BOTECNOLOGA

CINTICA DEL CRECIMIENTO

10.1. CRECIMIENTO MICROBIANO:
10.2. MEDICIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO :
10.3. CRECIMIENTO EN CULTIVO INTERMITENTE:
10.4. FACTORES QUE AFECTAN LA RAPIDEZ DE CRECIMIENTO :
10.5. CONSUMO DE NUTRIENTES Y FORMACIN DE PRODUCTO:
10.6. RENDIMIENTO DE BIOMASA Y DE PRODUCTO :
10.7. CULTIVO CONTNUO:
CONCLUSIONES:
APLICACIONES:
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
10.1. CRECIMIENTO MICROBIANO:
El crecimiento de clulas, microorganismos, clulas vegetales y animales, puede mirarse bajo dos aspectos o tipos de
crecimiento reproductivo.
a) Clulas individuales o poblacin de clulas en crecimiento sincronizado para estudio del ciclo de vida celular.
Procesos en laboratorio.
b) Divisin estocstica de la poblacin, o divisin al azar.
La divisin celular se efecta luego de un aumento en el tamao de la clula, duplicacin del ncleo, divisin celular, divisin
citoplasmtica (salva los organismos centicos). De sta manera una clula da nacimiento a dos clulas hijas de tamao
idntico y conteniendo los mismos elementos estructurales y potencialidades.
En el caso de las levaduras, y otros microorganismos, se presenta una variante que es ka gemacin o botn. Se forma una
pequea protuberancia que aumenta progresivamente de tamao, luego se produce la divisin en el ncleo y migra hacia el
botn. Finalmente crece hasta un tamao suficiente y posteriormente se separa formando otra clula idntica a la madre. Las
clulas hijas, sin importar el procedimiento de divisin celular, deben heredar todo el potencial gentico y son idnticas. (1)
10.2. MEDICIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO:
El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo mediante el recuento celular
(microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular
(grado de actividad bioqumica con relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican en dos apartados:
mtodos directos y mtodos indirectos.
Mtodos diretos:
Recuento del nmero de clulas en una cmara Thoma
Peso seco celular
Determinacin de nitrgeno o de protenas totales
Determinacin de DNA
Mtodos i!diretos:
Recuento de colonias en placa
Recuento sobre filtro de membrana
Consumo de oxgeno
Liberacin de dixido de carbono
Concentracin de un enzima constitutivo
Decoloracin de un colorante
ncorporacin de precursores radiactivos
Medida de la turbidez
10.2.1. "E#O #ECO CEL$LAR:
El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado
de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a
que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias. La desventaja de este
mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradacin. Tambin
la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.
El aumento de volumen con la humedad tiene un lmite. Este va creciendo hasta que la clula alcanza un porcentaje de
humedad que corresponde al punto de saturacin de la pared celular, aproximadamente del 30 % para todas las especies en
clculos tcnicos. A partir de ste valor el volumen permanece constante, ya que el agua que penetra en el volumen de las
clulas no produce hinchamiento de la pared celular. Por lo tanto, el valor del 30 % es un valor para utilizarlo prcticamente, si
bien cada especie tiene su punto de saturacin de la pared celular (2). No sucede as con el peso, cuyo valor sigue
aumentando hasta alcanzar el contenido mximo de agua para la especie correspondiente. Como consecuencia de lo
anteriormente expuesto, se definen, para una clula los siguientes pesos especficos:
"E#O E#"EC%&ICO AN'IDRO:
p0 = Peso anhidro (E. 10.2.1.1)
Volumen Anhidro
"E#O E#"EC%&ICO A ') DE '$MEDAD:
pk = Peso al H% de humedad (E. 10.2.1.2)
Volumen al H% de humedad
Cuando la humedad es del 12 %,se llama *eso es*e+,io !or-a..
"E#O #ECO /OL$MTRICO #AT$RADO:
Rs = Peso anhidro (E. 10.2.1.0)
Volumen a H%
Cuando la humedad ' es superior al punto de saturacin de la pared celular.
"E#O #ECO /OL$MTRICO '1MEDO:
Rk = Peso anhidro (E. 10.2.1.2)
Volumen a H%
Siendo, en este caso, la ' inferior al punto de saturacin de la pared celular.

El volumen ocupado por los huecos se determina por desplazamiento de fluidos, por lo que estos no deben reaccionar con la
pared celular para obtener un valor exacto del mismo. Se suelen emplear el agua o el helio, siendo este naturalmente ms
exacto al ser el helio un gas inerte.
El agua, como veremos, es sorbida molecularmente por la pared celular, produciendo una compresin de la misma que
enmascara el valor obtenido, cuyo efecto estudiaremos con la hinchazn. Con respecto al peso especfico real de la clula, o
ms exactamente peso especfico de la pared celular, despus de numerosos estudios, se ha encontrado que, con pequeas
variaciones, se puede considerar para todas las clulas prcticamente igual a 1,56.
10.2.2. AB#ORCIN:
Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partcula en suspensin, parte de la luz es reflejada, parte es
diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de partculas.
La turbidimetra mide la luz dispersada como un decrecimiento de la luz transmitida a travs de la solucin. Con relacin a la
longitud de onda y al tamao de la partcula pueden existir tres tipos de dispersin.
Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos.
Son muy tiles y poderosos pero pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre el peso seco
(contenido macromolecular).
T3rbidi-etr+a: La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin de luz debido a partculas de una suspensin y cuantifica la
luz residual transmitida.
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente
del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en
soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamao celular del
microorganismo.
Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los
tamaos de las clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de microorganismos totales o el
nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de calibracin" con cada tipo de
microorganismo, slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad ptica) con el nmero de microorganismos
totales o con UFC.
&i4. 10.2.251 Absorba!ia e! ,3!i6! de. "eso #eo

Absorbancia = K x Peso Seco (E. 10.2.2.1)
7: constante que vara con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce
un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia(1/W0).
"eso seo: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml-mg/ml).
La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias. Estas
suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer.
Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor
sensibilidad por el bajo nivel de absorcin.
&i4. 10.2.252 Absorba!ia e! ,3!i6! de. "eso #eo
&i4. 10.2.250 Absorba!ia e! ,3!i6! de. N8-ero de Miroor4a!is-os Tota.es
En estos grficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos microorganismos diferentes con igual peso seco tienen
la misma absorbancia, mientras que para el mismo nmero de microorganismos totales la absorbancia de cada suspensin es
distinta.
10.2.0. "E#O '1MEDO:
Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o
centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda
atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de lquido retenida puede ser importante,
por ejemplo, un pellet de clulas bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-
30% del peso, de acuerdo a la forma y deformacin celular.
Para corregir el peso hmedo se determina la cantidad de lquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una
centrifugacin, para ello se utilizan soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio
intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.

