
1
S
P A
; x
3
(36)
Aqui, as quantidades x
1.3
correspondem s contribuies de uma dada reao na reteno, por
isso que:
x
1
+ x
2
+ x
3
= 1 (37)
Ambos os modelos, do equilbrio dominante e da carga efetiva, postulam uma carga particular para o
nion eluente, mesmo que vrias espcies estejam presentes; isto significa que o modelo de reteno
para eluentes aninicos monovalentes (vide acima) pode ser usado.
O modelo do equilbrio dominante assume que o equilbrio na Equao 36 est completamente do
lado direito, uma vez que P
3
est ligado muito mais fortemente fase estacionria do que H
2
P
e
HP
2
, como um resultado de sua maior carga. Isto significa que P
3
sozinho decisivo para a eluio
sendo que a carga do nion eluente 3. Entretanto, na prtica este modelo s alcana uma boa
concordncia com analitos multivalentes [4].
No modelo da carga efetiva, uma carga efetiva calculada, levando-se em considerao o valor do
pH, a partir das fraes molares das espcies possveis H
2
P
, HP
2
e P
3
[22]. Utilizando-se estes
juntamente com as concentraes das espcies eluentes, uma relao anloga Equao 27 pode
ser obtida. Entretanto, um pr-requisito para este tipo de clculo que as seletividades das espcies
eluentes no sejam muito diferentes em relao s dos ons analitos A
. O modelo de carga efetiva

principalmente adequado para uso com analitos monovalentes [4].
Na realidade, o modelo do eluente de mltiplas espcies o mais adequado para a descrio de
eluentes cujos componentes so quimicamente derivados uns dos outros. As observaes seguintes
so baseadas no modelo de Mongay [27], que um desenvolvimento posterior do trabalho de Jenke
e Pagenkopf [25].
As Equaes 34 a 36 podem ser usadas para expressar o equilbrio global na coluna de separao
(Equao 38). Considerando-se a Equao 37, as constantes de equilbrio K
A,P
podem ser definidas
para o processo de troca se as atividades forem ignoradas (Equao 39).

(38)
] [HP ] [HP ] P [H ] [A
] [HP ] [HP ] P [H ] [A
K
/3 X 3
S
/2 X 2
S
/1 X
S 2 M
/3 X 3
M
/2 X 2
M
/1 X
M 2 S
P A,
3 2 1
3 2 1

=
(39)
O posterior tratamento matemtico realizado voltado para a derivao do modelo de reteno para
eluentes aninicos monovalentes. O que se segue deve ser considerado:
- a (possvel) dissociao do nion analito A
- a concentrao total das espcies eluentes: C

P
= [H
3
P] + [H
2
P
] + [HP
2
] + [P
3
]
- a extenso das interaes entre as espcies do eluente e os grupos funcionais
A introduo dos fatores de reteno k
A
(Equao 20) e a capacidade Q (Equao 22) supre, aps
posterior converso matemtica, uma expresso complicada para k
A
[28]; a qual dada aqui apenas
em sua forma logartmica e, posteriormente, simplificada:
P
3 2 1
3 A
c log
3
x
2
x
1
x
C k' log
\
|
|
.
|
+ + =
(40)
C
3
uma constante que, similarmente Equao 27, contm quantidades tais como a proporo
fase-volume, a capacidade e a constante de equilbrio; C
P
a soma das concentraes das espcies
do eluente. Da Equao 40, pode-se deduzir que inclinaes das linhas retas em um grfico
bilogartmico devem ser sempre menores do que aquelas obtidas com o modelo de reteno simples
para eluentes aninicos monovalentes (Equao 27), uma vez que o total entre parnteses sempre
menor que um. Est claro tambm que o valor do pH tem uma influncia decisiva na extenso para a
qual a relao log-log influenciada.
Para as espcies do eluente que no so quimicamente derivadas umas das outras, Jano (et al.)
desenvolvou um modelo para descrever eluentes contendo tampo fosfato e perclorato
adicionalmente [29]. Este modelo foi derivado de acordo com consideraes similares s descritas
acima, porm, um equilbrio de troca deve ser considerado para um posterior on eluente
monovalente. Os clculos fornecem expresses muito complicadas para o fator de reteno; eles
podem ser dramaticamente simplificados para eluentes cidos ou neutros. Se, apenas uma adicional
espcie monovalente do eluente estiver presente, alm do perclorato, ento a Equao 41 obtida
onde x e y representam as contribuies das reaes de equilbrio correspondentes (x: tampo
fosfato, y: perclorato) reteno. Assim como em outros modelos, C uma constante, enquanto o
fator a, to precisamente definido, deve mostrar o quanto mais fortemente o on perclorato est ligado
fase estacionria do que as espcies de fosfato envolvidas.
(41)
Como na Equao 41, os termos entre parnteses so sempre menores que um, a inclinao da
plotagem log-log sempre menor do que seria esperado do modelo de reteno simples. Em
aplicaes reais, o modelo fornece boa concordncia com os dados experimentais. Entretanto, a
forma descrita acima no pode ser usada para sistemas alcalinos de eluio.
3.4.2. Modelos de reteno em cromatografia de ctions
A cromatografia de ctions deve ser dividida em dois grupos de modelos de reteno. Um grupo est
relacionado com ctions metais alcalinos e alcalino-terrosos como analitos e s requerem um sistema
de eluio baseado em deslocamento isotnico. Neste caso, a fase estacionria tem grupos cido-
carboxlicos como grupos funcionais. Na separao de ons metlicos com duas ou mais cargas, o
uso de um agente complexante essencial; sua influncia na reteno descrita abaixo.
Modelo de reteno para eluentes com um ction
As explicaes dadas na seo Modelo de reteno para eluentes com um nion aplicam-se de
forma anloga para cromatografia de ctions com eluio por deslocamento isotnico. Na prtica, isto
relevante para a determinao de metais alcalinos e alcalino-terrosos, amnio e aminas de cadeia
curta. Alm de H
+
, ctions orgnicos tais como o cido 2,3-diaminopropinico (DAP), so usados
como ctions eluentes em combinao com cido clordrico diludo. Dependendo do pH do eluente,
DAP est presente nas formas inicas (1) e (2) (Figura 11). Aps supresso, a forma zwitterinica (3)
obtida, a qual no tem condutividade prpria.
Figura 11 Espcies inicas do cido diaminopropinico.
Modelo de reteno para eluio na presena de agentes complexantes
Em cromatografia de ctions, eluentes contendo um agente complexante alm do ction eluente E
n+
so usados para separao de ons de metais pesados, alcalino-terrosos e de transio. Os agentes
complexantes usados so principalmente os cidos dicarboxlicos H
2
L tais como os cidos tartrico,
oxlico, ctrico e tambm o piridinodicarboxlico. Os analitos formam complexos de diferentes
estabilidades com os nions dos agentes complexantes HL
e L
2
; suas estequiometrias tambm
podem diferir. Como resultado do processo de complexao, a carga efetiva, ou seja, a carga do
analito presente sob um perodo de tempo mdio reduzida. Isto ocorre de acordo com a cintica da
formao do complexo e as constantes de estabilidade dos complexos, as diferenas na seletividade
aumentam e a separao torna-se possvel, mesmo sendo de analitos similares. Alm da troca inica,
a formao de complexo decisiva para a separao de ons metlicos com altas cargas.
(42)
(43)
(44)
Levando-se em considerao a influncia do agente complexante na separao por cromatografia de
ons, o modelo de reteno para deslocamento isotnico (vide seo Modelo de reteno para
eluentes com um nion, captulo 3.4.1.) ampliado. O valor o
M
introduzido como quantidade
influente que descreve o grau de formao de complexo do analito. A frao o
M
dos ons analitos
livres na fase mvel dada como:
| |
| | | | | | | |
| |
| | Me'
Me
MeL MeL MeHL Me
Me
d
x
4 x
2
2 x 1 x x
x
M
+
+
+
=
+ + +
=
(45)
sendo [Me] a concentrao total dos ons metlicos. O valor o
M
pode ser calculado a partir das
constantes de formao de complexos, da constante de dissociao dos cidos carboxlicos e do pH
do eluente. Considerando-se a formao de complexos, a seguinte equao obtida para o
coeficiente de distribuio D
Me
:
| |
| |
| |
| |
+
= =
x
x
M
x
Me
Me
MeR
d
Me'
MeR
D
(46)
Assumindo-se que apenas os ons analitos livres Me
x+
interagem com o cido carboxlico ou com os
grupos de cido sulfnico e que c(E
z+
) >> c(H
+
), ento, obtm-se o seguinte para a Equao 23:
| |
x
x
+
|
|
.
|
\
|
|
|
.
|
\
|
=
y
y
M
Me
E Me,
E
y
Q
4 d
k'
K
(47)
De maneira similar Equao 25, a forma logartmica da Equao 47 obtida como:
] [E log
y
x
log
y
Q
log
y
x
K log
y
1
log k' log
y
M E Me, M Me
+
u + + + =
(48)
Se vrias espcies metlicas catinicas estiverem juntas, isto , Me
x+
e MeHL
(x1)+
, ento
normalmente um nico pico obtido no cromatograma para os analitos envolvidos. O nmero de
picos obtidos depende da cintica dos equilbrios de complexao e de descomplexao na fase
mvel. Apenas um pico obtido se os equilbrios dos complexos so alcanados mais rapidamente
na fase mvel em comparao ao tempo de residncia do complexo na fase estacionria. Por outro
lado, se o processo de complexao ocorre lentamente, ento, picos assimtricos ou mltiplos podem
surgir.
Assumindo-se que todas as espcies metlicas presentes na fase mvel podem interagir com a fase
estacionria, ento, obtm-se o seguinte para o fator de capacidade k
exp
do analito,
experimentalmente determinado:
(49)
Considerao da dependncia do fator de capacidade sobre as quantidades influentes Q, [E
y+
], bem
como o
M
requer que a relao apresentada na Equao 48 seja usada como base, uma vez que
analitos bivalentes formam, principalmente, complexos aninicos ou neutros com fortes agentes
complexantes.
Clculos dos valores o
M
De acordo com a Equao 45, o valor o
M
definido como a razo entre a concentrao dos ons
metlicos livres e a concentrao total dos ons metlicos. As concentraes das espcies metlicas
presentes na fase mvel podem ser calculadas a partir das constantes de formao de complexos e
constantes de dissociao dos cidos carboxlicos usados.
Se for usado cido tartrico como agente complexante em eluentes, ento, complexos MeL 1:1
neutros sero, principalmente, formados com metais pesados, alcalino-terrosos e de transio
juntamente com uma quantidade menor do complexo hidrogenotartarato MeHL
+
. Para eluentes
contendo cido tartrico, o seguinte obtido para o clculo do valor o
M
:
| |
| | | | | |
L HL MeHL L L MeL
2
2
M
c d K c d K 1
1
MeHL MeL Me
Me
d
+ +
=
+ +
=
+ +
+
(50)
onde c
L
a concentrao total de cido tartrico e o
HL
e o
L
so as fraes molares dos nions cidos
HL
e L
2
.
Alm dos complexos 1:1, alguns ons metlicos tambm formam complexos estveis MeL
2
2
com
cido oxlico e/ou cido piridinodicarboxlico, sendo que o
M
pode ser calculado como segue:
| |
| | | | | |
2
L
2
L MeL MeL L L MeL
2
2
2
2
M
c d K K c d K 1
1
MeL MeL Me
Me
d
2
+ +
=
+ +
=
+
+
(51)
Clculo da dissociao de cidos
O pH e a concentrao do agente complexante na fase mvel determina a concentrao de ligante e,
portanto, o quanto do analito est complexado. Um cido com dois prtons se dissocia em dois
estgios:
(52)
(53)
com as constantes de cidos KS1 e KS2. As fraes molares oH2L, oHL e oL, usadas para calcular o
valor oM, so obtidas das leis da ao das massas dos estgios individuais de desprotonao:
| |
| | | | | |
| |
| | | |
2 1 1
2
S S S
2
2
2
2
2
L H
K K H K H
H
L HL L H
L H
d
+ +
=
+ +
=
+ +
+

(54)
| |
| | | | | |
| |
| | | |
2 1 1
1
S S S
2
S
2
2
HL
K K H K H
H K
L HL L H
HL
d
+ +
=
+ +
=
+ +
+

(55)
| |
| | | | | |
| | | |
2 1 1
2 1
S S S
2
S S
2
2
2
L
K K H K H
K K
L HL L H
L
d
+ +
=
+ +
=
+ +

(56)
3.5. Sistemas de deteco em cromatografia de ons
Diferentes mtodos so usados para a deteco de substncias em CLAE. A seleo do detector
adequado deve sempre estar em concordncia com os problemas analticos a serem resolvidos. Os
requisitos de um detector podem ser sumarizados como se segue:
- alta sensibilidade de medio e curto tempo de resposta;
- sinal de medio proporcional concentrao do analito (faixa linear larga);
- pequenas mudanas na linha de base;
- baixo rudo de fundo (background);
- o menor volume possvel para reduzir o alargamento do pico.
Uma diferenciao geral feita entre detectores seletivos e no-seletivos. Enquanto um detector
seletivo responde diretamente a uma propriedade do analito, detectores no-seletivos reagem a uma
alterao de uma das propriedades fsicas do completo sistema de eluio causada pelo analito.
Como os detectores usados em cromatografia de ons no diferem, a princpio, daqueles usados em
CLAE convencional, os sistemas de deteco mais importantes sero, pelo menos, mencionados
nesta seo. O detector universal e mais freqentemente usado em CI o detector de condutividade.
3.5.1. Mtodos de deteco eletroqumica
Deteco de condutividade
Deteco de condutividade, tambm conhecida como deteco condutomtrica, tem uma
participao de mercado de aproximadamente 55% no setor de cromatografia de ons [4]. Se for
considerado o nmero de cromatgrafos de ons vendidos, ento, esta participao provavelmente
muito maior hoje em dia. Deteco de condutividade um princpio de deteco no-seletiva; assim,
ambas as determinaes com deteco direta e indireta so possveis. Uma vez que eletrlitos
aquosos so freqentemente usados como fase mvel em cromatografia de ons, o detector deve ser
capaz de responder s mudanas relativamente pequenas na condutividade total do eluente causada
pelos ons analisados. Pelo uso das chamadas tcnicas de supresso, a condutividade de fundo de
alguns eluentes pode ser drasticamente reduzida; no caso de nions de cido forte, possvel
melhorar consideravelmente a sensibilidade.
A condutividade k determinada como a recproca da resistncia R que um lquido produz entre dois
eletrodos com uma rea A em uma distncia L.
k = L / (A*R) (57)
A condutividade equivalente de uma soluo pode ser determinada como:
A = k / c (58)
A condutividade limite A
e a variao da condutividade com a concentrao pode ser determinada

pela Equao 59. As constantes A e B so constantes empricas das substncias.
A = A
(A + B A
) c (59)
A condutividade de um eletrlito obtida pela adio das condutividades inicas A
-
nion
e A
+
Cation
k = c (A
-
nion
+ A
+
Cation
) (60)
Distncia L
rea A
Figura 12 Construo de uma clula de condutividade.
De acordo com a lei de Kohlrausch, a condutividade de uma soluo diluda proporcional soma
das condutividades de todos os ons multiplicada por suas concentraes,
1000
i _
A
=
c
i
k (61)
onde k a condutividade em S cm
1
, a condutividade limitante em S cm
2
(z mol)
1
e c a
concentrao em z mol L
1
(z corresponde carga no on). O fator 1000 surge do fato de que 1 litro
igual a 1000 cm
3
.
A mudana na condutividade causada pelo analito proporcional sua concentrao no eluato,
( )
1000
c A A
A
S E S

= k (62)
onde S e E correspondem ao on analisado e on eluente, respectivamente. Sabemos que na
deteco de condutividade a alterao (variao) desta medida, assim, na cromatografia de nions,
eluentes com altas condutividades de fundo ocasionam pequenas alteraes na condutividade devido
passagem do analito. Isto significa que vantajoso manter a condutividade de fundo o mais baixo
possvel, conforme o exemplo abaixo:
Figura 13 Mudanas na condutividade do eluato durante a separao de uma mistura de
mltiplas substncias por cromatografia de ons. Os cromatogramas mostram o desempenho de um
eluente com condutividade alta (vermelho) e baixa (azul).
Em cromatografia de ons, a condutividade de um eluato pode ser determinada diretamente ou aps a
passagem por um supressor. Estas verses so conhecidas como tcnicas de coluna simples e
supressora. A melhor verso a ser adotada pode ser determinada realizando-se um clculo simples.
Se a deteco por condutividade direta for usada em cromatografia de nions, ento, a sensibilidade
k
Pico
da medida depende da diferena das condutividades equivalentes entre os nions analisados e
K
analito 1
K
eluente 1
(baixo)
K
eluente 2
(alto)
C
o
n
d
u
t
i
v
i
d
a
d
e

eluentes; tendo o cloreto como analito e o carbonato como nion eluente, as seguintes equaes so
obtidas:
k
Pico
~ c
Analito
(A
-
Cl
A
-
CO
3
2) k
Pico
~ c
Analito
(76 72)
k
Pico
~ c
Analito
4
Se o eluente estiver adaptado aos requisitos da deteco de condutividade direta, ento, a seguinte
sensibilidade obtida pela substituio do eluente carbonato pelo eluente ftalato:
k
Pico
~ c
Analito
(A
-
Cl
A
-
Ftalato
) k
Pico
~ c
Analito
(76 38)
k
Pico
~ c
Analito
38
Se, por outro lado, a condutividade do eluente for quimicamente suprimida (troca dos ctions eluentes
por H
+
), a sensibilidade depender da soma das condutividades equivalentes do nion analisado e do
on H
+
; o seguinte ento se aplica para Cl
como nion analisado:

k
Pico
~ c
Analito
(A
-
Cl
+ A
+
H
+) k
Pico
~ c
Analito
(76 + 350)
k
Pico
~ c
Analito
426
A partir deste clculo estimado pode ser observado que, para nions, a deteco por condutividade
direta menos sensvel por um fator de 10 em relao deteco por condutividade aps supresso
qumica.
Similarmente, o seguinte clculo simples pode ser feito para cromatografia de ctions, com Na
+
como
o ction analisado e H
+
como o ction eluente. No caso de deteco de condutividade direta
(NaCl/HCl) as seguintes equaes so obtidas para a sensibilidade k
Pico
da medida:
k
Pico
~ c
Analito
(A
+
Na
+ A
+
H
+) k
Pico
~ c
Analito
(50 350)
k
Pico
~ c
Analito
(300)
Se, por outro lado, a condutividade do eluente for suprimida quimicamente (troca dos nions eluentes
Cl
por OH
), o seguinte se aplica:
k
Pico
~ c
Analito
(A
+
Na
+ + A
-
OH
) k
Pico
~ c
Analito
(50 + 198)
k
Pico
~ c
Analito
248
Isto significa que a sensibilidade melhor para a deteco por condutividade direta do que para
deteco por condutividade aps supresso qumica.
Tabela 2 Condutividade equivalente A
de vrios ons
Ctions (S cm
2
eq
1
) nions

