MICROBIOLOGA DEL AGUA

INTRODUCCIN:

El agua, alimento esencial para los animales incluido el hombre, frecuentemente acta como vehculo de transmisin de microorganismos entricos. La materia fecal puede accidentalmente alcanzar una fuente de abastecimiento, siendo la forma ms comn el ingreso a travs de los sistemas de pozo ciego a napas profundas. La presencia de microorganismos patgenos en el agua de bebida es un riesgo que se incrementa en las reas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser causal de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad microbiolgica de muestras de diversos orgenes. Los controles rutinarios de la totalidad de los microorganismos hdricos, potencialmente riesgosos para la salud, resultan difciles de llevar a cabo debido a la gran variedad de bacterias patgenas cultivables, a la complejidad de los ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentracin de varias especies altamente agresivas, sin que el orden detallado indique prioridad. Por esta razn, los anlisis bacteriolgicos apuntan a la bsqueda de microorganismos indicadores de contaminacin fecal y se centralizan en la cuantificacin de coliformes. Este grupo est integrado por enterobacterias, siendo Escherichia coli el indicador universal de contaminacin fecal. El control de la calidad microbiolgica del agua de consumo y de desecho, requiere de anlisis dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patgenos; los agentes involucrados en la transmisin hdrica son las bacterias, virus y protozoos, que pueden causar enfermedades con diferentes niveles de gravedad, desde gastroenteritis simple hasta casos fatales de diarrea, disentera, hepatitis o fiebre tifoidea.

CONCEPTOS BSICOS Para estudiar la relacin que existe entre calidad de agua y salud humana, es necesario introducir el concepto de microbiologa, y a partir de ello valorar la presencia de organismos microscpicos en agua potable, los efectos de competencia y/o sinrgicos de las distintas especies y la posibilidad de aplicar tecnologas de desinfeccin. La microbiologa es una rama de la biologa que estudia seres vivientes de tamao microscpico que existen como clulas aisladas o asociadas y tambin incluye el estudio de virus (microscpicos no celulares). En general, los microorganismos a diferencia de los macroorganismos, son capaces de llevar a cabo procesos de crecimiento, generacin de energa y reproduccin, independientemente de otras clulas sean del mismo tipo o diferentes. La presencia de patgenos en el agua ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad microbiana de muestras de diversos orgenes, pero llevar los controles rutinarios de todos los microorganismos patgenos resulta difcil de llevar a cabo por la gran diversidad de bacterias patgenas, la complejidad de los ensayos y que las concentraciones en algunas ocasiones son bajas y agresivas, es por esto que es necesario utilizar microorganismos indicadores. Para comprender la relacin entre la calidad del agua y la salud Humana, se usa la microbiologa para valorar la presencia de microorganismo en agua potable. Las clulas estudiadas en microbiologa pueden pertenecer a los grupos eucarioticos o procarioticos. Las eucariotas constituyen la unidad estructural de protozoarias, hongos y algas, que son organismo que poseen en su interior estructuras limitadas por membranas; las clulas procariotas son las bacterias y son ms sencillas. Las bacterias son microorganismos unicelulares y se reproducen por fisin binaria. La rigidez de la pared celular es la que determina el tipo de forma bacteriana. Los tipos de forma principal son las esferas (cocos), el bastn alargado (bacilos) o bastn curveado (espiral). Los que proyectan una como en un plano se les llama vibrios. Algunos pueden presentar modificaciones y se les denomina pleamorfos y est en funcin a la edad del cultivo, siendo su forma una caracterstica para la clasificacin, es importante determinar el fenmeno de pleomorfismo para no clasificarlos incorrectamente. Algunas veces la clula se agrupo y recibe nuevos nombres acorde a la forma de la agrupacin, por ejemplo, dos clulas cocoides juntas se llaman diplococos, si solo se juntan formando una cadena se les llama estreptococos y si forman racimos se les dice staphylococos. Los flagelos de los procariotas estn involucrados en la movilidad y estn hechos de una protena llamada flagelina. Algunos gneros de bacterias como las Bacillus tienen la capacidad de formar endosporas y son estas estructuras de resistencia ante medios

