2 UNIDADE

Aminocidos / Protenas 12/09/2013 No organismo existem cerca de 5 milhes (estimativas) de protenas diferentes, comparadas com apenas 3.000 na E. coli. Contudo, todas as protenas so formadas por 20 aminocidos que se repetem cerca de 100 vezes nas vrias protenas. Os aminocidos funcionam no s como unidades estruturais para formao das protenas, mas tambm como percursores de uma srie de substncias biologicamente importantes. As protenas so importantes pois possuem as seguintes funes:

Estrutural e contrtil Protena microfibrilares (actina, miosina) Colgeno (pele, tendes, ligamentos) Elastina (vasos sanguneos) Queratina (pelo, cabelo, pele de animais) Caractersticas: forma filamentosa e praticamente insolvel em gua.

Catalisadores biolgicos (enzimas) So protenas que atuam como catalisadores de reaes bioqumicas. A sntese, assim como a atividade das enzimas, podem estar sujeitas aos vrios mecanismos de controle metablico.

Hormnios So substncias secretadas pelas glndulas endcrinas e lanadas na circulao sangunea por onde alcana todas as clulas, tecidos e rgos. Vrios hormnios so de natureza proteica tais como insulina e hormnio do crescimento. Estes hormnios so polipeptdeos ou protenas de baixa massa molar.

Protenas de transporte Um grande nmero de protenas funciona no organismo como transportadoras de nutrientes e metablicos dos fluidos fisiolgicos para os tecidos e vice-versa. Ex.: hemoglobina

que transporta O2 dos alvolos pulmonares para os tecidos e CO2 dos tecidos para os pulmes, no fenmeno de respirao aerbica.

Antgenos / Anticorpos Antgenos so protenas indesejveis ao organismo.

Funo nutricional Ingeridas com os alimentos, as protenas sofrem ao de enzimas proteolticas e seus aminocidos, uma vez absorvidos, entraro na sntese de protenas prprias do organismo que a ingeriu. Aminocidos essenciais: histidina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano, valina.

Composio das Protenas Protenas simples; Protenas conjugadas: a. Nucleoprotenas: Formadas de polipeptdeos + cidos nuclicos; b. Glicoprotenas: Formadas de polipeptdeos + carboidratos; c. Lipoprotenas: Contm em suas molculas polipeptdeos, triglicerdeos, fosfatdeos e colesterol; d. Hemoprotenas: Formadas por polipeptdeos e um radical HEME a mais como radical prostico; e. Flavoprotenas: Contm na molcula polipeptdeos alm de nucleotdeos de flavina e/ou adenina (FMN ou FAD); f. Fosfoprotenas: Compostas de polipeptdeos mais radicais livres ligados serina, treonina e/ou asparagina; g. Metaloproatenas: Formadas de polipeptdeos + elementos metlicos (Fe, Cu, Zn, etc).

Protenas fsico-qumicas Atividade ptica: Com exceo da glicina (um dos Rs o H, o que torna o carbono aquiral/simtrico), todos os aminocidos tm atividade ptica; Propriedade eltrica (cido/base): Os aminocidos possuem pelo menos dois grupos ionizveis: um carboxlico e um amino;

Ponto isoeltrico (pI): o pH no qual o somatrio das cargas nulo. Nesse ponto sua solubilidade em gua mnima. Para separar uma mistura de protenas, pode-se variar o pH de forma a atingir o ponto isoeltrico de uma das protenas do meio, fazendo com que ela precipite ( o que ocorre com leite quando coloca limo). Acima do ponto isoeltrico h a predominncia de cargas negativas (provindas do grupo amino) e abaixo h predominncia de cargas positivas (provindas dos grupos carboxlicos); Obs.: Outra forma de separar protenas a troca inica: supondo uma mistura de trs protenas com pontos isoeltricos 4, 7 e 9. Caso o pH do meio esteja 5, sabe-se que apenas a primeira deslocar o contra-on em uma troca aninica, uma vez que s ela est com carga predominantemente negativa, possibilitando a separao desta protena com uma outra troca inica (precisa utilizar um outro nion para competir com a protena e assim faz-la deslocar-se resina).

