Biologia 11: Crescimento e Renovao celular o DNA e Sntese proteica

Experincias: Experincia de Griffith: Aps a descoberta de Friedrich Miescher em 1869 da existncia do DNA, Griffith realizou uma srie de experincias em 1928 que vieram a desenvolver a importncia do DNA para a clula. A partir das bactrias que causam a pneumonia (Strepococcus Pneumoniae) que se podem dividir em duas estirpes, S (lisas, capsuladas e virulentas) e R (rugosas, no capsuladas e no patognicas), Griffith procedeu da seguinte forma: Lote 1: O rato foi infetado com a estirpe virulenta e morreu. Lote 2:O rato foi infetado com a estirpe no virulenta e sobreviveu. Lote 3:O rato foi infetado com a estirpe virulenta morta pelo calor e sobreviveu. Lote 4:O rato foi infetado com a estirpe no virulenta juntamente com a virulenta morta pelo calor e morreu. Surgiam bactrias tipo S vivas no rato. Griffith tirou concluses acerca do sucedido no lote 4. A experincia sugeria que as bactrias do tipo S conseguiam transmitir a sua virulncia s do tipo R. No entanto, o cientista no foi capaz de explicar como. Assim sugeriu a existncia de um princpio transformante, que permitiria que as S transmitissem informao s R, de modo a que as ltimas pudessem desenvolver cpsula. Isto foi desenvolvido na experincia de Avery.

Experincia de Avery: Na sequncia dos trabalhos de Griffith, Avery tentou descobrir qual seria a substncia que transmitia a informao entre as bactrias do tipo S e R. Avery suspeitava de que o principio transformante era o DNA. Assim, cultivou 5 colnias de bactrias tipo R em meio propcio. Sendo a A a de controlo, na B misturou DNA das bactrias tipo S, na C adicionou DNA das bactrias tipo S juntamente com DNAase, na D juntou DNA das bactrias tipo S juntamente com RNAase e na E acrescentou DNA das bactrias tipo S juntamente com Protease. Nas colnias B, D e E surgiram colnias de bactrias tipo S. Assim, Avery chegou concluso que o princpio transformante era, efetivamente, o DNA. Experincia de Hershey e Chase: Hershey e Chase utilizarem em 1953 bacterifagos para provar definitivamente que o suporte fsico da informao gentica o DNA. Os bacterifagos so vrus, ou seja so seres exclusivamente constitudos por DNA ou RNA e uma cpsula de natureza proteica. Tendo em considerao que: o o o os vrus no penetram nas cpsulas das bactrias. as protenas da cpsula dos vrus no tem fsforo, mas enxofre. O DNA tem fsforo, mas no enxofre.

Marcou-se dois lotes de bacterifagos radioactivamente. No primeiro marcou-se o enxofre das protenas e no segundo o fsforo do DNA. O Objetivo destas marcaes era ser possvel seguir os trajetos de cada uma das substncias. Assim, foi possvel descobrir que o DNA viral toma o comando da clula bacteriana, enquanto que as protenas no chegam a penetrar na cpsula.

Composio qumica dos cidos nucleicos, DNA e RNA:

Base Azotada

Grupo Fosfato

Pentose

Cada nucletido constitudo por uma base azotada (Adenina, Guanina, Citosina, Timina, Uracilo), uma Pentose (Desoxirribose ou Ribose) e por um grupo fosfato.

