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INTRODUCCIN
1.1 EL PROCESO OXIDATIVO
1.1.1 LA OXIDACIN Y LOS RADICALES LIBRES La oxidacin es un proceso bioqumico de prdida de electrones siempre asociado a otro de captacin que llamamos reduccin (Guerra, 2001). Estas reacciones se les conoce como reacciones redox. La oxidacin se encuentra presente en la naturaleza: el hierro es oxidado por el aire, al igual que la manzana cuando se corta y adquiere un color caf, y los alimentos grasos que cuando se oxidan, se vuelven rancios. Existen otros procesos oxidativos importantes como lo es la combustin, la respiracin y la fotosntesis en las plantas, ya que a travs de las reacciones que se llevan a cabo en ellos, se genera energa la cual es necesaria para que la vida exista. Sin embargo, en la respiracin no slo se obtiene energa, tambin se producen ciertas sustancias que son dainas para el organismo. Estas sustancias dainas son especies reactivas del oxgeno (EROs), es decir, son radicales libres o promueven la formacin de los mismos. Un radical libre se define como un tomo o molcula que tiene uno o ms electrones no apareados girando en sus rbitas externas. Es por esto que los radicales libres oxidan a las molculas vecinas para as adquirir un equilibrio qumico. Pero esas molculas vecinas, al momento de ser oxidadas por los radicales libres, se convierten en especies radicalarias que van en busca de electrones de otras molculas vecinas y es as como se genera una reaccin en cadena capaz de destruir estructuras biolgicas importantes (Leighton, 1998).

Tabla 2. Especies reactivas del oxgeno

ESPECIES REACTIVAS DE OXGENO RADICALES LIBRES ROO Radical perxido

(EROs)

NO RADICALES H2O2 Perxido de hidrgeno

OH O2

Radical Hidroxilo Anin Superxido

.-

O2

Oxgeno singlete

1.1.2 LOS ESTRESORES EXGENOS Los EROs no slo se generan por la respiracin. Existen miles de sustancias txicas en el ambiente que son fuente de radicales libres, por ejemplo, cuando el organismo se somete a la exposicin de radiaciones UV, la contaminacin ambiental, el exceso de ejercicio, ciertos frmacos, como el acetaminofeno, y el humo del cigarrillo, entre otros, son algunos de los estresores exgenos a los que estamos expuestos (Kidd, 1997). El ejercicio puede agotar la fuente de antioxidantes de los msculos y, algunas veces, de otros rganos, ya que incrementa el proceso oxidativo del cuerpo debido al requerimiento energtico que se requiere. Esta energa es el ATP, para formar ATP, se requiere oxgeno, y esto al final resulta en una produccin de especies reactivas del oxgeno (Ji LL, 1995).

Entre las sustancias qumicas txicas se encuentra el acetaminofeno, el cual es un medicamento txico que acaba con la fuente de antioxidantes del hgado y lo vuelve vulnerable al dao txico (Hoyumpa, 1996). Existen otros factores que alteran la concentracin de los antioxidantes en los tejidos, estos son, entre otros, el dao por quemaduras o cirugas, as como por choque sptico y traumatismos (Spies, 1994). La intoxicacin por metales, las infecciones bacterianas y virales, incluyendo el VIH, as como el alcohol pueden generar estrs oxidativo (Cross, 1987).

1.2 LOS ANTIOXIDANTES La primera fuente de proteccin del cuerpo contra los radicales libres y otros oxidantes, son los antioxidantes. Estos son compuestos que detienen el ataque y la formacin de especies radicalarias dentro de la clula. Existen dos tipos de antioxidantes: los antioxidantes enzimticos y los antioxidantes no enzimticos. Los primeros se encuentran dentro del organismo e impiden la formacin de radicales libres a partir de otras molculas. Si los radicales libres ya existen, estos antioxidantes se encargan de convertirlos en molculas menos dainas para el organismo. Ejemplos de estos antioxidantes son: la catalasa de los peroxisomas, la superxido dismutasa y la glutatin peroxidasa. Los antioxidantes no enzimticos son aquellos compuestos que donan sus electrones a los radicales libres, neutralizndolos y evitando reacciones en cadena. Sin embargo, los antioxidantes no enzimticos como el glutatin, la vitamina E, la vitamina C y el -caroteno no se convierten en radicales libres debido a la gran movilidad de sus otros electrones o simplemente son radicales libres no reactivos (Leighton, 1998).

