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2.2.1.1.

- CATALASA Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es Streptococcus spp. Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros: Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+). Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-) Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos tcnicas: Mtodo del portaobjetos (recomendado): o de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio. 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. esultado positivo). desinfectante. sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos. Mtodo del tubo de ensayo: puro densamente inoculado. positivo). Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaucin de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen catalasa y su presencia dar un falso resultado positivo 2.2.1.8 ROJO DE METILO Estas dos pruebas forman parte del IMVIC de las colimetras y permiten la diferenciacin dentro de las enterobacterias del grupo coli y aergenes. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarn la glucosa en dos fases: primero la metabolizarn aerobiamente (respiracin oxibintica) consumiendo rpidamente el oxgeno del medio, para, en segundo lugar, continuar metabolizndola por va anaerobia (fermentacin). sta puede ser de dos tipos: Fermentacin cido mixta: La realizan las bacterias del grupo de E.coli y los productos finales son cidos orgnicos (cidos 9

frmico, actico, lctico y succnico) que provocan un fuerte descenso del pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4. Fermentacin butiln gliclica: La realizan las bacterias del grupo Klebsiella spp Enterobacter spp (antiguo aergenes). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol, producindose acetona como intermediario que podr ser detectada aadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarn con este compuesto produciendo un color rojo caracterstico. Para la realizacin de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RMVP (medio de Clark y Lubs) y se incuba a 30C durante un periodo de 3 das como mnimo y 5 como mximo. Al revelar las pruebas, se separa el cultivo en dos porciones de unos 2,5ml que servirn para cada uno de los ensayos. Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le aade unas gotas (4-5) de solucin indicadora de Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloracin. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece amarillo. Voges-Proskauer: A la otra porcin de cultivo se le aade: -Proskauer (alfa-naftol 5% en etlico absoluto). El medio adquiere un aspecto lechoso. -Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente. Si la prueba es positiva, antes de cinco minutos aparece un color rosado-violceo, ms o menos intenso, que se inicia en la parte superior del tubo. Si la prueba es negativa no aparece coloracin alguna. 5.- PRUEBA DE VOGES-PROSKAUER Fundamento: La reaccin de Voges Proskauer se basa en la conversin del acetilmetilcarbinol (acetona) en diacetilo por accin del KOH al 40 % y el oxgeno atmosfrico, la acetona se convierte en diacetilo el naftol acta como catalizador para revelar un complejo de color rojo. Indicador de pH: Rojo de metilo 87 Prueba Control negativo Control positivo Voges - Proskauer Escherichia coli Klebsiella sp a.- Inocular un tubo que contenga caldo Voges Proskauer con 0.1 ml de la suspensin b.- Incubar el tubo a 35C durante 24 h. c.- Despus de incubar, agregar 6 gotas de solucin de alfa-naftol y 2 gotas de solucin de KOH, en ese orden

estricto y agitar suavemente, dejar en reposo 10-15 minutos y observar los cambios en el medio. RESULTADOS: Prueba positiva: Color rojo ladrillo en la superficie del medio de cultivo (Produccin de acetoina) Prueba negativa: No hay cambio en el color del medio. Fig. 101- Resultado de la prueba de VP, tubo 1 negativo, tubo 2 positivo y tubo 3 medio sin inocular