UNIVERSIDADE FEDERAL DA FRONTEIRA SUL CAMPUS CERRO LARO LIENCIATURA EM BIOLOGIA BIOQUMICA PROF LAUREN ZAMIN

RELATRIO DE DETECO DE PROTENAS DOS ALIMENTOS COM TESTE DO BIURETO Realizada dia 05/06/2013 ALINE PERIUS ARIANE SILVA LEONICE DA ROSA

Introduo As protenas so molculas orgnicas de extrema importncia para o correto funcionamento de nosso organismo, desempenhando funo estrutural, hormonal enzimtica, imunolgica, nutritiva, dentre outras. Nem todas as protenas so metabolizadas pelo nosso organismo, sendo estas encontradas em alimentos como laticnios, ovos, carne, e vegetais em geral, embora em menores propores. Assim, uma dieta diversificada permite a ingesto de qualidades e quantidades diferentes de aminocidos

essenciais. As protenas so compostos orgnicos de estrutura complexa e massa molecular elevada e so sintetizadas pelos organismos vivos atravs da condensao de um grande nmero de molculas de alfaaminocidos, atravs de ligaes denominadas ligaes

peptdicas. As protenas reagem com o reativo de biureto formando uma colorao violeta, que se deve formao de um complexo de coordenao do on Cu com dois tomos de nitrognio das ligaes peptdicas, em meio alcalino. A intensidade da cor proporcional ao nmero de ligaes peptdicas existentes. Esse composto analisado em um espectrofotmetro. A espectrofotometria uma tcnica

analtica que utiliza o espectro eletromagntico para determinar a concentrao de espcies qumicas. O espectro eletromagntico um conjunto de ondas eletromagnticas. Uma onda eletromagntica composta por um campo eltrico e outro magntico, que se propagam perpendicularmente e com a mesma direo. Toda onda

eletromagntica pode ser caracterizada por deu comprimento de onda, e por sua freqncia. O comprimento e a freqncia de uma onda esto relacionados ao seu contedo energtico. Quanto MENOR o comprimento de onda e MAIOR a freqncia de uma onda, MAIOR ser sua energia. Na tcnica de espectrofotometria, um feixe de luz atravessa uma soluo ou material biolgico contendo molculas capazes de absorver luz. Sendo assim, parte da luz incidente ser absorvida, detectado enquanto pelo o restante atravessar a a soluo e de ser luz

aparelho.

Estimando-se

quantidade

absorvida, possvel determinar a concentrao do composto em soluo. Inmeras molculas biolgicas tm a propriedade de

absorver luz o que permite sua quantificao por essa tcnica. A faixa mais utilizada do espectro vai de 200nm(ultravioleta) a 1.000nm (infravermelho). O espectro visvel, ou seja, aquele que percebido pelo olho humano (cores). A espectrofotometria uma tcnica quantitativa, que permite relacionar q quantidade de luz absorvida com a concentrao da amostra. A medida da absoro de luz dada pela ABSORBNCIA,

que definida como: A = log , onde Io= intensidade da luz incidente It=intensidade da luz transmitida A absorbncia , portanto, proporcional concentrao e espessura do tubo contendo a soluo e lida no espectrofotmetro em escala logartmica. Curva-padro ou de calibrao A determinao da concentrao de um soluto em uma soluoproblema pelo mtodo espectrofotomtrico envolve a comparao da absorbncia da soluo-problema com uma soluo de referncia, da qual j se conhece a concentrao do soluto. Em geral so utilizadas solues-padro do composto que se deseja quantificar, com