As bases azotadas podem dividir-se em: Bases pricas: Adenina e Guanina, que formam um anel duplo (sendo ambas presentes no RNA e DNA) Bases Pirimdicas: Uracilo (apenas presente no RNA), Timina (apenas presente no DNA) e Citosina (presente em ambos) que formam um anel simples. Os nucletidos formam ligaes entre si, formando cadeias polinucleotdicas. Estas ligaes estabelecem-se entre o grupo fosfato de um dos nucletidos e o carbono 3 da pentose do nucletido seguinte. Chamam-se ligaes fosfodister. Atravs da anlise do DNA de vrios organismos por Chargaff foi possvel chegar-se concluso de que a percentagem de Adenina igual de Timina e que a de Guanina igual de Citosina. Assim, a percentagem de Purinas igual de Pirimidinas. A partir destas investigaes e da descoberta de Rosalind Franklin, Watson e Crick apresentaram na Universidade de Cambridge o Modelo de Dupla Hlice do DNA. Estrutura do DNA: Modelo de Dupla Hlice do DNA: Os nucletidos que formam uma cadeia polinucleotdica ligam-se entre si atravs de ligaes covalentes (do tipo fosfodister) que se estabelecem entre o grupo fosfato e os carbonos 3 e 5 das pentoses. As cadeias designam-se por antiparalelas uma vez que a extremidade 5 de uma cadeia corresponde a extremidade 3 da outra cadeia. Entre as bases azotadas verifica-se uma ligao por pontes de hidrognio. Ou seja a Adenina emparelha com a Timina (por duas pontes de hidrognio) e a Guanina Citosina (por trs pontes de hidrognio). Por isso so bases complementares, o que justifica as propores encontradas por Chargaff. Estrutura do RNA: A molcula de RNA formada por uma cadeia simples de nucletidos e muito mais pequena que a molcula de DNA. Esta molcula sintetizada a partir do DNA e pode apresentar trs formas: o o o RNA mensageiro (mRNA) RNA de transferncia (tRNA) RNA ribossmico (rRNA)

Replicao do DNA: Foram propostos trs modelos para a replicao do DNA: Hiptese semiconservativa (a qual foi apoiada por Watson e Crick) o Hiptese conservativa o Hiptese dispersiva Experincia de Meselson e Stahl: Cultivaram E.Coli num meio de cultura com N durante vrias geraes de bactrias, transferindo posteriormente para um meio com azoto normal. Extraiu-se DNA neste momento, 20 minutos depois e
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40 minutos depois. Atravs da densidade do DNA recolhido foi possvel chegar-se concluso que o DNA se duplica de modo semiconservativo, sendo que se conserva sempre uma cadeia e se gera uma nova. Sntese Proteica: A molcula de DNA garante a preservao da informao gentica, transmitindo-a sempre a cada nova clula. A clula utiliza parte dessa informao para gerar protenas. Para que a sntese proteica ocorra, so necessrios dois processos: a transcrio e a traduo. A transcrio o processo que permite que a informao gentica do DNA seja copiada para uma molcula de mRNA. A traduo o processo de utilizao da informao contida, agora, na molcula de RNA para sintetizar protenas. O segmento de DNA que contem a informao necessria para sintetizar uma determinada protena o gene. Cdigo Gentico:

Os cidos nucleicos so constitudos por quatro nucletidos diferentes, enquanto que as protenas o so por cerca de vinte unidades aminocidos. Assim, chegou-se concluso de que para codificar um aminocido seriam necessrios trs nucletidos, um tripleto. Aps esta descoberta, realizaram-se duas experincias que a vieram desenvolver. Nirenberg chegou concluso de que quando utilizava mRNA poli-U apenas obtinha um tipo de aminocido, e a mesma coisa com poli-A e poli-C. Khorana sintetizou molculas com nucletidos alternados (ACACACA), e como esta cadeia permitia duas combinaes (ACA e CAC) formaram-se dois tipos de aminocidos. Estas experincias permitiram concluir que diferentes combinaes de tripletos codificam diferentes tipos de aminocidos. Cada tripleto do mRNA designa-se Codo (sendo o de DNA, codogene). O cdigo gentico tem as seguintes caractersticas: o Cada aminocido formado por um codo. o O tripleto AUG tem duas funes, codifica a metionina e constitui o codo de iniciao para a sntese proteica. o Os tripletos UAA, UGA e UAG so codes de finalizao. o Existe mais do que um codo para codificar um aminocido (degenerescncia do cdigo gentico) o O terceiro nucletido o menos especfico. o Um determinado codo no codifica dois aminocidos diferentes (no ambguo) o O cdigo gentico universal. (tem o mesmo significado para todos os organismos) Mecanismos envolvidos na sntese proteica: o Transcrio:

Para que a transcrio ocorra necessrio que a RNA polimerase desenrole um segmento de DNA. Assim, uma das cadeias de DNA serve de molde para o mRNA (que se constitui atravs dos nucletidos existentes no nucleoplasma). A transcrio termina quando a RNA polimerase encontra um codo de finalizao. Nos seres eucariontes o mRNA utilizado durante a transcrio designado por RNA prmensageiro, uma vez que ainda ir sofrer uma maturao. Esta ocorre quando diversas seces do mRNA, os intres, so removidas. Desta forma, os exes constituem o mRNA maturado, ou seja a informao para a sntese proteica dispe-se de forma fragmentada. Nos seres procarioentes a fase de processamento do mRNA no ocorre. No final deste processo, o mRNA migra do ncleo para o citoplasma, onde ocorrer o processo de traduo.