10.2.2 /OL$MEN DE CL$LA# EM"ACADA# 9 N1MERO DE CL$LA#:
El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede
llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologas. Para algunos, el crecimiento es la capacidad
para multiplicarse que tienen las clulas individuales, esto es iniciar y completar una divisin celular.
De esta forma, se considera a los microorganismos como partculas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento
en el nmero total de partculas bacterianas. Existen dos formas para determinar el nmero total de microorganismos en una
muestra:
Recuento microscpico de partculas
Recuento electrnico de partculas
Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces de formar colonias debido a que slo se tiene en
cuenta el nmero de microorganismos viables, esto es capaces de crecer indefinidamente. Las determinaciones que se utilizan
son:
Recuento de colonias
Mtodo del nmero ms probable
Para los fisilogos bacterianos, bioqumicos y bilogos moleculares una medida del crecimiento es el incremento de biomasa.
Para ellos, la sntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la sntesis de los componentes celulares es una
medida del crecimiento. Para este grupo la divisin celular es un proceso esencial pero menor que rara vez limita el
crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento es la capacidad del sistema enzimtico para utilizar los recursos del medio y
formar biomasa.
10.2.:.1. REC$ENTO# DIRECTO#:
REC$ENTO MICRO#C"ICO:
Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio de microbiologa.
Para estos recuentos se utilizan generalmente cmaras de recuentos, aunque tambin pueden realizarse a partir de muestras
filtradas en membranas y transparentizadas o teidas con colorantes fluorescentes (Naranja de acridina).
La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener reproductibilidad en el llenado de la cmara con lquido. Otra dificultad
es la adsorcin de las clulas en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas.
Esta adsorcin es crtica en el proceso de dilucin de la muestra y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta
fuerza inica (solucin fisiolgica o medios mnimos sin fuente de carbono).

Las cmaras ms utilizadas son las de 'a;<s.e= y la de "etro,,5'a3sser. La primera tiene la ventaja que puede ser utilizada
con objetivos de inmersin, aunque la mayora de los recuentos se realizan con objetivos secos.
Una de las mayores ventajas del recuento microscpico es brindar informacin adicional sobre el tamao y la morfologa de los
objetos contados.
&i4. 10.2.:.151 C>-ara de re3e!to de "etro,,5'a3sser
Tab.a 10.2.:.151 Re3e!to de Miroor4a!is-os
Ti*o de 3adro
Area
?-
2
@
/o.3-e!
?-.@
&ator
?1A/o.3-e!@
C3adrado tota. 1.00 x 10
-2
2.00 x 10
-5
5.00 x 10
4
C3adrado 4ra!de 4.00 x 10
-4
8.00 x 10
-7
1.25 x 10
6
C3adrado *eB3eCo 2.50 x 10
-5
5.00 x 10
-8
2.00 x 10
7
(E. 10.2.:.1)

1ADi.3i6!: nversa de la dilucin utilizada para llenar la cmara de recuento.
N8-ero de 3adrados o!tados: Cantidad de cuadrados de la cmara que se utilizaron para contar un el nmero de
bacterias.
/o.3-e! de. 3adrado: Volumen de cada cuadrado de la cmara. Depende del tipo de cuadrado en donde se realiz el
recuento. Por ejemplo, cada cuadrado pequeo tiene un volumen de 5 x 10-8 ml (50 m x 50 m x 20 m = 5 x 104 m
3
= 5 x
10-8 ml)
REC$ENTO ELECTRONICO:
Los contadores electrnicos permiten realizar recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de
hongos y microorganismos filamentosos o miceliares. Estos instrumentos constan bsicamente de dos compartimientos
comunicados a travs de un pequeo conducto.
En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia elctrica del sistema, y como el orificio del conducto es
muy pequeo y su resistencia es muy alta, la resistencia elctrica de cada compartimiento es independiente.
El principio de funcionamiento de estos instrumentos es el que se explica a continuacin. Un volumen fijo de una suspensin
bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al otro a travs del pequeo conducto, en un muy breve intervalo de
tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de ste se incrementa debido a que la
conductividad de la clula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y
contados. Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes.
Ciertas bacterias muy pequeas producen cambios en la resistencia que son comparables al "ruido" generado por la
turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse clulas que formen filamentos o agregados o
soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el pasaje de ms de una clula en un breve perodo de
tiempo va a ser tomado como una clula ms grande. Es comn la obstruccin del orificio por microorganismos muy grandes.
10.2.D. MA#A DE $N COM"ONENTE CEL$LAR:
Debido a que la clula no es tan "lista" (no sabe contar hacia atrs en el tiempo) ni tiene el don de la prediccin (los humanos
tampoco, para la mayor parte de las cosas importantes). La bacteria tampoco sabe "contar hacia adelante", ya que el tiempo de
inicio de una ronda de replicacin no guarda una relacin sencilla con la divisin celular previa. (3)
Entonces, cmo se acoplan divisin celular y replicacin cromosmica? Una clave hacia la respuesta a esta pregunta es que
la razn (proporcin) entre orgenes de replicacin y masa celular en el inicio (inmediatamente antes de la replicacin) es igual
para todas las tasas de crecimiento. He aqu un modelo hipottico sobre el mecanismo de coordinacin entre ambos eventos
del ciclo celular:
El sistema de coordinacin detecta la concentracin de orgenes de replicacin; conforme la bacteria crece, esta concentracin
va descendiendo, hasta que se alcanza un valor umbral crtico que desencadena una nueva onda de replicacin. Ello hace que
se doble el nmero de orgenes. Una ulterior ronda no se pone en marcha hasta que el crecimiento haga de nuevo descender
la concentracin de orgenes.
Se tratara, pues, de una especie de reloj biolgico y "oscilador" que usara como medida del tiempo el parmetro de masa
celular, volumen, u otro equivalente, de tal modo que la concentracin crtica de un factor iniciador o la dilucin de un represor
serviran para disparar la replicacin a una concentracin determinada.
Es fcil comprobar en los cultivos bacterianos que cuanto ms rico es un medio, y por lo tanto menor es el tiempo de
generacin (g), mayor es el tamao medio de las clulas:
1. bacterias creciendo en un medio relativamente pobre (supongamos que en este medio g = 60min, C+D=g);
2. si transplantamos una clula recin dividida procedente del cultivo anterior a un medio ms rico (por ejemplo, que
permite un tiempo de generacin g = 35min) podemos observar que:
la primera divisin ocurre C+D (60 minutos) despus; es decir, con un tiempo idntico al que tena en el medio
anterior;
pero como en este medio g = 35min, la iniciacin de una nueva ronda de replicacin ocurre antes de dicha
replicacin celular (es decir, C y D se superponen);
se observa que se alcanza un nuevo equilibrio, con un tamao celular mayor que en el medio pobre, y una masa
de inicio (tras la divisin celular) mayor, alterndose igualmente el tiempo de inicio.
10.2.E. MEDICIONE# &%#ICA#:
Podemos medir el crecimiento microbiano siguiendo diferentes parmetros fsicos, algunos de los cuales se presentan a
continuacin. No debemos olvidar que en condiciones de crecimiento equilibrado todos los parmetros del cultivo evolucionan
de forma proporcional y, por consiguiente, midiendo uno de ellos (el de medida ms fcil) podemos medir el resto.
En este apartado revisaremos los principales mtodos de recuento de microorganismos. Los mtodos para el seguimiento de la
evolucin de un cultivo microbiano pueden clasificarse en directos e indirectos. Los mtodos directos se basan en la medida de
la evolucin del nmero de clulas vivas (tcnicas de plaqueo) o del nmero de partculas (tcnicas microscpicas y de
contadores de partculas). Los mtodos indirectos se basan en la medida de algn parmetro del cultivo que nos permite
deducir informacin sobre la evolucin del nmero de microorganismos. La eleccin de un mtodo de seguimiento del cultivo
en concreto depende de las caractersticas del cultivo y del proceso.
Entre los mtodos principales de recuento de microorganismos podemos destacar:
1. Las tcnicas de recuento microscpico de clulas sin fijar usando microscopa de contraste de fase. Para ello se
cuenta el nmero de partculas en un volumen determinado usando una clula de Petroff-Hauser o de Neubauer
(portaobjetos modificado en el que una rejilla nos permite conocer el volumen que estamos observando). El
procedimiento es rpido y sencillo; pero no permite distinguir clulas vivas inmviles de clulas muertas.
2. Contaje de partculas utilizando sistemas automticos del tipo Coulter-Counter. La operacin de estos sistemas es
sencilla (mtodo de empleo) y permite rpidamente determinar el nmero de partculas presentes en una suspensin
y la distribucin de sus tamaos. El problema es que no distingue entre clulas vivas y muertas ni entre clulas y
agregados de material insoluble presente en la suspensin del cultivo.
3. Tcnicas de recuento en placa, basadas en colocar en un medio de cultivo adecuado un volumen determinado de
muestra. Cada una de las clulas aisladas dar lugar, despus de la incubacin correspondiente, a una colonia de
forma que el nmero de estas nos permitir estimar el nmero de clulas presentes en la muestra plaqueada
(sembrada).
El sistema es fcil de utilizar en el caso de clulas aisladas (no sirve en el caso de hongos filamentosos, por
ejemplo). Puede realizarse sembrando en superficie (extendiendo un volumen dado de muestra sobre el medio de
cultivo slido) o en profundidad (mezclando un volumen dado de muestra con el medio de cultivo antes que
solidifique). Esta ltima opcin permite realizar el recuento de microorganismos microaerfilos que no crecen bien en
la superficie de las placas de cultivo. Para que el sistema de recuento en placa tenga validez estadstica, es
necesario contar entre 30 y 300 colonias con objeto de disminuir el error de la medida.
4. Tcnicas turbidomtricas basadas en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que crecen
microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las partculas en suspensin (clulas) y su
medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un equipo similar al que se emplea en la medida de la absorbancia
de luz por disoluciones coloreadas (colormetro, por ejemplo). Las medidas se hacen a una longitud de onda
adecuada (normalmente en el entorno de 550 nm) y los valores se suelen denominar valores de densidad ptica. La
limitacin de este sistema, por otra parte muy sencillo, es que no distingue clulas vivas de muertas y que
normalmente no es capaz de detectar densidades celulares menores a 10.000 clulas por mililitro.
5. Medida de peso seco. El sistema consiste en la filtracin del cultivo a travs de una membrana que retenga las
clulas y su posterior desecacin hasta peso constante. El sistema, obviamente, no diferencia clulas vivas de
muertas y su sensibilidad es limitada.
!. Medida del ATP. Es una medida relativamente sencilla basada en la emisin de luz por la luciferasa de lucirnaga
(Photimus pyralis) en presencia de O2 y de ATP. De esta forma se puede medir la concentracin de ATP en un
volumen dado de cultivo. Esta medida es interesante porque la concentracin de ATP decae rpidamente en las
clulas muertas, de forma que esa medida indirecta detecta nicamente las clulas vivas.
Los sistemas de medida del crecimiento celular se han adaptado tcnicamente para poder ser utilizados como sistemas on-
line. En una operacin on-line no es necesario extraer la muestra del cultivo para realizar la medida. Esto es muy importante en
el caso de fermentaciones en gran volumen porque permite realizar medidas en tiempo real y disminuye los riesgos de
contaminacin.
Antes de cerrar este apartado hay que sealar que en la naturaleza hay muchsimos ms microorganismos de los que
podemos detectar por la mayora de los sistemas de recuento. De hecho, se estima que en el suelo o en el agua podemos
cultivar nicamente proporciones menores al 1% de los microorganismos vivos. Esto es debido a varias causas entre las que
se cuenta la falta de medios de cultivo adecuado, la dependencia de otros microorganismos para el cultivo debido a procesos
de sintrofa y la oligotrofa (inhibicin por altas concentraciones de nutrientes) que muestran algunos microorganismos.

