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REVISTA NACIONAL DE ODONTOLOGA

VOLUMEN 6, NMERO 10

ENERO-JUNIO

2010

Recibido: 26 de marzo del 2010 Aprobado: 23 de abril del 2010

ACTIVIDAD INHIBITORIA DE LA STEVIA REBAUDIANA SOBRE EL LACTOBACILLUS ACIDOPHILLUS Y EL STREPTOCOCCUS MUTANS


INHIBITORY ACTIVITY OF STEVIA REBAUDIANA UPON LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS AND THE STREPTOCOCCUS MUTANS
Gabriel Ricardo Vitery Sapuyes,1 Sandra Escribano Vargas,2 Fredy Omar Gamboa Jaimes,3 Nathaly Chavarria Bolaos,4 Ruth ngela Gmez Scarpetta5

RESUMEN
Introduccin: diferentes estudios han evidenciado cmo principales bacterias cariognicas al Lactobacillus acidophillus y al Streptococcus mutans. Dentro de las medidas preventivas para esta patologa se ha propuesto el remplazo de los azcares energticos dentro de la dieta por carbohidratos no energticos, dentro de los cuales se puede encontrar la Stevia Rebaudiana Bertoni. Materiales y mtodos: se realiz una investigacin de carcter experimental, en donde a travs de un estudio in vitro se compar el efecto, en diferentes concentraciones, de extractos de la Stevia Rebaudiana, obtenidos con solventes como agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano, sobre el crecimiento de cepas de S. mutans y L. acidophilus referenciadas por la American Type Culture Coleccin (ATCC), utilizando la tcnica de difusin en Agar Mueller Hinton, como controles positivos Clorhexidina, Vancomicina y Penicilina, y como controles negativos cada uno de los solventes. Resultados: el anlisis estadstico mostr que los resultados de los extractos de Stevia Rebaudiana con metanol y etanol comparados con los de la Vancomicina son estadsticamente iguales, con un valor de p igual al 20% para el extracto con metanol y el 79% para el extracto con etanol, lo que indica que sus efectos son similares a los del control positivo. En el caso de los resultados con los extractos de Stevia con hexanol y acetato de etilo muestran evidencias significativas, comparados con los resultados obtenidos con la Vancomicina, con valores de p inferiores al 5%, lo que indica que la Vancomicina mostr mejores resultados en la inhibicin del crecimiento que estos dos extractos. Conclusin: se demuestra la actividad antibacteriana de la Stevia Rebaudiana contra del S. mutans y el L. acidophilus y el posible potencial anticariognico de este endulzante natural. Palabras clave: Stevia Rebaudiana, Lactobacillus acidophillus, Streptococcus mutans.

ABSTRACT
Introduction: several different studies have proven Lactobacillus acidophillus and Streptococcus mutans to be a main carcinogenic bacteria. A preventive proposed measure for this pathology is replacing energy sugars for carbohydrates, within which Stevia Rebaudiana Berton is found. Material and methods: it was performed as an experimental investigation, where through a study in vitro it was compared an effect in different concentrations of extract of Stevia Rebaudiana, obtain with solvents as water, methanol, ethanol, ethyl acetate, and hexane, above of growing strains of S. mutans and L. acidophilus reference by ATCC (American Type Culture Collection), using the technique of diffusion in agar Mueller Hinton, as a positive control, Chlorhexidine, Vancomycin, Penicillin and as negative control each one of the solvents. Results: the statistical analysis showed that the extracts of Stevia Rebaudiana with methanol and ethanol compared with the Vancomycin are the statistical equivalent with value P equal to 20% for the extract with Methanol, and 79% for the extract with Ethanol, which indicated similarities with the positive control. The results with the extract of Stevia with hexane and ethyl acetate, showed significant evidence, compare with the results obtain with Vancomycin, with value P inferior to 5%, this indicate that Vancomicina showed better results than the other two extracts. Conclusion: it demonstrates the antibacterial activity of Stevia Rebaudiana against S. mutans and L. acidophilus and the potential anticariogenic of this natural sweetener. Keywords: Stevia Rebaudiana, Lactobacillus acidophillus, Streptococcus mutans.