(S cm
2
eq
1
)
H
+
350 OH
198
Li+ 39 F 54
Na
+
50 Cl
76
K
+
74 Br
78
NH
4
+
73 I
77
Mg
2+
53 NO
2
72
Ca
2+
60 NO
3
71
Sr
2+
59 HCO3 45
Ba
2+
64 CO
3
2
72
Zn
2+
52 H
2
PO
4
33
Hg
2+
53 HPO
4
2
57
Cu
2+
55
1
/
3
PO
4
3
69
Pb
2+
71 SO
4
2
80
Co
2+
53 CN
82
1
/
3
Fe
3+
70 SCN
66
N(Et)
4
+
33 Acetato 41
Ftalato 38
Propionato 36
Benzoato 32
Salicilato 30
Oxalato 74
Os supressores qumicos para cromatografia de ons podem ser classificados quanto a sua
composio: com resina catinica (trabalho descontnuo), ou com membrana permeavel a ctions
(trabalho contnuo). O supressor tipo packed-bed na verso revolver usada pela Metrohm (Figura
14) possui trs unidades supressoras idnticas; enquanto uma unidade age como supressora a
segunda regenerada e a terceira lavada com gua. Aps a realizao de uma anlise o revolver
girado por 120
o
e o canal, recentemente lavado, usado como supressor. Isto possibilita um
trabalho praticamente contnuo.
Descarte Detector Descarte
gua Eluato
Figura 14 Construo esquemtica de um supressor qumico tipo packed-bed para trabalho
praticamente contnuo.
A membrana supressora mostrada na Figura 15 permite trabalho contnuo, porm, como resultado do
uso de membranas trocadoras de ons, est suscetvel ocupao (processos de adsoro) da
superfcie da membrana; isto reduz a capacidade de supresso e finalmente faz com que o supressor
pare de funcionar.
Figura 15 Construo esquemtica de uma membrana supressora de trabalho contnuo.
Deteco amperomtrica
Em princpio, detectores voltamtricos podem ser usados para todos os compostos com grupos
funcionais que possam ser reduzidos ou oxidados. O detector amperomtrico a verso mais
importante. Neste detector, um determinado potencial aplicado entre um eletrodo de trabalho e um
eletrodo de referncia. Se um analito eletroquimicamente ativo, cujo potencial de meia-onda tal que
o potencial aplicado causa sua reduo ou oxidao, passar entre os eletrodos ento a corrente fluir
e esta representar o sinal de medida. A amperometria muito sensvel; sua taxa de converso de
aproximadamente 10%. Com exceo de uns poucos ctions (Fe
3+
, Co
2+
), so principalmente os
nions tais como nitrito, nitrato, tiossulfato bem como haletos e pseudohaletos que podem ser
determinados em anlise de ons. As aplicaes mais importantes consistem, entretanto, na anlise
de acares por cromatografia de nions e em anlises clnicas. Devido ao seu princpio de trabalho
diferente, o detector coulomtrico prov um resultado quantitativo sem, entretanto, haver qualquer
aumento da sensibilidade.
Deteco potenciomtrica
Na deteco potenciomtrica, eletrodos on-seletivos so usados, alguns dos quais tm uma alta
seletividade. Apesar de sua necessidade de alto grau de miniaturizao, os sensores devem
funcionar com segurana; isto ainda causa problemas na prtica. por isso que at agora, a
deteco potenciomtrica, em cromatografia de ons, est limitada a poucas aplicaes especiais.
3.5.2. Mtodos espectroscpicos de deteco
Deteco fotomtrica
Devido sua rea de aplicao extremamente ampla, a deteco fotomtrica ou UV/VIS o mais
importante mtodo de deteco usado em CLAE, j que praticamente todas as molculas orgnicas
possuem grupos cromforos, os quais so capazes de absorver na regio do visvel ou do ultravioleta
do espectro. Um requisito que o eluente usado no absorva nos comprimentos de onda usados.
Com deteco direta na absoro mxima de um analito, a deteco UV/VIS praticamente seletiva.
Substncias que possuem apenas uma absoro limitada ou que no possuem absoro em uma
determinada faixa de comprimento de onda podem ser determinadas indiretamente, medindo-se a
absoro mxima do sistema de eluio. Na rea de anlise de ons inorgnicos, a deteco UV/VIS
tem um papel menor. nions comuns tais como nitrato, brometo e iodeto absorvem radiao UV,
porm outros analitos importantes tais como fluoreto, sulfato ou fosfato s podem ser medidos
indiretamente [4]. Muitos ctions no absorvem, mas, particularmente metais de transio e
multivalentes podem ser convertidos em uma derivatizao ps-coluna, com formadores de quelatos
tais como 4-(2-piridilazo)-resorcinol (PAR) ou Tiron, para formar complexos coloridos. Analitos redox-
ativos tais como bromato e outros ons oxi-haletos podem ser analisados por deteco UV/VIS aps
sofrerem uma reao ps-coluna com um indicador eletroquimicamente ativo.
Deteco por fluorescncia
Deteco por fluorescncia muito sensvel, desde que os analitos possam ser estimulados a
fluorescer; principalmente o caso de compostos orgnicos com sistemas de eltrons-t conjugados.
Isto significa que aplicaes tpicas so encontradas nas reas de anlises clnicas e orgnicas.
Conectada cromatografia de ons, a deteco por fluorescncia usada em poucos casos
especiais, visto que apenas determinados ons tais como Ce
3+
esto diretamente acessveis e ons
no fluorescentes s podem ser detectados aps derivatizao. extremamente difcil desenvolver
sistemas de eluio para este mtodo de deteco devido sua grande susceptibilidade s
interferncias por contaminantes. Alm disso, a taxa linear do mtodo relativamente pequena
(freqentemente menor que 100 vezes) devido aos seus efeitos de absoro.
Tcnicas de acoplamento
As chamadas tcnicas de acoplamento representam a estreita ligao, ou link-up de um sistema
cromatogrfico com um mtodo analtico independente, geralmente a espectrometria [3].
Recentemente, estes mtodos tm adquirido uma importncia crescente. Embora o acoplamento de
uma cromatografia gasosa com um espectrmetro de massa (GC-MS, em Ingls) esteja bem
estabelecido, o acoplamento da CLAE com mtodos espectromtricos gera alguns problemas
tcnicos. Na CLAE clssica, ou seja, a anlise de compostos orgnicos, acoplamentos com um
espectrmetro de massa, espectrmetro de infravermelho e espectrmetro de ressonncia magntica
nuclear esto disponveis [3]. Em particular, poderosos detectores de espectrometria atmica so
usados em cromatografia de ons. Como exemplo h espectrometria de massa e emisso atmica
com plasma indutivamente acoplado e o resultado de sua sensibilidade e especificidade de cada
elemento, este acoplamento proporciona excelentes resultados. por isso que, apesar do alto custo,
tais sistemas so usados para especiao e em anlises de ultratraos de elementos.
Refratometria
Refratometria diferencial um outro mtodo de deteco baseado em mtodo ptico. Este detector
tambm chamado de detector RI (do Ingls Refractive Index = ndice de refrao). Ele no
especfico, pois a unidade de medida a mudana (variao) no ndice de refrao do eluente puro
causado pelo analito. Entretanto, a grande sensibilidade de temperatura deste parmetro significa
que o mtodo muito susceptvel a interferncias. Assegurando-se que a temperatura seja
absolutamente estvel, o mtodo tem uma faixa linear de trs potencias de dez. Uma vez que ons
inorgnicos possuem um ndice de refrao extremamente baixo, eles s podem ser determinados
indiretamente com o uso de eluentes aos quais foram adicionados compostos com alto ndice de
refrao.
3.6. Fases estacionrias em cromatografia de ons
A cromatografia de ons eficiente requer materiais de empacotamento, sendo estes feitos de
partculas muito pequenas as mais esfricas possveis e que tenham uma taxa de distribuio
reduzida do tamanho de partcula. Partculas com dimetros de 2 a 10 m so usadas. Alm disso, o
material de empacotamento deve apresentar cinticas de troca inica o mais rpido possvel. Com
exceo das partculas, isto tambm determina a eficincia dos trocadores de ons.
3.6.1. Viso geral das fases estacionrias comuns
Um grande nmero de materiais orgnicos e inorgnicos diferentes apropriado para o uso em
cromatografia de ons. O que todos tm em comum que suas superfcies carregam grupos
funcionais que podem trocar ons. As seguintes classes de substncias podem ser usadas [4]:
- Resinas de polmeros orgnicos modificadas;
- Slica gel modificada;
- Sais inorgnicos (por exemplo, polifosfatos);
- Vidros;
- Zelitas;
- xidos metlicos (por exemplo, Al
2
O
3
);
- Derivados de celulose.
Fora estes, os sistemas com uma constituio muito complexa so tambm possveis, tais como os
trocadores de nions com grupos funcionais consistindo de ons metlicos alcalinos ligados a uma
fase estacionria por teres coroa. Na prtica, os representantes mais importantes so baseados em
resinas de polmero orgnico modificadas e slica gel. A Figura 16 fornece uma viso geral dos
materiais de separao usados na CI:
Figura 16. Fases estacionrias comumente usadas em cromatografia de ons [4].
Todas as fases estacionrias podem posteriormente ser diferenciadas de acordo com seu tipo de
aplicao (cromatografia de nions ou de ctions) ou a estrutura do grupo funcional. Os materiais de
empacotamento baseados em slica gel foram originalmente usados para cromatografia de ons.
Embora tenham uma eficcia de separao muito boa e sejam mecanicamente muito estveis, sua
estabilidade qumica no muito grande, tanto que podem somente ser usados em pH = 2 a 7.
A partir dos anos 80, os trocadores de ons tornaram-se disponveis, os quais eram baseados em
polmeros orgnicos e podiam ser usados em cromatografia de ons; estes eram manufaturados
modificando-se as resinas adsorventes comercialmente disponveis. Hoje, os materiais de
empacotamento usados so normalmente baseados nos copolmeros do poliestireno-divinilbenzeno
(PS-DVB) ou polmeros metacrilato (MMA).
Estes dois tipos bsicos de copolmero diferem principalmente em sua polaridade. Os copolmeros do
PS-DVB so completamente no-polares e representam fases reversas enquanto os polmeros MMA
so relativamente polares. Esta situao uma vantagem em CI visto que as fases de separao
mais polares tm uma menor tendncia s interaes secundrias tais como a adsoro.
A maior vantagem das resinas orgnicas polimricas sua grande estabilidade qumica em toda a
escala de pH. Depois que problemas iniciais so superados, sua eficincia cromatogrfica similar
quela da slica gel. Entretanto, as fases de MMA podem ter uma estabilidade mecnica limitada, isto
poderia limitar o comprimento da coluna de separao usada ou da vazo mxima possvel do
eluente.
Na cromatografia de ons, dois tipos de fases estacionrias so usados hoje, os quais diferem no
princpio; trocadores de ons de superfcie funcional e trocadores de ons peliculares. No primeiro tipo,
os grupos funcionais esto localizados diretamente na superfcie do polmero ou nos poros; os
materiais peliculares tm partculas muito pequenas (tambm de superfcie funcional) que esto
ligadas s partculas centrais maiores [4]. A ligao pode ser mecnica ou resultar das interaes
hidrofbicas ou eletrostticas. A Figura 17 mostra o arranjo dos dois tipos de material de
empacotamento usando trocadores de nions como exemplos.
Ligao
eletrosttica
Figura 17. Estrutura de trocadores de nions de superfcie funcional (a) e peliculares com ligao
mecnica (b).
Os materiais de empacotamento do tipo pelicular tm uma maior eficincia cromatogrfica, pois as
vias de difuso so mantidas muito curtas devido grande distncia dos grupos funcionais para com
o material de base; isto resulta em excelente transferncia de massa. Entretanto, a estabilidade
qumica destas fases de separao consideravelmente menor do que a dos materiais de superfcie
funcionalizada.
3.6.2. Fases estacionrias para cromatografia de nions
O grupo funcional usado em cromatografia de nions produzido normalmente pela converso de um
grupo ncora com uma amina apropriada. Isto produz ons amnio que so fixados na superfcie do
polmero. Os grupos funcionais baseados em nitrognio so praticamente os nicos usados para a
separao de nions por CI. Isto baseado principalmente em sua estabilidade qumica e no nmero
quase ilimitado de substituintes possveis no tomo do nitrognio.
Grupos amnio so gerados na superfcie do polmero pela converso de um grupo ncora com uma
amina.
Os resduos alquilas no nitrognio positivamente carregado podem ser enormemente variados. No
caso mais simples, R=H e um on amnio primrio so formados. Entretanto, isto pode ser
desprotonado em pH elevado e perder sua carga. Com este tipo de material de empacotamento a
capacidade de troca depende do pH do eluente, por isso que eles devem ser fracamente alcalinos.
Se os tomos do hidrognio forem agora substitudos sucessivamente por grupos alquilas, ento,
primeiramente os grupos amnio secundrios e depois os tercirios so formados; estes podem
tambm ser desprotonados. Somente quando todos os resduos R consistirem de grupos alquilas, a
capacidade ou a carga, independente do pH do eluente, e um trocador de nions quaternrio
fortemente bsico so obtidos. Em cromatografia, uma capacidade independente de pH
normalmente o esperado para que somente as resinas completamente alquiladas sejam usadas. Para
aplicaes especiais tais como tcnicas de pr-concentrao ou anlise de protenas, materiais
fracamente bsicos so tambm usados.
Os dois grupos funcionais mais importantes em cromatografia de nions so derivados de
trimetilamina (TMA) e dimetiletanolamina (2-dimetilaminoetanol, DMEA). Praticamente todos os
materiais de separao comercialmente disponveis usam um destes dois grupos. Os grupos TMA
so tambm conhecidos na literatura como os grupos do Tipo I, e os grupos DMEA como do Tipo II.
Outros grupos funcionais, estreitamente relacionados aos mencionados acima, so mostrados na
Figura 18:
Figura 18. Viso geral dos grupos funcionais mais importantes mencionados neste trabalho
TMA: trimetilamina (Tipo I); DEMA: Dietanolmetilamina; EDMA: Etildimetilamina;
TEA: Trietanolamina; DMEA: Dimetiletanolamina (Tipo II).
Em materiais comerciais, que so derivados geralmente do tipo I ou II, o arranjo exato dos grupos
funcionais altamente secreto [4].
3.6.3. Fases estacionrias em cromatografia de ctions
Em cromatografia de ctions, tanto os materiais baseados em slica gel como os materiais baseados
em polmero esto em uso. Em contraste cromatografia de nions com seus eluentes alcalinos
usuais, as condies para a cromatografia de ctions permitem tambm o uso de slica gel.
3.6.4. Trocadores de ctions baseados em slica gel
Com os trocadores de ctions baseados em slica gel uma diferenciao feita entre os materiais
diretamente funcionais e aqueles que so revestidos por um polmero.
Praticamente todos os trabalhos a respeito dos materiais funcionais indicam o uso de trocadores
fortemente cidos, possuindo um grupo cido sulfnico [2,4]. Estes tm uma boa eficincia
cromatogrfica, mas so inadequados para a determinao simultnea de metais alcalinos e alcalino-
terrosos devido s grandes diferenas em afinidade.
Com a slica gel revestida de polmeros, as chamadas fases de Schomburg, a superfcie de silicato
revestida por um pr-polmero que ento imobilizado por ligao cruzada (cross-linking). Pela
subseqente funcionalizao, vrios tipos diferentes de trocadores podem ser produzidos. A fim de se
obter trocadores de ctions fracamente cidos, o cido polibutadienomaleico (PBDMA) usado,
proporcionando ligao cruzada (cross-linked) in-situ [30]. Em conseqncia da camada fina de
polmero de aproximadamente 1 a 5 nm [31], as vias de difuso do analito so pequenas visando um
elevado grau de eficincia cromatogrfica
Existe um grande nmero de aplicaes para trocadores de ons baseados em slica gel. A separao
simultnea de metais alcalinos e alcalino-terrosos uma das mais freqentes aplicaes; a
separao de ons de metal pesado e de transio tambm possvel. Entretanto, vrias
desvantagens impedem o uso universal dos trocadores de ons baseados em slica gel:
- Em pH < 2, a ligao entre a matriz de silicone e o grupo funcional torna-se muito mais fraca;
isto leva a uma eroso gradual dos grupos funcionais e uma perda da capacidade;
- Em pH > 7, a solubilidade da slica gel aumenta consideravelmente; isto resulta em uma
reduo da estabilidade mecnica do empacotamento, quebra da partcula e um volume
morto no incio da coluna.
3.6.5. Trocadores de ctions baseados em polmeros orgnicos
As resinas produzidas por co-polimerizao estireno-divinilbenzeno so usadas principalmente como
matrizes. As limitaes mencionadas para trocadores slica gel no ocorrem aqui; elas podem ser
usadas em toda a escala de pH, de 0 14, e so tambm inertes ao fluoreto. Embora sua resistncia
de presso seja menor do que a de slica gel, ainda geralmente adequada, com exceo de
algumas resinas metacrilato.
A maioria dos trocadores de ctions comercialmente disponveis usa grupos de cido sulfnico como
grupos funcionais. Estes podem ser ligados ao sistema aromtico diretamente ou atravs de um
espaador cujo comprimento seja varivel. Os trocadores de cido sulfnico com espaadores tm
uma eficincia cromatogrfica consideravelmente melhor; o comprimento do espaador de
importncia secundria. Eles no so apropriados para a determinao simultnea de metais
alcalinos e alcalino-terrosos devido s grandes diferenas em afinidade.
3.6.6. Trocadores de ctions peliculares
Assim como as resinas diretamente funcionalizadas, os trocadores peliculares esto tambm
disponveis. Eles tm um arranjo de camada dupla no sendo possvel apresentar uma partcula de
substrato completamente aminada. por isso que uma partcula substrato inteiramente sulfonada
primeiramente cercada por uma camada de partculas de ltex aminadas e ento por uma camada de
partculas de ltex sulfonadas. A fixao ocorre atravs das interaes eletrostticas e de van der
Waals. O dimetro relativamente grande das partculas do substrato (10 a 30 m) resulta em uma
contra-presso comparativamente baixa. Os dimetros pequenos (20 a 250 nm) das partculas de
ltex permitem vias curtas de difuso com processos de troca rpidos e, conseqentemente, uma alta
eficincia da coluna de separao. A desvantagem destes materiais peliculares sua sensibilidade
aos solventes orgnicos [32] e s fases mveis com uma fora inica elevada, visto que neste caso
as partculas de ltex so gradualmente removidas.
A determinao simultnea de metais alcalinos e alcalino-terrosos possvel usando-se uma verso
modificada na qual a camada aminada ligada covalentemente. Entretanto, as diferenas na
seletividade entre potssio, magnsio e clcio so desnecessariamente grandes, proporcionando
tempos de anlise relativamente longos. Isto pode ser justificado pela presena de grupos cido
sulfnico fortemente cidos que so usados.
3.6.7. Fases estacionrias em cromatografia de excluso inica
A escolha das fases estacionrias para este tipo de separao muito limitada. A formao da
membrana de Donnan por grupos funcionais dissociados importante para o processo da separao.
Alm disso, o material de empacotamento deve prevenir o mximo possvel a adsoro do analito na
fase estacionria e, como os analitos so principalmente dos grupos cido carboxlico e acar, uma
superfcie to polar quanto possvel o esperado para uma fase estacionria em cromatografia de
excluso inica. Praticamente nenhuma demanda requerida nas cinticas da reao de troca
inica, uma vez que a separao baseada em um mecanismo de excluso. Os polmeros de baixa
ligao cruzada a base de PS/DVB so quase que os nicos usados e estes devem ser
completamente sulfonados.
3.6.8. O significado da capacidade dos trocadores de ons
Alm do tipo de matriz e do tipo do grupo funcional, a capacidade de troca Q a quantidade decisiva
para caracterizar trocadores de ons. Ela fornece informao sobre o nmero de stios ativos
disponveis para a troca inica.
A capacidade de troca expressa normalmente em gramas do material seco de empacotamento, em
microequivalentes (eq/g) ou micromols (mol/g) [2]. Outras informaes tambm so normalmente
dadas [33]. Para finalidades analticas, trocadores de ons podem ser grosseiramente divididos de
acordo com sua capacidade em:
- Materiais de baixa-capacidade: Q < 100 mol/g;
- Materiais de mdia capacidade: 100 < Q < 200 mol/g;
- Materiais de alta capacidade: Q > 200 mol/g.
As fases da separao usadas em trocadores clssicos de ons so todos tipos de alta capacidade
com 3 a 5 mmol/g [4].
A definio de capacidade acima baseada em um equilbrio completo alcanado entre as fases
estacionria e mvel, por isso, tambm conhecida como capacidade esttica. Em contraste, a
capacidade dinmica (eficaz) conhecida como sendo o nmero dos grupos funcionais que esto
realmente disponveis durante um processo cromatogrfico. sempre menor do que a capacidade
esttica [2,4].
A capacidade de troca pode ser determinada de maneiras diferentes [33]:
- Volumetricamente ou titrimetricamente;
- pela anlise elementar;
- pela determinao dos tempos de reteno.
Todos os mtodos fornecem valores diferentes para Q para o mesmo material. Os mtodos
volumtricos so os mais freqentemente usados na prtica. Para trocadores de nions, uma coluna
de separao empacotada ou uma quantidade definida de resina so carregadas, por exemplo, com
soluo de cloreto. Aps a lavagem do cloreto residual, a coluna ou a resina pode ser eluda com
nitrato. A quantidade de cloreto eludo, que corresponde capacidade de troca esttica sob
condies de equilbrio, pode ser titulada contra uma soluo de AgNO
3
e quantificada.
A dependncia do pH pelos trocadores de ons pode geralmente ser desprezada. Com trocadores de
ctions, a capacidade dos grupos cido carboxlico fracamente cidos (R-OOH) dada apenas em
valores elevados de pH (desprotonao), enquanto que grupos de cido sulfnico fortemente cidos
(R-SO
3
H) sempre esto completamente desprotonados e fornecem uma capacidade independente do
pH.
Em combinao com os modelos de reteno (captulo 3.4), a importncia de Q para a seleo dos
sistemas de eluio e deteco torna-se bvia. A deteco universal de condutividade era
praticamente impossvel de ser realizada com eluentes com uma fora inica elevada, independente
de qual tcnica especial fosse usada. Esta a razo pela qual, desde a introduo da cromatografia
de ons em 1975, muitas colunas de separao de baixa capacidade tm sido usadas. At agora,
trocadores de ons de alta capacidade tm sido descritos geralmente para aplicaes da CI em
combinao com as tcnicas de deteco que no so to limitadas pelo sistema de eluio, tais
como a deteco UV/VIS [2,4].
Enquanto os materiais de separao de baixa capacidade so muito apropriados para a anlise de
amostras com uma fora inica baixa e, conseqentemente, para uma matriz de carga baixa, em
foras inicas mais elevadas eles alcanam rapidamente seus limites. Os efeitos da sobrecarga
ocorrem por causa de seu baixo nmero de grupos funcionais; estes resultam em picos deformados e
em uma queda drstica na eficincia. Os problemas ocorrem tambm se os analitos estiverem
presentes em concentraes muito diferentes; isto quase sempre o caso em anlise de ultratraos.
3.7. Eluentes em cromatografia de ons
Como em todas as separaes por cromatografia lquida, a fase mvel tambm o parmetro mais
fcil de se alterar na cromatografia de ons a fim de influenciar a separao enquanto que a coluna de
separao e o sistema de deteco so, na maioria dos casos, pr-definidos.
A escolha de um sistema de eluio adequado pode ser feita usando-se uma grande variedade de
critrios. Em cromatografia de nions, os seguintes parmetros, entre outros, devem ser
considerados [4]:
- Compatibilidade com o mtodo de deteco;
- Natureza qumica e concentrao do on eluente;
- pH;
- Capacidade de tamponamento;
- Contedo de solvente orgnico (modificadores);
Na literatura [2,4,5], a discusso sobre as fases mveis ocorre principalmente sobre a adequao
referentes s tcnicas com ou sem supresso. Este ser tambm o caso abaixo, mesmo que o foco
do assunto deste trabalho seja a capacidade de troca Q da coluna de separao. Primeiramente, ser
feita uma breve explanao sobre os termos tcnica de coluna simples (sem supresso) e tcnica
de supresso. Como na seo anterior, as observaes limitam-se principalmente cromatografia de
nions.
3.7.1. Cromatografia de nions
Tcnica da coluna simples
Na tcnica de coluna simples, que foi estabelecida na cromatografia de ons por Gjerde em 1979 [33],
a sada de uma coluna de separao conectada diretamente a um detector; isto corresponde ao
arranjo clssico de um equipamento da CLAE. Para distingu-la da segunda verso principal da CI,
esta tcnica tambm conhecida como cromatografia de ons no suprimida. O eluente contendo
os analitos sai da coluna de separao e no alterado quimicamente. O nmero de sistemas
possveis de eluio com caractersticas qumicas diferentes quase ilimitado. Exceto para a prpria
questo da separao, na qual somente uma compatibilidade do eluente com o detector deve ser
considerada. Por exemplo, se a deteco UV direta for usada, ento o eluente no deve absorver na
faixa de espectro relevante. Na tcnica de coluna simples, nenhuma limitao colocada no sistema
de deteco de modo que, em princpio, todos os detectores usuais de CLAE podem ser usados.
Para trocadores de nions da baixa capacidade (Q < 100 mol/coluna de separao), uma grande
variedade de eluentes com diferentes caractersticas qumicas est disponvel para a tcnica de
coluna simples. A concentrao dos eluentes corresponde normalmente a uma faixa de mmol/kg ou
menor. As classes de substncias mencionadas abaixo podem ser usadas [4], sendo que em casos
especiais, tambm podem ser usados agentes complexantes como o EDTA ou complexos borato-
manitol.
- cidos carboxlicos aromticos;
- cidos carboxlicos alifticos;
- cidos sulfnicos;
- Hidrxidos alcalinos;
- cidos inorgnicos tais como H
2
SO
4
, HCl ou H
3
PO
4.
A classe mais importante de compostos a dos cidos carboxlicos aromticos e seus sais. Os
representantes mais freqentemente usados so mostrados na Figura 19.
Figura 19. Estruturas dos cidos carboxlicos aromticos mais importantes usados com tcnica de
coluna simples.
Esta classe de substncias usada to freqentemente porque as solues de cidos e seus sais
tm uma elevada fora de eluio combinada com uma condutividade de fundo relativamente
pequena, de modo que possam ser usadas para a deteco direta de condutividade. Com cidos
poliprticos a carga e conseqentemente a fora de eluio podem ser controladas atravs do pH.
Entretanto, isto deve ser mantido de forma muito precisa. Os cidos carboxlicos aromticos tm uma
absoro elevada no espectro UV de modo que podem ser usados vantajosamente em deteco
indireta UV/VIS.
Para cidos sulfnicos aromticos, tais como o cido p-toluenossulfnico, aplicam-se, em princpio,
as mesmas indicaes; estes esto sempre presentes em um estado desprotonado e no possuem
conseqentemente capacidade tamponante. Sua fora de eluio pode somente ser controlada
atravs da concentrao.
Os cidos carboxlicos alifticos, tais como o cido oxlico e o cido ctrico, tm uma alta
condutividade de fundo, mas so transparentes em UV, podendo ser usados para a deteco direta
UV/VIS. Isto tambm se aplica aos cidos sulfnicos alifticos, dos quais o cido metanossulfnico
um dos mais freqentemente usados. Compostos similares de ambas as classes, com suas cadeias
carbnicas maiores, os quais esto associados a baixas condutividades equivalentes, oferecem a
possibilidade de serem usados para a deteco direta da condutividade [2, 4].
Os hidrxidos alcalinos tm um uso muito limitado na tcnica de coluna simples, pois os ons OH
tm
a mais baixa afinidade aos grupos amnio quaternrio de todos os nions eluentes possveis. Em
conseqncia, concentraes altas do eluente so requeridas mesmo em capacidades baixas, sendo
que na melhor das hipteses, somente a deteco indireta de condutividade possa ser usada. Em
contraste, a deteco UV/VIS facilmente possvel, embora os ons hidrxido basicamente
transparentes em UV tenham uma absoro caracterstica abaixo de 220 nm em concentraes
mais altas.
cidos inorgnicos ou seus sais parcialmente ou totalmente dissociados apresentam alta
condutividade. Isto significa que somente detectores fotomtricos podem ser usados. Por exemplo, se
o cido fosfrico ou fosfatos forem usados, ento, a capacidade tampo e a fora de eluio podem
ser controladas atravs do pH do eluente.
A maioria dos eluentes mencionados aqui permite tambm o uso de outros sistemas de deteco tais
como tcnicas de amperometria, fluorimetria ou de acoplamento. Se voc deseja usar os sistemas de
eluio mencionados acima com estes detectores, por favor, consulte uma literatura mais detalhada
[2,4,5].
Tcnica de supresso
A tcnica de supresso utilizada desde os princpios da CI [1] caracterizada principalmente pelo uso
do detector de condutividade na maioria das vezes, diferindo da tcnica da coluna simples. Na
tcnica de supresso, o chamado supressor inserido entre a coluna de separao e o detector e
por isso que esta tcnica tambm conhecida como cromatografia de ons suprimida [2, 4]. Tanto
os eluentes quanto os analitos so modificados quimicamente no supressor, isto de particular
importncia em relao subseqente deteco de condutividade. O supressor tem a tarefa de
reduzir a condutividade de fundo do eluente e, se possvel, aumentar a detectabilidade dos analitos.
A supresso realizada com um trocador de ction na forma H
+
fortemente cida. Se utilizarmos um
eluente NaHCO
3
e a amostra contendo o on cloreto, teremos as seguintes reaes 63 e 64
R-SO
3
H
+
+ Na
+
+ HCO
3
R-SO
3
Na
+
+ H
2
O + CO
2
(63)
R-SO
3
H
+
+ Na
+
+ Cl
R-SO
3
Na
+
+ H
+
+ Cl
(64)
No caso mais simples, a unidade supressora consiste em uma coluna inserida aps a coluna de
separao, de onde se origina o antigo termo tcnica de dupla coluna. O eluente bicarbonato de
sdio neutralizado de acordo com a Equao 63, uma vez que os ons de sdio so substitudos
por prtons, diminuindo drasticamente a condutividade de fundo do eluente. O analito Cl
no
alterado (Equao 64), mas seu contra-on Na
+
trocado por H
+
, que tem uma condutividade
equivalente consideravelmente maior [19]. Uma vez que o detector se sensibiliza com a soma das
condutividades do analito e do contra-on como o sinal, as duas reaes que ocorrem resultam em
uma sensibilidade claramente maior.
As colunas com trocadores de ctions na forma H
+
, originalmente usadas como supressoras,
contriburam consideravelmente para o alargamento dos picos. Alm disso, elas s podiam ser
operadas descontinuamente, visto que o trocador de ction tinha que ser regenerado. por isso que,
supressores com regenerao paralela ou de membrana operando continuamente so principalmente
usados hoje; nestes, o agente regenerante geralmente o cido sulfrico diludo[6].
Apesar de suas vantagens, a tcnica de supresso tem tambm algumas desvantagens. Na prtica,
somente os eluentes que so baseados, principalmente, em hidrxidos alcalinos ou carbonatos
podem ser suprimidos com sucesso na cromatografia de nions. Os nions de cidos mais fracos, por
exemplo, acetato ou propionato, so quase completamente protonados aps a reao de supresso,
sendo que sua detectabilidade torna-se menor quando comparada com a tcnica de coluna simples.
Como j vimos, a separao e quantificao de nions podem ser realizadas com tcnica de
supresso ou pela deteco direta de condutividade [2, 4]. Esta ltima tcnica menos utilizada em
cromatografia de nions, principalmente porque em muitos casos ela menos sensvel. Um dos
fatores a condutividade de fundo: para os eluentes clssicos da tcnica de coluna simples (por
exemplo, 2 mmol/kg de ftalato, pH = 8) este valor de aproximadamente 200 S/cm e para eluentes
capazes de serem suprimidos, ela geralmente menor em pelo menos dez vezes aps o processo da
supresso.
A supresso qumica da condutividade de fundo possvel somente para alguns eluentes. Estes so
solues de [4]:
- Hidrxidos alcalinos;
- Carbonatos alcalinos e bicarbonatos;
- Boratos (por exemplo, B
4
O
7
2
);
- Aminocidos.
Na prtica, dos eluentes mencionados acima somente os hidrxidos alcalinos e os tampes
carbonatos so de grande importncia, significando que a escolha das potenciais fases mveis
limitada.
O on hidrxido um on eluente extremamente fraco, de modo que mesmo com materiais de
separao com baixa capacidade, o trabalho deve ser realizado em altas concentraes, acima de 50
mmol/kg. Se, grupos funcionais muito polares estiverem presentes na resina trocadora, ento, a fora
de reteno relativa do on OH
pode ser consideravelmente aumentada utilizando-se a seletividade

