UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS DEPARTAMENTO ACADMICO DE ALIMENTOS

PENICILLIUM

DOCENTE CURSO INTEGRANTES

: : :

Blga. M. Sc. MARGARITA ALCEDO ROMERO. MICROBIOLOGA I FERNANDEZ ROMERO, Mery. LOZA ESTEBAN, Anglica.

CICLO

: 2013 II

TINGO MARA PER

I.

INTRODUCCION

Los Penicillium sp. son mohos comunes que desarrollan sobre los ms diversos substratos: granos, paja, cueros, frutas, etc. Su identificacin en base a las caractersticas morfolgicas fue catica hasta que Pitt(1980) normaliz las condiciones de cultivo y Frisvad (1981) consider la formacin de los metabolitos secundarios en la descripcin de las especies. La importancia de estos mohos en la alimentacin humana y animal se debe a que, adems causar deterioro, producen toxinas (Pitt & Leistner 1991).

El Penicillium es un hongo de crecimiento rpido dando colonias blancas aterciopeladas inicialmente, las cuales se cubren con los esporos y van tomando diferentes colores segn la especie; al final quedan completamente cubiertas de esporos con un aspecto pulverulento. La colonia est constituida por micelio de hifas delgadas septadas (Guzmn, 1977).

II.

OBJETIVO

Conocer la importancia del Penicillium en la industria alimentaria. Conocer los mtodos de aislamiento de los mohos. Conocer sus caractersticas morfolgicas y medio de cultivo.

III.

REVISION LITERARIA

3.1.

Penicillium spp. El Penicillium es un gnero grande y encontrado casi por

todas partes, y siendo comnmente el gnero de hongos ms abundante en suelos. La fcil proliferacin de los Penicillium en los alimentos es un problema. Algunas especies producen toxinas y pueden hacer el alimento no comestible o an peligroso. Es una buena prctica desechar los alimentos que demuestran el desarrollo de cualquier moho. Por otra parte otras especies de Penicillium son beneficiosas para los seres humanos. Los quesos tales como el roquefort, brie, camembert, stilton, etc. se crean a partir de su interaccin con algunos Penicillium y son absolutamente seguros de comer. La penicilina es producida por el hongo Penicillium

chrysogenum, un moho ambiental.

3.2.

TAXONOMA

El gnero Penicillium incluye especies mitosporicas cuyas formas perfectas se incluyen en la familia Trichocomaceae, del orden Eurotiaales, perteneciente al phylum Ascomycota. Estos teleomorfos yTalaromyces. se engloban en los gneros Eupenicillium

Reino: Clase: Orden: Familia: Gnero: Especie: Filo:

Fungi Euascomycetes Eurotiales Trichomaceae Penicillium Chrysogenicum Ascomycota

3.3.

IMPORTANCIA

3.3.1. Penicillium spp. en alimentos

En muchas ocasiones los alimentos destinados al consumo humano o animal son el hbitat de Penicillium spp. Algunas especies son consideradas patgenas de frutas y algunas verduras frescas y cereales. especificas As, con algunas Penicillium lo que spp. tienen asociaciones

alimentos,

permite

identificaciones

presuntivas, como algunas de las especies pertenecientes al subgnero Penicillium en los cereales, o como otras que presentan un mayor grado de especializacin: los patgenos de frutas P. digitatum y P. italicum en ctricos y P. expansum en manzana, pera, cereza, y otras frutas. Desde el punto de vista econmico, las especies de este gnero causan importantes prdidas al deteriorar cereales, frutas y otros alimentos durante su almacenamiento. Muchas especies del gnero son psicrtrofas y pueden producir el deterioro de diferentes alimentos a bajas temperaturas, suponiendo un posible problema para alimentos que se conservan en refrigeracin.