10.0. CRECIMIENTO EN C$LTI/O INTERMITENTE:
10.0.1. CINTICA DE CRECIMIENTO DE $N C$LTI/O INTERMITENTE:
En este apartado vamos a revisar el estudio de la cintica del crecimiento de microorganismos que crecen en un cultivo
realizado en un volumen finito. a esto se le denomina cultivo batch y podramos traducirlo por cultivo discontinuo por
contraposicin con el cultivo continuo que desarrollaremos ms adelante. El desarrollo de un cultivo discontinuo se ajusta al
representado en la siguiente figura:
&i4. 10.0.151 Desarro..o de 3! C3.tiFo I!ter-ite!te
Se pueden distinguir cuatro fases en el cultivo:
"1# La fase logartmica, en la que el microorganismo se adapta a las nuevas condiciones y pone en
marcha su maquinaria metablica para poder crecer activamente. La duracin de esta fase es
variable y en general es mayor cuanto ms grande sea el cambio en las condiciones en las que se
encuentra el microorganismo.
(2) La fase exponencial.
(3) La fase estacionaria, en la que no hay aumento neto de microorganismos, lo que no significa que no
se dividan algunos, sino que la aparicin de nuevos individuos se compensa por la muerte de otros.
"$# La fase de muerte, en la que el nmero de microorganismos vivos disminuye de forma exponencial
con una constante k que depende de diferentes circunstancias.
En la fase de muerte decimos que el nmero de microorganismos vivos disminuye exponencialmente. Pero qu es un
microorganismo vivo en trminos microbiolgicos?. Consideramos vivo al microorganismo que puede multiplicarse (dividirse), y
muerto al que ha perdido irreversiblemente la capacidad de dividirse. Es importante entender este concepto porque los
microorganismos microbiolgicamente muertos no tienen por qu estar metablicamente inactivos.
10.2. &ACTORE# G$E A&ECTAN LA RA"IDEH DE CRECIMIENTO:
10.2.1. E&ECTO DE LA CONCENTRACIN DE #$#TRATO:
Si [Et] representa la concentracin total del microorganismo en una reaccin y [ES] es la concentracin del complejo
microorganismo-sustrato, entonces [Et] - [ES] representa la concentracin de microorganismo libre para reaccionar con el
sustrato.
Durante una reaccin el microorganismo se unir al sustrato, hasta que todas las molculas se saturen. Usualmente la
concentracin de sustrato [S] es mayor que [ES], por lo que no resulta un factor limitante. La razn de formacin de [ES] est
definida por

[ES] Rate = k1 ([Et] [ES]) [S] (E. 10.2.1.1)

Mientras que la disociacin est definida por
[ES] disociacin rate = k 1 [ES] k2 [ES] (E. 10.2.1.2)

Mientras haya microorganismo disponible, la razn de k1 ir aumentando hasta que se saturen. Si las constantes de reaccin y
disociacin son iguales, la formacin del complejo [ES] se mantiene estable al igual que la velocidad de reaccin. O sea que la
generacin del producto se mantiene constante mientras la concentracin del sustrato no sea limitante. Esto se definira como

[ES] = [E t] [S] (E. 10.2.1.0)
[S] + (k2 + k -1) / k1

La velocidad inicial de la reaccin est determinada por
v = k2 [ES] (E. 10.2.1.2)

Si definimos KM como (k2 + k -1) / k1 y Vmax como k2 [Et], obtenemos que

v = Vmax [S] / KM + [S] (E. 10.2.1.:)

Esta es la ecuacin de Michaelis-Menten.