Traduo:

Para o processo de traduo necessria a presena do tRNA (RNA de transferncia) e do rRNA (RNA ribossmico). Cada molcula de tRNA apresenta uma regio que lhe permite fixar um aminocido

(local aminoacil que se localiza na ponta), um anticodo, que se liga ao codo, locais para ligao ao ribossoma e a enzimas. O processo inicia-se quando a subunidade menor do ribossoma se liga ao mRNA, deslizando at encontrar o codo de iniciao (AUG). De seguida o tRNA, que transporta o aminocido metionina ligase por complementaridade ao codo de iniciao. A subunidade maior do ribossoma liga-se menor. Esta primeira fase designa-se por iniciao. No processo de alongamento, um segundo tRNA transporta outro aminocido que se liga ao codo. O ribossoma avana trs bases (sentido 5 para 3), enquanto o processo se repete ao longo da molcula de mRNA. Os tRNA vo se desprendendo. Por ltimo, o processo de finalizao, que ocorre quando o ribossoma encontra um codo de finalizao, o ltimo tRNA abandona o ribossoma e as subunidades voltam a separar-se. Finalmente, a protena libertada. Este processo anablico exige consumo de energia, no entanto a cada molcula de mRNA podem ligar-se vrios ribossomas, formando um polirribossoma.

Alteraes do Material Gentico:

As mutaes genticas resultam da substituio, do desaparecimento ou da adio de um nucletido sequncia que constitui o gene. Assim, constituem-se protenas diferentes. Quando estas protenas tm um papel importante no organismo podem originar doenas. (Anemia Falciforme, Albinismo). So exemplos de agentes mutagnicos, os raios X, gama, csmicos, UV e as partculas emitidas por substncias radioativas ou qumicas como o gs mostarda e as nitrosaminas. o Mitose

Quando uma clula se divide necessrio que a molcula de DNA se replique, sendo que a clula filha herda toda a informao gentica da clula me. No caso das clulas procariticas, o processo bastante simples. Ocorre logo aps a replicao da molcula de DNA. No entanto, nas clulas eucariticas, o processo bastante mais complexo, uma vez que o DNA est armazenado em vrias molculas, sendo que est associado a uma protena, as histonas. Cada poro de DNA, associada s histonas, constitui um filamento de cromatina. Estes filamentos encontram-se dispersos na clula, exceto no processo de diviso, em que se condensam em cromossomas.

Esta condensao resulta da associao entre as histonas e o DNA. Na fase de condensao cada cromossoma constitudo por dois cromatdeos (duplicao do filamento inicial de cromatina) unidos por uma estrutura resistente, o centrmero. Para que a clula se divida, ocorre um processo designado por fase mittica que constitudo por um processo de mitose (duplicao de todos os cromossomas do ncleo original) e um de citocinese (diviso do citoplasma). Assim formam-se duas clulas-filhas idnticas entre si e clula-me. Ciclo Celular:

O ciclo celular constitudo pela fase mittica e pela interfase. Interfase: Perodo G1: (Ps Mittico) So produzidas molculas de RNA para sintetizar protenas, lpidos e glcidos. Ocorre crescimento celular. No caso de a clula no sofrer mais divises entra na fase G0 durante longos perodos de tempo. Perodo S: (Sntese de DNA) Caracterizado pela replicao do DNA, por replicao semiconservativa. Ao DNA replicado associam-se histonas, formando-se cromossomas. Perodo G2: (Pr-Mittico) Sntese de mais protenas e estruturas membranares. Ocorre crescimento celular. Fase Mittica: Profase: A etapa mais longa da mitose. Os cromossomas enrolam-se tornando-se condensados, curtos e grossos. Os centrossomas (2 centrolos) afastam-se para plos opostos, formando um fuso acromtico, o qual formada por fibrilas de microtbulos proteicos. No final da profase o