extremos. Otra herramienta para la diferenciacin bacteriana es teirla con una tcnica llamada tincin diferencial de gran, los colorantes gradan relacin con los componentes y estructura de la clula y se logra clasificarlos como Gram positivos o Gram negativos. El aumento ordenado de todos los componentes qumicos que lleva a un incremento de los constituyentes y estructuras celulares se le llama crecimiento celular y este crecimiento depende de la disponibilidad de los nutrientes. Los nutrientes requeridos en cantidades grandes se les llama macro nutrientes y los que son requeridos en mnimas cantidades son los micronutrientes. De acuerdo a los fines del aprovisionamiento de energa las bacterias se clasifican en fottrofas (utilizan luz como fuente de energa) y quimiotrofas (compuestos qumicos como fuente de energa). Tambin se pueden clasificar en auttrofos (crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias sencillas) y en hetertrofos (fuente de carbn orgnico). De acuerdo a sus requerimientos de oxigeno se clasifican en aerobias (necesitan oxigeno) y para las que el oxgeno es toxico se las llama anaerobias. El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. En el laboratorio el desarrollo de los microorganismos se realiza en medios de cultivo que son los ambientes artificiales diseados para el crecimiento de los microorganismos. Estos cultivos pueden ser definidos (contiene concentraciones conocidas desustancias puras), indefinidos (se desconoce su composicin y concentracin), enriquecidos (medios con aditivos extras que favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos), selectivos (permiten el crecimiento especifico de unas y no dejaque otras crezcan), diferenciales (estos ayudan a distinguir entre una especie y otra a simple vista). Todos estos pueden ser preparados en forma lquida, solida o semislida. Los medios de cultivo requieren una esterilizacin despus de su preparacin y su manipulacin posterior requiere condiciones de asepsia especiales. Las condiciones bacteriolgicas del agua son fundamentales desde el punto de vista sanitarias, las normas bacteriolgicas de calidad establece que el agua debe de estar exenta de patgenos de origen entrico y parsitos intestinales. Para los exmenes microbiolgicos se utilizan microorganismo indicador. Los microorganismos indicadores de contaminacin deben ser fciles de aislar y crecer en el laboratorio. Tres tipos de bacterias califican a tal fin, las coliformes fecales que indican contaminacin fecal, aerobias mesfilas y pseudomonas. La importancia de conocer las especies presentes en los sistemas acuosos naturales y el comportamiento en su ambiente radica en la posibilidad de desarrollar nuevas tecnologas que logren su eliminacin y de esta manera controlar enfermedades de origen hdrico. La calidad del agua debe mantenerse desde que el agua sale una planta de tratamiento o una fuente de agua hasta llegar al

consumidor. Las posibles causas de aparicin de patgenos transmitidos por el agua de consumo son la falta de proteccin de las fuentes de agua, el tratamiento inadecuado en plantas, y deficiencias en tuberas de distribucin. La buena calidad microbiolgica del agua potable se logra mediante una adecuada presin en las tuberas pues esto ayuda a que no se aniden microorganismos, el mantenimiento de las tuberas y el control del nivel de cloro y con un programa de vigilancia y control de calidad del agua (9).Las Guas de Calidad para Aguas de Consumo Humano de la OMS indican que no es prctico monitorear cada agente patgeno que est en el agua y lo ms lgico es detectar organismos que por lo general se encuentran en las heces de los seres humanos y de los animales de sangre caliente. MICROORGANISMOS PRESENTES EN AGUAS NATURALES La variabilidad microbiolgica de las aguas naturales abarca numerosos organismos e incluye clulas eucariotas (algas, protozoarios y hongos), clulas procariotas (bacterias) y virus (microorganismos con capacidad de sntesis nula). Algas Estos microorganismos contienen necesariamente clorofila para la actividad fotosinttica, sin embargo el color verde puede estar enmascarado por otros pigmentos (carotenoides) presentes. Son aerobias, y en ambientes con poco oxgeno, mueren, flotan y se descomponen produciendo mal olor. Podemos encontrar las siguientes familias de algas: Chlorophyta o algas verdes que huelen a pescado o hierba. Cyanophyta o algas verdes azuladas con olores desagradables que pueden producir sustancias txicas. Chrysophita son de color amarillo verdoso y a menudo generan olores aromticos (geranios) o huelen a pescado, por ej. Aulococeira y Cyclotella.