En un estudio de cintica microbiana se mide la actividad en trminos de producto formado por minuto, a distintas
concentraciones de sustrato. Si la actividad es graficada en trminos de la concentracin inicial del sustrato versus el producto
generado en un lapso de tiempo (velocidad de reaccin), la curva generada es una hiprbole rectangular.
La ecuacin que describe todos los puntos en esa lnea viene dada por v. Esta ecuacin expresa la velocidad para la reaccin
de un solo sustrato y se conoce como la ecuacin de Michaelis-Menten:
V max F = Vmax [S] / (Km + [S]) (E. 10.2.1.D)
F
F = actividad microbiana
V max/2 [S] = concentracin de sustrato
KM Vmax = actividad a [S] infinito
KM = el valor de [S] que da actividad
[S] igual a Vmax

&i4. 10.2.151

Estos ltimos dos parmetros son importantes, porque nos dan informacin directa sobre cun bien el microorganismo se une
al sustrato (KM) y sobre cun bien el microorganismo convierte el sustrato en producto una vez se une (Vmax). De hecho, KM es
la constante de disociacin dinmica del microorganismo con el sustrato, y Vmax es la concentracin molar del microorganismo
por la constante cataltica (Kcat).
EFECTO DE LA TEMPERATURA:
Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento. Esto significa que a determinada temperatura la
velocidad de duplicacin (o la velocidad de crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor. Hay que tener en
cuenta que no todos los microorganismos crecen en el mismo rango de temperaturas:
Tab.a 10.2.251 Te-*erat3ra *ti-a de Crei-ie!to
C.asi,iai6! Ra!4o O*ti-a
Termfilos 25 - 80 C 50 - 60 C
Mesfilos 10 - 45 C 20 - 40 C
Psicrfilo -5 - 30 C 10-20 C
&i4. 10.2.251 E,eto de .a Te-*erat3ra e! e. Crei-ie!to Mirobia!o
La temperatura afecta la estabilidad de las protenas celulares porque induce cambios conformacionales que alteran la
actividad biolgica de estos compuestos, especialmente la de enzimas.
10.2.0. E&ECTO DEL *':
La mayora de los microorganismos crecen en pH cercanos a la neutralidad, entre 5 y 9, cosa que no excluye que existan
microorganismos que puedan soportar pH extremos y se desarrollen. Segn el rango de pH del medio en el cual se desarrollan
pueden dividirse en:
Tab.a 10.2.051 C.asi,iai6! de .os Miroor4a!is-os se48! e. *'
C.asi,iai6! *' eIter!o *' i!ter!o
Acidfilos 1.0 - 5.0 6.5
Neutrfilos 5.5 - 8.5 7.5
Alcalfilos 9.0 - 10.0 9.5
Los microorganismos regulan su pH interno mediante un sistema de transporte de protones que se encuentra en la membrana
citoplasmtica, que incluye una bomba de protones ATP dependiente.
El rango de pH ptimo para el desarrollo de los microorganismos es estrecho debido a que frente a un pH externo muy
desfavorable se requiere un gran consumo de energa para mantener el pH interno.
10.:. CON#$MO DE N$TRIENTE# 9 &ORMACIN DE "ROD$CTO:
De algunos estudios realizados se pudo comprobar que las bacterias son nicamente una pequea parte de la estructura, el
resto es una materia de tipo mucilaginoso secretada por las propias bacterias, llamada matriz extracelular, que absorbe agua y
captura pequeas partculas.
En su interior, el agua fluye llevando a las colonias bacterianas nutrientes disueltos y retirando los productos de desecho, que
frecuentemente son utilizados por otros tipos bacterianos que forman parte de la estructura y que estn convenientemente
distribuidos segn sus intereses.
El flujo de nutrientes no es total en toda la dimensin del biofilm, en las zonas centrales, la llegada de nutrientes est de alguna
manera regulada por la actividad de las situadas en la periferia, de la misma manera que stas estn afectadas por la actividad
metablica de las bacterias que situadas en la zona central de biofilm. Tanto es as, que elementos importantes para el tipo de
metabolismo, como el oxgeno, puede variar su concentracin de forma significativa en centsimas de milmetro. Esto es un
indicativo de que en el mismo biofilm existe diversidad de agentes bioqumicos.
10.D. RENDIMIENTO DE BIOMA#A 9 DE "ROD$CTO:
Un aspecto importante en la operacin de un quimostato es la rata de produccin de biomasa y de sustancias celulares. La rata
de produccin de biomasa por unidad de volumen es el producto de la concentracin de clulas por la rata de dilucin.
Biomasa producida =
sustituyendo el valor de
(E. 10.D51)
Usualmente Ks es pequeo comparado con Sr y a ratas de dilucin inferiores al valor crtico, Dc, la biomasa producida es
aproximadamente igual a D Y Sr. Pero para valores de D cercanos al valor crtico, donde D = max, la expresin:
(E. 10.D52)
Tiende a infinito y la biomasa producida, D X, desciende a cero. Estos cambios en la produccin de biomasa con la rata de
dilucin se muestran grficamente en la Fig. 9 Para la produccin de protena microbiana se debe operar el quimostato a una
rata de dilucin que produzca el mximo de biomasa.
10.E. C$LTI/O CONT%N$O:

Consiste en mantener la poblacin microbiana en fase exponencial de crecimiento. Se utiliza en fermentaciones industriales
que requieren actividad metablica mxima. Los sistemas de cultivo continuo pueden hacerse funcionar como quimiostatos o
como turbidostatos. En un quimiostato la velocidad de flujo de entrada y salida de nutrientes se mantiene a un valor
determinado de tal manera que la velocidad de crecimiento del cultivo queda ajustada a esa velocidad de flujo. En un
turbidostato el sistema incluye un dispositivo ptico que regula la turbidez controlando la velocidad de flujo.
Es un cultivo balanceado mantenido por tiempo indefinido por un sistema de flujo que se compone de:
Una cmara de cultivo de volumen constante a la que llega un suministro de nutrientes, y de la que se eliminan
o separan los productos txicos de desecho (por un dispositivo de rebosadero).
Una vez que el sistema alcanza el equilibrio, el nmero de clulas y la concentracin de nutrientes en la cmara permanecen
constantes, y entonces se dice que el sistema est en estado estacionario, con las clulas creciendo exponencialmente.
Los parmetros a tener en cuenta son:
flujo (,), medido en ml/h
volumen de la cmara de cultivo (F, en ml)
densidad celular en la cmara (I)
factor de dilucin D = f/v (en h
--1
). El inverso de este factor de dilucin es el tiempo medio de residencia (1/D=
TMR)
Existe una prdida de clulas por el rebosadero: -dx/dt = xD. El crecimiento bruto es dx/dt = xm. Por lo tanto, el crecimiento
neto es dx/dt = xm - xD = x(m - D). Si logramos que el coeficiente de crecimiento (m ) se haga igual al factor de dilucin (D),
entonces dx/dt = 0, y por lo tanto la concentracin de clulas se hace constante (x= x). El cultivo se encuentra entonces en
estado dinmico de equilibrio. Las prdidas de clulas por drenaje se compensan con las ganancias por crecimiento.
Existen dos tipos de procedimientos para obtener cultivos continuos:
de control interno: turbidostato;
de control externo: quimiostato
10.E.1. TEOR%A DEL G$IMIO#TATO:
Se entiende por tal, el reactor tanque agitado en el que se asume bsicamente que:
El volumen de medio es constante
El caudal de salida es igual al de entrada
La concentracin de salida es igual a la concentracin en el interior del reactor
El efecto de la concentracin del nutriente sobre el crecimiento total es fcil de comprender, ya que gran parte del nutriente se
convierte en material celular, y por tanto, si se limita la cantidad de nutriente se convierte en material celular. La razn del
efecto de las concentraciones muy bajas de nutriente sobre el ritmo de crecimiento es ms incierta. Una opinin es que a estas
bajas concentraciones de nutriente ste no puede ser transportado a la clula a una velocidad suficiente para satisfacer todas
las demandas metablicas de nutriente. Es presumible que no todos los lugares transportadores estn ocupados. Esta
propiedad de alterar el ritmo de crecimiento mediante la concentracin del nutriente se utiliza en el aparato de cultivo continuo
llamado quimiostato. (4)
La cosecha mxima es tambin una funcin de la especie de organismo y de su eficacia en convertir nutrientes en masa
celular, y de las condiciones ambientales, tales como el pH y la y temperatura. El papel de la fuente de energa en el control de
la cosecha mxima se estudiar ms adelante.
En la industria de la levadura, la levadura del, pan crece en melazas como fuente de carbono y energa. Se ha descubierto que
si se aaden todas las melazas de una vez, parte del exceso de azcar es convertido el alcohol por las clulas y, por tanto, es
desaprovechado.
En las fases tempranas del crecimiento exponencial, cuando las densidades celulares son bajas, slo es necesaria una
pequea cantidad de azcar para soportar el ritmo mximo de crecimiento. Pero a medida que transcurre el tiempo, aumenta la
densidad y se precisa mayor cantidad de azcar. Lo que se hace en la prctica es aadir las melazas a un ritmo exponencial
paralelo al ritmo de crecimiento exponencial de la levadura.
Los antibiticos y otros agentes microbianos afectan al crecimiento de diversas maneras, y un estudio de la accin de estos
agentes en relacin con la curva de crecimiento es una ayuda considerable en la comprensin de sus modos de accin. La
manera ms precisa de observar el efecto de un antibitico es aadirlo en un grado de concentracin inhibidora a un cultivo en
crecimiento exponencial.
El quimiostato es un dispositivo de cultivo continuo en el cual tanto la densidad de la poblacin como el ritmo de crecimiento
son controlados por el investigador. Para la regulacin del quimiostato se utilizan dos elementos: el ritmo de flujo y la
concentracin de un nutriente limitante, como una fuente de carbono, de energa o de nitrgeno, o factor de crecimiento. Tal
como a concentraciones bajas de un nutriente es rpidamente consumido por el crecimiento. En los cultivos estticos el
crecimiento es proporcional a la concentracin de dicho nutriente. Sin embargo a estas bajas concentraciones el nutriente se
ha consumido, pero en el quimiostato la adicin continua de medio fresco que contiene el nutriente limitante permite el
crecimiento continuo. Puesto que a bajos niveles de nutrientes utilizados el nutriente limitante es rpidamente asimilado, su
concentracin en el quimiosato es siempre cero. Los quimiostatos han encontrado aplicacin en una gran variedad de
procedimientos de investigacin, especialmente en los casos en que se desea las poblaciones naturales a menudo crecen
lentamente o a concentraciones bajas de nutriente, los quimiostatos han sido especialmente tiles como modelos de
laboratorio de ecosistemas microbianos naturales.
10.E.2. EC$ACIONE# &$NDAMENTALE# DEL C$LTI/O CONTIN$O:
El estudio del crecimiento de la poblacin se ha limitado a los cultivos cerrados o estticos en los que el crecimiento se produce
en un volumen fijado en un medio de cultivo que es alterado por las acciones de los organismos en crecimiento y que, por ello,
ya no es apto para el crecimiento. En los estadios tempranos del crecimiento exponencial en los cultivos estticos las
condiciones pueden permanecer relativamente constantes, pero en los estadios tardos suelen ocurrir cambios drsticos. Para
muchos estudios es deseable conservar los cultivos en ambientes constantes durante largos periodos de tiempo, y esto se
logra utilizando cultivos continuos. Un cultivo continuo es e4sencialmenye un sistema de flujo de volumen constante al que se
aade medio continuamente y del que, gracias a un dispositivo de rebosamiento, se elimina el exceso continuamente. Una vez
que este sistema est en equilibrio, el nmero de clulas y el nutriente permanecen en un status constante y todo el sistema se
dice que est en estado de equilibrio. Un parmetro clave de un dispositivo de cultivo es el ritmo de dilucin, D que se define
como:
D= ritmo de flujo = F (E. 10.E.251)
Volumen V
a. E#TADO NO E#TACIONARIO:
La muerte de una poblacin a una velocidad logartmica hace reversible la cuenta de la poblacin a la misma velocidad de
aceleracin con que se efectu el crecimiento inicial. Uno de los problemas en bacteriologa es prevenir este fenmeno
asumiendo la conclusin lgica relacionada con la muerte del cultivo. Muchos de los mtodos y las tcnicas de cultivo de
coleccin se relacionan con el mantenimiento de un nmero razonable de clulas viables durante el almacenamiento. Las
bacterias con una activa fase de muerte deben ser transferidas a medios frescos en intervalos frecuentes. Es comn perder un
cultivo cuando no se atiende esta observacin. La liofilizacin y otras tcnicas similares son mtodos prcticos para prevenir el
dao metablico que se presenta en las clulas inactivas. El final de la fase de muerte puede ser simplemente la estabilizacin
de esa poblacin en una cuenta baja. Las infecciones crnicas, en donde el agente etiolgico (causante) permanece latente en
un tejido o en un nmero muy bajo, sin manifestar la patologa activa, pueden ser consideradas como ejemplo de una fase de
muerte que se ha estabilizado de esta manera. Un ejemplo sera la presencia del bacilo de la tifoidea en la vescula biliar o en
otro rgano del transmisor. Algunas bacterias, especialmente en los medios diluidos, permanecern en un bajo nivel de
poblacin en medios artificiales durante aos, sin morir en su totalidad y conservarn la movilidad.
b. E#TADO E#TACIONARIO:
En algunas ocasiones es difcil determinar la razn del cambio de una fase logartmica a una estacionaria, aunque han surgido
por ah algunas explicaciones que no son muy satisfactorias. Sin embargo, el anlisis de muchos cultivos diferentes nos
muestra que existen dos explicaciones muy adecuadas. Uno o ms nutrientes se agotan, o bien existe una acumulacin de
productos txicos. Cualquiera de estos fenmenos que ocurra primero ser la causa de la fase estacionara, dependiendo del
caso en particular. El txico puede ser tan slo un cambio a un cido orgnico o a una base que altere el pH en un rango no
tolerable por esa bacteria. En ciertos medios, Enterobacter eleva el pH demasiado y el Bacillus subtilis se queda sin alimento.
Por supuesto, ambos factores pueden operar al mismo tiempo. Algunas bacterias tienen fases estacionarias muy cortas y
rpidamente empiezan a morir. Otras permanecen en la fase estacionaria por semanas.
Una baja poblacin, o un yacimiento, no son causas de la fase estacionaria. Es ms, los cultivos mixtos de ciertas especies
logran obtener poblaciones ms grandes que los cultivos puros. Esto es a menudo una sorpresa para los bacterilogos que
slo trabajan con cultivos puros. Uno debe acostumbrarse a la idea de que un cultivo de Escherichia coli se estabilizar en un
periodo muy corto en una poblacin de 4 millones de clulas por mililitro y tendr que pensar que esto es vlido para la
mayora de bacterias que pueden encontrarse en un medio de cultivo. Los medios ambientes naturales, con grandes
poblaciones bacterianas, sobrepasan estas cifras considerablemente. Por ejemplo, el resumen presenta cuantas de una
mezcla de especies bacterianas en niveles que van desde los 30 a los 60 millones por gramo.
Esto se entiende fcilmente si comprendemos que las diversas especies tienen diferentes requerimientos para el crecimiento,
diferentes nutrimentos y diversas tolerancias a los factores ambientales. A pesar de ocupar el mismo espacio, en general, cada
especie vive su propio nicho ecolgico. No es enteramente independiente de otras especies, pero s est limitada en nmero
por sus propias demandas nutricionales y a las reacciones hacia los productos de desecho, y no por la competencia por el
espacio fsico con las otras especies.
RELACIONE# MATEMJTICA#:
El parmetro ms importante del quimiostato es el ritmo de dilucin o de rebosamiento, que es el ritmo al que el medio fluye a
travs del sistema. El ritmo de dilucin determina el ritmo de divisin celular de la poblacin, y alterando el ritmo de flujo se
puede alterar directa y rpidamente el ritmo de crecimiento lo que hace del quimiosato un dispositivo tan til. Cuando un
volumen de medio de cultivo ha pasado a travs del quimiosato, la poblacin se ha doblado ya que la poblacin celular ha
continuado siendo la misma. El tiempo de generacin es pues el tiempo que necesita un volumen de medio de cultivo para
desplazarse a travs del recipiente. (5)
Sin embargo, el tiempo de generacin en el quimiostato no es exactamente el mismo tiempo de generacin en un cultivo
esttico con crecimiento exponencial. Ello es debido a que en el cultivo esttico cada clula formada se divide y produce una
descendencia, mientras que en el quimiostato algunas de las clulas son arrastradas antes de que puedan dividirse, de manera
que el ritmo real de divisin celular es mayor que el ritmo de poblacin de clulas. Debemos que distinguir entre el tiempo de
generacin en cultivo y el tiempo de generacin celular. En un cultivo esttico con crecimiento exponencial el tiempo de
generacin celular es equivalente al tiempo de generacin del cultivo y viene dado por 1/k. En un quimiostato, el tiempo de
generacin en cultivo es la inversa del ritmo de crecimiento instantneo de un cultivo, el cual se expresa por la siguiente
ecuacin diferencial:
dx = x = 1 dx (E. 10.E.252)
dt x dt
Donde x es el nmero de clulas o la concentracin del organismo (miligramos de peso seco por mililitro) a un tiempo t, y es
el ritmo o velocidad de crecimiento instantneo. Con la integracin de la ecuacin anterior entre los lmites xo y xt, se obtienen
la siguiente ecuacin:
ln xt -ln xo = t (E. 10.E.250)
o, como se expresa generalmente la solucin,
xf = xo e
t
(E. 10.E.252)
Puesto que xf es tambin igual a 2
kt
xo, la relacin entre k y puede derivarse combinando las dos ecuaciones:
xo e
t
=