do hidrxido. Com eluentes OH
, a manipulao dos tempos de reteno ou das seletividades pode

somente ser realizada atravs da concentrao.
O uso de carbonatos ou bicarbonatos alcalinos permite trabalho com sistemas de eluio
consideravelmente mais flexveis. Ambas as espcies, HCO
3
e CO
3
2
, esto presentes como cido
carbnico H
2
CO
3
aps a supresso e s dissociam uma frao muito pequena. E quanto a fora de
eluio, o bicarbonato ligeiramente mais forte do que o hidrxido, visto que o carbonato um
eluente relativamente mais forte. Ambos os nions so normalmente usados juntos; isto resulta em
um eluente com um efeito tampo cuja fora de eluio pode ser facilmente controlada atravs das
concentraes dos dois componentes e da proporo de suas concentraes. Por causa das cargas
nas espcies eluentes, a seletividade para analitos monovalentes e divalentes pode ser influenciada
muito seletivamente. A proporo de concentrao dos dois ons eluentes pode tambm ser ajustada
com preciso atravs do pH, por isso que a faixa de pH usada para os eluentes HCO
3
/CO
3
2
est
entre 8 e 11. Assim como para eluentes OH
, a eluio pode ser acelerada pelo uso de fases

estacionrias com grupos polares funcionais.
Ambos os sistemas de eluio podem apenas ser usados com sucesso com trocadores aninicos de
superfcie funcionalizada quando a matriz (co-polmeros de metacrilato) ou o grupo funcional tiver
uma polaridade elevada. Para colunas de separao baseadas em PS-DVB, picos com simetria
menor e longos tempos de reteno tm sido observados para analitos fracos (nitrato, brometo)
mesmo quando grupos funcionais polares so usados. Com materiais peliculares, estes efeitos no
so to marcantes, o que explica o uso excepcionalmente grande difundido da tcnica de supresso
[2, 4].
3.7.2. Cromatografia de ctions
3.7.2.1. Cromatografia de ctions de ons alcalinos, alcalino-terrosos e amnio com deteco
de condutividade
Na separao de ons metlicos alcalinos e amnio, assim como aminas alifticas de cadeia curta em
fases sulfonadas de separao pela cromatografia de ons, os cidos minerais tais como HCl ou
HNO
3
so muito usados como eluente [4]. A concentrao cida do eluente depende do tipo e da
capacidade do trocador de ction usado, mas so necessrios alguns mmol/L. Ctions divalentes tais
como os alcalino-terrosos no podem ser eludos somente com cidos minerais, pois eles tm uma
afinidade distintamente maior para com a fase estacionria e, um aumento excessivo na
concentrao cida tornaria a deteco muito insensvel, ou seja, ctions monovalentes coeluindo e a
pobre separao entre os ctions divalentes. Como uma alternativa, uma base orgnica tal como a
etilenodiamina pode tambm ser usada para a separao de ons alcalino-terrosos. Em baixos
valores de pH, ela protonada e est presente como um ction divalente.
A anlise simultnea de ctions alcalinos e alcalino-terrosos em trocadores de ctions fortemente
cidos realizada principalmente com eluentes que contm o cido clordrico e o cido 2,3-
diaminopropinico [2]. Variando-se o pH possvel alterar o grau de protonao dos grupos aminas e
conseqentemente da fora de eluio do cido 2,3-diaminopropinico (veja o item Modelo de
reteno para eluentes com um ction, captulo 3.4.2).
Em sistemas de cromatografia de ons sem supresso, cidos orgnicos fracos podem tambm ser
usados como eluentes, alm dos cidos minerais. Os cidos orgnicos usados so, por exemplo,
cido oxlico, cido ctrico e cido tartrico. Os agentes complexantes tais como o cido 2,6-
piridinodicarboxlico (PDCA) e o ter coroa 18 Crown-6 so usados para influenciar seletivamente os
tempos de anlise de ctions individuais.
H dois tipos diferentes de deteco de condutividade. Se a condutividade de fundo dos eluentes for
elevada, por exemplo, com cidos minerais diludos por causa da alta condutividade dos ons
H
+
altamente dissociados, ento a deteco direta de condutividade possvel com os analitos que
tm uma condutividade evidentemente mais baixa do que a do eluente. Isto significa que picos
negativos so produzidos, entretanto, eles podem ser convertidos em um cromatograma normal pela
reverso da polaridade do detector. Se a qualidade do detector de condutividade no permite medida
sensvel da condutividade em um nvel elevado, ento, a supresso tambm usada para a
cromatografia de ctions. A construo de supressores para a cromatografia de ctions bem mais
difcil do que para a cromatografia de nions e eles tambm tm um tempo de vida til menor devido
a precipitao de hidrxidos de metais de transio.
3.7.2.2. Cromatografia de ctions para determinao de metais de transio e de ons alcalino-
terrosos com deteco pela derivatizao ps-coluna e fotomtrica
Ctions monovalentes tais como H
+
ou Na
+
so inadequados para o uso como um eluente para a
separao de ons de metais pesados e de transio porque os coeficientes de seletividade dos
analitos raramente diferem em um mesmo nmero da carga. Entretanto, a separao pode ser
realizada pela introduo de um equilbrio secundrio. Isto feito usando-se cidos carboxlicos
formadores de complexos (vide Figura 20) tais como o cido ctrico, o cido oxlico e o cido tartrico
como eluente. Junto com os ons do metal, eles formam complexos neutros ou aninicos (vide
captulo 3.4).
Figura 20. Vrios cidos carboxlicos como eluentes em cromatografia de ctions
Complexando-se ctions de metal, a densidade da carga efetiva dos analisados reduzida. Alm
disso, constantes formando diferentes complexos dos ons individuais de metal aumenta a
seletividade da separao. O mecanismo de eluio um resultado da remoo isoinica pelo
contra-on (efeito de empurrar) e pela formao de complexos (efeito de puxar) pelos ligantes
formadores de complexos [4].
A Figura 21 mostra os equilbrios entre os analisados M
2+
, o agente complexante L
2
e os contra-ons
E
+
, os quais participam do mecanismo de eluio.
Figura 21 Diagrama esquemtico dos participantes no equilbrio em um processo de troca catinica
[4].
A extenso da remoo isoinica pelos contra-ons E
+
determinada pela afinidade do ction fase
estacionria. Com contra-ons monovalentes, o ction possuindo uma maior afinidade fase
estacionria tem um efeito eluente mais forte. A influncia do agente complexante pode ser variada
alterando-se o pH e a concentrao do eluente. Alm disso, a fora de eluio pode ser influenciada
pelo uso de diversos agentes complexantes, bem como pelo uso de um ction divalente como contra-
on.
Enquanto os dois tipos de deteco de condutividade so apropriados para a deteco de metais
alcalinos e alcalino-terrosos, ons de transio e de metal pesado s podem ser determinados pela
medida direta da condutividade sem supresso. Se a tcnica de supresso fosse usada, ento, estes
metais seriam convertidos (a maioria) em hidrxidos insolveis pela reao de supresso. A deteco
direta de condutividade s possvel quando eluentes com uma baixa condutividade de fundo so
usados junto com trocadores de ctions de baixa capacidade.
por isso que a derivatizao ps-coluna, com a formao de complexos de metais
fotometricamente detectveis, usada principalmente para a deteco de ons de transio e de
metais pesados. Aps sair da coluna de separao, o eluato misturado com um reagente
colorimtrico em um reator ps-coluna. Este reage com os analitos para formar complexos coloridos
do metal que podem ser detectados fotometricamente. Uma variedade grande de azo-corantes pode
ser usada como agentes de colorao [2,4]. Metais de transio e lantandeos reagem com o 4-(2-
piridilazo)-resorcinol (PAR) (Figura 22) para formar complexos coloridos. Lantandeos e actindeos
podem ser detectados usando-se o cido 2,7-bis(2-arsenofenilazo)-1,8-dihidroxinaftaleno-3,6-
dissulfnico (Arsenazo III). O cido pirocatecol-3,5-dissulfnico (Tiron) apropriado para a
derivatizao ps-coluna do alumnio.
Figura 22 Estrutura do indicador de metal PAR
PAR usado principalmente para a deteco de ons de transio e de metal pesado. Como o Fe,
Co, Ni, Cu, Zn, Mn, Pb e Cd, o PAR forma complexos coloridos; estes absorvem em comprimento de
ondas de 490 a 520 nm com coeficientes de absoro de at 10
4
L mol
1
cm
1
e podem ser
detectados fotometricamente. A sensibilidade do mtodo baseada no fato de que os coeficientes de
extino dos complexos de metal-PAR so grandes comparados com o coeficiente de absoro do
reagente no comprimento de ondas usado.
3.7.2.3. Cromatografia de excluso de ons
Na cromatografia por excluso inica, a escolha do agente de eluio, como a seleo do material de
empacotamento, no permite muitas variaes. A faixa se estende da gua pura at cidos minerais
diludos. Ao selecionar o sistema mais apropriado tambm necessrio considerar o sistema de
deteco. Os mtodos de deteco mais freqentemente usados so deteco fotomtrica e de
condutividade. Com deteco fotomtrica, o cido sulfrico ou perclrico diludos so freqentemente
usados por causa de sua absoluta transparncia em UV. Ao aplicar a deteco da condutividade, o
cido sulfrico diludo o eluente de escolha porque ele produz bons cromatogramas com um
mnimo de equipamento, com ou sem supressor.
A concentrao de cido no eluente determina o grau de dissociao dos analitos e
conseqentemente tambm a sua reteno. Em geral, a reteno diminui enquanto a concentrao
cida aumenta. A forma do pico influenciada tambm pela concentrao cida. Para cidos
orgnicos, a gua pura no geralmente apropriada devido sua elevada adsoro, embora produza
excelentes resultados para o carbonato e borato.
4. Seo prtica
A seo prtica desta monografia apresenta experimentos que fornecem uma introduo detalhada
da cromatografia de ons. Inicialmente, os experimentos abrangem os conceitos da cromatografia de
ons (captulo 4.2); a segunda parte (captulo 4.3) continua com a determinao de nions, e a
terceira e ltima parte (captulo 4.4) trata da determinao de ctions orgnicos e inorgnicos.
Em princpio, os experimentos podem ser realizados em qualquer cromatgrafo de ons. Entretanto, o
instrumento deve satisfazer os seguintes requisitos:
- Bomba de duplo pisto e baixa pulsao, se possvel, operando sem suprimento externo de
nitrognio ou hlio;
- Controle de fluxo de acordo com os requisitos da coluna;
- Vlvula eltrica de injeo;
- Possibilidade de trocar vrios loops de amostra e colunas de pr-concentrao;
- Supresso eletrnica para ctions e nions;
- Supresso qumica para nions;
- Detector de condutividade estabilizado termicamente, se possvel, melhor que 0,01C;
- Gabinete do instrumento isolado trmica e eletronicamente;
- Operao de nions e ctions;
- Controle por PC recomendado;
Todos os sistemas modulares ou compactos de CI da Metrohm satisfazem os requisitos acima.
Entretanto, o CI bsico 792 especialmente projetado para treinamento e ensino, sendo assim,
recomendado para realizar os experimentos descritos abaixo.
Figura 23. CI bsico 792 da Metrohm: desenvolvido especialmente para treinamento e ensino.
4.1. Informaes sobre a parte prtica
Crescimento bacteriano
A fim de prevenir o crescimento bacteriano, o eluente, as solues de lavagem e as de regenerao
devem ser sempre preparados no momento do uso, e no devem ser usados por um perodo de
tempo longo. Para impedir o crescimento de bactrias ou algas, pode-se adicionar 5% de metanol ou
acetona ao eluente. Isto no pode ser feito se forem usados supressores de membrana, pois estes
sero destrudos pelos solventes orgnicos. Entretanto, o mdulo supressor da Metrohm MSM
100% resistente a solventes.
Anlise de ctions
Em cada anlise realizada, a amostra pode ser acidificada (pH 2,5 a 3,5) com cido ntrico
(aproximadamente 100 L de HNO
3
a 2 mol/L para 100 mL de amostra). Caso contrrio, a anlise de
ctions bivalentes poder no apresentar resultados reprodutveis.
Grau qumico
Todos os produtos qumicos usados devem ter pelo menos grau p.a. (grau analtico) ou purssimo
(extra-puro). Quaisquer padres usados devem ser especialmente adequados para a cromatografia
de ons; por exemplo, sais sdicos devem ser dissolvidos em gua, no em cido.
Fontes de contaminao
Todas as solues, as amostras, as solues de regenerao, a gua e os eluentes usados devem
estar livres de partculas, pois estas podero bloquear as colunas de separao ou capilares no
decorrer do tempo (aumento da presso da coluna). Isto especialmente importante no momento da
preparao de eluentes, visto que estes fluem pela coluna continuamente (500 a 1000 mL por dia de
operao, enquanto a amostra injetada de aproximadamente 0,5 mL).
Degaseificao de eluentes
A fim de evitar a formao de bolhas, recomendado que a gua usada para a preparao de
eluente seja degaseificada antes de serem adicionados os reagentes. Isto pode ser feito aplicando-se
vcuo proveniente de trompa dgua ou bomba de vcuo por 10 minutos ou utilizando-se um banho
ultrassnico.
Proteo ambiental
Uma das grandes vantagens da cromatografia de ons que, geralmente, meios aquosos so
usados. Por isso, os produtos qumicos usados em cromatografia de ons so praticamente atxicos e
no poluem o ambiente. Entretanto, se cidos, bases, solventes orgnicos ou metais pesados forem
usados, deve-se tomar o cuidado de descart-los apropriadamente aps o uso.
Desligando o instrumento
Se o cromatgrafo de ons no for usado por um longo perodo de tempo (>1 semana), ento, a
coluna de separao deve ser removida e a soluo metanol/gua (1:4) deve ser bombeada atravs
do cromatgrafo. Deve-se tomar o cuidado para que todos os trs canais de supressores sejam
lavados.
Informaes de segurana
culos de segurana, roupa apropriada e, se necessrio, luvas protetoras devem ser usadas na
realizao de qualquer experimento. Observe as informaes de segurana especificadas para os
produtos qumicos.
Selecionando uma coluna
A maioria dos experimentos descritos realizada com colunas de baixo custo Metrosep Anion Dual
1 para nions e Metrosep C2 para ctions. Estas colunas promovem a separao adequada para
todos os experimentos descritos. Naturalmente, o conjunto de produtos Metrosep inclui colunas de
separao que tm uma eficincia consideravelmente melhor, porm so de custo mais altos.
Armazenamento das colunas de separao
- Coluna para nions Metrosep A Supp 4 (6.1006.430)
A coluna armazenada no eluente.
Figura 24. Coluna para nions Metrosep A Supp 4 (6.1006.430)
- Coluna para nions Metrosep A Supp 5 (6.1006.530)
A coluna armazenada no eluente.
- Coluna para ctions Metrosep C2 (6.1010.210)
A coluna armazenada no eluente num refrigerador (4 C). essencial que a coluna no
permanea seca.
Figura 25. Coluna de ction Metrosep C2 (6.1010.210).
- Coluna para ctions Nucleosil 5SA (6.1007.000)
Para armazenagem a curto-prazo (dias), a coluna mantida em eluente, e para longo-prazo
(semanas), em metanol/gua (1:4).
- Coluna Metrosep Organic Acids (6.1005.200)
Para armazenagem a curto-prazo (dias), a coluna mantida em eluente, para longo-prazo
(semanas), em gua deionizada.
- Colunas de separao de outros fabricantes
Favor seguir as instrues do fabricante.
Qualidade da gua
Em cromatgrafos de ons so usados, principalmente, meios aquosos. por isso que a qualidade da
gua crucial para bons resultados cromatogrficos. Se a qualidade da gua for insatisfatria, ento,
certamente os resultados sero insatisfatrios. Alm disso, h o perigo de danificar o aparelho e a
coluna de separao. Portanto a gua deionizada usada deve atender a classificao Tipo I da
ASTM, ou seja, ter uma resistncia maior que 18 MD e ser livre de partculas. recomendado que a
gua seja filtrada em filtro de 0,45 m.
4.2. Experimentos abrangendo a teoria da cromatografia de ons
4.2.1. Experimento 1 Cromatografia de ons com e sem supresso
A condutividade equivalente A
sempre obtida pela soma das condutividades equivalentes de todos