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Investigador principal. Odontlogo Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrnico: gabrielricardovitery@hotmail.com Odontloga Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrnico: snadraescribano@yahoo.com Bacterilogo M.Sc PH.D, Profesor Asociado Centro de Investigaciones Odontolgicas (CIO) Ponticia Universidad Javeriana. Correo electrnico: gamboa@javeriana.edu.co Odontopediatra, Profesora asociada Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrnico: nathalychavarria@hotmail.com Bacteriloga, Esp. Epidemiologa, Directora Giomet, Universidad Cooperativa de Colombia, sede Villavicencio. Correo electrnico: ruangego@hotmail.com

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Introduccin
La caries dental es considerada como una enfermedad localizada que resulta de los procesos metablicos de la biomasa en contacto con la superficie dental, y la dieta proporciona los requerimientos nutricionales y por lo tanto energticos a los microorganismos de la microbiota bucal. La caries dental es una enfermedad bacteriana endgena, que implica bacterias potencialmente patgenas que son residentes en la cavidad oral. La enfermedad es resultante de unas condiciones en las cuales la resistencia del hospedador est disminuida por la proliferacin de especies bacterianas que han sido seleccionadas debido a cambios dietticos que incorporan un consumo frecuente de azcar e hidratos de carbono refinados.1 La complejidad de la comunidad bacteriana encontrada en las superficies de los dientes hace difcil implicar a grupos especficos de bacterias como causa de la caries, sin embargo, los Lactobacillus Acidophillus y el Sstreptococcus Mutans se encuentran en casi todas las lesiones de caries, y su proporcin en la placa y la saliva est positivamente relacionada con la frecuencia y la actividad de caries.2 Diferentes estudios demuestran la relacin directa de los microorganismos como el S. mutans y el L. acidophillus con la caries dental; por ejemplo Roeters, quien realiz un estudio en 1995 con el fin de identificar el S. Mutans y bacilos en el proceso y desarrollo de las caries, trabaj con 252 nios con caries en premolares activas, en los cuales se detectaron: S. Mutans en un 43% y L. Acidophilus en un 11,5%.3, 4 Por lo tanto, es muy importante evitar el consumo del azcar refinado, que es una sustancia qumica pura, extrada de fuentes vegetales, que interfiere como factor importante en la etiologa de los ataques cardiacos, la obesidad, la caries dental, la diabetes, la cual a su vez tiene como complicaciones la insuficiencia renal y la ceguera, slo para citar unas cuantas; pero tampoco significa que estamos condenados a llevar una dieta inspida. Por eso, es til sentirse a gusto con algunos endulzantes artificiales (xilitol, sorbitol, manitol, etctera) y naturales como la Stevia Rebaudiana Bertoni, que es un pequeo arbusto del norte de Paraguay; mientras que los indios nativos de la tribu guaran haban usado las hojas de esta