2
kt
xo (E. 10.E.25:)
Suprimiendo los factores comunes, tomando logaritmo natural y despejando , se obtiene:
= k(ln 2) = 0.693 k (E. 10.E.25D)
As, se puede calcular , el ritmo de crecimiento instantneo para un quimiostato, multiplicando k por 0.693.
Volviendo al quimiostato, podemos ver que , el ritmo de crecimiento instantneo, es igual al ritmo de dilucin, ya que el ritmo
al que salen las clulas est exactamente equilibrado con el ritmo de crecimiento. El ritmo de dilucin se expresa como el ritmo
de flujo en mililitros por hora dividido por el volumen del cultivo del quimiostato. As, si el volumen es 500 ml y el ritmo de flujo
es 5 ml/h, el ritmo de dilucin es 5/500 0.01 por hora. Esto significa que cada 100 horas el volumen del quimiostato sera
repuesto y el ritmo de crecimiento instantneo sera 100 horas.
Para entender el principio por el cual la densidad de poblacin y el ritmo de crecimiento estn controlados en el quimiostato,
debemos reconsiderar el efecto de la concentracin de nutriente en el crecimiento, expresado cualitativamente.
La relacin entre y la concentracin de un nutriente limitante se describe empricamente por la ecuacin:
= max s (E. 10.E.25E)
ks + s
Donde s es la concentracin del sustrato, max es el ritmo de crecimiento especifico mximo ( es decir, el valor mximo de a
niveles de saturacin de sustrato) y k, es una constante de saturacin, numricamente igual a la concentracin de sustrato en
la que = max. La ecuacin anterior es formalmente equivalente a la ecuacin de Michaelis-Menten utilizada en los anlisis
enzimticos cinticos. Se pueden calcular los parmetros desconocidos max y k, representando grficamente 1/v sobre el eje
y en funcin de 1/s sobre el eje x. Se obtendr una lnea recta que intercepta el eje y, y el valor en el punto en que lo intercepta
es 1/ max. La curva de la lnea ks / max, y puesto que max es conocido, se puede calcular ks. En general, los valores de k, son
muy bajos.
La relacin entre el ritmo de crecimiento y el ritmo de consumo de sustrato pueden expresarse como:
dx = Y ds (E.10.E.25K)
dt dt
donde Y, la constante de rendimiento, es:
Y = peso de las bacterias formadas (E. 10.E.25L)
Peso de sustrato consumido
La clave del modo de accin del quimiostato es la composicin del medio del depsito. Todos los componentes de este medio
se hallan en exceso, excepto uno, el sustrato limitante del crecimiento. El smbolo para la concentracin de este sustrato en el
depsito es SR, mientras que el del mismo sustrato en el recipiente de cultivo es s. Tomando en cuenta las ecuaciones
anteriores, pueden hacerse las siguientes consideraciones.
Cuando un quimiostato es inoculado con un pequeo nmero de bacterias y el ritmo de dilucin no excede de un cierto valor
crtico (Dc), el nmero de organismos empezar a aumentar. El aumento es dado por:
dx = crecimiento salida (E. 10.E.2510)
dt
o bien:
dx = x Dx (E. 10.E.2511)
dt
Puesto que inicialmente > D, dx/dt es positivo. Sin embargo, a medida que aumenta la densidad de poblacin decrece la
concentracin del sustrato limitante del crecimiento, causando un descenso de . Si D se mantiene constante, se alcanzar un
estado de equilibrio en el que = D y dx/dt = 0.
Los estados de equilibrio slo son posibles cuando el ritmo de dilucin no excede de un valor crtico Dc. Este valor depende de
la concentracin del sustrato limitante del crecimiento en el depsito (SR).
Dc = max (SR/ ks + SR) (E. 10.E.2512)
As, cuando SR >> ks (que es el caso general), pueden obtenerse estados de equilibrio a ritmos de crecimiento cerca de max .
El cambio en s viene dado por:
ds = SRD sD x (E. 10.E.2510)
dt Y
Cuando se ha alcanzado un estado de equilibrio, ds/dt = 0
Un estado de equilibrio se alcanza automticamente cuando D < Dc.
A partir de las ecuaciones 10.7.4-5 y 10.7.4-6 pueden calcularse los valores del estado de equilibrio de la concentracin de
organismo (x*) y del sustrato limitante del crecimiento (s*):
x* = Y (SR s) (E. 10.E.2512)
s* = ks (D/ max D) (E. 10.E.251:)
Estas ecuaciones, una vez que sus valores son conocidos, los valores del estado de equilibrio de x* y s* pueden ser
determinados de antemano para cualquier ritmo de dilucin. Como puede verse a partir de la ecuacin 10.7.4-8, la
concentracin de sustrato del estado de equilibrio (s*) depende del ritmo de dilucin (D) aplicado y es independiente de la
concentracin del sustrato en el depsito (SR) . As, D determina s* y s* determina x*.
Como se ha visto, los lmites dentro de los cuales el ritmo de dilucin controla el ritmo de crecimiento son muy amplios, aunque
tanto a ritmos de dilucin muy bajos como muy altos se rompe el estado de equilibrio. A elevados ritmos de dilucin, cerca de
Dc el organismo no puede crecer bastante deprisa para mantener el mismo ritmo que la dilucin, y el cultivo sale del
quimiostato. En el otro extremo, a ritmos de dilucin muy bajos, una fraccin grande de clulas puede morir de inanicin ya que
el nutriente limitante no es aadida con suficiente rapidez para permitir el mantenimiento del metabolismo celular.
Probablemente, hay una cantidad mnima de nutriente necesaria para mantener estructura y la integridad celular, llamada
energa de mantenimiento, y este nutriente no est disponible para la biosntesis ni para el crecimiento celular. As, a ritmos
muy bajos de dilucin es probable que no se mantengan las condiciones del estado de equilibrio y la poblacin ser eliminada
lentamente del quimiostato.
La densidad celular en el quimiostato es controlada por el nivel del nutriente limitante. Si la concentracin de este nutriente en
el medio que entra es aumentada, permaneciendo constante el ritmo de dilucin, la densidad celular aumentar aunque el
ritmo de crecimiento continuar siendo el mismo. As, pues, ajustando el ritmo de dilucin y el nivel de nutriente, el
experimentador puede obtener a voluntad una variedad de densidades de poblacin de diversos ritmos de crecimiento.
10.E.0. RA"IDEH CINTICA DE DIL$CIN:
De la cintica se conoce que uno de los modelos ms ampliamente aceptados en Enzimologa es el de Michaelis-Menton,
quienes han propuesto una ecuacin para ligar la velocidad de formacin de producto, con la mxima velocidad de produccin,
V, con la concentracin del sustrato, S, y con la constante de Michaelis-Menten (que a su vez relaciona la constante de
equilibrio de la disociacin del complejo enzima-sustrato con las constantes de velocidad de formacin de producto y de
formacin del complejo enzima-sustrato) km:
v = VS/(km + S) (E.10.E.051)
En los procesos de Biomasa, el producto de la fermentacin es precisamente la masa molecular, en consecuencia v es
equivalente a la velocidad de crecimiento especfico , h
1
, y V equivalente a max de tal manera que el modelo propuesto por
Monod es el siguiente:
= max S/(Ks + S) (E. 10.E.052)
Donde Ks es la constante de saturacin, g/l y numricamente es igual a S para cuando = max.
10.E.2 "ROD$CTI/IDAD:
Los cultivos continuos tienen cierta ventaja con relacin a los cultivos por lotes. Pueden operar por largos perodos de tiempo y
tener niveles de crecimiento constantes, la productividad puede ser mayor, en comparacin al mtodo por lotes, se maximiza la
conversin y se reducen los problemas de inhibicin del sustrato por el mantenimiento de sustrato residual de baja
concentracin.
Tambin tiene inconvenientes, lo cual consiste en la sofisticacin tcnica y control, costo de instalacin inicial alto debido al
suministro continuo de nutrientes estriles y la continua separacin de productos.
10.E.: DETERMINACIN DE LA# CON#TANTE# CINTICA# 9 DE RENDIMIENTO:
Se sugiere que cuando el crecimiento se realiza a gran velocidad y cuando la concentracin de sustrato es alta, se pueden
considerar las siguientes relaciones:
Y = -dx (E. 10.E.:51)
ds
o lo que es lo mismo
dx = Y ds (E. 10.E.:52)
dt dt
Sin embargo hay ocasiones que el sustrato se consume tambin en mantenimiento del sistema, tal es el caso de la glucosa
que puede emplear un microorganismo para respirar pero no para la multiplicacin. Por este motivo a bajas concentraciones la
expresin de rendimiento debe incluir un factor que contabilice el sustrato limitante que se consume en mantenimiento y la
ecuacin sugerida es la siguiente:
rx + dx =- Y ds (E. 10.E.:50)
dt dt

