Mdulo V
NDICE
Estafilococos, estreptococos, enterococos e outros cocos gram positivos ........................................ 1 Introduo..............................................................................................................................................1 Identificao preliminar ............................................................................................................................1 Identificao de estafilococos ....................................................................................................................3 Identificao dos staphylococcus aureus.....................................................................................................4 Identificao dos estreptococos .................................................................................................................5 2. Neisserias......................................................................................................................................... 9 Introduo..............................................................................................................................................9 Isolamento ........................................................................................................................................... 10 Transporte e semeadura do material........................................................................................................ 11 Bacterioscopia e identificao.................................................................................................................. 11 3. Enterobactrias .............................................................................................................................. 14 introduo ............................................................................................................................................ 14 tipos de testes utilizados para identificao............................................................................................... 15 etapas da identificao de enterobactrias................................................................................................ 18 identificao das enterobactrias de importncia clnica ............................................................................. 19 identificao sorolgica .......................................................................................................................... 27 4. Bastonetes no fermentadores....................................................................................................... 31 Introduo............................................................................................................................................ 31 Semeadura, leitura e interpretao das provas de identificao ................................................................... 31 Procedimentos para a identificao .......................................................................................................... 33 5. Bacilos curvos ou espiralados......................................................................................................... 41 Introduo............................................................................................................................................ 41 Campylobacter ...................................................................................................................................... 42 Vibrios, Aeromonas e Plesiomonas ........................................................................................................... 43 6. Bacilos gram positivos.................................................................................................................... 45 Introduo............................................................................................................................................ 45 Corineformes ........................................................................................................................................ 46 Bacilos gram positivo ............................................................................................................................. 50 Bacilos esporulados aerbios e anaerbios facultativos............................................................................... 52 Actinomicetos ....................................................................................................................................... 54 7. Fastidiosos ..................................................................................................................................... 56 Introduo............................................................................................................................................ 56 Bartonella ............................................................................................................................................. 58 Bordetella ............................................................................................................................................. 59 Brucella ................................................................................................................................................ 60 Francisella tularensis.............................................................................................................................. 61 Haemophylus ........................................................................................................................................ 62 Legionella ............................................................................................................................................. 64 Pasteurella ........................................................................................................................................... 65 Actinobacillus ........................................................................................................................................ 66 Capnocytophaga.................................................................................................................................... 68 Eikenella .............................................................................................................................................. 68 Kingella ................................................................................................................................................ 68 Cardiobacterium hominis ........................................................................................................................ 69 Chromobacterium violaceum ................................................................................................................... 69 Streptobacillus moniliformis .................................................................................................................... 70 8. Bactrias anaerbias estritas ......................................................................................................... 71 Introduo............................................................................................................................................ 71 Coleta de material ................................................................................................................................. 73 Transporte do material........................................................................................................................... 73 Processamento do material ..................................................................................................................... 73 Identificao bacteriana ......................................................................................................................... 74 Provas de sensibilidade a antimicrobianos................................................................................................. 77 9. Interpretao de Resultados e laudos ............................................................................................ 78 Introduo............................................................................................................................................ 78 Laudo para o trato respiratrio superior ................................................................................................... 79 Laudo para escarro ................................................................................................................................ 81 Laudo para secreo endotraqueal, lavado traqueal, e lavado brnquico ...................................................... 81 Laudo para lavado brocoalveolar ou escovado brnquico ............................................................................ 82 Laudo para pleural................................................................................................................................. 84 Laudo para abscesso pulmonar ............................................................................................................... 84 Laudo para ocular.................................................................................................................................. 84 Laudo para lquido cfalo raquidiano (LCR) ............................................................................................... 85 Laudo para fezes ................................................................................................................................... 85 Laudo para pele, abscessos e feridas ....................................................................................................... 86 Laudo para genital................................................................................................................................. 88 Laudo para urina ................................................................................................................................... 89 Laudo para sangue ................................................................................................................................ 92 10. Referncias Bibliogrficas .............................................................................................................. 93 1.