El almacenamiento de frutas, al tratarse de productos frescos, puede presentar importantes prdidas debido al crecimiento de Penicillium ssp. El control de estos posibles problemas se lleva a cabo mediante prevencin de daos fsicos en la fruta, tratamientos diversos y un almacenamiento a bajas temperaturas lo ms corto posible. Los tratamientos seguidos suelen ser mediante fungicidas, lavados con agua o con soluciones desinfectantes o tratamientos trmicos. Tcnicas propuestas recientemente utilizan

pulverizaciones con bacterias o levaduras como agentes de biocontrol. Estas inoculaciones pueden ser combinadas con calor o con el uso de atmosferas modificadas y fungicidas. Estudios recientes demuestran que es posible inducir una mayor una mayor resistencia de los ctricos frente a la infeccin por P. digitatum

mediante tratamientos con reguladores de crecimiento, agua caliente, con el agente de biocontrol candida oleophila o mediante irradiacin con UV.

Uno de los mayores problemas que generan las Penicillium spp. Para el hombre y los animales radican en la posible produccin de micotoxinas, con diferentes efectos txicos, en alimento. Algunos autores consideran que el mayor avance que podra hacerse en la nutricin actual seria el control de la presencia de estos metabolitos fngicos. El creciente inters en controlar y reducir esta presencia en alimentos queda reflejado en la reciente publicacin de normativa europea reguladora de los niveles de distintas micotoxinas en alimentos.

Tradicionalmente, los hongos micotoxigenos se haban dividido en hongos de campo y de almacenamiento. Las Penicillium spp. Pueden considerarse hongos colonizadores tanto en

condiciones de campo como de almacenamiento. Las toxinas elaborada Penicillium spp. y Aspergillus spp. Se producen tanto en condiciones de campo como de almacenamiento. Las principales toxinas que producen estas especies son las aflatoxinas, la ocratoxina A y la citrinina.

3.3.2.

Uso industrial del Penicillium spp.

El primer y mayor uso industrial de Penicillium spp. ha sido la produccin de penicilina. En descubrimiento de este metabolito de P. notatum por Alexander Fleming fue en 1928. El estudio del genero aumento en aos posteriores es busca de cepas que presentaba una gran produccin de penicilina y en busca de nuevos antibiticos. Ningn otro metabolito aislado en la poca, sin embargo, presento actividad contra bacterias sin presentar toxicidad para el hombre.

El uso de la penicilina como agente teraputico comenz a llevarse a cabo en los aos 40. A partir de entonces y hasta nuestros das, se han utilizado cepas de esta especie en procesos industriales para producir el antibitico. El estudio del metabolismo de la produccin de la penicilina todava es motivo de investigacin. La produccin de antibiticos, como sucede con la de micotoxinas, ha de ser evitada en cualquier tipo de alimento. Algunas Penicillium spp. son utilizada para la elaboracin de quesos. Las especies utilizadas con este fin son P. roqueforti para la produccin de queso Roquefort y quesos azules. Las especies del genero Penicillium, as como sucede en otro gneros de hongos microscpicos, comparten muchas rutas metablicas con animales y plantas y poseen la capacidad de sintetizar metabolitos muy complejos, como las benzodiacepinas. Muchos de estos metabolitos son similares a molculas presentes en organismos superiores y algunos son utilizados como frmacos.

Otras especies del gnero de Penicillium

son tambin

utilizadas para la obtencin de enzimas, principalmente, pectinasas, glucosa oxidasa y catalasa.

3.3.3.

Patogenicidad de Penicillium spp.

La nica especie de Penicillium spp. Considerada patgena para el hombre y los animales es P. marneffei. Esta especie presenta dimorfismo, caracterstica nica en el gnero, de manera que cuando se desarrolla a 37C su crecimiento es levaduriforme. Las infecciones producidas por esta especie estn generalmente relacionadas con pacientes que presentan inmunodeprimidos.

Son pocas las especies del genero Penicillium que puedan desarrollarse a 37C. La mayora de las que presentan esta capacidad pertenecen, As han como sido P. marneffei, al subgnero otras

Biverticillium.

descritas espordicamente

Penicillium spp., sobre todo pertenecientes al citrato subgnero, como causantes de infecciones sistmicas en hombre y animales. La especie P. piceum ha sido descrita recientemente como causante de un cuadro sistmico en el hombre.

3.4.