Solubilidade: relativamente elevada em gua e reduzida em solventes orgnicos; Momento dipolar: elevado, aumentando a solubilidade em solventes polares.

Aminocidos / Protenas 17/09/2013 Reaes do Grupo -COOH Esse grupo d as reaes caractersticas da funo carboxlica, sendo mais caractersticas: a) Formao de amida

b) Formao de ster

Reaes do grupo -NH2 Esses grupos so bastante reativos principalmente em sua forma desprotonada.

Reao com ninidrina

Reao usada para deteco de peptdeos e protenas; O produto possui cor prpura, exceo para a prolina e hidroxiprolina (amarelo).

Estruturas das Protenas 1) Primria: A estrutura se caracteriza por apresentar as ligaes peptdicas entre os aminocidos. Importante: Necessidade de hidrlise cida ou enzimtica. Pepsina (Len e Ile) Tripsina (Arg e Lis) Quimiotripsina (Phe, Tyr e Trp) Insulina Frederick Sanger et al (1952)

2) Secundria: A estrutura secundria refere-se a um arranjo regular e recorrente nas cadeias polipeptdicas. Ocorre de duas formas (-hlice enovelada e folha plissada pregueada). Ocorre principalmente devido s pontes de hidrognio.

3) Terciria: A estrutura terciria criada pelas interaes especficas entre os diferentes resduos de aminocidos, usualmente nas regies das cadeias laterais e so causadas por uma variedade de ligaes, incluindo pontes de hidrognio. Pontes de dissulfeto (confere rigidez molcula), hidrofbicas e pontes salinas.

4) Quaternria: A maioria das protenas globulares com massa molar acima de 50 kDa so oligomricas, ou seja, so formadas por mais de uma unidade estrutural. Cada unidade pode conter, por sua vez, um ou mais polipeptdeos e cada um tem seu prprio grau de estruturao (primrio, secundrio, tercirio). As subunidades estruturais ligam-se uma s outras por ligaes no covalentes. A esse grau de estruturao das protenas d-se o nome de estrutura quaternria. Ex.: Hemoglobina 4 cadeias polipeptdicas: 2 e 2 ( 141 resduos e 146 resduos). Cada uma dessas cadeias liga-se a um radical heme por meio de ligaes no covalentes.

Aminocidos / Protenas 19/09/2013 Enzimas So catalisadores biolgicos. So molculas com atividade cataltica, sendo encontradas na natureza em todos os seres vivos. Sua funo viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. A singularidade desses compostos decorre do elevado grau de especificidade do substrato, em condies moderadas, sob os quais atuam. As enzimas so catalisadores ideais: elevada especificidade alta eficincia para converter S em P elevada atividade em condies moderadas

(+) Reao no catalisada

() Reao catalisada por enzima Caractersticas So produtos naturais biolgicos; Apresentam um alto grau de especificidade; Reaes banais e seguras; So altamente eficientes, acelerando a velocidade das reaes de 108 a 1011 vezes; So no txicas.

Cofatores: Algumas enzimas para serem ativas requerem componentes qumicos adicionais chamados cofatores. Em geral, um on metlico como Fe2+, Mg2+, Zn2+. Enzima + cofator = holoenzima. Apenas a parte proteica da enzima = apoenzima.

Coenzimas: So aceptores de tomos ou grupos funcionais retirados do substrato, em uma dada reao, e como doadores destes mesmos grupos ao participarem de uma outra reao (transportadoras de grupos). Obs.: Diauxia dois patamares de crescimento devido presena de mais de uma fonte de carbono.