donde :
r = requerimiento, para mantenimiento especfico de sustrato limitante por unidad de masa molecular.
10.E.D DE#/IACIONE# DE LA COND$CTA IDEAL DEL G$IMIO#TATO:
Monod encontr que cuando se opera con el Quimiostato y existe un solo sustrato limitante, tiene vigencia satisfactoria un
modelo muy simple que se parece al modelo de Michaelis-Menten de la cintica enzimtica. El sustrato limitante se caracteriza
porque al modificar su concentracin se afecta a la formacin de productos. Al consumo de sustrato por el microorganismo, y al
crecimiento mismo del microorganismo. El modelo propuesto por Menod ha sido comprobado experimentalmente razn por la
que tiene mucha aceptacin. Con este modelo se describen muy satisfactoriamente los procesos de Biomasa de tal manera
que se utiliza como criterio de diseo en Fermentacin Continua.
10.E.E MODI&ICACIONE# A LA TEOR%A BJ#ICA DEL G$IMIO#TATO:
Cuando X aumenta.- Considerando las ecuaciones anteriores, se observa que al aumentar X, la concentracin de sustrato S
tiene que disminuir, lo cual implica que debe disminuir. Lo que se ha asumido significa que, S = 0. Pero la disminucin de a
su vez implica un efecto contrario al supuesto al principio.
Cuando X disminuye. mplica tambin que S = 0.
Al disminuirse la concentracin de microorganismos aumenta la concentracin de sustrato S, por lo que debe aumentar con
lo que se produce el efecto contrario al que se supuso.
Cuando aumenta F. Considerando que el factor de dilucin D es la relacin entre caudal de alimentacin y el volumen de
sustrato fermentescible y debiendo permanecer V constante en razn de o asumido para definir el Quimiostato, el nico
parmetro de operacin es F.
F = VD (E. 10.E.E51)

