UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA Programa: Agronoma e Ingeniera Agroforestal

PREINFORME: Laboratorio Bioqumica Metablica-LBM Nombres y Apellidos; Kevin Oate Hernndez Cdigo: 1065629976 Tutora: Lina Monsalve; curso 352001 Fecha: 13/10/2013

ACTIVIDAD URESICA EN MUESTRAS DE ORIGEN BIOLGICO

INTRODUCCIN La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de urea a dixido de carbono y amoniaco dependiendo de las reacciones bioqumicas enzimticas (RBE) en dichas reacciones las enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos las cuales se convierten en molculas diferentes llamadas productos. La ureasa se encuentra en varios tejidos vegetales lo cual puede ser usada en el anlisis de alimentos y forrajes para la determinacin de urea por el mtodo de Kjeldhal o por titulacin del hidrxido de amonio producido por la hidrolisis. Mentefacto diagrama conceptual

1.3.2 En Laboratorio 1. Pesamos 1.0g de harina, forraje o suelo (wm) 2. En un tuvo centrifuga adicionamos la muestra previamente pesada con 10ml de NaCl 3. Agitamos 4. Centrifugamos a 350 rpm(revoluciones por minuto) 5. Cojamos el volumen sobrenadante y lo vertimos a una proveta adicionndole 25ml de NaCl 6. Agitamos durante 30 segundos 7. Rotulamos el extracto de la muestra para actividad ureasica. 1.3.3.Diagrama de Flujo

FINALIZAR REGISTRAR DATOS TITULACIN COLOR AZUL VERDOSO muestra positiva (AU) adicionamos HCl COLOR ROSADOVIOLASEO EQ: NH4OH neutralizados por HCl

EXTRACCIN PESAJE DE LA MUESTRA(wm) mescla de reactivos

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos

Material / Equipo Tubos de ensayo con gradilla Pinzas para bureta Erlenmeyer pipetas Matraz aforado Bao termostato beaker bureta Soporte universal Caractersticas medianos Mango de palo 125ML 5 y 10 ml 100 ml Control de temperatura 400 ml 25ml

2. TABLA DE DATOS TUBOS TIPO DE MUESTRA B ST 1 2 3 4

ML GASTADOS DE HCL 0,1N

3. RESULTADOS ESPERADOS: En la extraccin de la muestra se espera que se torne una tonalidad azul verdosa lo que nos indica que es una muestra positiva para actividad ureasica. en caso contrario es necesario volver a hacer la extraccin. En el proceso de titulacin al adicionar lentamente el HCl aparece un color rosado violceo, lo cual indica que los equivalentes-gramo del hidrxido de amonio fueron neutralizados por los equivalentes- gramos de cido clorhdrico (HCl). Se determinara en cul de las muestras existentes se presenta la mayor actividad ureasica. (suelo, forraje, harina.)

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1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Frmula ureasa En buffer fosfato De PH urea H2NCONH2 Cloruro de HgCl2 mercurio cidoclorhdrico HCl indicador de C15H14N3O2Na Tashiro + C16H18N3SCl - 3H2O + C2H6O

Concentracin 0,1% 7.0 0.25 M 1% 0,1N

GLOSARIO:

Ureasa
es una enzima que cataliza la hidrlisis de urea a dixido de carbono y amonaco. La reaccin ocurre de la siguiente manera: (NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3 En 1926, James Batcheller Sumner demostr que la ureasa es una protena. Es producida por bacteria, hongos y varias plantas superiores.

solucin buffer
Un tampn, buffer, solucin amortiguadora o solucin reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un cido dbil y su base conjugada, es decir, sales hidrolticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades relativamente pequeas de cidos o bases fuertes.

1.3 Procedimiento 1.3.1.En campo: Se recolectaron en una finca las muestras indicadas en el protocolo. forraje:(250g) previamente picadoa un tamao de 0.5 cm Suelo: (250 g) a 20cm de profundidad el cual fue secado al aire. Concentrado: (50g) previamente molido. Todas estas muestras fueron sellados y rotulado con la descripcin del lugar donde se tomaron las muestras.