Algumas enzimas que necessitam de cofatores Enzima Citocromo oxidase Catalase Fe2+ ou Fe3+ Peroxidase Anidrase barbnica lcool desidrogenase Zn2+ Cofator

Vrease Ni2+

Algumas coenzimas que funcionam como transportadoras de grupos ou de tomos Coenzima Tiamina pirofosfato Flavina adenina dinucleotdeo Coenzima A 5-desoxiadenosil-cobalina (Coenzima B12) Grupos Funcionais Aldedos Eltrons Grupos acila Precursor Tiamina (Vitamina B1) Riboflavina (VitaminaB2) cido pantotnico

tomos de hidrognio e Vitamina B12 grupos alquila

Classificao e nomenclatura das enzimas A comisso de enzimas da unio internacional de bioqumica classifica as enzimas em 6 grandes classes. Cada classe dividida em subclasses conforme o tipo de reao catalisada. A cada enzima. A cada enzima assinalado um nmero classificatrio de 4 dgitos: O primeiro nmero designa a qual das seis classes a enzima pertence; O segundo nmero indica o tipo de ligao que a enzima atua; O terceiro nmero uma subclassificao do tipo de ligao; O quarto nmero diferencia a enzima.

Ex.: ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato. Nome: ATP: Glicosefosfatotransferase (EC.2.7.1.1). O primeiro dgito (2) denota o nome da classe (transferase); o segundo dgito (7) a subclasse (fosfotransferase); o terceiro dgito (1), fosfotransferases que trabalham com um grupo hidroxila como receptor; e o quarto dgito (1), indica ser a D-Glicose o receptor do grupo fosfato. * Nome trivial: hexoquinase.

Aminocidos / Protenas 24/09/2013 1) Oxidorredutases: So enzimas que catalisam reaes de oxi-reduo. Ex.: Desidrogenases e oxidases.

a. Atuando em CH-OH b. Atuando em C=O c. Atuando em C=Od. Atuando em CH-NH2 e. Atuando em CH-NHf. Atuando em NADH, NADPH

2) Transferases: Enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupamentos funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil. Ex.: Quinases e transaminases.

a. Grupos de um carbono b. Grupos aldedo ou cetona c. Grupos acil d. Grupos glicosil e. Grupos fosfatos f. Grupos contendo enxofre

3) Hidrolases: Catalisam reaes de hidrlise de ligaes covalentes. Ex.: Celulases.

a. steres b. Ligaes glicosdicas c. Ligaes peptdicas d. Outras ligaes C-N e. Anidridos cidos

4) Liases: Catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico. Ex.: Descarboxilases.

a. =C=C= b. =C=O c. =C=N-

5) Isomerases: Catalisam reaes de interconverso entre ismeros pticos. Ex.: Epimerases. a. Racemase b. Cis-trans isomerases c. Oxirredutases intramoleculares d. Transferases intramoleculares e. Liases intramoleculares

6) Ligases: Catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao de duas j existentes, sempre s custas de energia. Ex.: Sintases.

a. C-O b. C-S c. C-N d. C-C

Especificidade substrato/enzima: o stio ativo As enzimas so muito especficas para os seus substratos. Esta especificidade pode ser relativa a apenas um substrato ou a vrios substratos ao mesmo tempo. Esta especificidade se deve existncia, na superfcie da enzima, de um local denominado stio de ligao do substrato. O stio de ligao do substrato de uma enzima dado por um arranjo tridimensional dos aminocidos de uma determinada regio da molcula, a qual se liga ao substrato. O stio de ligao do substrato capaz de reconhecer inclusive ismeros D e L de um mesmo composto. Este stio pode conter um segundo stio, chamado stio cataltico ou stio ativo, ou estar prximo dele; neste stio ativo que ocorre a reao enzimtica.

Alguns modelos procuram explicar a especificidade substrato/enzima Modelo chave/fechadura: Prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria rgido como uma fechadura.

Modelo do ajuste induzido: Prev um stio de ligao no totalmente pr-formado, mas sim moldvel molcula de substrato: a enzima se ajustaria molcula de substrato na sua presena.

Mecanismo geral de catlise As enzimas aceleram a velocidade de uma reao por diminuir a energia livre de ativao. Para superar a energia de ativao de uma reao, passa-se pela formao de um estado intermedirio chamado de estado de transio (ocorre no stio ativo), sempre um composto instvel e de alta energia representado por Ts, ligado com altssima afinidade ao stio cataltico; como a afinidade do Ts ao stio cataltico muito maior que a afinidade do substrato com o mesmo, a pequena quantidade de molculas em Ts ser rapidamente convertida em produto.