Protozoarios Frecuentemente en el agua contaminada con heces se encuentran dos protozoarios parsitos con incidencia en salud humana, responsables de epidemias: Giardia lamblia: es flagelado con un tamao de 15 m y se transmite al hombre a travs de agua contaminada con materia fecal. Las clulas del protozoario producen un estado de reposo denominado quiste. Los quistes al ser ingeridos germinan y causan giardiasis, enfermedad caracterizada por diarreas, calambres intestinales,

flatulencia, nauseas, sntomas que pueden ser agudos o crnicos. La giardisis es una de las enfermedades parasitarias de origen hdrico ms comunes. Cryptosporidium parvum: es un parsito del hombre y animales de tamao muy pequeo (2-5m), redondeado que crece en el interior de las clulas del epitelio mucoso de intestino y estmago. Los quistes infecciosos producidos por este protozoario poseen una pared muy gruesa. Los quistes de Cryptosporidium son mucho ms resistentes a la cloracin que los de Giardia. La criptoposiosis es una infeccin que se caracteriza por dolores estomacales, nauseas, diarrea y deshidratacin. Virus El 87% de las enfermedades virales transmitidas por el agua son causadas por el virus de la hepatitis (adenovirus y rotavirus). Bacterias Ms del 80% de las bacterias descriptas en el Manual de Bergey pueden aislarse del agua. Teniendo en cuenta la respuesta a la tincin de Gram, a continuacin se mencionan y describen algunas de las ms importantes. Bacterias Gram negativas Entre las especies que se han aislado de aguas, podemos mencionar a las pertenecientes a los gneros Pseudomonas, Flavobacterium, Gallionella, Enterobacteriaceae, Aeromonas, Vibrio, Achromobacter, Alcaligenes, Bordetella, Neisseria, Moraxella y Acinetobacter. Las pseudomonas son las ms comunes en napas freticas debido a su versatilidad respecto a fuentes de carbono, y a sus bajos requerimientos nutricionales. Ellas son bacilos psicrfilos, presentan flagelos pertricos, producen pigmentos (verde, azul verdoso, rojo, marrn) y no forman esporas. La morfologa y el hbitat de muchas pseudomonas coincide con el de bacterias entricas como Escherichia coli pero se diferencian en que no fermentan azcares. Segn el Manual de Bergey este grupo admite 7 especies, siendo Pseudomonas aeruginosa la de mayor relevancia sanitaria, es un patgeno oportunista por excelencia y el agente etiolgico principal de infecciones en vas urinaria, intestino, odo y heridas. Por su relativa resistencia al cloro es considerada un indicador de eficiencia de la cloracin. Su presencia en sistemas de almacenamiento, tanque, y cisternas, responde a un estado deficiente de dichas instalaciones. El control de pseudomonas, al igual que el de bacterias aerbicas, debe intensificarse en redes expuestas a contaminacin o cuando se comprueba cloracin deficiente.