Hidrlisis:
La hidrlisis es una reaccin cido - base que se produce al disolver determinadas sales en agua. La reaccin tiene lugar entre uno de los iones de la sal y el agua y, hay que tener en cuenta que se trata de una reaccin de equilibrio.

PH:
El pH es una medida de acidez o alcalinidad de una disolucin. El + pH indica la concentracin de iones hidronio [H3O ] presentes en determinadas sustancias

*Seleccionar 3 conceptos claves de la prctica y definirlos brevemente*

BIBLIOGRAFIA

*Segn muestra el ejemplo, relacionar 3 referencias de literatura utilizadas como consulta, de acuerdo a las normas APA http://www.gaqsa.com/Muestro%20Forrajes.htm http://www.unalmed.edu.co/~esgeocien/doc*

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2. CAPACIDAD AMORTIGUADORA ( ) Y POTENCIAL AMORTIGUADOR (p ( ) ) DE MUESTRAS BIOLOGICAS

1.3.2 En Laboratorio

INTRODUCCIN Medida y rotulacin de las muestras, titulacin volumtrica con Soluciones amortiguadoras son aquellas soluciones cuya NaOH 0.1 N, tcnica potenciometrica, registro de mL gastado; tabla concentracin de hidrogeniones varia muy poco al aadirles de datos cidos bases. El objeto de su empleo, tanto en tcnicas de laboratorio como en la finalidad funcional del plasma, es precisamente impedir o amortiguar las variaciones del pH, y por eso suele decirse que sirven para mantener constante el pH. Mentefacto diagrama conceptual

ACIDO DEBIL + SAL Reguladores de pH Absorben excesos de iones H- y H+ propiedades Controlan metabolismo acido base Regulan metabolismo homeosttico

componentes

cidos fuertes (cidos minerales)

.
Soluciones buffer (amortiguadoras) excluyen

Diagrama de Flujo

ejemplos

Lpidos y carbohidratos

Bicarbonatos (HCO3-)

Fosfatos (HPO4=)

Hemoglobina (HbH)

Aminocido (protenas)

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1 Materiales y equipos requeridos

Material / Equipo - Esptula - Agitador - Erlenmeyer. - Pipetas graduada - Probeta graduada Caractersticas Metlica De vidrio De 125ml. De 10ml De 100ml . Vaso de precipitado de

- Potencimetro

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- Beaker - Bureta - Soporte universal. - Equipo de titulacin - Balanza - Muestras Biolgicas

250ml De 25 ml Metlico con pinza para bureta

2. TABLA DE DATOS
Ta bla de da tos Datos potenciomtric os para c apacidad amortiguadora de muestras biolgicas

Valores evaluados

Digital Concentrado, orina, sangre y forraje

Muestras

Wm (g) Conce ntra do Ha rina Forra je Sa ngre Orina

Vm (ml)

pH1

pH2

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo - Hidrxido de sodio - Acido clorhdrico - Fenolftalena - Rojo de Metilo - Agua destilada - Solucin Buffer fosfato

Frmula

Concentracin 0.1 N 0.1N

3. RESULTADOS ESPERADOS: Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biolgicas mediante tcnicas potenciometricas. Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras biolgicas mediante titulacin volumtrica, en presencia de los indicadores adecuados. Realizar un anlisis comparativo del potencial bufferante de muestras de origen biolgico. GLOSARIO: Biocatalizador: es un catalizador de las reacciones bioqumicas de los seres vivos. Se consideran biocatalizadores las enzimas, las hormonas y las vitaminas. Desaminacin: degradacin de un aminocido. Plasma: es la fraccin lquida y acelular de la sangre, es decir, se obtiene al dejar a la sangre desprovista de clulas como los glbulos rojos y los glbulos blancos. Est compuesto por un 90% de agua, un 7% de protenas, y el 3% restante por grasa, glucosa, vitaminas, hormonas, oxgeno, gas carbnico y nitrgeno, adems de productos de desecho del metabolismo como el cido rico. BIBLIOGRAFIA Granados , J (2010), Modulo Bioqumica Metablica, Unidad 2, cap. 2;ECAPMA; UNAD Granados, J (2010), Protocolo Prcticas de laboratorio, Pg. 9-12; Bioqumica Metablica, Unidad 2, cap. 2;ECAPMA; UNAD