ncleo desagrega-se. Nas clulas vegetais as fibras do fuso acromtico so formadas por centros organizadores de microtbulos existentes nos plos. Metafase: Os cromossomas dispem-se no plano equatorial da clula, formanda a placa equatorial. Os centrmeros encontram-se nesta placa, enquanto que os braos dos cromossomas se voltam para fora deste plano. Anafase: O centrmero rompe-se, separando os dois cromatdeos. Os cromossomas iniciam a ascenso polar ao longo do fuso acromtico. No final da Anafase cada plo contm um conjunto de cromossomas exatamente igual. Telofase: Forma-se um invlucro nuclear em torno dos cromossomas, que iniciam um processo de descondensao. O fuso acromtico desorganiza-se. A mitose termina e a clula possui dois ncleos. Citocinese: A citocinese inicia-se durante a Anafase ou a Telofase. Nas clulas animais ocorre devido ao estrangulamento do citoplasma, devido a contrao de um conjunto de filamentos proteicos. Nas clulas vegetais a existncia da parede no permite o estrangulamento. Assim, vesculas resultantes do complexo de Golgi depositam-se na regio equatorial, formando uma membrana celular que divide a clula em duas, ambas com parede celular completa.

Crescimento e regenerao de tecidos vs diferenciao celular: Clulas Estaminais

Todos os fenmenos de multiplicao, reproduo assexuada e crescimento so justificados pela mitose. No entanto, em organismos multicelulares existem geralmente clulas diferenciadas. Para que a partir de uma clula inicial se obtenha uma variedade to grande de clulas tm que existir um processo de diferenciao. Aps a fecundao, a partir da clula ovo que totipotente forma-se um conjunto de clulas indiferenciadas que posteriormente se dividem em clulas diferenciadas para as mais variadas funes. Fatores citoplasmticos envolvidos nos processos de traduo e transcrio, ou sinais de clulas vizinhas conduzem diferenciao celular. Estes fatores ativam ou bloqueiam determinados genes que do clula informao para se diferenciar. As clulas responsveis pela construo do corpo das plantas e dos animais so as clulas estaminais: o So clulas indiferenciadas o So capazes de se dividirem e diferenciarem. o Tm capacidade de autorrenovao e diviso assimtrica (criar uma clula filha diferenciada e outra indiferenciada) o So totipotentes at formao do blastocisto. A partir desse momento so pluripotentes.

Nos tecidos adultos apenas existem clulas multipotentes, que no so capazes de produzir clulas de outro tipo. No entanto, nos tecidos adultos vegetais existe um outro tipo de clulas indiferenciadas, os meristemas, que so capazes de renovar zonas lesadas e levar ao crescimento de rgos. o Clonagem:

Para clonar um organismo necessria a reprogramao do ncleo de uma clula diferenciada, tornando-a totipotente. Assim, funde-se uma clula diferenciada com um vulo anucleado, que se tornar um embrio. o Diferenciao Celular e Cancro:

Durante os processos de diferenciao celular e diviso ocorrem por vezes erros que conduzem produo de clulas cancerosas. Uma das mais preocupantes alteraes que ocorrem na clula a perda dos mecanismos de regulao celular na expresso dos genes, assim as clulas podem tornar-se imortais, por diminuio da apoptose. O resultado desta diviso infinita leva produo de tumores. As clulas de alguns tumores malignos podem formar metstases. De uma forma geral podemos identificar as seguintes etapas no desenvolvimento de um cancro (neoplasia): Proliferao celular no controlada Perda de diferenciao (Displasia) Cancro in situ (localizado, no invasivo) Cancro invasivo (resultante da acumulao de vrios alteraes genticas nas clulas).

CRESCIMENTO E RENOVAO CELULAR

DNA constitudo por: Um acar (desoxirribose); Um grupo fosfato; Uma base azotada (adenina, tmina, citosina e guanina)

A molcula de DNA apresenta os seguintes aspetos: 2 cadeias polinucleotdicas enroladas em hlice; Pontes de hidrognio que ligam as 2 cadeias; O emparelhamento das bases azotadas (adenina e timina A-T) e (citosina e guanina C-T); Ligaes covalentes entre o grupo fosfato e a desoxirribose do nucleotido seguinte.