Esto es que al aumentar el caudal F, aumenta el factor de dilucin D provocndose el lavado del reactor, es decir hay
disminucin de la concentracin celular X.
De los anlisis realizados se puede concluir que es conveniente que la concentracin del sustrato de salida S sea lo ms bajo
posible, pero en cambio que la velocidad de reproduccin o de crecimiento del microorganismo X sea lo ms alto posible. Sin
embargo se debe tambin puntualizar que:
Si el sustrato es barato puede lograrse la mxima conversin lo cual permite trabajar con valores de D
correspondientes al mximo valor X
Si el sustrato es costoso, no se puede trabajar con el factor de dilucin D demasiado alto con lo que X es
menor que el valor ptimo.
10.E.K /ENTAMA# DEL C$LTI/O CONTIN$O #OBRE EL C$LTI/O "OR LOTE#:
Las ventajas de este tipo de cultivo se las puede enumerar de la siguiente manera:
Opera por periodos largos; tiempos muertos bajos
Costos de operacin y trabajo bajos
El cultivo se mantiene con coeficientes de crecimiento constantes
Crecimiento balanceado, composicin celular constante
Generacin de biomasa constante como productividad y conversin
Volumen de reactor reducido en comparacin a la productividad similar en proceso por lotes
10.E.L DE#/ENTAMA# DEL C$LTI/O CONTIN$O #OBRE EL C$LTI/O "OR LOTE#:
Las desventajas de este tipo de cultivo se las puede enumerar de la siguiente manera:
Alto costo por alta calidad de equipos y accesorios
Requiere gran reservorio para almacenamiento de MDUM o suministro continuado de sustrato.
Esterilizacin continuada, separacin continuada de producto y niveles de purificacin
Biosensores sofisticados y automatizacin computarizada para operacin ptima
Se incrementa el riesgo de contaminacin debido a la amplia operacin
Posibilidad de mutacin, incremento de FAGOS por los cambios genticos debido a la presencia de
plasmidios e incremento de estos
La conversin total de sustrato exige sistema de multiniveles, inmovilizacin celular o recirculacin celular
que encarece el costo de operacin.
10.K A"LICACIONE# DEL C$LTI/O CONTIN$O:
En todos los sistemas de cultivo continuo las densidades de poblacin son mantenidas a niveles considerablemente bajos que
los que se presentan en la fase estacionaria del crecimiento. El tipo ms simple de sistema de cultivo continuo que hay que
comprender es el llamado turbidostato. En este sistema la turbidez del cultivo es medida fotoelctricamente y la seal elctrica
se utiliza para controlar una bomba que aade medio de cultivo a fin de diluir el cultivo a un ritmo justamente suficiente para
equilibrar el aumento de turbidez debido al crecimiento. El dispositivo est ajustado de tal modo que una turbidez determinada
puede ser mantenida indefinidamente. Si se desea poca turbidez, el medio se aade ms rpidamente, mientras que si se
desea un alto grado de turbidez el medio se aade ms lentamente. El medio utilizado contiene todos los nutrientes esenciales
en exceso, de forma que la poblacin crece en una manera similar a la fase exponencial. En el turbidostato el ritmo de
crecimiento no es controlado por el investigador, sino por condiciones internas del sistema tales como las condiciones
ambientales utilizadas, la especie de organismo y el medio.
Los turbidostatos son dispositivos tiles para proporcionar aportaciones continuas de clulas en estados fisiolgicamente
controlados, y pueden ser especialmente importantes en la microbiologa industrial, campo en el que los procesos de
produccin continua suelen ser ms econmicos.
En otro tipo de dispositivo de cultivo continuo, el quimiostato, tanto la densidad de poblacin como el ritmo de crecimiento son
controlados por el investigador. Para la regulacin del quimiostato se utilizan dos elementos: el ritmo de flujo y la concentracin
de un nutriente limitante, como una fuente de carbono, de energa o de nitrgeno, o factor de crecimiento.
CONCL$#IONE#:
1. El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo mediante el recuento celular
(microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad
celular (grado de actividad bioqumica con relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican en dos
apartados: mtodos directos y mtodos indirectos.
2. El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el
secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de
muestra, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias. La
desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el secado y puede existir
alguna degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente
tiene una humedad relativa alta.
3. Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos
bacterianos. Son muy tiles y poderosos pero pueden llevar a resultados errneos. Principalmente, dan informacin sobre
el peso seco (contenido macromolecular).
4. El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se
puede llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologas. Para algunos, el crecimiento es la
capacidad para multiplicarse que tienen las clulas individuales, esto es iniciar y completar una divisin celular.
5. Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento. Esto significa que a determinada temperatura
la velocidad de duplicacin (o la velocidad de crecimiento poblacional) de los microorganismos es mayor. Hay que tener
en cuenta que no todos los microorganismos crecen en el mismo rango de temperaturas.
6. El efecto de la concentracin del nutriente sobre el crecimiento total es fcil de comprender, ya que gran parte del
nutriente se convierte en material celular, y por tanto, si se limita la cantidad de nutriente se convierte en material celular.
La razn del efecto de las concentraciones muy bajas de nutriente sobre el ritmo de crecimiento es ms incierta. Una
opinin es que a estas bajas concentraciones de nutriente ste no puede ser transportado a la clula a una velocidad
suficiente para satisfacer todas las demandas metablicas de nutriente. Es presumible que no todos los lugares
transportadores estn ocupados. Esta propiedad de alterar el ritmo de crecimiento mediante la concentracin del nutriente
se utiliza en el aparato de cultivo continuo llamado quimiostato.
A"LICACIONE#:
El conocimiento de la cintica de crecimiento de los microorganismos es de sumo inters en el campo industrial, ya que
permite conocer la manera de reproduccin de las bacterias, permitiendo desarrollar mtodos de catalizacin e inhibicin de
stos y de prevencin en caso de que el crecimiento sea en una forma desproporcionada y peligrosa. Adems este
conocimiento ayuda en diferentes campos, como por ejemplo, el alimenticio, en el cual el conocimiento de la cintica de
crecimiento microbiano es un parmetro que indica la forma en que se deben colocar los preservantes en un producto
determinado. En general las aplicaciones de ste tema son innumerables y ya se han detallado con bastante amplitud en
puntos anteriores.
RE&ERENCIA# BIBLIONRJ&ICA#:
CITA# BIBLIONRJ&ICA# :
(1) VAROS, Los Microorganismos, ed. Crculo de Lectores, cuarta edicin, Barcelona, 1998, p.576.
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BIBLIONRA&%A:
Aurelio Hernndez Muoz, Microbiologa, Editorial Paraninfo, Madrid, 1997.
VAROS, Enciclopedia Autodidctica, Editorial Quillet, Barcelona, 1998.
VAROS, Los Microorganismos, ed. Crculo Lectores, 4ta edicin, Barcelona, 1998
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La cintica de crecimiento microbiano constituye una de las operaciones ms
utilizadas por la ingeniera alimentaria y la biotecnologa, por lo tanto, es
menester conocer los diferentes mecanismos de crecimiento, as como, la forma
de cuantificacin de los mismos, sus formas de aplicacin, las ventajas y
desventajas de los diferentes mtodos, y sobre todo el monto econmico de cada
uno de ellos. Por tanto, el siguiente documento trata de proporcionar una
informacin general acerca de los diferentes mecanismos de reproduccin
bacteriana, as como de dar una idea acerca de la utilizacin de los mismos, sus
caractersticas, especificaciones, y un anlisis de las ventajas y desventajas de
cada uno de ellos.
DE#CRI"TORE#:
/Crecimiento Microbiano/Cintica de Crecimiento/ Medicin del Crecimiento
Microbiano/Cultivo ntermitente /Cultivo Continuo /
TRABAMO REALIHADO "OR:
Arias Ediso! 5 Lastra Mor4e
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