Cintica Enzimtica 26/09/2013 O estudo cintico das reaes enzimticas avalia as velocidades das reaes enzimticas e os fatores que influenciam nesta velocidade. A cintica de uma reao enzimtica estudada avaliando-se a quantidade de produto formado ou a quantidade de substrato consumido por unidade de tempo da reao. Uma reao enzimtica pode ser expressa pela seguinte equao: [ ] [ ] [ ] [ ] [ ]

O complexo enzima/substrato [ES] tem uma energia de ativao ligeiramente menor que a do substrato, e sua formao levam ao aparecimento do estado de transio Ts. A formao de P a partir de [ES] a etapa limitante da velocidade da reao.

A velocidade de uma reao enzimtica depende das concentraes de enzima e de substrato

Modelo de Michaelis-Menten [ ] Hipteses: 1) Regime pseudo-estacionrio para [ ]

[ ]

[ ]

[ ]

[ ]
K4 = 0 porque a reao no volta

(I)

2) [Et] = [E] + [ES] 3) Considerando que

[ [

(II)

[ [

] ]

(III)

Considerando regime pseudo-estacionrio para [ES], de (I), tem-se: [ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ] [ ][ ] ( [ ] )[ [ ]

Quanto menor o KM, maior a afinidade pelo substrato

[ ][ ]

(IV)

Substituindo (IV) em (II) e posteriormente em (III): [ ][ ] [ ] [ ][ ]

Tirando o mnimo e cancelando os termos iguais:

[ ] [ ]

(Equao de Michaelis-Menten)

v vmax

[S]

Quando

: [ ] [ ]

[ ]

[ ]

[ ]

Estimativa dos parmetros do modelo de Michaelis-Menten (Duplo recproco ou mtodo de Linewaver-Burk) [ ] [ ] [ ]

[ ]

[ ] [ ] (V)

Considerando (V) e fazendo 1/v = 0: [ ] [ ]

[ ]

1/v

KM/vmax

1/vmax -1/KM 1/[S]

Inibio da atividade enzimtica A catlise enzimtica pode ser impedida por compostos que, quando presentes no meio, ligam-se diretamente enzima, impedindo sua ao.

Inibidores reversveis competitivos Os inibidores competitivos so substncias que tm forma estrutural suficientemente semelhante do substrato para poderem ligar-se ao stio tico da enzima. Faltam-lhe, entretanto, grupos qumicos que levem reao. Nesse caso, existe uma competio entre as

molculas do inibidor competitivo e as do substrato pela ligao com o stio ativo da enzima. O percentual de inibio depender das concentraes relativas de substrato e inibidor, e da afinidade diferencial da enzima pelo substrato e pelo inibidor. [ ] [ ] [ ] [ [ ] ] [ ] [ ] [ ]

Cintica enzimtica 01/10/2013 Inibio competitiva Considerando regime pseudo-estacionrio para [EI]: [ ] [ [ ] [ ][ ] ] [ ][ ] [ ][ ]
Quanto menor o KM, maior a afinidade pelo substrato

[ ][ ]

(VI)

Sabendo que Et = [E] + [ES] + [EI]: [ [ ] ] [ ][ ] [ ] [ ][ ] [ ][ ]

Tirando o mnimo, cancelando os termos iguais e rearranjando:

[ ] (
[]

) [ ]

(Inibio competitiva)

Reduo da velocidade devido presena do inibidor quando comparada com a velocidade sem inibio (Equao de Michaelis-Menten)

Estimativa dos parmetros do modelo de Michaelis-Menten (Duplo recproco ou mtodo de Linewaver-Burk) (

[]

[ ]

[ ] (

[]
[ ]
(

[ ] [ ]
) [ ]

[]

(VII)

Considerando (VII) e fazendo 1/v = 0: (

[]
[ ] (

[ ] ) [ ]

[ ] )

[ ]

1/v
(

[]

1/vmax
( [] )

1/[S]

Comparando a inibio competitiva com sem inibio, o coeficiente linear no muda (1/vmx). Desta forma, pode ser identificada o tipo de inibio (inibio competitiva).