Flavobacterium es un gnero ampliamente distribuido en aguas y suelos. No ha sido encontrado en sedimentos de acuferos profundos pero si en las aguas que se extraen de ellos. Por esta razn, se duda si las flavobacterias se encuentran naturalmente en un acufero o simplemente colonizan el pozo luego de su perforacin. Son bacilos que se caracterizan por falta de movilidad y produccin de pigmentos de color amarillo. BACTERIAS INDICADORAS DE CONTAMINACIN Las condiciones bacteriolgicas del agua son fundamentales desde el punto de vista sanitario. La norma bacteriolgica de calidad establece que el agua debe estar exenta de patgenos de origen entrico y parasitario intestinal que son los responsables de transmitir enfermedades como salmonelosis, shigelosis, amebiasis, etc. Los microorganismos indicadores de contaminacin deben cumplir los siguientes requisitos: fciles de aislar y crecer en el laboratorio; ser relativamente inocuos para el hombre y animales; y presencia en agua relacionada, cuali y cuantitativamente con la de otros microorganismos patgenos de aislamiento ms difcil. Tres tipos de bacterias califican a tal fin: Coliformes fecales: indican contaminacin fecal. Aerobias mesfilas: determinan efectividad del tratamiento de aguas. Pseudomonas: sealan deterioro en la calidad del agua o una recontaminacin. Desde el punto de vista bacteriolgico, para definir la potabilidad del agua, es preciso investigar bacterias aerobias mesfilas y, coliformes totales y fecales. La gran sensibilidad de las bacterias aerobias msfilas a los agentes de los agentes de cloracin, las ubica como indicadoras de la eficacia del tratamiento de potabilizacin del agua. Las bacterias coliformes habitan el tracto intestinal de mamferos y aves, y se caracterizan por su capacidad de fermentar lactosa a 35C. Los gneros que componen este grupo son Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter y Edwardsiella. Todas pueden existir como saprofitas independientemente, o como microorganismos intestinales, excepto el gnero Escherichia cuyo origen es slo fecal. Esto ha llevado a distinguir entre coliformes totales (grupo que incluye a todos los coliformes de cualquier origen) y coliformes fecales (trmino que designa a los coliformes de origen exclusivamente intestinal) con capacidad de fermentar lactosa tambin a 44,5C. La existencia de una contaminacin microbiolgica de origen fecal se restringe a la presencia de coliformes fecales, mientras que la presencia de coliformes totales que desarrollan a 35C, slo indica existencia de contaminacin, sin asegurar su origen. Los enterococos fecales cuyo desarrollo ocurre a 35C se usan como indicadores complementarios de contaminacin fecal.

La validez de todo examen bacteriolgico se apoya en una apropiada toma de muestra (recipiente estril de boca ancha y metodologa precisa), y en las adecuadas condiciones de transporte desde el lugar de la fuente de agua hacia el laboratorio (refrigeracin, tiempo). El sistema de conservacin de la muestra debe ser confiable, y la misma analizada inmediatamente o al cabo de un corto perodo entre extraccin y anlisis. El anlisis cuantitativo de bacterias indicadoras de contaminacin en una muestra de agua puede realizarse por dos metodologas diferentes: Recuento directo de microorganismos cultivables por siembra de la muestra sobre o en un medio de cultivo agarizado. Recuento indirecto (basado en clculos estadsticos) despus de sembrar diluciones seriadas de la muestra en medios de cultivos lquidos especficos. Se considera, al cabo de una incubacin adecuada, los nmeros de cultivos positivos y negativos. Esta metodologa se denomina Tcnica de los Tubos Mltiples y los resultados se expresan como nmero ms probable (NMP) de microorganismos. Adems de otros mtodos, se puede recurrir a aquellos en los que se aplica biologa molecular como por ejemplo, la tcnica de hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) utilizando sondas marcadas en base a secuencia nucleotdica del gen 16S. En este captulo slo se describir el primer mtodo en el cual la muestra se concentra por filtracin sobre membrana, denominada Tcnica de la Membrana Filtrante. En ella, se procede a filtrar un volumen determinado de muestra (normalmente 100 mL) a travs de membranas de steres de celulosa generalmente con dimetro de poros de 0,45 m y en algunos casos de 0,22 m. Posteriormente, la membrana se deposita sobre un medio de cultivo selectivo y bajo condiciones favorables (temperatura y tiempo de incubacin) y sobre la membrana desarrollan colonias aisladas con aspectos caractersticos que permiten la identificacin y el recuento. Conociendo el volumen de muestra filtrada es posible determinar el nmero de UFC por unidad de volumen. La obtencin de resultados confiables requiere un intercambio de nutrientes a travs de los poros de la membrana, por ello se debe evitar la filtracin de aguas con alto contenido de material en suspensin que pueden obstruir las membranas. Adems, el nmero de colonias desarrolladas sobre la membrana debe ser inferior a un determinado valor (variable segn los microorganismos y la composicin del medio que condiciona el tamao de las colonias) generalmente comprendido entre 80 y 100. A valores superiores, la proximidad de las colonias, puede conducir a resultados inexactos.