planta como un endulzante natural desde tiempos precolombinos, no fue sino hasta 1887 cuando un cientfico naturalista sudamericano llamado Dr. Moiss Santiago Bertoni, director del colegio de Agricultura en Asuncin, la descubri. Para 1913 la planta a la que Bertoni se haba referido como rara y poco conocida se haba hecho famosa. La dispersin del fenmeno de la Stevia es enorme: inici cultivndose en Japn y hoy tambin es cultivada y usada en muchos pases fuera de Sudamrica, incluyendo China, Alemania, Malasia, Israel y Corea. Se estima que hay ms de 80 especies de Stevia que crecen en forma silvestre en el continente americano; de todas ellas, solamente la Stevia Rebaudiana y otra especie ya extinta parecen poseer la dulzura natural que las distingue. Se sabe que en los aos cincuenta algunos mdicos paraguayos usaban la Stevia Rebaudiana en bebidas con mate para el tratamiento de la diabetes e, igualmente, gracias a un consumo tradicional se le atribuyen grandes propiedades que hoy son objeto de estudio.5-8 Un punto importante es que no hay reportes en la literatura mdica de algn efecto adverso por usar la Stevia, pues se reconoce que tiene un amplio margen de seguridad. En Japn se consumen hasta 100 toneladas mtricas al ao, donde tampoco se han reportado reacciones adversas. En septiembre de 1995 la Agencia Americana de Drogas y Alimentos (FDA) aprob a la Stevia como un complemento diettico despus de realizarse un estudio en Brasil, donde se mostr una disminucin del 9,5% en las presiones sanguneas diastlica y sistlica. Las propiedades nicas de la Stevia tambin la hacen ideal como componente de enjuague bucal y pasta dental, puesto que algunos estudios han indicado que realmente podra reducir las caries al retrasar el crecimiento de la placa en la boca. Debido a las grandes propiedades que se le atribuyen a este pequeo arbusto, se realiz este estudio cuyo objetivo general fue observar cmo afecta la Stevia Rebaudiana bertoni en diferentes concentraciones el crecimiento in vitro del S. mutans y del L. acidophilllus cultivados en agar Mueller Hinton, determinando el posible potencial anticariognico de este endulzante natural

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Metodologa
Se realiz una investigacin de carcter experimental en donde a travs de un estudio in vitro se compar la influencia de la Stevia Rebaudiana a diferentes concentraciones sobre el crecimiento de cepas de S. mutans y L. acidophilus, referenciadas por la American Type Culture Coleccin (ATCC) obtenidas a travs del Centro de Investigaciones Odontolgicas (CIO) de la Pontificia Universidad Javeriana, tradas del laboratorio de microbiologa oral del doctor Liebana Urea de Granada Espaa, las cuales permanecan liofilizadas a menos 70 C, se hicieron repiques cada 24 horas en caldo Tripticasa de soya (STS) para mantenerlas vivas durante 48 horas, posteriormente se prepara agar STS (agar y caldo) para hacer siembras y mantenerlas por un lapso ms prolongado, usando la cantidad necesaria de bacterias para cada uno de los ensayos. La obtencin de los extractos de Stevia se realiz utilizando solventes como: agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano (en orden de mayor a menor polaridad segn escala elutrpica); este recurso sirvi para probar la posible actividad inhibitoria de la Stevia contra las cepas bacterianas, para lo cual se realiz el siguiente procedimiento: Para la obtencin de extractos se utiliz la tcnica de maceracin en fro, la cual consiste en mezclar las hojas secas pulverizadas de Stevia con los diferentes solventes en frascos taparrosca y dejarlos en agitacin mecnica durante 24 horas a 150 rpm. Luego se filtraron con papel filtro de 125 mm para retirar los residuos de hoja y, posteriormente, cada extracto se filtr con filtros millipore de 0,45 micras referencia HVLPO 1300 utilizando una cmara de vaco, lo cual impide el paso de impurezas proporcionando una garanta total que asegur que se encontraran libres de contaminacin. Posteriormente cada extracto fue colocado en balones estriles para realizar el proceso de evaporacin de los respectivos solventes, para lo que se utiliz un rotavaporador (referencia 111 marca Buchi Suiza) a una temperatura de 40 C constante para todos los solventes, variando la presin para lograr el punto de ebullicin de cada uno sin tener que someter los extractos a temperaturas ms elevadas evitando as la desnaturalizacin de las sustancias; la ebullicin
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se hizo de manera tal que el volumen fue reducido al mnimo para que el secado fuera ms rpido y de esta forma obtener los slidos deseados. Una vez obtenidos los slidos se llevaron a beackers previamente pesados y esterilizados para saber cul sera el rendimiento final de cada extracto. Una vez obtenidas las diluciones a la concentracin deseada, se prepar el medio de cultivo utilizando agar Mueller Hinton (OXOID CM 337). El ensayo microbiolgico se realiz con tcnica de agar difusin con bacterias y perforacin en placa, para esto se llenaron 100 tubos taparrosca con 20 mL de agar cada uno y se esterilizaron en autoclave (matachana 21 L E-10349) a 121 C durante 20 minutos a 15 atmosferas de presin; se prepar una suspensin en caldo de la bacteria con agua destilada al 0,5 segn la escala de macfarland (1X10 UFC/mL) y, una vez el agar toma la temperatura deseada (an en estado lquido) para ser mezclado con las bacterias, se coloca 100 uL de la suspensin con una pipeta calibrada en 30 tubos, se mezcl y se llev a igual nmero de cajas de petri. Cuando el agar gelific, se procedi a hacer los pozos con una pipeta de pasteur y se aplic con una pipeta calibrada 20 uL de las diluciones de cada extracto en los pozos; el ensayo se realiz de forma duplicada con cada uno de los extractos. El mismo procedimiento se hizo tanto para S. mutans como para L. acidophillus. Igualmente se montaron los siguientes controles positivos: 20 uL de clorhexidina 0,2%, 20 uL de Vancomicina (5 sensidiscos de 30 ug en 500 uL de agua); disco de 10 ug de penicilina y los controles negativos: 20 uL de cada solvente: agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano. Las cajas de petri se taparon y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos para lograr una mejor difusin de la sustancia; luego se colocaron en campanas de incubacin con sobres de anaerobiosis (ANAEROGEN N2 80%, H2 10% y CO2, 10% marca Oxoid) a 37 C y se hicieron observaciones 24, 48 y 72 horas despus para determinar el efecto de estos extractos en el crecimiento de las bacterias.