1/v

[I] [I = 0]

1/vmax 1/[S] A inibio competitiva aplicada terapeuticamente para tratar pacientes que ingeriram metanol. No fgado o metanol converte-se no formaldedo. O etanol compete com o metanol pela enzima.

Cintica enzimtica 08/10/2013 Inibio no competitiva O inibidor no compete com o substrato pelo stio ativo, mas vai ocupar outro stio da enzima (stio regulatrio ou de inibio), formando alm de complexos [ES] e [EI], um terceiro complexo [ESI]. A enzima inativada quando o inibidor est ligado, o substrato estando tambm presente ou no. Uma concentrao alta de substrato no consegue levar toda a enzima sob a forma de [ES], que a forma produtiva. Para qualquer [I], uma parte da enzima permanecer sob a forma [ESI], em que se pode prever que vmx ser menor que a vmx observada na ausncia de inibidor. [ ] [ ] [ ] [ ] [ [ ] [ ] ] [ ] [ [ ] ] [ ]

[ [

] ]

[ ]

Considerando regime pseudo-estacionrio para [ES]:

[ ] [ ][ ] [ ] [ ] [ ] [ ][ ] [ ]

Fazendo o balano para [ESI], considerando regime pseudo-estacionrio: [ ] [ ][ ] [ ] [ ]

[ [ ] [ [

][ ] ][ ] [

][ ]

Substituindo

] em

:
][ ] [ ( ] )[ [ ] ] [ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ] [ ] ( )

)[ [

] ] [ ][ ]

[ ][ ]

Substituindo [ES] em [ESI]:

[ ][ ] [ ]

Considerando regime pseudo-estacionrio para [EI]: [ ] [ ][ ] [ ]

[ ][ ] [ [ ] ] [ ][ ] [ ][ ]

Substituindo [Et] em

, tem-se: [ ][ ] [ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ]

Tirando o mnimo, cancelando os termos iguais e rearranjando: [ ] ( [ ] Estimativa dos parmetros do modelo de Michaelis-Menten (Duplo recproco ou mtodo de Linewaver-Burk) [ ] ( [ ] [ ] ( ( [ ] ) [ ] [ ] ) ( [ ] ) ( [ ] ) [ ] ) [ ] )

Fazendo

e dividindo os dois lados por ( [ ] [ ]

[ ]

):

[ ]

1/v
( [ ] )

[ ]

1/[S] Comparando graficamente com a reao sem inibio:

1/v

[I] [I = 0]

1/[S]

Cintica enzimtica 08/10/2013 Inibio no competitiva O inibidor no compete com o substrato pelo stio ativo, mas vai ocupar outro stio da enzima (stio regulatrio ou de inibio), formando alm de complexos [ES] e [EI], um terceiro complexo [ESI]. A enzima inativada quando o inibidor est ligado, o substrato estando tambm presente ou no. Uma concentrao alta de substrato no consegue levar toda a enzima sob a forma de [ES], que a forma produtiva. Para qualquer [I], uma parte da enzima permanecer sob a forma [ESI], em que se pode prever que vmx ser menor que a vmx observada na ausncia de inibidor. [ ] [ ] [ ] [ [ ] ] [ ] [ ] [ ]

[ ]

[ [

] ]

[ ]

Considerando regime pseudo-estacionrio para [ES]:

[ ] [ ][ ] [ ] [ ] [ ] [ ][ ] [ ]

Fazendo o balano para [ESI], considerando regime pseudo-estacionrio: [ ] [ ][ ] [ ] [ ]

[ [ ] [ [

][ ] ][ ] [

][ ]

Substituindo

] em

:
][ ] [ ( ] )[ [ ] ] [ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ] [ ] ( )

)[ [

] ] [ ][ ]