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS

La estructura que caracteriza a Penicillium spp. es el conidiforo que presenta en forma de pincel. A la morfologa de esta estructura es a la que debe el nombre el gnero (del latn Penicillium, pincel pequeo). Los conidios se presentan en cadenas y son originados partir de una clula especializada: la filide. El conidiforme est unido al micelio mediante la estipe. Entre esta y las filides pueden aparecer diferentes clulas. Estas clulas se presentan agrupadas partiendo de un mismo punto desde el que se originan. Aparte de las filides, los puntos de ramificacin son uno, dos o excepcionalmente, tres, a lo largo del conidiforo. La clula de soporte de la filide se denomina mtula y la clula de soporte de la mtula se denomina rama, en las especies que las presentan. Estas ramas paren del estipe, aunque pueden partir, a su vez, de otras ramas. Figura 1: Penicillium: 1. Conidiforo, 2. Mtula, 3. Filide, 4. Esporas.

En la Figura 2 se esquematizan los tipos de conidiforos del gnero Penicillium, cuyas ramificaciones se ubican formando verticilos. Si hay slo un verticilo de filides el pincel es monoverticilado. Las ramificaciones de un pincel poliverticilado son ramas, rmulas, mtulas y filides. Los conidios generados en filides suelen llamarse fialoconidios para indicar su origen. En la filide, al dividirse el ncleo, se extiende simultneamente el extremo apical que luego se estrangula separando a la espora recin formada. Se llama conectivo a la porcin de pared que une entre s a los conidios permitiendo la formacin de cadenas, y en algunas especies se aprecia claramente con el microscopio ptico. (Webster 1986). Figura 2: Tipos de conidiforos del gnero Penicillium.

Los filamentos o hifas alcanzan un dimetro entre dos o tres micrmetros y tienen septos con un poro central que no es visible al microscopio ptico. Las paredes del estpite, las ramas o las mtulas pueden ser lisas, rugosas o equinuladas. La pared de las filides es siempre lisa. Las filides pueden tener forma de nfora o bien ser casi cilndricas con la porcin apical en forma de cono. El tamao mximo de las filides es de 15 mm y la parte terminal no supera los 3 mm de largo. Los conidios son esfricos o elipsoidales,

unicelulares, hialinos que en masa se ven de color verde, verde azulado, verde aceituna o gris. La pared de lo conidios es lisa o rugosa segn las especies (Webster 1986). El gnero Penicillium est subdividido en grupos o

subgneros de acuerdo a la morfologa de los pinceles aunque tambin se tiene en cuenta la velocidad de crecimiento. La serie Monoverticillata (Bridge etal. 1992) o subgnero Aspergilloides (Pitt & Hocking 1997), comprenden a todos los penicilios monoverticilados. En ellos el estpite suele tener mayor dimetro en la zona donde se implantan las filides, sin llegar a ser una vescula como en el gnero Aspergillus. La serie Terverticillata o subgnero Penicillium, comprende a las especies que tienen tres, a veces cuatro, niveles de

ramificaciones y son de crecimiento relativamente rpido sobre Czapek-Glicerol. Las especies con pinceles biverticilados, generalmente simtricos, cuyas colonias son de crecimiento lento sobre CzapekGlicerol se agrupan en la serie Biverticillata symmetrica, o subgnero Biverticillium, pero a veces suele haber algunos pinceles

terverticilados. Las filides son delgadas, con el pice alargado y alcanzan la misma longitud que las mtulas. Si los pinceles son biverticilados o irregulares, a veces junto a monoverticilados, con las filides en forma de nfora y ms cortas que las mtulas, se las rene en el subgnero Furcatum que comprende especies de las series Biverticillataasymmetrica y Divaricata. Las colonias de este subgnero crecen relativamente rpido en Czapek-Glicerol (Bridge et al. 1992, Pitt & Hocking 1997). Las cepas de Penicillium con reproduccin sexuada

corresponden a los gneros teleomrficos Eupenicillium que forma cleistotecios con pseudoparnquima constituido por clulas de pared engrosada, y Talaromyces que presenta los ascos rodeados de hifas

entrelazadas formando la delgada pared del gimnotecio (Pitt & Hocking 1997).

3.5.