os nions A
e ctions A
+
na soluo:
A
= A
+
+ A
Em princpio, a condutividade aumenta com o aumento da concentrao dos eletrlitos ou ons. Uma
relao linear entre concentrao e condutividade s existe para solues diludas, visto que A
depende da concentrao (lei de Kohlrausch). Os valores encontrados nas tabelas (vide seo
Deteco de Condutividade) aplicam-se para A
- condutividade equivalente em solues de

concentraes infinitas.
A medida da condutividade equivalente depende, em grande parte, da temperatura (2% / C). Em
particular, para medidas sem supresso qumica, ou seja, principalmente contra uma alta
condutividade de fundo, erros causados por uma mudana na temperatura so extremamente
aparentes. por isso que oscilaes na temperatura dentro do detector no devem ser maiores que
0,01 C.
Em cromatografia de ons sem supresso qumica, na qual o sinal de fundo suprimido
eletronicamente, o eluente deve ter uma condutividade to baixa quanto possvel. Os sais de cidos
fracos tais como cido ftlico, cido saliclico e cido benzico so freqentemente usados aqui. Um
valor medido sem supresso qumica depende da diferena das condutividades equivalentes do on
da amostra e dos ons do eluente.
AA ~ (A
P
A
E
)
Picos negativos ocorrem sempre que a condutividade do on da amostra for menor do que a dos ons
eluente. Um exemplo disto o nion fosfato. Em pH = 5, ele est presente principalmente como
H
2
PO
4
. Como a condutividade equivalente A
do H
2
PO
4
de 33 S*cm
2
/mol menor do que a
condutividade equivalente A
do ftalato com 38 S*cm

2
/mol, um pequeno pico negativo obtido. Isto
pode ser corrigido selecionando-se um pH maior, no qual o fosfato estar presente como HPO
4
2
com
condutividade equivalente A
de 57 S*cm
2
/mol.
Cromatografia de ons com supresso qumica significa que a condutividade de fundo reduzida
quimicamente. Um eluente com uma alta condutividade convertido, em uma reao ps-coluna
reao de supresso , em um eluente com uma baixa condutividade.
Em anlise de nions, isto realizado com o uso de sais de cidos fracos, ou seja, HCO
3
,
CO
3
2
e
BO
3
3
, no eluente. Todos os ctions no eluente e na amostra so trocados por H
+
no supressor.
cidos fracamente dissociados so formados a partir do eluente de acordo com a seguinte reao:
Na
+
+ HCO
3
H
2
CO
3
O cido carbnico resultante est presente como CO
2
+ H
2
O. Em conseqncia, a condutividade
residual muito baixa. Como os contra-ons dos nions a serem determinados so tambm trocados
por H
+
no supressor, a seguinte equao pode ser formulada:
Na
+
+ Cl
H
+
+ Cl
Ao invs de Na
+
e Cl
, que estavam originalmente presentes na amostra, a condutividade equivalente

consideravelmente maior de H
+
e Cl
agora medida tambm contra uma baixa condutividade de

fundo. Teoricamente, o sinal com supresso qumica esperado dever ser dez vezes maior do que
sem supresso qumica. Entretanto, na prtica, a sensibilidade aumenta de 2 a 4 vezes.
Em contraste funo de calibrao linear obtida quando operando sem supresso qumica, uma
funo de calibrao quadrtica ser obtida quando a supresso qumica for usada; isto significa que
uma calibrao multi-pontos necessria para o clculo. A regio de operao linear
consideravelmente menor (aproximadamente 1/20 a 1/50) do que para CI sem supresso qumica.
Contedo do aprendizado
- Princpios de montagem de um sistema CI;
- Diferenas entre operao com e sem supresso qumica;
- Determinao da diferena de sensibilidade entre os dois mtodos.
Experimento 1a Anlise sem supresso qumica
Tabela 3 Parmetros Experimento 1a
Coluna 6.1006.430 Metrosep A Supp 4
Eluente
cido ftlico a 5 mmol/L, 2% acetona; pH = 4,4 (TRIS)
Condutividade, aproximadamente 324 S/cm
Amostra Padro (fluoreto, cloreto, nitrito, brometo, nitrato, fosfato, sulfato)
Mtodo exp_01_n_e2.mtw
Sistema anonsupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Tempo de anlise 33 min
Loop 20 L
Polaridade -
Preparao do eluente
Dissolver 830 mg de cido ftlico em 20 mL de acetona e um pouco de gua, e completar at 1 L.
Ajustar o pH para 4,4 adicionando aproximadamente 1 g de TRIS (slido). Antes de adicionar os
reagentes, retire o gs da gua utilizada aplicando uma bomba de vcuo por 10 min ou utilizando um
banho ultrassnico sob o frasco de eluente sob agitao.
Cromatograma 1 Soluo padro sem supresso qumica
Tabela 4 Componentes Experimento 1a
Experimento 1b Anlise com supresso qumica
Tabela 5 Parmetros Experimento 1b
Eluente
Na
2
CO
3
a 1,8 mmol/L / NaHCO
3
a 1,7 mmol/L + acetona 2%
Condutividade aps supresso qumica aprox. 14 S/cm
Mtodo exp_01_s_e2.mtw
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 3 MPa
Loop 20 L
Supressor
Agentes de regenerao: H
2
SO
4
a 50 mmol/L e gua ultrapura alimentados
continuamente com mudana automtica dos canais de supresso, regenerao
e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Dissolver 191 mg de carbonato de sdio (anidro) e 143 mg de hidrogenocarbonato de sdio em 980
mL de gua ultrapura e, ento, adicionar 20 mL de acetona.
Cromatograma2 Soluo padro com supresso qumica
Pico Componente t
R
[min] Conc. [mg/L] N
o
de pratos rea [S/cm*s]
21 Cloreto 9,45 25 4834 61,48
32 Nitrito 12,30 25 4709 43,67
43 Brometo 17,06 25 4272 29,83
54 Nitrato 20,96 25 4174 33,44
65 Sulfato 26,06 25 2636 52,62
Tabela 6 Componentes Experimento 1b
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 4,05 5 5605 66,28
2 Cloreto 5,65 5 8573 43,59
3 Nitrito 6,56 5 8013 27,43
4 Brometo 7,90 5 7963 17,70
5 Nitrato 8,83 5 7653 22,26
6 Pico do sistema 10,50
7 Fosfato 13,50 5 6477 11,66
8 Sulfato 15,62 5 7922 29,28
4.2.2. Experimento 2 Capacidade das colunas de separao
Picos cortados, picos em forma de barbatana de tubaro, tempos de reteno alterados para os
mesmos ons, picos com cauda ou deformao frontal todos estes podem ter uma causa em
comum: sobrecarga da coluna.
Cada coluna tem um nmero finito de stios de troca inica. Antes da injeo da amostra, eles esto
completamente ocupados pelos ons do eluente. Quando a amostra injetada, inicia-se a troca
inica: ons do eluente so trocados por ons da amostra e, ento, ons da amostra so trocados por
ons do eluente. Como as espcies de ons diferem em suas constantes de ligao, eles eluem da
coluna em velocidades diferentes. O resultado obtido a separao das substncias da mistura e,
em seguida, o cromatograma.
Este processo s funciona perfeitamente se o nmero dos stios de troca for substancialmente maior
do que o nmero dos pontos de ligao requeridos pela amostra. Por exemplo, uma coluna com
capacidade de troca de 1 meq (miliequivalente) pode ligar no mximo 1 mmol de ons monovalentes.
Um segundo efeito com uma influncia negativa na separao o fato de que, em princpio, cada on
pode agir como um on eluente. Se a coluna estiver sobrecarregada, ento muitos ons eluentes so
substitudos pelos ons da amostra. Isto resulta em alteraes incalculveis no equilbrio da coluna e
a separao se torna ruim.
A capacidade de uma coluna pode ser determinada pela sua ocupao completa com ons cloreto.
Aps a etapa de lavagem com gua deionizada, os ons cloreto so eludos com eluente carbonato e
ento quantificados por cromatografia de ons ou titulao argentomtrica.
No experimento seguinte, a concentrao de cloreto elevada at que a coluna esteja
sobrecarregada. Alguns efeitos associados com a sobrecarga da coluna so descritos abaixo:
os tempos de reteno dos ons seguintes tornam-se mais curtos;
o pico do on dominante cortado;
o pico do on dominante forma cauda;
o nmero de pratos tericos (PT) torna-se menor;
a proporo rea/altura torna-se pior (em rea constante, a altura do pico diminui);
a simetria do pico torna-se deficiente.
A simetria do pico tambm se torna deficiente com o bloqueio dos discos de vedao frits, formao
de elevados volumes mortos como resultado dos efeitos de absoro no material da coluna.
- Esclarecimentos sobre os seguintes parmetros cromatogrficos: tempo de reteno,
resoluo, rea, nmero de pratos, simetria e proporo rea/altura;
- Influncia de um componente dominante principal sobre os componentes com uma
concentrao muito menor: alteraes nos parmetros acima mencionados.
Tabela 7 Parmetros Experimento 2
Eluente
Na
2
CO
3
3
a 1,7 mmol/L / + 2% acetona
Amostra
Padro (fluoreto, cloreto, nitrito, brometo, nitrato, fosfato, sulfato) + NaCl (aprox. 5%;
m:v)
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Tempo de
anlise
20 min
Loop 20 L
Supressor
Agentes de regenerao H
2
SO
4
continuamente com mudana automtica dos canais de supresso, regenerao e
lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 3 Soluo padro com uma concentrao muito elevada de cloreto.
Cromatograma 4 Soluo padro com uma concentrao de cloreto muito alta; parte ampliada
do cromatograma 3
Observaes
O cloreto de sdio slido foi pesado e dissolvido na soluo-padro dos outros nions. Os tempos de
reteno dos picos, bem como os valores para o nmero de pratos e a rea podem variar
dependendo da quantidade do NaCl pesada.
O enorme pico do cloreto interfere na avaliao dos picos seguintes. A identificao correta de picos
individuais apenas possvel atravs da adio de padro na amostra dos respectivos nions,
visando o aumento da altura dos picos.
4.2.3. Experimento 3 Seletividade das colunas de separao
Se a fora inica do eluente for plotada contra o logaritmo dos tempos de reteno dos ons mono e
divalentes, ento uma linha reta obtida. A inclinao desta linha maior para os ons divalentes do
que para os monovalentes. O aumento na fora de eluio do eluente, portanto, tem uma maior
influncia no tempo de reteno dos ons divalentes do que no tempo de reteno dos ons
monovalentes.
A influncia pode ser observada no on sulfato. Com o aumento da concentrao do eluente, a
eluio do sulfato acelerada mais do que a dos ons monovalentes.
Em geral, os ons bivalentes so eluentes mais efetivos do que os monovalentes, uma vez que
podem formar duas ligaes com a fase estacionria e, conseqentemente, realizar interaes mais
fortes com a mesma.
Em uma mesma concentrao molar, o hidrxido de sdio tem um pH maior do que o
carbonato/hidrogenocarbonato. O poder de eluio do on OH
menor quando comparado com a do