PROVA DA CATALASE
Com a ala bacteriolgica ou com um palito coleta-se o centro de uma colnia suspeita e esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar sobre este esfregao uma gota de gua oxigenada a 3% e observar a formao de bolhas. Para a famlia Microccocacea (estafilococos) a prova geralmente positiva, enquanto que para a famlia Streptococcacea (estreptococos) negativa.
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Ao coletar a colnia, no carregar meio de cultura (gar sangue), que pode acarretar resultados falsopositivos porque o sangue do meio contm catalase. Algumas cepas de enterococos podem dar falsa reao positiva (fazer Gram e ver disposio em cadeias curtas ou aos pares). Identificao simplificada dos cocos Gram positivo de importncia clnica
Gnero Catalase Motilidade NaCl 5% Oxidase Aerbio estrito no + varivel no no no no Ttrade
+ + + + varivel + neg
PYR + neg
2
E. casseliflavus e E. gallinarum so positivos S. pyogenes positivo alguns S. viridans podem ser positivos
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IDENTIFICAO DE ESTAFILOCOCOS O teste mais importante na identificao da famlia Micrococcaceae a prova da catalase, e esta famlia composta de quatro gneros: Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e Staphylococcus. O gnero Staphylococcus apresenta 32 espcies, 14 subnegespcies, sendo que somente 15 espcies so encontradas em amostras humanas, e de uma maneira prtica, os estafilococos so divididos em duas categorias: coagulase positivos e coagulase negativos de acordo com a resposta ao teste da plasmo coagulase. Provas diferenciais dos generos Catalase positivos
Gnero Motilidade NaCl 5% Oxidase Aerbio estrito no + + no Ttrade
+ + + neg
Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase negativa conhecidas, das quais os mais freqentes so: Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais freqente microrganismo encontrado em hemoculturas. Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres jovens. Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia aumentada aos antimicrobianos, e por ser comumente confundido com o S. aureus, pois apresenta hemlise na placa de gar sangue de carneiro.
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IDENTIFICAO DOS STAPHYLOCOCCUS AUREUS A forma mais simples de identifica o Staphylococcus aureus a prova da coagulase que pode ser efetuada em tubo ou em lamina.
Um mtodo alternativo a emulsificao desta mesma colnia suspeita em um 0,5 plasma e incubado da mesma forma. Qualquer cogulo indica uma prova positiva, porm no confundir com precipitados ou floculao. O melhor plasma a ser usado o de coelho com EDTA, no devendo ser usado o plasma humano vindo do banco de sangue.
TESTE DA DNASE
Este teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo DNA, (DNAse test agar) obtido comercialmente. Adicionar ao meio original azul de ortotoluidina na concentrao de 0,1%; o meio adquire uma colorao azul intensa; Incubar a 35C por 24 horas; Uma colorao rsea caracterstica ao redor das colnias produtoras de DNAse indica a positividade da prova.
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O meio adicionado com corante demonstra uma melhor facilidade na leitura, e permite o repique da amostra positiva para o teste de sensibilidade aos antimicrobianos, evitando que se retorne placa original onde nem sempre as colnias esto bem isoladas.
TESTE DA ENDONUCLEASE
Teste da endonuclease termoestvel efetuado no mesmo meio de DNA. Fever o caldo de cultura com a bactria suspeita por 15 minutos; Colocar ao meio de DNA gotas de caldo de cultura turvo com a colnia suspeita; Fazer pequenos orifcios no meio (em placa) utilizando canudos de refrigerante; A leitura do teste semelhante ao da DNAse.
Note que este mtodo pode ser efetuado a partir de caldo de hemocultura em que foi observado o crescimento de cocos Gram positivos agrupados.
TESTE DA BACITRACINA
importante notar que as identificaes devem ser feitas em gar sangue sem tenso de CO2 ou os resultados podem ser conflitantes. Semear meia placa de gar sangue com o estreptococo a ser identificado, como para um antibiograma; Colocar o disco de bacitracina 0,004 u como indicado; Incubar por uma noite a 35C sem CO2; Observar qualquer zona de inibio como resultado de sensibilidade.
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