1.2.1 EL GLUTATIN COMO SISTEMA ANTIOXIDANTE El glutatin (-glutamilcisteinilglicina, GSH) es un antioxidante sulfidrlico, una antitoxina y un cofactor enzimtico. El GSH se encuentra en todos los animales, plantas y microorganismos, principalmente en forma soluble en el citosol. Existe en dos formas: la forma antioxidante o glutatin reducido (GSH) y la forma oxidada, un compuesto unido por enlaces disulfuro, conocido como glutatin oxidado (GSSG) (Kosower NS, 1978).

GLUTATIN (GSH) Gamma-glutamil-cisteinil-glicina.

Figura 1. Estructura del glutatin (GSH) (Kidd, 1997).

El GSH en su forma reducida es una molcula formada por la unin de tres aminocidos, el cido glutmico, la cistena y la glicina, unidos covalentemente terminacin con terminacin. El grupo sulfhidrilo (-SH), el cual le da a la molcula su capacidad electro donadora, proviene del residuo de cistena. El GSH esta presente dentro de las clulas, mayormente en forma reducida. En una clula en buen estado, el GSSG raramente excede el 10% del total de la clula (Anderson, 1997). El estado del GSH es homeostticamente controlado, esto significa que continuamente esta siendo auto-ajustado con respecto al balance entre la sntesis de GSH (GSH sintetasa), su reciclaje a partir de GSSG (GSH reductasa) y su utilizacin. La sntesis de GSH ocurre en el citoplasma. Primero, la cistena y el glutamato son combinados por la enzima gamma-glutamilcisteinil sintetasa, la disponibilidad de cistena usualmente es factor limitante. La acumulacin excesiva de GSH acta inhibiendo esta enzima, y de esta manera se controla la sntesis de GSH. La segunda reaccin para la sntesis de GSH combina a la gamma-glutamilcistena con la glicina para generar GSH, esta reaccin es catalizada por la GSH sintetasa. El GSH es un cofactor esencial para las enzimas antioxidantes llamadas GSH peroxidasas, las cuales son utilizadas para detoxificar perxidos, por ejemplo: perxido de hidrgeno, generados en las membranas celulares, reaccionando stos con el GSH. Una vez que el GSH ha sido oxidado a GSSG, el reciclaje de GSSG a GSH se lleva a cabo por la enzima glutatin reductasa. Esta enzima emplea como fuente de electrones la coenzima NADPH, la cual proviene principalmente de la ruta de las pentosas fosfato. El GSH tambin contribuye al reciclaje de otros antioxidantes que han sido oxidados como el -tocoferol (vitamina E) y los carotenoides (Kidd, 1997).

GSH

Figura 2. Ruta de oxidacin-reduccin del glutatin (Kidd, 1997).

1.2.2 METALOTIONENAS COMO ANTIOXIDANTES Los grupos sulfhidrilo (SH) del glutatin y su poder reductor determinan el estado redox de las protenas conocidas como metalotionenas (Hidalgo, 1990). Las metalotionenas (MT) constituyen un grupo de protenas ampliamente distribuidas en los organismos. Se caracterizan por tener un alto contenido de grupos -SH provenientes de los aminocidos cistenas capaces de unir metales esenciales y no esenciales. Varios metales, as como una gran cantidad de factores fisiolgicos y patolgicos inducen la sntesis de las MT.