HCO
3
, uma vez que os ons hidrxidos no interagem to fortemente com a fase estacionria.
O tempo de reteno do on fosfato depende fortemente do valor do pH. Em valores altos, o equilbrio
deslocado de HPO
4
2
para PO
4
3
. Se for adicionado hidrxido de sdio a um eluente carbonato de
sdio, isto resulta em um aumento no tempo de reteno do fosfato, enquanto os tempos de reteno
de todos os outros ons so diminudos.
- Comparao dos eluentes com nions mono e divalentes;
- Comparao de eluentes hidrxido de sdio e carbonato/hidrogenocarbonato;
- Influncia do pH do eluente na reteno do fosfato.
Tabela 8 Parmetros Experimentos 3a a 3d
Eluente a) Na
2
CO
3
3
a 11 mmol/L
b) Na
2
CO
3
3
a 1,7 mmol/L
c) Na
2
CO
3
a 1 mmol/L / NaHCO
3
a 4 mmol/L
d) Na
2
CO
3
a 4 mmol/L / NaOH a 1 mmol/L
e) Na
2
CO
3
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Tempo de anlise a) 18 min
b) 16 min
c) 20 min
d) 10 min
e) 25 min
Loop 20 L
Supressor Agentes de regenerao: H
2
SO
4
e lavagem
Polaridade +
Experimento 3a Eluente: Na
2
CO
3
3
a 11 mmol/L
Preparao do eluente
Dissolver 53,0 mg de carbonato de sdio (anidro) e 924,4 mg de hidrogenocarbonato de sdio em 1 L
de gua ultrapura.
Cromatograma 5 Soluo padro Eluente: Na
2
CO
3
3
a 11 mmol/L.
Tabela 9 Componentes Experimento 3
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 4,12 10 5936 128,6
2 Cloreto 6,07 10 7548 86,9
3 Brometo 9,07 10 6711 36,3
4 Nitrato 10,41 10 6318 44,8
5 Fosfato 12,19 10 5104 23,1
6 Sulfato 14,71 10 5061 61,4
Experimento 3b Eluente: Na
2
CO
3
a 1,8 mmol/L / NaHCO3 a 1,7 mmol/L
Preparao do eluente
Dissolver 191 mg de carbonato de sdio (anidro) e 143 mg de hidrogenocarbonato de sdio em 1 L
de gua ultrapura.
2
CO
3
3
a 1,7 mmol/L.
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3,51 10 5109 134,7
2 Cloreto 4,88 10 6664 82,5
3 Brometo 6,89 10 6083 32,9
4 Fosfato 7,71 10 5500 40,3
5 Nitrato 10,81 10 4651 21,2
6 Sulfato 12,41 10 5837 56,6
Experimento 3c Eluente: Na
2
CO
3
a 1 mmol/L / NaHCO
3
a 4 mmol/L
Preparao do eluente
Dissolver 106 mg de carbonato de sdio (anidro) e 336,2 mg de hidrogenocarbonato de sdio em 1 L
de gua ultrapura.
2
CO
3
a 1 mmol/L / NaHCO
3
a 4 mmol/L.
Tabela 11 Componentes Experimento 3c
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 4,00 10 5542 128,5
2 Cloreto 5,91 10 6889 78,9
3 Brometo 8,76 10 6069 32,4
4 Nitrato 9,95 10 5280 39,5
5 Fosfato 15,40 10 5099 20,1
6 Sulfato 18,46 10 6408 55,4
Experimento 3d Eluente: Na
2
CO
3
Preparao do Eluente
Dissolver 424 mg de carbonato de sdio (anidro) e 100 L NaOH 30% em 1 L de gua ultrapura.
2
CO
3
a 4 mmol/L / NaOH a 1 mmol/L.
Tabela 12 Componentes Experimento 3d
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3,67 10 4662 123,5
2 Cloreto 4,65 10 6672 79,5
3 Brometo 6,04 10 7201 32,3
4 Nitrato 6,61 10 6902 41,4
5 Fosfato + Sulfato 7,94 10 + 10 4889 81,8
Experimento 3e Eluente: Na
2
CO
3
Preparao do Eluente
Dissolver 106 mg de carbonato de sdio (anidro) e 400 L NaOH 30% em 1 L de gua ultrapura.
2
CO
3
a 1 mmol/L / NaOH a 4 mmol/L.
Tabela 13 Componentes Experimento 3e
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 4,36 10 4654 127,8
2 Cloreto 5,6 10 7884 80,7
3 Brometo 7,31 10 8307 33,1
4 Nitrato 7,98 10 8204 42,8
5 Sulfato 14,29 10 7676 55,4
6 Fosfato 22,84 10 6477 21,8
4.2.4. Experimento 4 Limites de calibrao, deteco e determinao na cromatografia de
ons
Os parmetros importantes para mtodos de determinao analtica so a faixa linear, limite de
deteco e limite de determinao. Os mtodos matemticos para eles baseiam-se em mtodos
padres, por exemplo, em DIN 32645.
Se os cromatogramas so registrados com um detector de condutividade, a rea do pico ,
geralmente, usada para avaliao. A rea do pico proporcional quantidade de substncia. Se a
rea do pico for plotada contra a concentrao, ento a funo calibrao obtida. Ela linear para
medidas sem supresso qumica. Como uma primeira aproximao, ela uma funo quadrtica
para medidas com supresso qumica. Programas de avaliao calculam as funes de calibrao
automaticamente.
A avaliao utilizando a altura do pico usada, preferencialmente, para picos com significativa cauda
ou para picos insuficientemente separados, com grandes diferenas na relao rea/altura, visto que
nestes casos, a avaliao baseada na rea prporciona grandes erros.
O limite de deteco a concentrao mnima de um analito que pode ser detectada com uma
conhecida certeza estatstica. A menor concentrao terica, que pode ser distinta de um valor do
branco, deve ser calculada.
H dois mtodos para calcular o limite de deteco:
Mtodo do valor branco:
A amostra branco deve ser uma amostra que no contm o on a ser determinado, mas que produz
um sinal na mesma posio que o on da amostra. Medidas repetidas de uma amostra branco
geram para uma concentrao 0 (valor x) valores medidos (valores y) cujo modo (freqncia mdia
mxima) conhecido como o valor branco. Utilizando-se uma curva de calibrao, o valor y mximo
associado com o valor de concentrao no eixo x; isto o limite de deteco.
Mtodo da curva de calibrao:
Este mtodo usado quando no possvel determinar o valor do branco, devido ao fato de que o
on analisado no pode ser detectado na amostra. No mtodo da curva de calibrao, mltiplas
medidas so realizadas em diferentes concentraes do on. Uma faixa de confiana obtida a partir
do desvio padro. Desta forma, a concentrao 0 corresponde a um intervalo y particular. A funo
calibrao usada para associar o intervalo y a um intervalo de concentrao cujo valor mximo o
limite de deteco.
A relao sinal/rudo freqentemente usada para determinar o limite de deteco. Por exemplo, o
limite de deteco definido como sendo a concentrao do analito na qual o sinal de medida 3, 5
ou 7 vezes o rudo da linha de base.
O limite de quantificao considerado como o menor valor que possa ser quantificado com uma
determinada confiana. Este valor deve ser sempre maior que o limite de deteco e, como
estimativa, pode ser dito que o limite de quantificao maior por um fator de trs.
- O que significa calibrao?
- Comparao de uma calibrao de ponto nico e de pontos mltiplos estimativa de erros;
- Determinao de rudo do sistema;
- Estimativa do limite de deteco.
Experimento 4a Determinao de nions com supresso qumica
Eluente
Na
2
CO
3
a 1,8 mmol/L NaHCO
3
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
Supressor
Agentes de regenerao: H
2
SO
4
continuamente com mudana automtica dos canais de supresso,
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 10 Sobreposio de cromatogramas Solues padro com concentraes
diferentes com supresso qumica
Conc. [mg/L]
Pico Componente t
R
[min]
Nvel 1 Nvel 2 Nvel 3 Nvel 4
1 Fluoreto 4,04 1 5 25 50
2 Cloreto 5,66 1 5 25 50
3 Nitrito 6,58 1 5 25 50
4 Brometo 7,95 1 5 25 50
5 Nitrato 8,89 1 5 25 50
6 Fosfato 13,49 1 5 25 50
7 Sulfato 15,62 1 5 25 50
Experimento 4b Determinao de nions sem supresso qumica
Eluente
cido ftlico a 5 mmol/L, 2% acetona; pH = 4,4 (TRIS)
Condutividade aprox. 324 S/cm
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
Polaridade
Preparao do eluente
Dissolver 830 mg de cido ftlico em 20 mL de acetona e um pouco de gua e completar para 1 L.
Ajustar o pH para 4,4 adicionando aprox. 0,6 g de TRIS (slido).
Cromatograma 11 Sobreposio de cromatogramas Solues padro com concentraes
diferentes sem supresso qumica
Conc. [mg/L]
Pico Componente t
R
[min]
Nvel 1 Nvel 2 Nvel 3 Nvel 4
1 Cloreto 9,45 1 5 25 50
2 Nitrito 12,30 1 5 25 50
3 Brometo 17,06 1 5 25 50
4 Nitrato 20,96 1 5 25 50
5 Sulfato 26,06 1 5 25 50
4.2.5. Experimento 5 Alterao da seletividade com o auxlio de teres coroa (18 Crown-6)
Os tempos de reteno de ctions podem ser alterados pela adio de agentes complexantes aos
eluentes. O agente complexante age como um ligante, o ction analisado incluso como o on
metlico central. Quanto mais seletivo for um ligante em relao ao on metlico central, mais forte a
influncia no tempo de reteno. Em um caso ideal, os tempos de reteno dos outros ctions s
sero alterados levemente.
Os agentes complexantes so usados para obter uma melhor separao de ons de metais alcalinos.
A adio de ter coroa 18 Crown-6 ao eluente proporciona uma melhor separao de Na
+
, NH
4
+
e K
+
.
Por exemplo, o ter coroa pode ser adicionado ao eluente para melhorar a separao entre Na
+
e
NH
4
+
quando traos de NH
4
+
tm que ser determinados em guas naturais. O aumento no tempo de
reteno do K
+
muito acentuado. Isto pode ser explicado pela formao do complexo K
+
e o ter 18-
Crown-6. O K
+
se ajusta perfeitamente no espao central do ter. Ele complexado atravs de
pares de eltrons dos tomos de oxignio. Aps a complexao, uma molcula consideravelmente
maior, com a mesma carga, separada. Isto significa que o tempo de reteno do potssio
aumentado como resultado de impedimento estrico.
Figura 26 Complexo Potssio-18 Crown-6
O nome 18 Crown-6 indica que um sistema de anel consiste de 18 tomos dos quais 6 so tomos de
oxignio. Os teres coroa no s tm um papel importante na cromatografia de ons, como tambm
so usados como fase de seleo de ons em eletrodos de potssio.
- Efeito de um agente complexante muito seletivo nos tempos de reteno
- Esclarecimentos sobre o efeito em comparao com o Experimento 6
Tabela 18 Parmetros Experimentos 5a e 5b
Coluna 6.1010.210 Metrosep C2 (4 x 100 mm)
Eluente
a) cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
b) cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,75 mmol/L + ter coroa a
0,75 mmol/L
Amostra Padro (ltio, sdio, amnia, potssio, clcio, magnsio + HNO
3
a 2 mmol/L)
Mtodo exp_05_c.mtw
Sistema ction.smt
Fluxo 1 mL/min
Presso 8 MPa
Tempo de anlise
a) 15 min
b) 20 min
Loop 20 L
Polaridade
Experimento 5a Eluente sem ter coroa
Preparao do Eluente
Dissolver, sob aquecimento, 600 mg de cido tartrico e 125 mg de cido dipicolnico em 100 mL de
gua ultrapura e, ento, completar para 1 L com gua ultrapura.
Cromatograma 12 Soluo padro Eluente sem ter coroa.
Pico Componente t
R
o
1 Ltio 2,7 1 2584 22
2 Sdio 3,5 5 3203 30
3 Amnio 3,9 5 2919 33
4 Potssio 5,3 10 2675 28
5 Clcio 9,7 10 3168 26
6 Magnsio 12,5 10 2298 53
Experimento 5b Eluente com ter coroa
Preparao do eluente
Dissolver, sob aquecimento, 600 mg cido tartrico e 125 mg de cido dipicolnico em 100 mL de
gua ultrapura, adicionar 200 mg de ter coroa e completar para 1 L com gua ultrapura.
Cromatograma 13 Soluo padro Eluente com ter coroa.
Pico Componente t
R
o
1 Ltio 2,7 1 2653 22
2 Sdio 3,8 5 3108 30
3 Amnia 4,9 5 2207 32
4 Clcio 10,7 10 2914 27
5 Magnsio 12,2 10 2378 53
6 Potssio 14,9 10 1889 26
4.2.6. Experimento 6 Alterao da seletividade pela utilizao de agentes complexantes
Na anlise dos ons magnsio, sdio e potssio na presena dos ons zinco e clcio, a habilidade
destes em formar complexos com o cido dipicolnico (DPA, cido 2,6-piridinodicarboxlico)
utilizada.
Me
2+
H H
O O
O O
C C N
Figura 27 Complexo Me
2+
cido dipicolnico
A constante que resulta da formao de complexo
Me
2+
+ (DPA) [Me(DPA)]
2+
diferente para cada metal.
Dependendo do pH, os seguintes complexos podem ser formados (aumento da remoo de H
+
com o
aumento de pH):
condies cidas condies fracamente cidas condies alcalinas
Isto significa que, dependendo do pH, o complexo formado tem uma dupla carga positiva ou uma
nica carga positiva ou neutro.
O critrio primrio de separao em uma coluna trocadora de ction a carga positiva dos ons a
serem separados. Os complexos neutros no so retardados enquanto os complexos com trs
cargas positivas so ligados muito fortemente. Como resultado da constante de formao de
complexo e do pH do eluente, o complexo tem uma carga mdia devido ao equilbrio. Esta carga de
equilbrio determina o tempo de reteno. por isso que ons metlicos bivalentes podem ser
acelerados pela adio de cido dipicolnico em uma determinada faixa de pH.
No h influncia nos tempos de reteno dos ons metlicos monovalentes, os quais no formam
um complexo com o cido dipicolnico.
- Influncia da constante de formao de complexo no tempo de reteno comparao de
zinco e clcio;
- Comportamento de outros ons de metais de transio;
- Influncia do valor do pH na carga total do complexo;
- Explicao sobre os efeitos em comparao ao Experimento 5.
Tabela 21 Parmetros Experimentos 6a a 6d
Eluente a) cido tartrico a 4 mmol/L
b) cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,1 mmol/L
c) cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,25 mmol/L
d) cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
Amostra Padro (sdio, zinco, potssio, clcio, magnsio + HNO
3
a 2 mmol/L)
Mtodo exp_06_c.mtw
Sistema Ction.smt
Fluxo 1 mL/min
Presso 7 MPa
b) 20 min
c) 16 min
d) 13 min
Loop 10 L
Polaridade
Experimento 6a Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L
Preparao do eluente
Dissolver 600 mg de cido tartrico em 1L de gua ultrapura.
Cromatograma 14 Soluo padro Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L.
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 4,3 5 4450 17
2 Potssio 7,8 10 2330 16
3 Zinco 11,2 5 2330 11
4 Magnsio 14,4 10 2010 63
5 Clcio 19,5 10 2640 34
Experimento 6b Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,1 mmol/L
Preparao do eluente
gua ultrapura e completar para 1L.
Cromatograma 15 Soluo padro Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a
0,1 mmol/L.
Tabela 23. Componentes Experimento 6b
Pico Componente t
R
o
1 Zinco 1,9 5 554 6.7
2 Sdio 4,4 5 4390 17
3 Potssio 7,6 10 2750 16
4 Magnsio 14,8 10 2100 64
5 Clcio 17,9 10 2720 33
Experimento 6c Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,25 mmol/L
Preparao do eluente
0,25 mmol/L.
Tabela 24. Componentes Experimento 6c
Pico Componente t
R
o
Zinco ~1,1 5
1 Sdio 4,3 5 4450 18
2 Potssio 7,8 10 2330 17
3 Clcio + Magnsio 14,4 10 + 10 2010 98
Experimento 6d Eluente: cido tartrico a 4 mmol/L + cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
Preparao do eluente
0,75 mmol/L.
Tabela 25 Componentes Experimento 6d
Pico Componente t
R
o
Zinco ~1,1 5
1 Sdio 3,8 5 4540 17
2 Potssio 6,4 10 2900 17
3 Clcio 8,5 10 2630 33
4 Magnsio 10,5 10 2190 67
Observaes:
Todas as solues devem ser estocadas em recipientes plsticos. Para uma correta determinao de
sdio, deve-se evitar qualquer contato com vidro. O pH da soluo padro e da amostra deve estar
entre 2,5 e 3,5.
Aps a troca do eluente, deixar o sistema em funcionamento at que a linha de base se apresente
constante.
Cromatogramas 14 e 15: o zinco complexado pelo cido dipicolnico e elui no pico de injeo.
4.2.7. Experimento 7 Tcnica de pr-concentrao
Na cromatografia de ons, a injeo da amostra realizada com o auxlio de um loop de amostra
integrado com a vlvula de injeo. Em condies padronizadas, o volume do loop de amostra de
20 L para nions e 10 L para ctions. Com um sistema CI simples, loops de amostra deste
tamanho cobrem limites de deteco de 100 g/L ou 100 ppb sem qualquer problema.
Aumentando o loop de amostra, ou seja, para 100 L, por exemplo, os limites de deteco podem
ser diminudos dez vezes, aproximadamente. Entretanto, um volume maior de amostra produz um
pico de gua, volume morto, substancialmente maior, o que afeta a avaliao dos picos que eluem
no inicio do cromatograma. Alm disso, o formato dos picos assimtricos torna-se pior.
Um mtodo simples para diminuir os limites de deteco em vrios nveis de magnitude a pr-
concentrao da amostra. Uma coluna de pr-concentrao montada ao invs do loop de
amostra. Um volume elevado de amostra 5 mL no nosso exemplo passado atravs da coluna de
pr-concentrao. A princpio, esta coluna preenchida com o mesmo material que usado na
prpria coluna de separao. Isto assegura que todos os nions ou ctions da amostra a ser
analisada sejam completamente retidos durante muito tempo, enquanto nenhum on do eluente atual
esteja presente. Entretanto, a pr-concentrao s funciona se a amostra em si no contiver ons
(analitos) em altas concentraes.
A capacidade da coluna de pr-concentrao significantemente menor do que a da coluna de
separao. Para eluir os ons pr-concentrados em um volume menor possvel, a extrao
realizada pelo eluente em contracorrente, ou seja, a direo da vazo durante a pr-concentrao
oposta quela durante a eluio.
Figura 28 Tcnica de pr-concentrao: esquerda posio alimentar, direita posio
injetar.
A tcnica de pr-concentrao permite amostras com concentraes menores que g/L, ou ppb,
sejam determinadas mesmo em um sistema de cromatografia simples.
- O que preparao da amostra?
- Onde a interface entre a cromatografia de ons e a preparao da amostra?
- Qual a vantagem da pr-concentrao da amostra?
- Quais so os limites do mtodo?
- Qual o efeito de carbonato/CO
2
na amostra?
Eluente
Na
2
CO
3
3
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Coluna de pr-concentrao 6.1006.300 Metrosep Anion
Volume da amostra 5 mL em coluna de pr-concentrao
Supressor
Agentes de regenerao H
2
SO
4
a 50 mmol/L e gua ultrapura
alimentados continuamente com mudana automtica dos canais
de supresso, regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 18 Soluo padro (1 ppb de cada nion) para anlise de gua ultrapura
Tabela 27 Componentes Experimento 7 Padro
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
1 Fluoreto 3.81 1 3196 0.36
2 Acetato 4.35 n.d.
3 Cloreto 5.22 1 4919 0.32
4 Nitrito 6.01 1 5545 0.18
5 Brometo 7.23 1 5307 0.12
6 Nitrato 8.02 1 5900 0.14
7 Pico do sistema 9.88
8 Fosfato 11.79 1 10497 0.10
9 Sulfato 13.28 1 7033 0.33
Cromatograma 19 gua ultrapura
Tabela 28 Componentes Experimento 7- gua Ultrapura
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
1 Acetato 4.37 n.d. 4945 0.139
3 Sulfato 13.33 n.d. 8154 0.231
Observaes:
Lavar com muito cuidado e por vrias vezes todos os recipientes, seringas e o sistema; utilize
recipientes plsticos.
4.3. Experimentos para a determinao de nions
4.3.1. Experimento 8 nions em gua potvel
A gua potvel o nosso mais importante tipo de alimento. Ela obtida principalmente de gua
subterrnea e gua de superfcie. guas de superfcie incluem guas de lagos e reservatrios, gua
subterrnea enriquecida com guas de superfcie e gua de rios.
De acordo com a DIN 2000, a gua potvel deve satisfazer os seguintes requisitos:
- Deve ser incolor, clara, fria e livre de odor
e sabor estranho;
- Se possvel, deve ser naturalmente livre
de patgenos e substncias consideradas
de risco para a sade;
- No deve conter muitos sais,
particularmente componentes slidos,
ferro, mangans, bem como substncias
orgnicas (lodo e substncias hmicas);
- No deve causar corroso;
- A quantidade disponvel deve ser
suficiente para suprir todas as
necessidades da populao que a utiliza.
Dependendo do grau de poluio, vrios mtodos so usados para o tratamento da gua potvel.
Triagem, remove solo grosso e partculas grandes.
Filtro de areia, para filtrao; processo de biodegradao tambm ocorre na areia e ajuda na
purificao.
Filtro de carvo ativo absorve substncias orgnicas dissolvidas, por exemplo, pesticidas.
Remoo de ferro e mangans pela oxidao de Fe(II) e Mn(II); este processo ocorreria, por outro
lado, em aqueduto de gua potvel e resultaria em turbidez marrom ou flocos na gua potvel.
Desinfeco sempre necessria quando a gua no est livre de patgenos. Cloro, oznio, dixido
de cloro e irradiao UV so usados.
Clorao preventiva antes da liberao na tubulao de gua potvel, a fim de impedir o
crescimento de microrganismos na gua que chega ao consumidor.
Figura 29 Tratamento de gua potvel diagrama feito por Thomas Seilnacht, Tuttling.
- Investigao do nosso alimento Nmero 1;
- Conferindo as informaes fornecidas nas garrafas de gua mineral.
Tabela 29 Valores limitantes para gua potvel (Alemanha)
Fluoreto 1,5 mg/L como F
Nitrato 50 mg/L como NO

3
Nitrito 0,1 mg/L como NO

2
Cloreto 250 mg/L

Sulfato 250 mg/L
Eluente NaHCO
3
a 1,8 mmol/L / Na
2
CO
3
a 1,7 mmol/L + 2% acetona
Amostra gua potvel (gua de torneira, gua mineral)
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 20 gua de torneira de Herisau, Sua.
Tabela 31 Componentes Exeprimento 8 Padro
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.99 0.03 4916 0.69
2 Cloreto 5.65 10.66 7984 96.39
3 Nitrato 8.96 11.16 5398 47.43
4 Pico do Sistema 10.64
5 Sulfato 15.40 6.07 7546 34.29
Cromatograma 21 gua mineral sem dixido de carbono.
Tabela 32 Componentes Exeprimento 8 gua mineral sem dixido de carbono
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.93 0.18 1789 7.77
2 Cloreto 5.76 46.24 2456 468.9
5 Nitrato 8.75 0.23 4659 0.94
6 Sulfato 15.55 95.61 4400 637.1
Observaes
A gua mineral contendo dixido de carbono deve ser desgaseificada antes da medio por qu?
4.3.2. Experimento 9 nions em etanol e destilados (licores)
A determinao de nions em solventes orgnicos possvel, embora ocorra a presena de picos
marcantes nos cromatogramas no incio do sistema. Anlises de rum, vodca e etanol so usadas
como exemplos.
Para se obter limites de deteco menores, a tcnica de pr-concentrao pode ser aplicada (vide
captulo 4.2.7). Em alguns casos, entretanto, a matriz da amostra (por exemplo, etanol) pode interferir
principalmente com a determinao, levando a picos com formatos irregulares que no podem ser
avaliados (vide Cromatograma 26). , ento, necessrio remover a matriz pela lavagem da coluna de
pr-concentrao com gua ultrapura (eliminao da matriz). Desta forma, so obtidos bons
cromatogramas (vide Cromatograma 25).
A tcnica de eliminao da matriz pode ser usada para analisar solventes polares e at mesmo no-
polares.
Um mtodo alternativo para remover matria orgnica de solues aquosas usar uma coluna de
preparao da amostra RP (Fase Reversa)
- Anlise de alimentos;
- Influncia da matriz na cromatografia;
- Preparao da amostra;
- Pr-concentrao da amostra e eliminao da matriz.
Tabela 33 Parmetros Experimentos 9a a 9c
Eluente NaHCO
3
a 1,7 mmol/L / Na
2
CO
3
Amostra a) Rum
b) Vodca
Mtodo exp_09_s e2.mtw
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
b) 19 min
Loop a) 100 L
b) 100 L
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Experimento 9a Determinao de nions em rum
Cromatograma 22 Soluo padro para anlise de rum.
Tabela 34 Componentes Experimento 9a Padro
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.51 5.011 5759 225.321
2 Nitrato 8.65 0.248 4834 5.110
3 Sulfato 14.91 5.005 5925 143.508
4 Oxalato 16.51 0.250 4732 5.411
Cromatograma 23. Anlise de rum.
Tabela 35 Componentes Experimento 9a Rum
Pico Componente t
R
o
1 n.d. 4.15 n.d. 1535 54.68
2 n.d. 4.43 n.d. 3358 41.49
3 Cloreto 5.32 0.837 5456 35.44
4 Nitrato 8.32 0.059 5554 1.46
5 Sulfato 14.17 0.580 4624 15.90
6 Oxalato 15.76 0.233 5268 5.05
Experimento 9b Determinao de nions em vodca
Cromatograma 24 Anlise de vodca
Tabela 36 Componentes Experimento 9b Vodca
Pico Componente t
R
o
1 n.d. 3.89 50.52
2 n.d. 4.50 38.89
3 Cloreto 5.39 3.04 4942 132.57
4 Nitrato 8.32 0.26 4991 5.33
5 Sulfato 14.23 2.87 3100 80.17
6 Oxalato 15.78 0.57 3530 11.95
Observaes:
Os picos 1 e 2 no foram avaliados.
Experimento 9c Determinao de nions em etanol com pr-concentrao e eliminao da
matriz
Tabela 37 Parmetros Experimento 9c
Eluente Na
2
CO
3
3
Amostra Etanol
Mtodo exp_09_me e2.mtw
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 2 mL na coluna de pr-concentrao Metrosep nion 6.1006.300; enxge
com 2 mL de gua ultra-pura para eliminao de matriz
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 25 Determinao de nions em etanol com eliminao da matriz.
Tabela 38 Componentes Experimento 9c Etanol sem eliminao da matriz
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.2 1.82 5416 1.81
2 Nitrito 6.03 0.42 2658 0.41
3 Nitrato 8.08 1.83 3887 1.17
5 Sulfato 13.34 2.61 5440 3.89
6 Oxalato 14.77 0.99 6025 1.11
Cromatograma 26 Determinao de nions em etanol sem eliminao da matriz.
Tabela 39 Componentes Experimento 9c Etanol sem eliminao da matriz
Pico Componente t
R
o
n.d
4.3.3. Experimento 10 nions em alface
Os nitratos entram no corpo humano no s atravs da gua potvel, mas tambm pela ingesto de
vegetais, saladas etc. A OMS (Organizao Mundial da Sade) recomenda que o consumo dirio de
nitrato no exceda 220 mg por pessoa. Na Alemanha, o consumo mdio dirio de nitrato de
aproximadamente 130 mg por pessoa. Aproximadamente 5% desta quantidade origina-se de carnes
e lingias; o restante dividido em quase meio a meio entre a gua potvel e os vegetais.
O nitrato pode causar efeitos adversos na sade humana por diferentes formas. O nitrato em si
relativamente atxico. Porm, o consumo de grandes quantidades pode levar inflamao do trato
gastrintestinal. Entretanto, sob certas condies, particularmente em presena de bactrias da regio
bucal humana, o nitrato reduzido a nitrito pela enzima nitrato-redutase:
NO
3
NO
2
O nitrito capaz de converter a hemoglobina, a colorao vermelha do sangue, em metemoglobina