[ ][ ]

Substituindo [ES] em [ESI]:

[ ][ ] [ ]

Considerando regime pseudo-estacionrio para [EI]: [ ] [ ][ ] [ ]

[ ][ ] [ [ ] ] [ ][ ] [ ][ ]

Substituindo [Et] em

, tem-se: [ ][ ] [ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ]

Tirando o mnimo, cancelando os termos iguais e rearranjando: [ ] ( [ ] Estimativa dos parmetros do modelo de Michaelis-Menten (Duplo recproco ou mtodo de Linewaver-Burk) [ ] ( [ ] [ ] ( ( [ ] ) [ ] [ ] ) ( [ ] ) ( [ ] ) [ ] ) [ ] )

Fazendo

e dividindo os dois lados por ( [ ]

[ ]

):

[ ] [ ]

1/v
( [ ] )

[ ]

1/[S] Comparando graficamente com a reao sem inibio:

1/v

[I] [I = 0]

[ ]

1/[S]

Cintica enzimtica 10/10/2013 Inibio incompetitiva Trata-se de uma inibio por bloqueio do complexo [ES]. Supe-se que existam na enzima dois stios ativos: um reservado ao substrato e outro ao inibidor, mas este ltimo s pode fixar de modo reversvel sobre o complexo intermedirio [ES]. A associao enzima-inibidor no-exclusiva. O inibidor no permite ao complexo ternrio [ESI] evoluir para elaborar o produto. Neste tipo de inibio, a velocidade mxima e KM so menores que na ausncia de inibidor.

[ ]

[ ]

] [ ]

[ ]

[ ]

[ [

] ]

[ ]

Considerando regime pseudo-estacionrio para [ES]:

[ ] [ ][ ] [ ] [ ] [ ] [ ][ ] [ ]

Fazendo o balano para [ESI], considerando regime pseudo-estacionrio: [ ] [ ][ ] [ ] [ ]

[ [ ] [ [

][ ] ][ ] [

][ ]

Substituindo

] em

:
][ ] [ ( ] )[ [ ] ] [ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ]

[ ][ ] [ ] ( )

)[ [

] ] [ ][ ]

[ ][ ]

Substituindo [ES] em [ESI]:

[ ][ ] [ ]

Substituindo [Et] em

, tem-se: [ ][ ] [ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ]

Tirando o mnimo, cancelando os termos iguais e rearranjando:

[ ] ( [ ] )

[ ] ) [ ]

Comparando com Michaelis-Menten (

[ ] [ ]

) o que muda vmx e KM, os quais

so menores na inibio incompetitiva (divididos por fatores maiores que 1).

Estimativa dos parmetros do modelo de Michaelis-Menten (Duplo recproco ou mtodo de Linewaver-Burk) ( [ ] ) [ ] ( [ ]

[ ] )

[ ] ) [ ] (

[ ] ) (

( [ ] )

[ ] )

[ ]

( [ ]

[ ] )

Fazendo

: ( [ ] ( [ ] ( [ ] [ ] ) [ ] ) [ ] )

1/v

[ ]

[ ]

1/[S]

Comparando graficamente com a reao sem inibio:

1/v

[I] [I = 0]

[ ]

[ ]

1/[S]

Se o inibidor fosse o substrato [S]: [ ] [ [ ] ] [ [ ] ] [ ] [ ] [ ]

[ [

] ]

[ ]

[ ][ ] [ ] [ ][ ] [ ][ ] [ ]

Tirando o mnimo, cancelando os termos iguais e rearranjando:

[ ] [ ] [ ]

Influncia do meio sobre a atividade enzimtica A estrutura e a forma do stio ativo so decorrncia da estrutura tridimensional da enzima e podem ser capazes de provocar mudanas conformacionais na estrutura proteica. Isto tonar a atividade enzimtica depende do meio, notadamente pH e temperatura