Resultados
La actividad inhibitoria de extractos con solventes como agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano (en orden de mayor a menor polaridad segn escala
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elutrpica) de hojas de Stevia Rebaudiana Bertoni pulverizadas medida por el dimetro del halo de inhibicin en todas las concentraciones observadas 48 horas despus, para lo cual se utiliz un dentmetro, se muestran a continuacin. Los solventes: agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano utilizados como controles negativos no mostraron ninguna actividad inhibitoria en contra de las cepas estudiadas. El extracto en agua requiri una concentracin mnima de 400 mg/mL para producir efecto inhibitorio, generndose un halo de 9 mm en promedio tanto para S. mutans como para L. acidophillus (figura 1). Con el extracto metanlico, al igual que con el de agua, requiri una concentracin mnima de 400 mg/mL para producir efecto inhibitorio con halo de 11,5 y 12 mm de dimetro en promedio contra el S. mutans y L. acidophilus respectivamente (figura 1). Con el extracto de acetato de etilo, la concentracin mnima que requiri fue de 200 mg/ mL y form un halo de inhibicin de 11,5 mm en promedio con el S. mutans y de 10,5 mm en promedio con el L. acidophillus (figura 1). Con el extracto hexanlico se obtuvieron los mejores resultados, puesto que present halos de inhibicin ms grandes y con concentraciones ms pequeas. La mnima concentracin que se utiliz para producir efecto inhibitorio fue de 50 mg/mL, con un promedio de 14,5 mm de dimetro con el S. mutans y 15,5 mm con el L. acidophillus (figura 1).
Tamaos halos de inhibicin en mm
18,0 16,0 14,0 12,0 10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0 16,1 12,7 9,0 9,3 9,8 12,2 13,3 11,8 10,5 14,2 16,5 17,3

En el caso de los controles positivos en los que se utiliz una dilucin de 7 sensidiscos de Vancomicina de 30 ug en un mL, gener un halo de 16,5 mm de dimetro en promedio con el S. mutans y de 17 mm con el L. acidophilus; igualmente, el control con la clorhexidina al 0,2% mostr un halo de 15 mm de dimetro para las dos cepas bacterianas; en el caso de la penicilina (disco de 10 mg), gener un halo de inhibicin de 21 mm en promedio con L. acidophilus, pero no hubo ninguna actividad en contra del S. mutans (figura 2).