(Fe
2+
oxidado a Fe
3+
). Ao contrrio da hemoglobina, a metemoglobina no pode transportar o
oxignio no sangue. Em seres humanos adultos, este dano pode ser sanado por reaes
metablicas. Entretanto, o metabolismo de bebs at os 5 meses de idade ainda no capaz de
realizar tais reaes com eficincia. Isto resulta em falta de oxignio no sangue dos bebs e a pele se
torna azulada. Esta cianose ou metemoglobinemia pode, s vezes, resultar em morte.
Nas proximidades cidas do estmago, o nitrito pode reagir com vrias aminas secundrias (dois
tomos de H da molcula amnia so substitudos por grupos alquilas), que entram no corpo humano
atravs de medicamentos e alimentos, para formar as nitrosaminas.
Figura 30 Formao de nitrosaminas a partir de nitrito e aminas secundrias
As nitrosaminas esto entre as substncias mais carcinognicas conhecidas. Elas so formadas
dentro do organismo a partir de compostos no-carcinognicos.
- Controle dos alimentos, particularmente, em relao ao nitrito e nitrato.
Eluente Na
2
CO
3
3
Amostra Alface
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
Supressor Agentes de regenerao H
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Preparao da amostra
Picar a alface, espalhar, adicionar gua ultrapura (proporo 1:100) e filtrar.
Cromatograma 27 Soluo padro para a anlise de alface.
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 6.53 1.00 4994 7.30
2 Nitrato 8.96 10.0 4789 39.98
3 Fosfato 19.68 1.0 3328 2.29
4 Sulfato 22.40 3.0 3946 3.99
5 Oxalato 24.35 1.0 4395 5.63
Cromatograma 28 Anlise de alface (diluio 1:100).
Tabela 42 Componentes Experimento 10 Alface
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 6.51 172 5223 12.13
2 Nitrato 8.91 1346 4659 54.04
4 Fosfato 19.72 88 3697 2.06
5 Sulfato 22.40 351 3345 4.68
6 Oxalato 24.33 103 3926 5.93
4.3.4. Experimento 11 cido fosfrico em refrigerantes tipo cola
A Coca-Cola uma bebida no-alcolica que contm dixido de carbono e cafena. Ela foi produzida
pela primeira vez em 1885, pelo farmacutico americano Pemberton. Entre os seus ingredientes
esto os extratos de noz de cola, laranjas amargas, essncia de gengibre, acar, cido fosfrico (pH
= 2,7), corante caramelo, dixido de carbono e cafena.
Muitos refrigerantes tipo cola esto disponveis em supermercados (Pepsi Cola, Club Cola, River
Cola, Afri Cola, Bar Cola, Dolly Cola etc.); a composio destes pode diferir da composio da Coca-
Cola.
A determinao do contedo de cido fosfrico em refrigerantes tipo cola de especial importncia,
uma vez que os engarrafadores locais deste refrigerante adquirem o concentrado e o engarrafamento
controlado atravs do contedo de fosfato, requerendo uma determinao altamente precisa.
O cido fosfrico um cido tribsico (pK
A1
= 2,161; pK
A2
= 7,207; pK
A3
= 12,325). As quantidades das
diferentes espcies variam com o pH, como pode ser visto no seguinte diagrama:
Figura 31 Efeito tampo do cido fosfrico em uma escala de pH de 6 a 8.
Uma mistura do fosfato primrio e secundrio freqentemente usada como uma soluo tampo em
pH de 6 a 8 (90% de H
2
PO
4
+ 10% de HPO
4
2
at 10% de H
2
PO
4
+ 90% de HPO
4
2
).
Veja tambm a equao de Henderson-Hasselbalch (equao de tampo):
) (
) (
lg
HA c
A c
pK pH
S
+ =
- Anlise de bebidas;
- Qumica do cido fosfrico;
- Influncia do pH na separao cromatogrfica;
- Estatstica: reprodutibilidade.
Eluente Na
2
CO
3
3
Amostra Refrigerantes cola
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Tempo de anlise 18 min para Coca-Cola, 30 min para Coca-Cola de baixa caloria
Loop 20 L
Supressor Agentes de regenerao H
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 29 Soluo padro para a anlise de refrigerante tipo cola.
Tabela 44 Componentes Experimentos 11a e 11b Soluo Padro
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.29 0.5 4883 5.85
2 Ciclamato 6.60 5 2663 2.91
3 Nitrato 8.31 0.5 5109 1.64
4 Fosfato 12.07 40 4744 64.97
5 Sulfato 13.79 1 5583 4.26
Experimento 11a Anlise de Coca-Cola
Cromatograma 30 Anlise de Coca-Cola (diluio 1:10).
Pico Componente t
R
o
1 n.d.
2 n.d.
3 Cloreto 5.57 1.83 7547 6.25
4 Nitrato 8.71 4.39 7408 3.96
5 Fosfato 13.55 26.47 6409 136.26
6 Sulfato 15.42 7.77 7150 9.39
Experimento 11b Anlise de Coca-Cola de baixa caloria
Cromatograma 31 Anlise de Coca-Cola de baixa caloria (diluio 1:10).
Pico Componente t
R
o
1 n.d.
2 n.d.
3 Cloreto 5.56 3.23 8140 1.84
4 Ciclamato 7.07 360.76 3670 46.02
5 Nitrato 8.69 2.69 4290 2.27
6 Fosfato 13.54 247.96 1850 102.58
7 Sulfato 15.41 9.33 1630 6.03
Observaes:
Os picos 1 e 2 no foram avaliados.
Experimento 11c Reprodutibilidade das medidas de fosfato em Coca-Cola
Cromatograma 32 Sobreposio de cromatogramas: 8 medidas (amostra no diluda).
Tabela 47 Reprodutibilidade das medidas
Cromatograma rea do fosfato [S/cm*s] conc. do fosfato [mg/L]
1 3627 519
2 3629 520
3 3626 519
4 3626 519
5 3636 521
6 3638 521
7 3639 521
8 3638 521
Desvio padro: inferior a 0,2%
Observaes:
Os refrigerantes tipo cola devem ser degaseificados. Em refrigerante tipo cola de baixa caloria, o
adoante ciclamato elui prximo do pico do fosfato.
4.3.5. Experimento 12 cidos orgnicos em vinho
De acordo com a lei alem de vinhos, o vinho um produto que s pode ser obtido atravs de uma
fermentao alcolica, parcial ou completa, de uvas frescas ou amassadas, ou do suco de uvas. O
suco de uvas contm de 12 a 25% de carboidratos (glicose, frutose) e 0,9 a 1,5% de cidos; os mais
importantes so o cido L-(+) tartrico (2R, 3R) e o cido mlico, mas o cido ctrico, o cido
cetoglutrico, o cido succnico e o cido ltico podem tambm estar presentes.
Um critrio importante para analisar o suco de uva o grau Oechsle (Oe); quanto maior for o grau,
mais acar o suco contm. Isto indica o nmero de gramas pelo qual 1 L de suco a 20 C mais
pesado do que 1 L de gua destilada. Por exemplo, um suco com uma densidade de 1,115 kg/L (115
g a mais que em 1 L de gua) tem 115 Oe. A partir de graus Oechsle, um clculo simples permite a
determinao do contedo de acar e lcool. 1,7 g de acar produz 1 mL (0,794 g) de etanol. Em
uma frao de 12 a 15% do volume de lcool a fermentao se paralisa, uma vez que as leveduras
so mortas pelo lcool que elas produziram.
O aroma do vinho constitudo de 600 a 800 componentes: hidrocarbonetos, lcoois, aldedos,
cetonas, cidos, steres, lactonas, teres, fenis, entre outros.
De interesse analtico so os (2R, 3R)-cidos tartrico, cido mlico, cido ctrico, cido ltico e cido
succnico. O contedo total de cido (calculado como cido tartrico) est, geralmente, entre 5,5 e 8,5
g/L. O cido actico, cido propinico, cidos graxos maiores e quantidades anormais de cido ltico
ocorrem em vinhos estragados e so, principalmente, produzidos por microrganismos.
COOH
C OH H
C H HO
COOH
2
3
Figura 32 cido L-(+) tartrico, forma (2R, 3R)
A fermentao alcolica ocorre de acordo com a seguinte equao:
C
6
H
12
O
6
+ 2 ADP + 2 P 2 C
2
H
5
OH + 2 CO
2
+ 2ATP
Abreviaes: ADP = difosfato de adenosina, ATP = trifosfato de adenosina, P = fosfato
Os cidos orgnicos fracos podem ser determinados por cromatografia de excluso de ons (vide
captulos 3.3.4, 3.6.7 e 3.7.2.3).
T
a
b
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7
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o

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L
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M
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3
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H
B
S

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r
o
x
i
b
u
t
r
i
c
o

2 Monografia Metrohm 94
- Cromatografia de excluso de ons;
- Quais ons podem ser determinados por cromatografia de excluso de ons?
Coluna 6.1005.200 Metrosep Organic Acids (7.8 x 250 mm)
Eluente H
2
SO
4
a 0,5 mmol/L / acetona (85:15)
Amostra Vinho branco e vinho tinto
Mtodo exp_12_o.mtw
Sistema orgacids.smt
Fluxo 0,5 mL/min
Presso 3 MPa
Loop 20 L
Polaridade +
Preparao do eluente
Misturar H
2
SO
4
a 0,5 mmol (850 mL) e acetona (150 mL).
Preparao da amostra
Diluir a amostra de vinho 1:100 e filtrar em membrana com poros de 0,45 m.
Cromatograma 33 Soluo padro para a determinao de cidos orgnicos em vinho.
Tabela 50 Componentes Experimentos 12a e 12b Soluo Padro
Pico Componente t
R
o
1 Citrato 7,2 5 26200 1,1
2 Tartarato 7,5 20 7990 31
3 Malato 8,3 5 9210 4,5
4 Succinato 9,9 5 7140 1,2
5 Lactato 10,8 20 8830 11
6 Acetato 13,1 10 11500 1,2
Pico do sistema 15,9
Experimento 12a Determinao de cidos orgnicos em vinho branco
Cromatograma 33. Determinao de cidos orgnicos em vinho branco (diluio 1:100).
Pico Componente t
R
o
1 Citrato 7,2
2 Tartarato 7,5 1210 8430 19
4 Malato 8,2
7 Succinato 9,8 350 5660 0,8
8 Lactato 10,7 2190 8820 13
9 Acetato 13,0 710 5200 0,8
Observaes:
Os picos 3, 5 e 6 no foram avaliados.
Experimento 12b Determinao de cidos orgnicos em vinho tinto
Cromatograma 35 Determinao de cidos orgnicos em vinho tinto (diluio 1:100).
Pico Componente t
R
o
1 Citrato 7,2
2 Tartarato 7,5 2230 8300 34
4 Malato 8,2
7 Succinato 9,9 410 10500 1,0
8 Lactato 10,8 1560 9570 8,9
9 Acetato 13,1 1010 7950 1,1
Observaes:
Os picos 3, 5 e 6 no foram avaliados; o citrato e o malato no puderam ser quantificados
corretamente.
4.3.6. Experimento 13 Contaminantes em borato determinao de cloretos e sulfatos em
solues de brax
O brax (tetraborato dissdico, Na
2
B
4
O
7
10 H
2
O, Na
2
[B
4
O
5
(OH)
4
]8H
2
O) tem a seguinte estrutura:
B HO
O
O
B
B
OH
OH
O
O
B OH O
2 Na 8 H
2
O
Figura 33 Brax (tetraborato dissdico, Na
2
B
4
O
7
10 H
2
O, Na
2
[B
4
O
5
(OH)
4
]8H
2
O)
Ao se fundir, o brax pode dissolver muitos xidos metlicos com a formao de cores
caractersticas. Estas prolas de brax so muito conhecidas em prtica de qumica inorgnica. O
brax tambm usado na produo de vidro, cermica vitrificada, porcelana e como um fundente em
solda. A 100C, o brax perde 5 molculas de gua e se torna o pentaidrato pedra brax. Se um
metal fundente for adicionado a ele, os contaminantes de superfcie principalmente camadas de
xido sero destrudos. Estes, por outro lado, afetariam a formao de uma liga entre a solda (uma
liga de prata, cobre e estanho) e o material bsico.
As solues de tetraborato de sdio (brax) so usadas em circuito interno de resfriamento de usinas
nucleares como absorvedores de nutrons. A pureza do material extremamente importante, uma
vez que traos de cloreto e sulfato causam corroso na tubulao, o que deve ser evitado de todas as
maneiras.
O cido brico H
3
BO
3
ou B(OH)
3
um cido monobsico muito fraco, cujo valor de pK
A
corresponde
a 9,25, aproximadamente, ao do HCN. O cido brico no um doador de H
+
(definio de cido
segundo Bronsted), mas sim um aceptor de OH
(definio de cido segundo Lewis).

B(OH)
3
+ HOH H
+
+ B(OH)
4
-
A cromatografia de ons sem supresso qumica usa um eluente cido com pH = 4,1 para a
determinao de contaminantes em borato. Neste pH, o borato est presente quase que totalmente
como cido brico B(OH)
3
. Ao contrrio dos nions carregados negativamente, o cido brico no
interage com a fase estacionria da coluna de separao. Isto significa que ele elui no volume morto.
Entretanto, com supresso qumica usado o eluente carbonato/hidrogenocarbonato fracamente
alcalino. Embora seja possvel separar o borato como um nion, a deteco no funciona. A causa
disto pode estar no supressor, que troca todos os ons Na
+
por ons H
+
. Em conseqncia, formado
o cido brico fraco.
A grande quantidade de cido brico promove distores no cromatograma, tornando quase
impossvel a determinao dos nions. A eliminao da matriz (vide captulo 4.3.2) a melhor
maneira de resolver o problema.
Em usinas de energia, traos de nions devem, freqentemente, ser determinados em amostras de
gua contendo 2 a 4% de cido brico. Nestes casos, aplica-se a tcnica de eliminao da matriz
com pr-concentrao da amostra (vide Cromatograma 39).
- cidos fortes e fracos;
- Pr-concentrao da amostra e eliminao da matriz.
Determinao de traos de nions em cido brico com pr-concentrao e eliminao de
matriz
Experimento 13a Medio sem supresso qumica (com supresso eletrnica)
Tabela 53. Parmetros Experimento 13a
Eluente
cido ftlico a 5 mmol/L, acetona a 2%; pH = 4,1
Amostra
0,8% de cido brico em soluo aquosa, com adio de padro (2 ppm de
cloreto e nitrato)
Mtodo exp_13_ne2.mtw
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,0 MPa
Loop 100 L
Polaridade
Preparao do eluente
Dissolver 821 mg de cido ftlico em 20 mL de acetona e um pouco de gua, adicionar a soluo
gua degaseificada e completar para 1 L. Ajustar o pH para 4,1 pela adio de aprox. 0,5 g de TRIS
(slido).
Cromatograma 36 Adio de padro em cido brico (2 ppm de cloreto e nitrato) sem
supresso qumica.
Tabela 54. Componentes Experimento 13a
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 10.79 2.0 4327 14.23
2 Nitrato 27.25 2.0 1669 7.48
Experimento 13b Medies com supresso qumica
Eluente Na
2
CO
3
3
Amostra 0,8% de cido brico em soluo aquosa com adio de padro (2 ppm de
cloreto e nitrato)
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,0 MPa
Loop Agentes de regenerao: H
2
SO
4
regenerao e lavagem
Supressor 100 L
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 37 Adio de padro em cido brico (2 ppm de cloreto e nitrato) com
supresso qumica.
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 7.95 2 2714 70.7
2 Nitrato 14.17 2 85005 57.8
Experimento 13c Determinao, com supresso qumica, de traos de nions em cido
brico com pr-concentrao e eliminao de matriz
Eluente Na
2
CO
3
3
a 1,7 mmol/L + 2% de acetona
Amostra Soluo aquosa de cido brico a 0,2%
Mtodo exp_13_me_e2.mtw
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Introduo da
amostra
2 mL da amostra so passados pela coluna de pr-concentrao onde os
traos de nions a serem determinados so retidos. Posteriormente, a coluna
de pr-concentrao lavada com gua ultrapura para remover o cido
brico (eliminao da matriz) e, ento, injetada. Os traos de nions retidos
so re-eludos, transportados para a coluna Metrosep A Supp 4 e l
separados.
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Cromatograma 38 Determinao de traos de nions em padro com pr-concentrao
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
1 Cloreto 5.35 1.5 4421 3.48
2 Nitrito 6.19 5 3455 2.42
3 Nitrato 8.58 1 5324 0.24
5 Sulfato 13.54 5 5441 3.19
6 Oxalato 15.00 5 4855 3.19
Cromatograma 39 Determinao de traos de nions em 0,2% de cido brico com pr-
concentrao e eliminao de matriz
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
1 Cloreto 5.37 2.8 4833 5.65
2 Nitrito 6.20 4.8 4452 2.36
3 Nitrato 8.36 n.d. n.d.
5 Sulfato 13.51 7.0 5269 4.30
6 Oxalato 14.98 3.5 5293 2.25
Cromatograma 40 Sobreposio de um branco (cromatograma inferior) e soluo de cido
brico a 0,2% (cromatograma superior) com pr-concentrao e eliminao
de matriz idnticas.
Observaes:
A sobreposio dos dois cromatogramas mostra claramente que a maioria dos nions determinados
proveniente do cido brico e no da gua ultrapura utilizada para diluir o cido brico.
4.3.7. Experimento 14 Determinao de nions em gua efluente
Em estaes de tratamento biolgico, o efluente purificado, principalmente, com o auxlio de
bactrias. As substncias orgnicas so oxidadas com o consumo de oxignio.
Substncias orgnicas + O
2
CO
2
+ H
2
O + massa celular
Alm da oxidao de substncias orgnicas, a amnia tambm pode ser oxidada para nitrato
(nitrificao) em estaes adequadamente projetadas.
NH
4
+
+ 2 O
2
NO
3
+ H
2
O + 2 H
+
Em processos com ausncia de oxignio, as bactrias utilizam o oxignio do nitrato para a oxidao
de substncias orgnicas (desnitrificao).
Substncias orgnicas + 2 NO
3
2 CO
2
+ 2 OH
+ 2 H
2
O + N
2
|
O fosfato um nutriente para plantas, assim como NH
4
+
e NO
3
- pode ser precipitado, por exemplo,

