Practica: Coprocultivo.
Materia: Microbiologa.
INTRODUCCION:
Es un examen bacteriolgico en el cual se investiga la presencia de bacterias patgenas (que producen enfermedad) en materia fecal. Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entricas patgenas. Muestra adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es ms fcil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administracin de antimicrobianos. Es el mtodo utilizado usualmente para la investigacin de la bacterias productoras de diarrea, aunque, en realidad, solamente es capaz de detectar el agente etiolgico en un 60-80% de los procesos, quedando solamente un 20% sin identificar englobados en el trmino de sndrome diarreico inespecfico. Dentro del conjunto de la flora normal hay que buscar los microorganismos patgenos eventualmente presentes. En ciertos casos, estos patgenos son abundantes y pueden suplantar casi totalmente a la flora normal, siendo fcil su detencin, pero otras veces son poco numerosas y su bsqueda resulta muy, laboriosa, siendo indispensable utilizar tcnicas especiales de aislamiento selectivo. El coprocultivo rutinario va encaminada fundamentalmente a la investigacin del entero patgeno ms frecuente: Salmonella, shigella y campylobacter, aunque simultneamente pueden detectarse otros patgenos como Yersinia, Vibrio, Aerononas, Staphylococcus, Candida, Pseudomonas y otras bacterias, en los mismos medios de cultivo, conviene investigar separadamente, adems, otros patgenos frecuentes por otros mtodos.
Materiales:
-Guantes. -Bata. -Microscopio. -Muestra biolgica de heces (2). -Portaobjetos. -Cubre boca. -Agar Mac Conkey. -Agar Salmonella Shigella. -Agar Sangre. -Agar Sal Manitol. -Mechero. -Aceite de Inmersin. -Colorantes para tincin de Gram (cristal violeta, yodo lugol, alcohol acetona y safranina). -Pinzas para portaobjetos. - Asa de nicromio. -Hisopo estril.
Mtodo
-Se colocan guantes, bata y cubre boca. -Se realiza asepsia en el rea de trabajo. -Se prende mechero para trabajar cerca de l. -Con ayuda del hisopo estril se descarga muestra en un lado del agar y se procede a ser el estriado con ayuda del asa de nicromio en cuatro cuadrantes. - Se procede hacer lo mismo en cada agar y con cada muestra. -Incubar a 37 grados centgrados durante 24 horas.
Despus de incubar:
-colocar guantes, bata y cubre boca. -Realizar asepsia en el rea de trabajo. -Sacar agares de incubadora. -Hacer observaciones macroscpicas. -Prender mechero para trabajar cerca de l. Se procede a hacer tincin de Gram en portaobjetos. -Realizar morfologa microscpica.
Tincin de Gram:
*Se coloca en el portaobjetos de una a dos gotas de solucin salina. *Con la ayuda del asa de nicromio se toma muestra y se pone en el portaobjetos dando pequeos giros para que se despegue del asa y se quede en el portaobjetos. *Se deja secar. *Se fija al mechero 3 veces con ayuda de las pinzas para portaobjetos. *Se tie en orden: -Cristal violeta por un min. -Se enjuaga suavemente al agua corriente. -Yodo lugol por un min. -Se enjuaga suavemente al agua corriente. -Alcohol-acetona de 8 a 15 segundos. -Y por ltimo safranina por un min. *Dejar secar. *Prender microscopio. *Enfocar en el objetivo de 10x *Agregar una gota de aceite de inmersin al portaobjetos. *Observar en el objetivo de 100x. *Hacer observaciones microscpicas.
Discusin:
En el agar Sal Manitol y Mac Conkey no se realiz morfologa macroscpica debido a que no haba colonias aisladas en el medio. En el agar Sangre se observaron colonias pequeas puntuales blanquecinas con hemolisis Gamma. En el agar Salmonella Shigella se observaron colonias puntiformes y filamentosas de color rosa.
Sal Manitol
Mac Conkey
Salmonella Shigella
Sangre
Discusin:
En el agar Sal Manitol no se realiz morfologa macroscpica debido a que no hubo crecimiento de colonias en el medio. En el agar Sangre se observ hemolisis Gamma y colonias puntuales pequeas de color blanquecinas. En el agar Salmonella Shigella se observaron colonias puntiformes pequeas de color rosa.
Mac Conkey
Sal Manitol
Salmonella Shigella
Chocolate
Discusin:
En el agar Sal Manitol no se realiz frotis debido a que no hubo crecimiento en el medio.
Salmonella Shigella
Sangre
Mac Conkey
Discusin:
No se realiz frotis del agar sal manitol debido a que no hubo crecimiento en el medio.
Se observaron bacilos Gram (-) en los agares: Sangre, Salmonella Shigella y Mac Conkey.
Conclusin:
En esta prctica se logr reforzar como sembrar en los medios de cultivo, los nombres y colores de los agares antes y despus de sembrarlos, que algunos son selectivos, otros diferenciales, generales y nutritivos. Las caractersticas macroscpicas, microscpicas y la tincin de Gram para recordar los colores y tiempos de cada uno. Detectar de mejor manera los arreglos y formas de las bacterias, asi como conocer cules son fermentadores de lactosa que cambio de color tiene, a reconocer mejor la hemolisis entre otras ms cosas.
Bibliografa:
www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/teo209