Influncia do pH A maioria das enzimas apresenta um valor de pH para o qual a sua atividade mxima. A velocidade da reao diminui medida que o pH se afasta desse valor timo, que caracterstico para cada enzima, mas com frequncia est prximo do pH neutro. Sabe-se que: [HA] [H+] + [A-] As concentraes relativas de HA e de A- dependem do pH. Para pH baixo, o equilbrio rearranja-se pelo aumento da concentrao de HA e diminuio de A. Quando o valor do pH alto, ocorre o inverso: os grupos R dissociveis dos aminocidos comportam-se de maneira analgica. v0

pH timo

Cintica enzimtica 15/10/2013 Influncia do meio sobre a atividade enzimtica

Influncia do pH [ [ [ ] [ [ [ [ ][ ] [ [ ] ] ] ] ] ] ( ) ]

Influncia da temperatura A influncia da temperatura sobre a cintica da reao enzimtica deve ser entendida em duas fases: no incio, aumentos de temperatura conduzem a aumentos da velocidade de rao, pois aumenta a energia cintica das molculas componentes do sistema. Esse efeito observado em um intervalo de temperatura compatvel com a estrutura espacial da enzima. Temperaturas mais altas levam desnaturao da enzima por alterarem as ligaes qumicas que mantm sua estrutura tridimensional. A temperatura que provoca desnaturao est geralmente pouco acima de sua temperatura tima. Enzimas de baixa massa molar compostas de uma nica cadeia polipeptdica e possuindo pontes de dissulfeto so geralmente mais estveis ao calor que enzimas oligomricas de alta massa molar. O efeito da temperatura em uma enzima depende de um nmero de fatores que incluem o pH, a fora inica do meio e a presena ou ausncia de ligantes. Na reao enzimtica, a constante de velocidade (K) funo crescente da temperatura do sistema. A influncia da temperatura na constante de velocidade obedece equao de Arrhenius:

sendo a energia de ativao.

ln K

1/T Lembrando que as enzimas so temolbeis, ao mesmo tempo que ocorre a reao enzimtica, desenvolve-se tambm a reao de inativao trmica da enzima que atua no sistema. , ento:

sendo a energia de ativao.

O efeito da temperatura na velocidade das reaes , em geral, expresso em termos de coeficiente de temperatura (Q10), fator pelo qual a velocidade aumenta quando a temperatura aumenta 10C. ( )

v0

T timo

Regulao da atividade enzimtica No metabolismo celular, grupos de enzimas trabalham em conjunto, formando vias sequenciais para desenvolver um dado processo metablico. Nesses sistemas, o produto da primeira reao torna-se o substrato da enzima subsequente e assim sucessivamente. Em cada sistema enzimtico, entretanto, h pelo menos uma enzima que determina a velocidade de toda a sequncia. Estas enzimas reguladores tm sua atividade cataltica

aumentada ou diminuda em resposta a determinados sinais, ajustando a velocidade de cada sequncia metablica, devido s necessidades de energia e de biomolculas requeridas no crescimento da clula e no seu autorreparo.

Enzimas alostricas As enzimas alostricas funcionam por meio das ligaes no covalentes e reversveis de um metablito regulador chamado modulador. Essas enzimas so aquelas que possuem outras formas ou conformaes induzidas pela unio com moduladores. Em alguns sistemas multienzimticos, a enzima reguladora inibida especificamente pelo produto final da via, sempre que este estiver em excesso em relao s necessidades celulares. Quando a velocidade da reao catalisada pela enzima reguladora diminui, todas as enzimas subsequentes passam a operar em velocidades reduzidas, porque as concentraes de seus substratos diminuem proporcionalmente. Este tipo de regulao chamado de inibio por retroalimentao. Alm do stio ativo ou cataltico, as enzimas alostricas geralmente tm um ou mais stios reguladores ou alostricos para ligao do modulador, sendo este especfico para o seu modulador. As enzimas com vrios moduladores geralmente tm stio de ligao diferente e especfico para cada um deles. As enzimas alostricas mostram relaes entre v0 e [S] que diferem do comportamento enzimtico normal, do tipo Michaelis-Menten. v vmax (1) (2)

[S] (1) Enzima no reguladora (2) Enzima reguladora