Tamaos halos de inhibicin en mm

25 20 15 10 5 0 Vancomicina Clorhexidina 0,2% Penicilina 17 17 15

22

15

Streptococus mutans

Lactobacillus acidophilus

Figura 2. Actividad inhibitoria de los controles positivos contra el Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus observada a las 48 horas Fuente: los autores

Agua 400 mg/mL

Metanol 400 mg/mL

Etanol 400 mg/mL

Acetato de etilo 200 mg/mL

Hexano 50 mg/mL

Vancomicina (control positivo)

Streptococus mutans

Lactobacillus acidophilus

Figura 1. Actividad mnima inhibitoria de los extractos de Stevia contra el Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus observada a las 48 horas Fuente: los autores

La prueba estadstica de los resultados obtenidos con los extractos de Stevia en los diferentes solventes comparados con el control positivo de Vancomicina a las 48 horas, frente al crecimiento del S. mutans y el L. acidophilus, evidencia que no existen diferencias significativas entre el tamao promedio de los halos de inhibicin presentados por el extracto hexanlico y los de Vancomicina con un valor de p igual al 75%, lo que indicara un resultado similar de este extracto con el del control positivo; contrario a lo que sucede con los extractos preparados con metanol, etanol y acetato de etilo, en los que los valores de p son inferiores al 5%, evidenciando diferencias significativas que demuestran que los resultados con la Vancomicina son mejores que los de estos solventes (tabla 1).

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Tabla 1. Diferencias a 48 horas, entre cada extracto de Stevia y control de Clorhexidina, comparados con Vancomicina para Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus
Extracto Metanol Etanol Acetato de etilo Agua Hexano Clorhexidina (control) Vancomicina (control) Fuente: los autores Promedio general tamaos halos de inhibicin 9,83 12,17 11,75 9 16,1 15 16,5 Varianza 2,97 0,57 0,5 0,4 2,77 2 0,5
DS IC: 95%

Valor de signicancia p<0,05 0,0004 0,00003 0,000002 0,0003 0,75 0,22 control positivo

1,72 0,75 0,7 0,63 1,6 1,4 0,7

8,46-11,2 11,57-12,77 11,27-12,23 8,5-9,5 15,08-17,12 13,05-16,95 15,17-17,48

Los resultados obtenidos a las 72 horas no mostraron cambio alguno frente a los resultados obtenidos con el S. Mutans 24 horas antes; sin embargo, s se present con los cultivos de L. acidophilus, observndose un aumento considerable en el tamao de los halos de inhibicin del crecimiento con todos los extractos de Stevia Rebaudiana y con los controles positivos, excepto con el extracto

hexanlico en el que se observaron dimetros de halos similares a los medidos 24 horas antes; sin embargo, todos los halos de inhibicin, incluidos los del extracto hexanlico, se mostraron mucho ms claros, lo que sugiere que hay una actividad inhibitoria in vitro tarda, pero muy potente, de los extractos de hoja de Stevia pulverizada contra el L. acidophilus (tabla 2).

Tabla 2. Diferencias entre extractos de Stevia y controles a las 48 y 72 horas, comparados con Vancomicina para Lactobacillus acidophilus
Promedio general tamao halo de inhibicin (48 horas) 12,67 13,33 10,5 9,33 14,2 15,25 21,25 17,25 Promedio general tamao halo de inhibicin (72 horas) 31,33 29,83 17,62 32,16 16,35 29,25 30,5 30,25 Varianza (72 horas) 1,06 4,96 1,12 0,16 0,55 0,125 0,5 0,125
DS

Extracto Metanol Etanol Acetato de etilo Agua Hexano Clorhexidina 0,2% (control) Penicilina (control) Vancomicina (control) Fuente: los autores