pela adio de solues de sal de Fe
3+
. Alm dos chamados parmetros de fechamento demanda
bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), carbono orgnico total (TOC)
que so uma medida da carga orgnica do efluente ou gua em geral, a anlise de NH
4
+
, NO
3
e
PO
4
3
tambm importante. Cl
e SO
4
2
so normalmente apenas analisados sob circunstncias
especiais.
Em estaes de tratamento comunitrias com mais de 100.000 dos chamados equivalentes de
populao (1 equivalente de populao o fluxo de esgoto por pessoa), os seguintes limites so
estabelecidos na Alemanha:
DBO 15 mg/L
DQO 75 mg/L
NH
4
-N 10 mg/L
*
N
tot
18 mg/L
*
(soma de NH
4
-N, NO
2
-N, NO
3
-N)
PO
4
-P
tot
1 mg/L
*
S se aplica a uma temperatura de gua efluente >12 C, uma vez que a nitrificao fortemente
influenciada pela temperatura.
NH
4
-N, NO
2
-N, NO
3
-N significa que os valores se referem ao nitrognio contido nos respectivos ons;
o mesmo se aplica para PO
4
-P.
- Anlise ambiental;
- Tcnicas de preparao da amostra;
- Anlise de mistura de substncias com grandes diferenas em concentrao taxa da
concentrao dinmica.
Eluente NaHCO
3
a 1,8 mmol/L / Na
2
CO
3
Condutividade a supresso qumica aprox. 13 S/cm
Amostra gua potvel municipal (de Herisau, Sua)
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
2
SO
4
e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Preparao da amostra
A filtrao das amostras essencial. Usar membrana com poros de 0,45 m ou menor. Mesmo as
solues aparentemente limpas podem conter partculas muito finas que danificam a coluna.
Experimento 14a Influxo em estao de tratamento
Cromatograma 41 Cromatograma padro para a anlise do influxo em estao de tratamento.
Tabela 61 Componentes Experimento 14a Padro
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.68 0.08 3545 0.9
2 Cloreto 5.24 150.97 5416 1354.2
3 Nitrito 5.99 0.49 5510 1.8
4 Brometo 7.26 0.49 5228 1.2
5 Nitrato 8.07 4.95 4949 15.9
6 Fosfato 12.01 4.99 4440 8.3
7 Sulfato 13.94 50.30 5886 249.8
Cromatograma 42 Anlise do influxo em estao de tratamento.
Tabela 62 Componentes Experimento 14a Influxo em estao de tratamento
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.68 0.15 1454 1.77
2 n.d. 4.25
3 Cloreto 5.20 72.86 5581 1880.47
4 Nitrito 6.03 1.13 4562 0.89
5 Brometo 7.35 0.37 2898 2.16
6 Nitrato 8.23 8.40 4244 40.97
8 Fosfato 12.05 3.85 3381 7.01
9 Sulfato 13.90 27.21 5981 492.44
Experimento 14b Efluxo em estao de tratamento
Cromatograma 43 Cromatograma padro para a anlise do efluxo em estao de tratamento.
Tabela 63 Componentes Experimento 14b Efluxo em estao de tratamento
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.68 0.06 3163 0.8
2 n.d. 4.23
3 Cloreto 5.19 56.54 5782 473.1
4 Nitrito 6.00 0.27 2252 0.6
5 Nitrato 8.09 27.73 3882 94.9
7 Fosfato 12.06 1.12 4318 1.9
8 Sulfato 13.89 23.95 5827 113.3
4.3.8. Experimento 15 Fluoreto em creme dental
Os cremes dentais so constitudos por diferentes ingredientes:
- gua - 30 a 40%;
- Substncias asspticas so substncias inorgnicas insolveis que intensificam a ao de
limpeza da escovao dental. Elas possuem partculas com tamanho < 15 m. As substncias
asspticas comumente usadas so silicato de alumnio e sdio, Al
2
O
3
, CaCO
3
, CaHPO
4
2H
2
O,
SiO
2
H
2
O;
- Fluoreto aumenta a resistncia do esmalte dos dentes contra o ataque dos cidos originados
por placas bacterianas. Os fluoretos tornam tambm possvel a mineralizao do esmalte dos
dentes (a parte inorgnica do esmalte dos dentes consiste principalmente de fosfato de clcio,
hidroxiapatita, carbonato de clcio, fosfato de magnsio, fluoreto de clcio e cloreto de clcio). Isto
significa que o fluoreto importante na preveno de cries. Os compostos fluorados mais
freqentemente usados so o fluoreto de sdio, monofluorfosfato de sdio e fluoretos de amnio
quaternria, os quais tambm contm ons fluoreto livres. Em alguns pases, o fluoreto
adicionado na gua potvel.
Figura 34 Monofluorfosfato de sdio
- Surfactantes (por exemplo, lauril sulfato de sdio) reduz a tenso da superficial e ajuda a
distribuir homogeneamente o creme dental. Eles aumentam os efeitos de limpeza, particularmente
em locais difceis de se alcanar com a escova dental.
Outros ingredientes de cremes dentais so:
- Umectantes (por exemplo, glicerol, sorbitol, polietilenoglicol) melhoram a estabilidade a baixas
temperaturas e impedem o ressecamento;
- Ligantes e espessantes (por exemplo, carboximetilcelulose de sdio) impedem a separao
em fases lquida e slida;
- Edulcorantes (por exemplo, sacarina sdica) melhora o sabor do creme dental;
- Conservantes (por exemplo, cido 4-hidroxibenzico) so usados para proteger o creme dental
contra a decomposio bacteriana;
- Substncias aromticas so adicionadas para aumentar tanto a aceitao do creme dental
como tambm a sensao de higiene. Estes incluem leo de hortel, mentol, leo de semente de
anis, leo de eucalipto, leos aromticos, leos ctricos;
A anlise de creme dental por cromatografia de ons determina o fluoreto proveniente de fluoreto de
sdio juntamente com o monofluorfosfato de sdio.
Observaes
O citrato elui da coluna Metrosep Anion Dual 1 (3 x 150 mm) s aps aprox. 90 min.
A fim de checar se o citrato est presente no creme dental, o Experimento 15b usa o cartucho
(6.1006.030) da pr-coluna Metrosep Anion Dual 1 ao invs da coluna de separao Metrosep Anion
Dual 1.
- Controle de qualidade;
- Preparao da amostra.
Experimento 15a Creme dental
Eluente NaCO
3
a 1,8 mmol/L / Na
2
HCO
3
Amostra Creme dental
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 5,5 MPa
Loop 20 L
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Preparao da amostra
Dissolver 1 g de creme dental em 20 mL de gua ultrapura e, ento, filtrar esta soluo em
membrana com poros de 0,45 m.
Cromatograma 44 Padro para anlise de creme dental
Tabela 65 Componentes Experimento 15a - Padro
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.91 2.50 2714 684.38
2 Cloreto 5.27 0.50 5447 85.02
3 Nitrato 8.25 0.01 4889 1.05
4 Sulfato 13.91 5.04 5456 689.44
5 Sacarina 30.63 0.25 2044 5.84
Cromatograma 45 Creme dental (diluio 1:20)
Tabela 66 Componentes Experimento 15
Pico Componente t
R
o
1 Fluoreto 3.9 76.38 2063 1022.00
2 n.d. 4.36 2.93
3 Cloreto 5.25 6.18 5066 51.25
4 Nitrato 8.22 0.70 4890 2.77
5 Sulfato 13.95 155.16 4545 1115.672
6 Sacarina 29.70 183.92 2262 116.15

4.3.9. Experimento 16 nions em acar refinado branco e mascavo
Os acares so compostos orgnicos com vrios grupos hidroxilas. Usualmente, o termo acar se
refere sacarose (dissacardeo).
Figura 35 Estrutura da sacarose (dissacardeo).
Na produo de acar a partir de beterraba, estas so inicialmente lavadas e repicadas, ento,
extradas com gua chamadas unidades de difuso em contra-fluxo. Os constituintes solveis, por
exemplo, acar, sais, cidos, protenas e pectinas, so dissolvidos. A maioria dos constituintes que
no so acares precipitada com a adio de cal viva (CaO). O dixido de carbono (CO
2
) , ento,
usado para precipitar o excesso de hidrxido de clcio como CaCO
3
. Aps a filtrao, a soluo de
acar concentrada em evaporadores multi-estgios para formar um xarope, filtrado novamente
e concentrado, posteriormente, at que o acar se separe como uma massa branca. O acar
separado em centrfugas e, aps a purificao (recristalizao), obtm-se o acar cristal branco com
uma pureza de 99,95%. O lquido da centrfuga no ltimo estgio corresponde ao xarope de cor
marrom melao.
O acar mascavo purificado com menor intensidade e pode ser colorido pela adio de melao.
Alm de contaminantes orgnicos, contm ons de metais alcalinos e alcalino-terrosos, bem como
nions; tambm tem um sabor diferente em relao ao acar cristal branco.
Os contaminantes orgnicos podem ser separados com uma coluna RP (Fase Reversa) antes que os
nions sejam determinados.
- Controle do processo;
- Controle de alimentos contendo grande quantidade de acar, por exemplo, o mel.
Eluente NaCO
3
a 1,0 mmol/L / Na
2
HCO
3
Amostra a) Acar branco
b) Acar mascavo
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 4,4 MPa
Loop 20 L
2
SO
4
e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Preparao da amostra
Dissolver o acar em gua ultrapura (diluio 1:10) e filtrar em membrana com poros de 0,45 m.
Experimento 16a Acar branco
Cromatograma 46 Soluo padro para a anlise de acar branco e mascavo
Tabela 68 Componentes Experimentos 16a e 16b Soluo padro
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.86 10 7341 77.26
2 Nitrato 7.72 0.5 4531 2.16
3 Fosfato 16.95 10 3035 18.58
4 Malato 18.75 5 5150 5.88
5 Sulfato 20.32 1 6114 5.31
6 Oxalato 21.62 1 6330 2.75
Experimento 16a Acar branco
Cromatograma 47 Anlise de acar branco (diluio 1:10).
Tabela 69 Componentes Experimento 16a Acar branco
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.93 8.83 6484 7.27
2 Nitrato 7.84 1.37 4802 0.64
3 n.d. 8.84
4 Malato 19.13 0.11 3819 0.38
5 Sulfato 20.64 2.18 4595 1.39
6 Oxalato 22.01 2.57 5163 0.54
Experimento 16b Acar mascavo
Cromatograma 48 Anlise de acar mascavo (diluio 1:10)
Tabela 70 Componentes Experimento 16b Acar mascavo
Pico Componente t
R
o
1 Cloreto 5.81 232.60 7502 209.60
2 Nitrato 7.66 1.58 983 0.74
3 n.d. 12.75
4 Fosfato 16.61 16.49 4952 3.09
5 Malato 18.54 30.35 5389 3.56
6 Sulfato 20.38 200.92 5843 96.95
7 Oxalato 21.45 10.05 6986 2.82
Observaes
Com o acar mascavo, os contaminantes podem eluir em tempos de reteno retardados; isto pode
interferir com os cromatogramas seguintes se o tempo de corrida for muito curto. por isso que o
acar branco deve ser medido primeiro, e em seguida, o mascavo.
4.3.10. Experimento 17 Contaminantes em perxido de hidrognio
O perxido de hidrognio puro (H
2
O
2
) se funde a 0,4C e entra em ebulio a 150C. O perxido de
hidrognio puro s pode ser preparado por cristalizao fracionada sob condies restritas de
segurana. O H
2
O
2
comercial est disponvel como uma soluo aquosa com concentraes de 35,
50, 60 ou 70%. Estas solues so purificadas atravs de trocadores inicos ou por destilao. A
decomposio fortemente exotrmica de H
2
O
2
em H
2
O e O
2
no ocorre espontaneamente, porm
metais pesados agem como catalisadores.
2 H
2
O
2
===> 2 H
2
O + O
2
+ 196.2 kJ
ons de metais pesados so ligados pela adio de estabilizadores tais como polifosfatos, EDTA,
estanato etc. Isto inibe a decomposio. A propriedade caracterstica do H
2
O
2
seu efeito oxidante.
O potencial padro (E
0
) +1,8 V em pH = 0 e +0,78 V em pH = 14.
O perxido de hidrognio um dos produtos mais importantes no setor de qumica bsica com uma
produo anual de 2,7 milhes de toneladas. produzido industrialmente pela converso de
hidroquinona com O
2
atmosfrico. Isto produz o correspondente antraquinona e H
2
O
2
. A antraquinona
reduzida novamente a hidroquinona por hidrognio natural e um catalisador de paldio, retornando
ao sistema.
Um dos processos que mais utiliza o H
2
O
2
o alvejamento de papel e celulose. Em muitos pases,
alvejantes clorados (Cl
2
ou ClO
2
), com os quais formam subprodutos organo-clorados dificilmente
biodegradveis no efluente, tm sido parcial ou totalmente substitudos por outros mtodos. Isto
significa que o H
2
O
2
tem se tornado muito importante.
Outras reas de aplicao so:
- Remoo de ferro e mangans de gua potvel;
- Descontaminao de efluentes contendo cianetos (CN
CNO
), por exemplo, efluente de