NaOH

HCl C20H14O4 C15H15N3O2 H2O KH2PO4 + NaOH

1.3 Procedimiento 1.3.1. En campo: Se realizar un anlisis comparativo del potencial bufferante de muestras biolgicas: 20ml de Leche; y se medir la capacidad amortiguadora de muestras biolgicas: 5g de Concentrado pulverizado, 5g de harina, 5g de forraje picado, 1ml de sangre y 20ml de orina.

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Ttulo de la prctica: Determinacin de carbohidratos no 1.3,2, LABORATORIOS estructurales (CNE), por el mtodo del fenol-cido sulfrico INTRODUCCION Es un mtodo que determina la cantidad de carbohidratos totales, no estructurales, basndose en el contenido de almidones hidrolizables y azcares solubles. Mentefacto conceptual

1.3.2.2 Mezcla de reactivos Reactivos (ml)

1.MATERIALES Y METODOS 1.1. Materiales y equipos requeridos Materiales Equipos Forrajes Pipeta de 5 y 10ml, Tubos de ensayo Gradillas, Pinzas para Suelos bureta, Buretas de 25ml, Erlenmeyer de 125ml, Matraz aforado de 100ml, Harinas Braker de 400ml, Soporte universal 1.2 Reactivos a utilizar Reactivo Formula Concentracin Cloruro de mercurio HgC12 1% cido clorhdrico HCI 0,1N Hidrxido de sodio NaOH 0.1N Ureasa 0.1N C6H6O 5% Fenol 1.3 Procedimiento 1.3.1 Toma de muestra La muestra de concentrado para animales se toman 50g, macerado, triturado o molido, empacado en bolsa negra y rotulada descripcin y caractersticas de la muestra

Tubos de ensayo B St M Fenol 5% 0,5 0,5 0,5 Agua destilada 1,0 0 0 Glucosa 100 ppm 0 1,0 0 FCN 0 0 2,0 H2SO4 1N 3,5 3,5 2,5 Se agita con cuidado x 20 seg, lleva a bao Mara por 3min, sacar los tubos y agita 10 seg y dejar enfriar

1.3.2.3 Lectura espectrofotomtrica Se alista el espectrofotmetro a una =485nm y calibrar el aparato con el tubo blanco, ajustando a 100% de Transmitancia (%T) y 0,000 de Absorbancia (A). Leer el % de Transmitancia (T),de los tubos st y m, luego de este proceso, se convierte estos valores a Absorbancia (A), mediante la ecuacin : A =2- Log %T 2. TABLA DE DATOS 2.1 Datos Volumtrico 3. RESULTADOS ESPERADOS Que el elemento sea un patrn confiable para la cuantificacin de carbohidratos no estructurales, la cantidad de CNE en la muestra sean los necesarios y as ejecutar medidas por esta tcnica 4. GLOSARIO Carbohidrato: Compuesto qumico formado por carbono, hidrgeno y oxgeno, est presente en los alimentos en diferentes formas y porcentajes. Hidrlisis: Es una reaccin qumica entre una molcula de agua y otra molcula, en la cual la molcula de agua se divide y sus tomos pasan a formar parte de otra especie qumica. Bibliografa

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TITULO DE LA PRACTICA: Actividad de Catalasa(ACAT) en muestras de origen Biolgico INTRODUCCION Estando libres lo radicales se asocian al desarrollo de enfermedades, en el organismo un radical originado, el perxido de hidrogeno que puede metabolizarse a travs de la enzima catalasa, al transformarse en agua y oxgeno, que es participe en proceso de respiracin vegetal , pero tambin muy importante en los organismos vegetales y animal Mentefacto conceptual