Replicao do DNA Semiconservativa - uma das duas cadeias da molcula de DNA que se forma deriva da molcula original e a outra sintetizada de novo; Conservativa - preserva as duas cadeias da molecula original e gera uma molcula de DNA composta por duas cadeias inteiramente novas; Dispersiva - produz duas molculas com DNA em que ambas as cadeias eram formadas por fragmentos originrios da molcula inicial alternados por fragmentos sintetizados de novo.

Dogma central da biologia molecular (explicar como se processa a expresso da informao gentica): A informao presente no DNA transcrita para o RNA; O RNA posteriormente traduzido

para

formar

protenas.

RNA formado no ncleo por transcrio do DNA, constitudo por: Um acar (pentose); Um grupo fosfato;

Uma base azotada (adenina-uracilo A-U) e (citosina-guanina C-G).

O RNA constitudo por uma cadeia polinucleotdica simplesmente que os nucleotidos esto ligados covalentemente. Existem diversos tipos de RNA: RNA mensageiro (mRNA); RNA transferencia (tRNA); RNA ribossomal (rRNA);

A transcrio corresponde transferncia da informao presente no DNA para uma molcula de RNA. O RNA que leva a informao gentica do DNA o RNA mensageiro (mRNA). Para alm deste, os outros dois tipos de RNA so sintetizados. Informao Transcrio: DNA --> mRNA --> Ribossoma traduo

O uso de outras combinaes de nucleticos permitiu verificar que a cada cdo de mRNA corresponde um aminocido especifico. CICLO CELULAR Conjunto de processos que ocorrem ao nvel celular, incluindo a diviso do material gentico. As clulas apresentam um ciclo celular que tem inicio quando a clula se forma a partir de uma clulame e que se prolonga at que se divide, originando 2 clulas-filhas. Quando uma clula se divide, o material gentico tem de ser previamente replicado. Este processo permite que o material gentico de cada clula duplique de 2Q para 4Q. Durante todo este processo o nmero de cromossomas mantm-se igual. Todos estes fenmenos ocorrem ao longo do ciclo celular, que est organizado em duas fases: a interface e a fase mittica. Interfase Esta fase inclui 3 fases principais: G1, S e G2. A diviso mittica ocorre entre a fase G2 e a G1.

G1

G2

Tem inicio com a formao da clula e termina quando o DNA se comea a replicar. Nesta etapa os cromossomas apenas apresentam um cromatdio. Ocorre replicao semiconservativa do DNA, formando uma cpia de cada molcula de DNA. No final desta fase, os cromossomas encontram-se constitudos por dois cromatdios iguais unidos pelo centrmero. Intervalo de tempo compreendido entre a etapa S e o inicio da fase mittica, durante a qual a clula se prepara para a diviso. Nesta fase, os cromossomas ainda possuem os dois cromatdios unidos pelo centrmero.

Fase mittica A fase mittica constituda pela mitose e pela citocinese, onde ocorrem divises nucleares e citoplasmticas, respetivamente, dando origem a duas clulas-filhas iguais clula-me. A mitose processa-se ao longo de quatro fases: prfase, metfase, anfase e telfase, durante as quais ocorre condensao e separao do material gentico por dois ncleos.

Prfase a etapa mais longa da mitose; Os centrolos comeam a movimentar-se no sentido dos plos da clula, com inicio da formao do fuso mittico; No final desta fase, o nucleolo desaparece, a membrana nuclear desintegra-se e os cromatdios ligam-se ao fuso acromtico. Metfase Os centrolos encontram-se nos plos da clula; Os cromossomas deslocam-se para o centro da clula, formando uma placa equatorial.

Anfase Telfase O fuso acromtico degenera; O invlucro nuclear volta a formar-se volta da cromatina existente dm cada polo, individualizando os ncleos; No final desta etapa, a clula apresenta 2 ncleos idnticos entre si e ao ncleo que os originou. Ocorre a rutura do centrmero, os cromatdios de cada cromossoma separam-se, originando cromossomas com apenas 1 cromatdio; Cada cromossoma inicia a ascenso polar.

Para alm da diviso do ncleo, ocorre a diviso do citoplasma e dos organitos para as clulas que se formam. A diviso do citoplasma da clula que permite a individualizao das clulas filhas denomina-se citocinese. Nas clulas animais a citocinese ocorre por estrangulamento citoplasmtico, enquanto que nas clulas vegetais se forma uma placa equatorial com produtos transportados pelas vesculas derivadas do Complexo de Golgi.