CONCLUSIN: La contaminacin fecal de las aguas superficiales que sirven como fuente de abastecimiento es uno de los problemas ms preocupantes en los pases en vas de desarrollo, esta contaminacin se debe al vertimiento de los desages sin ningn tratamiento, hecho que es usual en las grandes ciudades. En las zonas rurales la contaminacin se origina en la defecacin a campo abierto y a la presencia de animales domsticos y silvestres que actan como reservorios de agentes patgenos. Los agentes patgenos implicados en la transmisin hdrica de enfermedades son las bacterias, virus, protozoos, helmintos y cianobacterias. Estos microorganismos pueden causar enfermedades con diferentes niveles de gravedad, desde una gastroenteritis simple hasta cuadros graves de diarrea, disentera, hepatitis o fiebre tifoidea. La transmisin hdrica es solo una de las vas, pues estos agentes patgenos tambin pueden ser transmitidos a travs de alimentos, de persona a persona debido a malos hbitos higinicos, de animales al hombre, entre otras rutas. La calidad del agua afecta de manera directa a la salud de la poblacin. Echando mano de los mtodos y tcnicas que se emplean en la microbiologa, se pretende tener un control microbiolgico de unos de los recursos ms importantes que tenemos, el agua. RECOMENDACIONES: El agua apta para consumo humano puede contaminarse cuando entra al sistema de distribucin, a travs de conexiones cruzadas, rotura de las tuberas del sistema de distribucin, conexiones domiciliarias, cisternas y reservorios defectuosos, grifos daados y durante el tendido de nuevas tuberas o reparaciones realizadas sin las mnimas medidas de seguridad. De igual manera, la construccin defectuosa en las estructuras de pozos o depsitos y ausencia o irregular mantenimiento de estas instalaciones son causas que predisponen el ingreso y multiplicacin de microorganismos a partir de distintas fuentes. Adems, existen otros factores que permiten el desarrollo de microorganismos en el agua dentro de los sistemas de distribucin y almacenamiento como: cantidad y tipo de nutrientes, oxgeno, temperatura, pH, concentracin de desinfectante y material de las tuberas. No obstante, existe una gran dificultad para determinar la presencia de todos los microorganismos patgenos implicados en los procesos de contaminacin ambiental. Dicha determinacin implica costos elevados, tiempo, y laboratorios especializados. Frente a estas dificultades y a la necesidad de hacer una evaluacin rpida y fiable de la presencia de patgenos en el agua, se ha planteado la necesidad de trabajar con determinados grupos indicadores

Bibliografa Moreno Merino, Luis (1998). Conceptos bsicos de microbiologa de las aguassubterrneas. Glynn y G.W. Heinke, Ingeniera Ambiental, Prentice Hall, Mxico, (1999). Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) Enterobacteriaceae, Coliforms, and Escherichia coli as Quality and Safety Indicators. In: Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA. Washington. Guas para la Calidad del Agua Potable, Vol. 3, Publicacin Cientfica N 58, Organizacin Panamericana de la Salud, Washington, (1988).