EFCAT(extracto de fruta para catalasa), ECCAT (extracto de concentrado para catalasa), seguidamente, poner en bao de hielo 1.3.2. LABORATORIOS

2. TABLA DE DATOS

Tubo
B

Tipo de muestra

HCl 0,1N gastado (ml)

1.MATERIALES Y METODOS 1.1Materiales y Equipos requeridos

Materiales Concentrado Frutas Sangre Verduras Orina

1.2 Reactivos a utilizar

Equipos
Montaje de titulacin (soporte universal, bureta, pinzas, Erlenmeyer); pipeta graduada Probeta graduada beaker de 400Ml; tubos de ensayo con gradilla

1 2 3 4 5 6
3. RESULTADOS ESPERADOS cuantificar la actividad catalasa en distintas muestras, de forma indirecta usando la enzima de muestras biolgicas BIBLIOGRAFA

Reactivo
Perxido de hidrogeno

Formula
H2O2 H2SO4 KMnO4

Concentracin
0,06M

cido sulfrico

2N

Permanganato de potasio 0,01M Extractos de catalasa ECAT 1.3 Procedimiento 1.3.1 Toma de muestra Las frutas, verduras concentrados se pesan 2g de muestra picada pulverizada y se ubican en un tubo de centrifuga, se adiciona 10mL de solucin fra de buffer fosfato 0,05M, pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de vidrio (3min) y centrifugar a 2500rpm, durante 5min Sacar el sobrenadante, pasarlo a una probeta, medir su volumen, registrarlo como Vs y tomar 5 mL de ste y poner en un tubo de ensayo tapar, rotular como: EVCAT(extracto de verdura para catalasa )

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TITULO DE LA PRACTICA: Determinacin de Nitrgeno No proteico (NNP) INTRODUCCION El 90 % del nitrgeno total (NT) se presenta en el contenido del lquido ruminal, se encuentra en forma insoluble. El 10 % de ste corresponde a nitrgeno amoniacal (NNP), y el remanente, es una mezcla entre aminocidos libres y pptidos. Mentefacto conceptual

1.3.2. LABORATORIOS

2. TABLA DE DATOS Tubos Materiales (ml)

Tubos de ensayo

St

1. MATERIALES Y MTODOS 1.1 Materiales y Equipos requeridos

Materiales Suelo forraje Sangre Harinas

1.2 Reactivos a utilizar Reactivo cido tricloroacetico Agua destilada Albumina 5% Reactivo de Biuret FNNP

3. RESULTADOS ESPERADOS Cuantificar el Nitrgeno en el filtrado, por mtodo espectrofotomtrico de BiuretL owry Montaje de titulacin (soporte a) Realizar la Mezcla de reactivos universal, bureta, pinzas, Alistar 3 tubos de ensayo, rotularlos as: B: blanco; st: estndar; Erlenmeyer); pipeta m: muestra. graduada Probeta graduada beaker de 400Ml; tubos de GLOSARIO Nitrgeno no proteico: Se denomina as a los compuestos de ensayo con gradilla nitrgeno que pueden ser convertidos en protenas por algunos organismos vivos. Amoniaco: Es un compuesto qumico cuya molcula consiste en Formula Concentracin un tomo de nitrgeno (N) y tres tomos de hidrgeno (H) de Cl3-C-COOH 10N acuerdo con la frmula NH3. H2O Pptidos: Son un tipo de molculas formadas por la unin de 0,5 varios aminocidos mediante enlaces peptdicos. Albumina: Es una protena que se encuentra en gran proporcin en el plasma sanguneo, siendo la protena de la sangre, y la ms abundante en el ser humano, esta se sintetiza en el hgado.

Equipos

1.3 Procedimiento 1.3.1 Toma de muestra Se toma la muestra de sangre animal se debe recolectar 5mL envasados en un tubo vacutainer, el cual contiene anticoagulante, almacenar en refrigeracin a 4C (Bao de hielo); luego Rotular indicando la descripcin del animal al cual se le tom la muestra.

BIBLIOGRAFIA http://www.ucam.edu/estudios/grados/nutricion-presencial/

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