diferentes concentraes, e sua absorbncia determinada. Com os valores de absorbncia e concentrao conhecidos, pode-se traar um grfico cujo perfil conhecido como curva de calibrao ou curva - padro. Aplicando-se a lei de Lambert-Beer, ao se plotar o valor da absorbncia da amostra-problema no grfico da curva de calibrao pode-se, por projeo, determinar a concentrao do soluto. DETERMINAO DA CONCENTRAO DE PROTENAS EM UMA AMOSTRA PELO MTODO DO BIURETO O biureto o composto formado pelo aquecimento da uria a 180C. Quando este composto colocado em presena de uma soluo de sulfato de cobre em um meio fortemente alcalino, formase um composto de cor azul. A cor devida ao complexo de interao entre o on cprico e os quatro tomos adjacentes de nitrognio. Este tipo de reao acontece com peptdeos que contenham no mnimo duas ligaes peptdicas e com protenas em geral. A concentrao de protena e/ou peptdeo no meio influenciar na intensidade da cor: uma soluo de protena apresentar matizes de violeta; quando a

soluo apresentar elevada concentrao de peptdeos, a cor tender o rosa. A sensibilidade do mtodo de 0,5 a 5mg de protena/mL. Materiais e Mtodos - Tubos de ensaio - Estante para tubos de ensaio - Cubeta - Pipeta - Espectrofotmetro - Banho-Maria - Agitador vrtex Reagentes - Soluo de Biureto: Sulfato cprico pentahidratado (1g/L).......150mg Tartarato de sdio e potssio 4g/L.............600mg Hidrxido de sdio 10g/L............................30mL gua 150mL - Soluo aquosa de clara de ovo (1 clara para 250 mL de gua) - Extrato de soja (diluir 1 colher de sopa do extrato da soja em 100 mL de gua) - Amido de milho (maisena) (diluir 1 colher de sopa do extrato da soja em 100mL de gua. Mtodo O experimento foi realizado na aula prtica em laboratrio a qual teve como contedo a deteco de protenas com teste de Biureto. O objetivo era identificar em qual dos alimentos encontramos maior concentrao de destilada............................................q.s.p

protenas, sendo que os alimentos analisados foram os seguintes: soluo de clara de ovo, soja e amido. Outras trs cubetas foram distribudas no qual cada um foi nomeado e numerado de: n1, n 2 e n3. Em seguida com ajuda de uma pipeta foram dissolvidas no tubo de n 1 1,5 mL de gua destilada, 0,5mL de clara de ovo e 5 mL de biureto. No tubo de n2 foram adicionados 1,5 mL de gua destilada, 0,5 mL de soja e 5 mL de biureto. No tubo de n 3 foram adicionados 1,5 mL de gua destilada, 0,5 mL de amido e 5 mL de biureto. Em seguida agitamos as solues no agitador vrtex e colocamos em banho-maria por cerca de 10 minutos. Passado o tempo retiramos os tubos e colocamos no espectrofotmetro com ajuda da professora para analisarmos o fator de calibrao. Resultados Depois de analisadas as solues no espectrofotmetro

observamos que a absorbncia da soluo de clara de ovo era de 0,297. A absorbncia da soluo de soja era de 1,188 e do amido 0,541. Conforme a tabela abaixo: Reagente s Bran co gua destilada Clara de ovo Soja Amido Biureto Absorbn cia 2 5 7 1 1,5 0,5 5 0,29 8 Tub os 2 1,5 0,5 5 1,18 1 3 1,5 0,5 5 0,54

Aps termos os resultados de absorbncia das solues, calculamos a concentrao padro de protenas nessas solues. Fator de calibrao= concentrao de calibrao/ absorbncia.(Fc= C/A)

O fator de calibrao foi fornecido pela professora que equivale a 35mg/mL. Clara do ovo (Fc= C/A) : 35 = C/0,297
10,3mg/mL C =

Soja (Fc= C/A): 35 = C/1,188 C = 41,5mg/mL Amido (Fc= C/A): 35 = C/0,541 C = 18,9mg/mL

A concentrao padro da clara do ovo de 10,3mg/mL. A concentrao padro da soja de 41,583mg/mL. A concentrao padro do amido de 18,9mg/mL. Podemos observar que a concentrao de protena maior na soluo da soja, em seguida na soluo de amido e a menor concentrao encontra-se na soluo da clara do ovo.