(72 horas) 1,03 2,22 1,06 0,4 0,74 0,35 0,7 0,35

95% (72 horas) 30,51-32,15 28,07-31,59 16,92-18,38 31,84-32,48 15,9-16,8 28,77-29,73 29,53-31,47 29,77-30,73

IC:

Valor de significancia p<0,05 (72 horas) 0,2 0,79 0 0,00018 0 0,03 0,73 control positivo

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En este caso el anlisis estadstico nos muestra que los resultados de los extractos de Stevia Rebaudiana con metanol y etanol comparados con los de la Vancomicina son estadsticamente iguales con un valor de p igual al 20% para el extracto con metanol, y de 79% para el extracto con etanol, lo que indica que estuvieron dentro de la regin de aceptacin. En el caso de los resultados con los extractos de Stevia con hexano y acetato de etilo, los resultados estadsticos evidencian que hay diferencias significativas comparados con los resultados obtenidos con la Vancomicina con valores de p inferiores al 5%, lo que indica que la Vancomicina produjo mejores resultados comparados con los de estos dos extractos. Sin duda el resultado ms interesante fue el obtenido con el extracto de Stevia en agua, el cual fue significativamente diferente en comparacin con el resultado de la Vancomicina con una p inferior a 0,005, pero en este caso sugiere un resultado mejor con el agua.

Discusin
Fue probada la capacidad inhibitoria del extracto de la Stevia Rebaudiana Bertoni en cinco solventes diferentes como agua, metanol, etanol, acetato de etilo y hexano in vitro sobre el Streptococus mutans y el Lactobacillus acidophilus. Basndose en el estudio de Manish B, Tadhani y Rema Subhash en el que encontr actividad inhibitoria in vitro de extractos de hojas de Stevia Rebaudiana con solventes como agua, metanol, acetato de etilo y hexano contra cuatro bacterias gran positivas (B. subtilis, S aureus, M. letus, B. megaterium), cuatro gram negativas (S. marcensens, P. aeruginosa, E. coli, P. valgaris) y hongos como R. oligosporus y A. niger; en los que se observaron resultados interesantes especialmente con el extracto hexanlico, que present actividad inhibitoria con halos desde los 9 mm contra el B. subtilis, hasta 22 mm contra R. oligosporus.9 El presente trabajo nos permite comprobar la actividad antibacteriana de la Stevia, contra el S. Mutans y el L. Scidophilus; adems da la posibilidad de analizar los resultados obtenidos, que al compararlos con el estudio de Manish,9 muestran similitud en el sentido de que el extracto con el solvente ms polar

de los utilizados, como lo es el hexano, es el que tiene mayor actividad en contra de las bacterias estudiadas al cabo de 48 horas, formndose halos de inhibicin en promedio de 14,5 mm con el S. mutans y de 15,5 mm contra el L. acidophilus a una concentracin de 50 mg/ml soportado por la prueba estadstica, pero tambin demuestra que al igual que en el estudio sobre el que se basa el presente, los extractos de Stevia con los dems solventes tambin muestran actividad en contra de las bacterias estudiadas, claro est que para lograrlo fue necesario aumentar las concentraciones cuatro veces ms (200 mg/ml) en el caso del extracto con el acetato de etilo y ocho veces ms (400 mg/ ml) con los restantes, como son el extracto en agua, metanol y etanol. Sin embargo vale la pena anotar que hubo dificultad en la obtencin de concentraciones tan altas (600 y 800 mg/ml), debido a que la sobresaturacin impeda obtener una dilucin completa del soluto (slido en gramos del extracto) en el solvente (cada uno de los solventes), lo que sugiere que los halos de inhibicin formados por las concentraciones entre los 400 y 800 mg/ml sean muy similares. Ahora bien, en la observacin realizada a las 72 horas, se obtiene un cambio significativo en comparacin con los tamaos de los halos de inhibicin al cabo de 48 horas en los cultivos con L. acidophilus, presentndose halos de inhibicin mucho ms grandes con todos los extractos de Stevia, excepto con el extracto hexanlico, con el que se mantuvieron resultados similares a los obtenidos 24 horas antes, aunque los halos fueron ms claros, al igual que con el resto de los extractos. Esto sugiere que los extractos de Stevia Rebaudiana tienen un efecto tardo en contra del L. acidophilus (ms no contra el S. mutans) y que por lo tanto las concentraciones mnimas inhibitorias de stos deben ser reevaluadas. Por otra parte, ensayos previos que se realizaron en las tres primeras semanas, en los que se probaron diferentes presentaciones de Stevia como Stevia lquida al 25%, al 30%; Stevia Aldy, Steviosido en polvo al 70%; utilizando la misma tcnica de difusin en agar, con perforacin en placa y con incrementos de concentraciones en cada ensayo, la Stevia no present