Se ha postulado que las MT pueden tener un papel importante en los procesos de detoxificacin de metales pesados, regulacin del metabolismo del zinc (Zn) y el cobre (Cu), estabilizacin de membranas celulares, activacin de apoenzimas, captura y eliminacin de radicales libres, as como en la modulacin de la expresin de algunos genes. Durante los procesos inflamatorios, la activacin de neutrfilos y macrfagos por citocinas, lleva a la liberacin de radicales hidroxilo y radicales superxido. Para contrarrestar los efectos txicos de los radicales libres, las clulas han desarrollado mecanismos especiales para su inactivacin. Las metalotionenas han mostrado ser sumamente eficientes en la captura e inactivacin de radicales hidroxilo in vitro (Brambila, 1999).

1.3 EL ESTRS OXIDATIVO Y LA PEROXIDACIN LIPDICA Cuando la concentracin de los radicales libres sobrepasa la concentracin de los antioxidantes, las reacciones radicalarias en cadena se hacen presentes, daando lpidos, carbohidratos, protenas y ADN, lo que provoca un dao irreversible a la clula y la conduce a la muerte. A este proceso se le conoce como estrs oxidativo. La peroxidacin lipdica es uno de los efectos del estrs oxidativo y consiste en la deterioracin oxidativa de los lpidos. Las especies reactivas del oxgeno, actan sobre los lpidos de la membrana celular, produciendo as, ciertas sustancias caractersticas como el malonildialdehdo (MDA), los 4-hidroxi-alquenales (4-HDA) y las sustancias tiobarbitricas cido reactivas, entre otras (Leighton, 1998).

1.4 MARCADORES DEL ESTRS OXIDATIVO Ciertos marcadores del estrs oxidativo como la relacin GSH/GSSG, que es utilizada para indicar el grado de estrs oxidativo de la clula y algunos productos de la peroxidacin lipdica como el MDA, los 4-HDA y varias sustancias tiobarbitricas cido reactivas sirven como medida indirecta de lesiones oxidativas (Masnatta, 2003). Algunos otros marcadores del estrs oxidativo son: O2 (radical anin superxido): la cuantificacin de este radical se realiza por quimioluminiscencia. Isoprostanos (marcador de lipoperoxidacin): su formacin es una medida directa de la formacin de lipoperxidos. Se mide por tcnicas de enzimo inmuno anlisis (EIA) NF Kappa B: es un factor de transcripcin nuclear que est involucrado en la activacin de genes que participan en la patofisiologa de la pared vascular y en el desarrollo de la enfermedad aterosclertica. En condiciones de estrs oxidativo, este factor se encuentra activado. Su cuantificacin se realiza habitualmente por tcnicas de movilidad electrofortica (EMSA) Tambin existen marcadores de defensa antioxidante, como son: Glutatin (GSH): la medicin del contenido total de GSH se determina por tcnicas espectrofotomtricas. Superxido dismutasa (SOD) Glutatin peroxidasa (GPx)

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1.5 ENFERMEDADES Y PROCESOS DEGENERATIVOS El envejecimiento es un proceso degenerativo que se relaciona con el ataque de los radicales libres. Muchas enfermedades se relacionan con el estrs oxidativo, como lo es la arterioesclerosis, el cncer, las cataratas, insuficiencia renal aguda, crnica y dilisis, artritis, Parkinson, enfermedad de Alzheimer, hipertensin arterial, enfermedades autoinmunes, cirrosis, insuficiencia heptica y hepatopata alcohlica entre otras. La teora de los radicales libres en el envejecimiento supone que ste resulta de la acumulacin de lesiones orgnicas debidas al ataque de stas especies radicalarias sobre los tejidos. Tambin se ha detectado una disminucin de las concentraciones de antioxidantes e inactivacin de las enzimas detoxificadoras de radicales libres (Guerra, 2001).

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