banhos galvnicos, pela ao do H
2
O
2
puro ou pela mistura H
2
O
2
/H
2
SO
4
;
- A combinao de H
2
O
2
e radiao UV prov radicais OH (radicais hidroxilas), os quais so
oxidantes extremamente fortes (E
0
= +2.8 V). Estes so de interesse para a purificao de
tipos especiais de efluente;
- O desenvolvimento de um mtodo muito promissor para a produo de xido de propileno a
partir de propeno e H
2
O
2
(catalisador de titnio), ao invs do mtodo da cloridrina que gera
poluentes;
- Entre os produtos secundrios de H
2
O
2
, o perborato de sdio e o percarbonato de sdio so
os mais importantes; estes so usados como alvejantes em sabo em p;
- H
2
O
2
usado na indstria eletrnica para limpar camadas de silcio e circuitos impressos.
A determinao de contaminantes em H
2
O
2
de grande importncia, principalmente na indstria
eletrnica mencionada acima. Mesmo em menor quantidade de ons no identificados (ng/L ou ppt)
diminui significantemente o rendimento das camadas como, por exemplo, o fosfato e o nitrato causam
n-desarranjos cristalinos no cristal de silcio.
Em concentraes elevadas, o perxido de hidrognio afeta tanto a coluna de separao como o
equilbrio de carbonato do eluente (vide Cromatograma 49). por isso que a eliminao de matriz
(vide captulo 4.3.2) aplicada na anlise de traos com as seguintes vantagens: Primeiro, as
solues concentradas podem ser analisadas sem diluio; segundo, volumes maiores de amostra
podem ser usados (pr-concentrao).
- Controle do processo;
- Pr-concentrao da amostra e eliminao da matriz;
- Seletividade de colunas diferentes.
Eluente Na
2
CO
3
3
Amostra Perxido de hidrognio 30%, ultrapuro, diluio 1:30
Sistema asupp.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 6,6 MPa
Coluna de
pr-concentrao
6.1006.300 Metrosep Anion
Introduo da amostra 2 mL da amostra em coluna de pr-concentrao; para eliminao da matriz,
lavar com 4 mL de gua ultrapura
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Introduo da amostra
Lavar com muito cuidado e por vrias vezes com gua ultrapura. Passar 2 mL da amostra atravs da
coluna de pr-concentrao e lavar com 4 mL de gua ultrapura.
Cromatograma 49 Soluo padro para a determinao de nions em perxido de hidrognio.
Tabela 72 Componentes Experimentos 17a e 17b Soluo padro
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
2 Fosfato 13.58 200 4989 24.09
3 Sulfato 15.85 20 5694 7.11
4 Oxalato 16.97 10 4755 2.45
Experimento 17a Anlise de perxido de hidrognio sem eliminao da matriz
Cromatograma 50 Anlise de perxido de hidrognio (1%) sem eliminao da matriz.
Experimento 17b Anlise de perxido de hidrognio com eliminao da matriz
Cromatograma 51 Anlise de perxido de hidrognio (1%) com eliminao da matriz.
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
2 Fosfato 13.60 112.2 4253 12.69
4 Sulfato 15.91 17.2 3767 6.48
5 Oxalato 17.01 5.6 3724 1.39
Observaes
Lavar com muito cuidado e por vrias vezes os recipientes, seringas e o sistema. Usar recipientes
plsticos. culos de proteo devem ser usados! O pico 3 no foi avaliado.
Experimento 17c Anlise de perxido de hidrognio com eliminao da matriz em uma
coluna de alta eficincia
Coluna 6.1006.530 Metrosep A Supp 5 (4 x 250 mm)
Eluente NaHCO
3
a 1 mmol/L / Na
2
CO
3
a 3,2 mmol/L
Amostra Perxido de hidrognio 30%, ultrapuro
Mtodo exp_17c_s.mtw
Sistema asupp5.smt
Fluxo 1,0 mL/min
Presso 11 MPa
Coluna de
pr-concentrao
6.1006.300 Metrosep Anion
Introduo da amostra 1 mL da amostra na coluna de pr-concentrao; para eliminao da matriz,
lavar com 1 mL de gua ultrapura
2
SO
4
regenerao e lavagem
Polaridade +
Preparao do eluente
Dissolver 339 mg de carbonato de sdio (anidro) e 84 mg de hidrogenocarbonato de sdio em 1 L de
gua ultrapura.
Introduo da amostra
Lavar o sistema com muito cuidado com gua ultrapura, ento, passar 1 mL da amostra atravs da
coluna de pr-concentrao e lavar com 1 mL de gua ultrapura.
Cromatograma 52 Anlise de perxido de hidrognio (30%) com eliminao da matriz em coluna
Metrosep A Supp 5.
Pico Componente t
R
[min] Conc. [g/L] N
o
3 Acetato 6,3 6,8 2850 219
4 Formiato 6,7 0,77 8740 123
6 Cloreto 8,9 0,78 17810 380
7 Pico do sistema 13,0
8 Nitrato 16,4 0,15 19100 37
10 Sulfato 23,3 0,35 16640 86
13 Oxalato 27,0 0,04 12100 7,7
Observaes
Os picos 1, 2, 5, 9, 10, 11 e 12 no foram avaliados.
4.4. Experimentos para a determinao de ctions
4.4.1. Experimento 18 Metais alcalinos e metais alcalino-terrosos em gua potvel
Alm dos gases dissolvidos O
2
, N
2
e CO
2
, a gua na natureza tambm contm sais que so retirados
principalmente do solo e rochas que esta gua penetra. Outros tipos de ingredientes da gua so os
compostos orgnicos polares que se originam, por exemplo, das camadas de hmus no solo. A
contaminao por efluente tambm uma possvel fonte de vrios sais e compostos orgnicos. Os
sais mais importantes so os cloretos, sulfatos e hidrogenocarbonatos de sdio, clcio e magnsio.
Um parmetro importante da gua potvel, tanto para o seu uso como um alimento, assim como para
o uso em processos de lavagem ou processos industriais a chamada dureza da gua.
A dureza total da gua entendida como sendo a soma das concentraes molares (mmol/L) dos
ons clcio e magnsio. A dureza que pode ser removida pelo aquecimento conhecida como dureza
carbonato (anteriormente, dureza temporria). A dureza residual causada pelos ons sulfato e
cloreto, cujos sais de Ca e Mg no podem ser precipitados pelo aquecimento.
Nos sabes clssicos sais sdicos de cidos graxos os ons clcio e magnsio formam
compostos insolveis dos respectivos ons. Os dois so ineficazes em lavagem e so tambm
depositados nos tecidos como metal cinzento. Modernos agentes para lavagem contm alquil-
sulfatos que no formam compostos insolveis de clcio e magnsio. As zelitas, que so tambm
adicionadas a estes agentes, funcionam como trocadores inicos e ligam os ons Ca
2+
e Mg
2+
. Isto
efetivamente impede a precipitao de CaCO
3
insolvel e de carbonato bsico de magnsio sob
aquecimento.
Normas sobre qualidade da gua potvel, as quais so implementaes das diretivas da CE para
gua potvel (80/778/EEC), estipulam os seguintes valores para ctions:
NH
4
+
0.5 mg/L
Na
+
150 mg/L
K
+
12 mg/L
Mg
2+
50 mg/L
Ca
2+
400 mg/L
Uma ingesto elevada de ons sdio pelos seres humanos causa presso alta, entre outras
alteraes. A necessidade diria para uma pessoa de 1 g de Na
+
, atualmente verificamos que o
consumo, em mdia, maior (de 3 a 7g).
Em todas as anlises realizadas, as amostras foram acidificadas com cido ntrico (pH 2,5 a 3,5),
caso contrrio, alguns resultados podero no se reproduzir, para ctions bivalentes.
- Controle do alimento Nmero 1;
- Checando as informaes contidas nas garrafas de gua mineral;
- Por que necessrio acidificar as amostras?
Eluente cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
Amostra gua potvel, acidificada a pH = 2,5 a 3,5 (+ aprox. 100 L de HNO
3
a 2 mol/L
para 100 mL da amostra)
gua mineral, acidificada a pH = 2,5 a 3,5 (+ aprox. 100 L de HNO
3
a 2
mol/L para 100 mL da amostra)
Mtodo exp_18_c.mtw
Sistema ction.smt
Fluxo 1 mL/min
Presso 7 MPa
Loop 10 L
Polaridade
Preparao do eluente
gua ultrapura e completar para 1 L com gua ultrapura.
Cromatograma 53 Soluo padro para determinao de ctions em gua potvel
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,8 0,5 4200 1,5
2 Potssio 6,5 0,2 3090 0,9
3 Clcio 8,4 20 1960 66
4 Magnsio 11,0 5 2700 34
Cromatograma 54 gua de torneira (Herisau, Sua, diluio 1:10).
Tabela 79. Componentes Experimento 18 gua de torneira
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,8 5 4840 1,4
2 Clcio 8,7 85 2640 29
3 Magnsio 11,2 19 3520 13
Cromatograma 55 gua mineral (diluio 1:10)
Tabela 79 Componentes Experimento 18 gua mineral
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,7 4,3 4190 1,3
2 Potssio 6,4 0,8 6350 0,3
3 Clcio 8,3 344 1520 113
4 Magnsio 10,9 62 2550 43
Observaes
Todas as solues devem ser mantidas em recipientes de plstico. Para uma correta determinao
do sdio, qualquer contato com vidro deve ser evitado. Os valores do pH da soluo padro e da
amostra devem estar entre 2,5 e 3,5.
4.4.2. Experimento 19 Determinao de metais de transio
Agentes complexantes so adicionados fase mvel a fim de separar ons de metais de transio.
Eles reduzem a densidade da carga e melhoram a seletividade da separao, a qual relativamente
baixa para ons de metais de transio com a mesma carga. Alm do equilbrio entre a resina
trocadora e o on analito, o agente complexante que foi adicionado promover um equilbrio adicional,
isto , entre o on metlico e este complexante. Este ltimo equilbrio tambm influenciado pelo pH
da soluo, se vrias etapas da dissociao do agente complexante forem possveis ou se os ons
metlicos formarem hidrxi-complexos.
Os cidos orgnicos fracos so freqentemente usados como agentes complexantes, por exemplo,
cido tartrico, cido ctrico, cido oxlico, cido 2,6-piridinodicarboxlico (cido dipicolnico vide
captulo 4.2.6 Experimento 6 Alterao da seletividade pelo uso de agentes complexantes). O
nmero de ligantes L ao redor do on metlico central (Me) pode variar, por exemplo, MeL, MeL
2
,
MeL
3
. A carga resultante pode tambm diferir. Dependendo da carga do on metlico, dos ligantes e
sua quantidade, podem estar presentes complexos aninicos, neutros ou catinicos. Isto significa
que, dependendo de suas cargas, os complexos podem ser separados em trocadores catinicos ou
trocadores aninicos. Teoricamente possvel o uso de trocadores contendo os dois grupos de
trocadores, catinicos e aninicos.
A separao pode ser influenciada e otimizada pela variao do pH e agentes complexantes dois
ou mais agentes complexantes diferentes podem ser adicionados fase mvel. Em parte, as
influncias so contrrias e difceis de serem previstas. Algumas informaes gerais so dadas
abaixo:
- Estabilidades diferentes (constantes de formao do complexo) influenciam na separao.
- A adio de um solvente orgnico, por exemplo, a acetona, ao eluente tambm influencia na
separao. Os ons lipoflicos eluem mais rapidamente aps a adio.
- Em cromatografia de troca catinica, a etilenodiamina tem se mostrado um bom eluente. Sob
condies normais, ele est presente como um ction carregando dois prtons.
- Um aumento no pH resulta em uma reduo do tempo de reteno pela reduo da carga total.
- Um aumento na concentrao de ligante na fase mvel, alm de remover o equilbrio do
complexante, tambm aumenta a concentrao do contra-on H
+
ou Na
+
e acelera a remoo do
complexo dos stios de troca negativamente carregados, ou seja, o tempo de analise reduzido.
A deteco dos complexos pode ser realizada atravs da condutividade ou fotometricamente
(derivatizao ps-coluna)
Para deteco de condutividade, apenas a deteco sem supresso qumica pode ser usada, uma
vez que hidrxidos insolveis seriam formados pela reao supressora e os nicos nions eluentes
disponveis seriam carbonato ou hidrxido.
A deteco fotomtrica requer derivatizao ps-coluna, na qual, um agente complexante
cromforo adicional remove o complexo com o eluente (por exemplo, cido tartrico, cido oxlico
etc.). Este complexo recentemente formado, que absorve radiao UV ou VIS, detectado caso a
mxima absoro dos ligantes livres no ultrapasse o valor do mximo do complexo. Assim como,
para a maioria dos corantes complexantes, a mxima absoro dos complexos de metais de
transio individuais ocorre em regies de diferentes comprimentos de onda, o que acarreta limites
de deteco de metais individuais bem diferentes.
- Influncia do eluente na seletividade;
- Complexantes de ons de metais de transio;
- Agentes complexantes para a deteco fotomtrica;
- Fotometria.
Coluna 6.1007.000 Nucleosil 5SA (4 x 125 mm)
Eluente a) cido tartrico a 4 mmol/L, cido ctrico a 0,5 mmol/L, etilenodiamina a 3
mmol/L, 5% acetona
b) cido oxlico a 3,5 mmol/L, 5% acetona, pH = 4 (aprox. 120 L de
etilenodiamina)
Amostra gua de torneira
Mtodo exp_19_c.mtw
Sistema nucleosil.smt
Fluxo 1,5 mL/min
Presso 13 MPa
b) 13 min
Loop 100 L
Polaridade
Experimento 19a Determinao de metais de transio com um eluente contendo cido
tartrico, cido ctrico, etilenodiamina e acetona
Preparao do eluente
Dissolver 600 mg de cido tartrico e 105 mg de cido ctrico em gua ultrapura. Adicionar 200 L de
etilenodiamina e 50 mL de acetona e completar para 1L com gua ultrapura.
Cromatograma 56 Soluo padro 1 para determinao de metais de transio.
Tabela 81 Componentes Experimento 19a Soluo padro 1
Pico Componente t
R
o
1 Nquel 3,4 5 1020 40
2 Zinco 4,4 5 5640 36
3 Cobalto 5,6 5 4370 34
4 Ferro(II) 8,1 10 6150 30
5 Clcio 9,8 5 6340 29
6 Magnsio 10,8 5 6390 39
Cromatograma 57 Soluo padro 2 para determinao de metais de transio
Tabela 82 Componentes Experimento 19a Soluo padro 2
Pico Componente t
R
o
1 Chumbo 2,9 5 2680 8.6
2 Nquel 3,4 5 930 43
3 Zinco 4,3 5 5510 37
4 Cobalto 5,6 5 4310 34
5 Cdmio 8,6 5 6600 15
6 Mangans 9,9 10 6270 45
Cromatograma 58 Anlise de gua de torneira.
Tabela 83 Componentes Experimento 19a gua de torneira
Pico Componente t
R
o
1 Zinco 4.2 1.2 6360 0.9
2 Clcio 9.8 89 5750 53
3 Magnsio 10.6 19 7460 15
Experimento 19b Determinao de metais de transio com um eluente contendo cido
oxlico, etilenodiamina e acetona
Preparao do eluente
Dissolver 315 mg de cido oxlico em gua ultrapura, adicionar 50 mL de acetona e completar para 1
L com gua ultrapura. Ajustar para pH = 4 com a soluo de etilenodiamina a 3 mmol/L
(aproximadamente 120 L).
Cromatograma 59 Soluo padro para determinao de metais de transio
Tabela 84 Componentes Experimento 19b Padro
Pico Componente t
R
o
1 Ferro 2,2 10 2110 50
2 Mangans 4,0 10 1830 110
3 Magnsio 7,5 5 3110 98
4 Clcio 12,3 5 6000 45
Cromatograma 60 Anlise de gua de torneira
Tabela 85 Componentes Experimento 19b gua de torneira
Pico Componente t
R
o
1 Magnsio 7.3 21 4690 41
2 Clcio 12.4 91 4780 83
Observaes
O clcio e o mangans coeluem se o eluente a for usado. Com o eluente b, o clcio e o mangans
so separados; o nquel, o zinco e o cobalto esto fortemente complexados e eluem no pico da gua.
4.4.3. Experimento 20 Contaminantes em slica gel determinao de ons clcio e magnsio
A slica gel produzida, por exemplo, pela hidrlise de silicato de sdio e pela remoo quase
completa da gua; ela tem a seguinte estrutura:
Si
Si
Si Si
Si
O
O
O
O
O
O
O
OH
OH
OH
Figura 36 Estrutura da slica gel
Alm de seu uso como um agente tcnico de absoro, a slica gel usada tanto em cromatografia a
gs como em cromatografia lquida de alta presso.
Em cromatografia gasosa, originalmente, apenas colunas empacotadas eram usadas estas ainda
so usadas atualmente, em uma menor proporo. Uma fase lquida, por exemplo, leo de silicone,
aplicada para um arraste particulado como a slica gel. O nmero de pratos tericos de tais colunas
baixo em comparao ao das colunas capilares usadas atualmente.
Em cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), a slica gel usada como uma fase
estacionria ou material de arraste para adsoro, fase reversa (RP), fase normal e cromatografia de
ons. Para algumas destas aplicaes, a superfcie da slica gel deve ser modificada com grupos
funcionais (por exemplo, C18 ou grupos trocadores inicos).
Em cromatografia de adsoro, a slica gel tambm usada como fase estacionria ou juntamente
com Al2O3. A separao cromatogrfica baseada em ligaes dipolo, dipolo-dipolo, ligaes de
hidrognio e ligaes t-complexos. A cromatografia de adsoro usada para a separao de
substncias no polares que so difceis de dissolver em gua.
Em cromatografia fase reversa, os grupos silanis livres da slica gel so hidrofobizados pelas
ligaes qumicas de longas cadeias alquilas (por exemplo, grupos octila ou octadecila):
Figura 37 Reao de slica gel com clorosilano (R = C
8
H
17
to C
18
H
37
).
Nesta converso, os grupos silano residuais permanecem; estes podem adsorver compostos polares
e originar picos com caudas. Estes grupos silano residuais podem ser desativados por
trimetilclorosilano.
Em cromatografia de fase normal, os resduos polares so quimicamente ligados aos grupos
silanos, por exemplo:
(CH
2
)
n
C N ou (CH
2
)
n
NH
2
Uma fase mvel menos polar ou no-polar usada com esta fase estacionria polar para separao
cromatogrfica. Na cromatografia de fase reversa, usada em quase 75% de todas as aplicaes de
HPLC, as polaridades so reversas e uma fase estacionria no-polar usada com a fase mvel
polar. Isto significa que o nome fase reversa tem uma base histrica, visto que este mtodo foi
desenvolvido posteriormente.
Em cromatografia de ons, a slica gel, na qual foram ligados grupos de cidos sulfnicos, usada
como um trocador catinico para a anlise de ons alcalinos.
A contaminao da slica gel por ons metlicos importante em cromatografia, uma vez que podem
causar interaes no especficas ou valores nulos. Um trocador catinico fortemente cido usado
para a determinao destes contaminantes; ctions monovalentes eluem no volume morto e s os
ctions bivalentes so separados. Fe(III) deve ser reduzido a Fe(II) com cido ascrbico antes da
anlise.
- Controle de qualidade;
- Experimento adicional: adio de padro ao extrato com Fe(III); determinao com e sem a
adio de cido ascrbico (vitamina C);
- Colunas de separao para CLAE baseadas em slica gel.
Coluna 6.1007.000 Nucleosil 5SA (4 x 125 mm)
Eluente cido tartrico a 4 mmol/L, cido ctrico a 0,5 mmol/L, etilenodiamina a 3
mmol/L, 5% acetona
Amostra Slica gel (5% soluo)
Mtodo exp_20_c.mtw
Sistema nucleosil.smt
Fluxo 1,5 mL/min
Presso 13 MPa
Loop 100 L
Polaridade
Preparao do eluente
Dissolver 600 mg de cido tartrico e 105 mg de cido ctrico em gua ultrapura. Adicionar 200 L de
etilenodiamina e 50 mL de acetona e completar para 1 L com gua ultrapura.
Cromatograma 61 Soluo padro para a determinao de ctions em slica gel.
Tabela 87 Componentes Experimento 20 Soluo padro
Pico Componente t
R
o
1 Clcio 9,6 0,5 6990 3,1
2 Magnsio 10,5 0,1 7260 0,7
Cromatograma 62 Determinao de ctions em slica gel.
Tabela 88 Componentes Experimento 20 Slica gel
Pico Componente t
R
o
Ferro 8,1 n.d.
1 Clcio 9,7 9,4 6850 2,9
2 Magnsio 10,6 1,4 10100 0,4
H N
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
OH
OH
HO CH
2
CH
2
N
CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
OH
OH
H
2
N CH
2
CH
2
OH
4.4.4. Experimento 21 Cosmticos e proteo contra corroso: determinao de
etanolaminas e metais alcalinos
As trs etanolaminas seguintes, cujos nomes sistemticos so aminoetanol, iminodietanol e
nitrilotrietanol, so produzidas pela reao de amnia com xido de etileno.
As trs substncias so usadas para remover CO
2
e H
2
S de misturas de gases, por exemplo, para a
remoo de dixido de carbono de gs sntese e na sntese de amnia, bem como para a remoo
de sulfeto de hidrognio em gases de refinarias.
NR
3
+ H
2
O + CO
2 HNR
3
+
+ HCO
3
-
T
Em temperaturas maiores, o CO
2
novamente liberado e a etanolamina NR
3
retorna ao processo de
absoro.
2NR
3
+ H
2
S
T
(HNR
3
)
2
S
O H
2
S novamente liberado em elevada temperatura oxidado para enxofre lquido em unidades de
Claus; esta , ento, convertida para cido sulfrico via SO
2
e SO
3
.
A monoetanolamina (MAK = concentrao mxima permitida em ambiente de trabalho = 3 ppm)
usada em surfactantes como um ster de cido graxo. A dietanolamina usada em produtos de
proteo de mveis e pisos, graxas de sapatos e lubrificantes.
A trietanolamina empregada em sabes com cidos graxos, por exemplo, com o cido esterico
C
17
H
35
COOH. Estes so facilmente solveis em gua e em leos minerais e so, portanto, usados
como emulsificantes. Eles podem tambm estar contidos em preparaes cosmticas (por exemplo,
espuma de barbear).
A monoetanolamina usada como inibidor de corroso em usinas hidreltricas, uma vez que ele
mantm um pH fracamente alcalino e arrasta o excesso de ons H
+
.
Para serem determinados por cromatografia de ons, as etanolaminas so protonadas pela adio de
cido e, ento, podem ser determinados na forma de seus derivados de amnio.
- Determinao de ctions inorgnicos e orgnicos;
- Mudana na seletividade pela adio de agentes complexantes;
- Determinao de aminas por cromatografia de ons.
Figura 38. Aminoetanol
Figura 39. Iminodietanol Figura 40. Nitrilotrietanol
Eluente a) cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
b) cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,5 mmol/L Condutividade
aprox. 570 S/cm
Amostra Etanolamina, trietanolamina + padres catinicos
Mtodo exp_21_c.mtw
Sistema ction.smt
Fluxo 1 mL/min
Presso 6 MPa
b) 14 min
Loop 10 L
Polaridade
Preparao do eluente
a) Dissolver, sob aquecimento, 600 mg de cido tartrico e 125 mg de cido dipicolnico em 100
mL de gua ultrapura, ento, completar para 1 L com gua ultrapura.
b) Dissolver, sob aquecimento, 600 mg de cido tartrico e 84 mg de cido dipicolnico em 100
mL de gua ultrapura, ento, completar para 1 L com gua ultrapura.
Cromatograma 63 Padro 1 Eluente a
Tabela 90 Componentes Experimento 21 Padro 1 (Eluente a)
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,8 2 4520 6,8
2 Amnio 4,3 2 4340 6,8
3 Monoetanolamina 4,9 7 4120 10,8
4 Potssio 6,4 5 3070 7,9
5 Trietanolamina 9,0 20 2230 6,9
Cromatograma 64 Padro 2 Eluente a.
Tabela 91 Componentes Experimento 21 Padro 2 (eluente a)
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,7 2 4500 7,2
2 Amnio 4,3 2 4190 7,0
4 Potssio 6,4 5 2930 8,6
5 Clcio + trietanolamina 8,7 5 + 20 2070 24
6 Magnsio 11,0 5 2970 32
Cromatograma 65 Padro 2 Eluente b.
Tabela 92 Componentes Experimento 21 Padro 2 (eluente b)
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,9 2 4700 7,2
2 Amnio 4,5 2 4110 7,0
4 Potssio 6,6 5 2920 8,4
5 Trietanolamina 9,3 20 2400 7,3
6 Clcio 10,8 5 3240 16
7 Magnsio 12,2 5 2820 32
Observaes
Se o eluente a for usado, ento o clcio e a monoetanolamina coeluem.
Todas as solues devem ser mantidas em recipientes plsticos para uma correta determinao do
sdio, qualquer contato com vidro deve ser evitado.
4.4.5. Experimento 22 Metais alcalinos e metais alcalino-terrosos em vinho
As substncias minerais presentes no suco de uva so, principalmente, fosfatos de clcio, magnsio
e potssio. As concentraes destes compostos variam entre 3 e 5 g/L. O contedo mineral, tambm
conhecido como cinzas do vinho, menor do que o do suco, uma vez que parte dos minerais
consumida pelas leveduras durante seu metabolismo. O contedo mineral tambm reduzido pela
separao de tartaratos. Isto significa que o vinho contm s 1,8 a 2,5 g/L de cinzas. Importantes
constituintes catinicos so dados como xidos, tais como: K
2
O (aprox. 40%), MgO (aprox. 6%), CaO
(aprox. 4%) e Na
2
O (aprox. 2%).
(vide Experimento 12)
- Anlise alimentcia;
- Anlise do processo checando a precipitao do tartarato.
Eluente cido tartrico a 4 mmol/L / cido dipicolnico a 0,75 mmol/L
Amostra Vinho tinto (Pinot Noir, Sua), Vinho branco (Fechy, Sua)
Mtodo exp_22_c.mtw
Sistema ction.smt
Fluxo 1 mL/min
Presso 6 MPa
Loop 10 L
Polaridade
Preparao do eluente
gua ultrapura, ento, completar o volume para 1 L com gua ultrapura.
Preparao da amostra
Filtrar e diluir a amostra (1:10).
Cromatograma 66 Soluo padro para determinao de ctions em vinho
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,7 1 4360 3,5
2 Potssio 5,9 100 1480 180
3 Clcio 8,6 5 2950 16
4 Magnsio 10,8 10 2150 66
Observaes
Todas as solues devem ser mantidas em recipientes plsticos. Para uma correta determinao do
sdio, qualquer contato com vidro deve ser evitado. O pH da soluo padro e da amostra deve estar
entre 2,5 e 3,5.
Cromatograma 67 Determinao de ctions em vinho branco (diluio 1:10)
Tabela 95 Componentes Experimento 22 Vinho branco
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,7 24 4220 8,4
5 Potssio 6,0 590 1860 106
6 Clcio 8,6 72 2920 23
8 Magnsio 11,0 59 2880 39
Observaes
Os picos 2, 3, 4 e 7 no foram avaliados.
Cromatograma 68 Determinao de ctions em vinho tinto (diluio 1:10).
Tabela 96 Componentes Experimento 22 Vinho tinto
Pico Componente t
R
o
1 Sdio 3,7 10 2000 3,6
6 Potssio 5,8 1380 1300 248
8 Clcio 8,6 50 3030 16
10 Magnsio 10,8 80 2520 53
Observaes
Os picos 2, 3, 4, 5, 7, e 9 no foram avaliados.
5. Literatura citada
[1] H. Small, T. S. Stevens, W. C. Bauman, Anal. Chem. 47 (1975) 1801.
[2] J. Weiss, Ionenchromatographie, 2. Aufl. (1991), Verlag Chemie, Weinheim.
[3] J. M. Mermet, M. Otto, H. M. Widmer, Analytical Chemistry, 1. Aufl. (1998), Wiley-VCH,
Weinheim, New York.
[4] P. R. Haddad, P. E. Jackson, Ion Chromatography Principles and Applications, 1
st
ed.
(1990), J. Chromatogr. Library Vol. 46, Elsevier Verlag, Amsterdam.
[5] J. S. Fritz, D. T. Gjerde, Ion Chromatography, 3
rd
ed., Wiley-VCH, Weinheim, 2000.
[6] G. Schwedt, Chromatographische Methoden in der Anorganischen Analytik, 1. Aufl. (1980),
Dr. Alfred Hthig Verlag, Heidelberg.
[7] International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC), Pure & Appl. Chem. 65 (1993),
819.
[8] H. Engelhardt, L. Rohrschneider, Deutsche chromatograpische Grundbegriffe zur IUPAC-
Nomenklatur (1998), Universitt Saarbrcken.
[9] G. Schwedt, Chromatographische Trennmethoden, 3. Aufl. (1994), Thieme Verlag, Stuttgart.
[10] V. R. Meyer, Praxis der Hochleistungsflssigchromatographie, 5. Aufl. (1988), Diesterweg
Verlag, Frankfurt/Main.
[11] A. J. P Martin, R. L. M. Synge, Biochem. J. 35 (1941) 1358.
[12] B. A. Bindlingmeyer, F. V. Warren, Anal. Chem. 56 (1984) 1583.
[13] J. P. Foley, J. G. Dorsey, Anal. Chem. 55 (1983) 730.
[14] E. Grushka, L. R. Snyder, J. H. Knox, J. Chrom. Sci. 13 (1975) 25.
[15] E. Katz, K. L. Ogan, R. P. W. Scott, J. Chromatogr. A 270 (1983) 51.
[16] J. J. van Deemter, F. J. Zuiderweg, A. J. Klinkenberg, Chem. Eng. Sci. 5 (1956) 271.
[17] J. H. Knox, H. P. Scott, J. Chromatogr. A 282 (1983) 297.
[18] A. Berthold, F. Chartier, J. L. Rocca, J. Chromatogr. A 469 (1989) 53.
[19] G. Wedler, Lehrbuch der physikalischen Chemie, 3. Aufl. (1987), Verlag Chemie, Weinheim.
[20] G. Schwedt, Fresenius Z. Anal. Chem. 320 (1985) 423.
[21] M. J. van Os, J. Slania, C. L. de Ligny, W. E. Hammers, J. Agterdendos, Anal. Chim. Acta 144
(1982) 73.
[22] P. R. Haddad, C. E. Cowie, J. Chromatogr. A 303 (1984) 321.
[23] A. Diop, A. Jardy, M. Caude, R. Roset, Analusis 14 (1986) 67.
[24] A. Jardy, M. Caude, A. Diop, C. Curvale, R. Roset, J. Chromatogr. A 439 (1988) 137.
[25] D. R. Jenke, G. K. Pagenkopf, Anal. Chem. 56 (1984) 85 and 88.
[26] T. B. Hoover, Sep. Sci. Tech. 17 (1982) 295.
[27] P. R. Haddad, P. E. Jackson, A. L. Heckenberg, J. Chromatogr. A 346 (1985) 139.
[28] P. Jano, J. Chromatogr. A 789 (1/2) (1997) 3.
[29] P. Jano, P. Aczel, J. Chromatogr. A 749 (1996) 115.
[30] P. Kolla, J. Khler, G. Schomburg, Chromatographia 23 (1987) 465.
[31] C. A. Pohl, J. R. Stillian, P. E. Jackson, J. Chrom. A 789 (1997) 29.
[32] K. Dorfner (Ed.), Ion Exchangers, 4
th
ed. (1991), Walter de Gruyter Verlag, Berlin.
[33] D. T. Gjerde, J. S. Fritz, G. Schmuckler, J. Chromatogr. A 186 (1979) 509.

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Prticas em

Prticas em Cromatografia de ons 13

forem considerados, ento os seguintes equilbrios so formados:

. O modelo de carga efetiva

- a concentrao total das espcies eluentes: C

e a variao da condutividade com a concentrao pode ser determinada

como nion analisado:

pode ser consideravelmente aumentada utilizando-se a seletividade

, a manipulao dos tempos de reteno ou das seletividades pode

, a eluio pode ser acelerada pelo uso de fases

sempre obtida pela soma das condutividades equivalentes de todos

- condutividade equivalente em solues de

. Como a condutividade equivalente A

do ftalato com 38 S*cm

, que estavam originalmente presentes na amostra, a condutividade equivalente

agora medida tambm contra uma baixa condutividade de

menor quando comparado com a do

Nitrato 50 mg/L como NO

Nitrito 0,1 mg/L como NO

Cloreto 250 mg/L

O nitrito capaz de converter a hemoglobina, a colorao vermelha do sangue, em metemoglobina

(definio de cido segundo Lewis).

- pode ser precipitado, por exemplo,

), por exemplo, efluente de

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