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actividad inhibitoria alguna en contra del S. mutans y L. acidophilus presentndose la misma situacin con los endulzantes artificiales utilizados como controles como xilitol, sacarina sdica al 10%. Sin embargo, un estudio realizado por Hatsue Kakuta, Yoshimichi Iwami, Hideaki Mayanagi y Nobuhiro Takahashi, en el que se prueba la inhibicin del crecimiento y la produccin del cido del xilitol en presencia de varios azcares de la dieta contra el S. Mutans en condiciones estrictamente anaerbicas, utilizando espectrofotometra para medir el crecimiento y un peachimetro (referencia pH-stat aut-2115. Toa Electronics Ltd.) para medir el pH, los resultados muestran una pequea disminucin del crecimiento S. Mutans y una lectura de pH ligeramente ms bsico en los medios con los azcares dietarios con xilitol en comparacin con cada endulzante (glucosa, galactosa, fructosa, maltosa, lactosa, sucrosa) por separado.10 Es probable que utilizando esta tcnica se pueda observar el crecimiento y la produccin de cidos por parte del S. mutans y el L. acidophilus, en presencia de los glucsidos de la Stevia Rebaudiana en combinacin con los otros azcares de la dieta. Igualmente es importante anotar que la presente es un rea de investigacin abierta para continuar con futuros estudios sobre la Stevia, que lleven a establecer o confirmar las propiedades anticariognicas y que contribuyan a buscar posibles soluciones a enfermedades que, como la caries, afectan a un gran porcentaje de la poblacin mundial. Debido a que no se encontraron estudios publicados en la literatura sobre la actividad inhibitoria de la Stevia Rebaudiana contra microorganismos carigenos como el S. mutans y L. acidophilus, no se tuvo un referente comparativo para discutir frente al presente estudio.

Tamaos halos de inhibicin en mm

25 17 15 15 15

22

20

17

16 14

10

5 0 0 Vancomicina Clorhexidina 0,2% Penicilina Hexano 200mg/mL

Streptococus mutans

Lactobacillus acidophilus

Figura 3. Controles positivos y extracto con mayor actividad contra Streptococus mutans y Lactobacillus acidophilus Fuente: los autores

Todos los extractos de Stevia con los diferentes solventes, incluyendo los controles positivos, mostraron un efecto de inhibicin retardado (72 horas despus) en el crecimiento de Lactobacillus acidiphilus. Se evidencia el efecto inhibitorio de la Stevia Rebaudiana Bertoni en el crecimiento del Streptococo mutans y el Lactobacillus acidophilus, considerados importantes grmenes cariognicos, y por lo tanto se podra deducir un posible poder anticariognico de este endulzante natural, al ser utilizado como reemplazo de azucares calricos en la dieta o al utilizarlos en dentfricos o enjuagues orales.

Referencias
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Conclusin
El extracto de Stevia que mostr mejores resultados en la inhibicin del crecimiento, comparado con los controles positivos, tanto para S. mutans como para L. acidophilus, fue el hexanlico (figura 3).

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