IDENTIFICACIN

Es importante poder diferenciar los penicilios de los otros hongos que forman esporas en conidiforos ramificados. El ms parecido es el gnero Paecilomyces que tiene filides con el pice muy alargado, conidios elpticos y colonias de tonos pardos pero nunca verdes. El gnero Geosmithia se origin al separar de Penicillium las especies que forman colonias blancas a beiges, esporas casi cilndricas y filides rugosas y cilindroides que se estrechan sbitamente en el pice. Las especies de Gliocladiumtien en filides con el extremo curvado y esporas mucosas que se aglomeran, mientras que los penicilios originan exorosporas en filides con un eje de simetra. Tambin las especies de Trichoderma forman conidios mucosos que se renen en cabezuelas con tonos verdes. El gnero Scopulariopsis produce colonias pardas y esporas en anlides (Pitt & Hocking 1997). PENNAME (Pitt 1991) era una clave que permita identificar los penicilios comunes con ayuda de una computadora. Usaba las caractersticas macromorfolgicas de las colonias sobre CzapekLevadura,Malta-Glucosa y Czapek-Glicerol luego de 7 das a 25C, y la posibilidad de crecer a 5 37C. Tambin se necesitaba conocer las caractersticas micromorfolgicas observadas en un microcultivo. Figura 3: Mtodo de Pitt.

3.6.

CULTIVOS Y DESCRICION MICOLOGICA

Los PENICILLIUM son hongos aerobios y, aunque poco exigentes en este aspecto, su micelio es siempre superficial; rara vez las hifas penetran ms de 4 5 mm. En el seno del substrato. Variando la composicin de ste puede variar tambin el aspecto de estos mohos y lo mismo ocurre si se mezclan micelios de especies distintas. Es pues indispensable, para caracterizarlos, obtener colonias puras, cultivadas en medios adecuados, preparados al efecto; de otro modo no pueden ser debidamente estudiados. Los cultivos, en cpsulas Petri, en tubos, etc. se hacen guardando escrupulosamente todas las precauciones y reglas de asepsia y desinfeccin, indispensables en la prctica bacteriolgica. Todo medio de cultivo debe contener la totalidad de los elementos qumicos necesarios para el moho y en forma asimilable. Como alimento energtico les basta con una substancia orgnica carbonada; los restantes elementos pueden ser aportados por materias minerales y. es innecesario decir que siempre ha de ser el agua el principal y ms abundante de sus componentes. Pudiendo variar el aspecto de una colonia de Penicillium por efecto de la composicin del substrato o medio de cultivo, es necesario elegir algunos como tipo y describir el aspecto del moho cuando en ellos vegetan para caracterizar la especie. Los substratos de cultivo ms generalmente usados son el lquido RAULIN y el lquido CZAPEK.

Cuadro 1: Composicin del medio RAULIN

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Agua Sacarosa Nitrato amnico Acido tartrico Fosfato amnico Carbonato potsico Carbonato magnsico Sulfato amnico Sulfato de cinc Sulfato ferroso Silicato potsico 1,5g 70g 4g 4g 0,6g 0,6g 0,4g 0,25g 0,07g 0,07g 0,07g

Cuadro 2: Composicin del medio CZAPEK

1 2 3 4 5 6 7 8 Agua Sacarosa Nitrato sdico Fosfato potsico Sulfato magnsico Cloruro potsico Sulfato ferroso Agar 1.000 g 30g 2g 1g 0,5g 0,5g

0,01g 15 (de 12 a 20)

Los

medios como Malta-Sacarosa, Creatina-Sacarosa,

Creatina -Diclorn y Sacarosa-Diclorn permiten aislar y diferenciar penicilios, incubando a 25C durante una semana. El agregado de 0,5% de cido actico glacial al medio favorece el aislamiento de P. roqueforti (Frisvad et al. 1992).

En medios slidos, el hongo exige para vegetar un cierto mnimo de humedad; la desecacin relativa perturba o detiene el desarrollo o determina anormalidades en la colonia. De igual manera, el poder osmtico de las soluciones del substrato no puede exceder de un cierto lmite. En general, los mohos vegetan bien en medio neutros o ligeramente cidos; de ordinario el desarrollo del moho hace variar rpidamente el pH en el sentido de aumento de acidez y con frecuencia despus el pH aumenta aproximndose a la neutralidad. Claro es que estos fenmenos dependen de los productos de su metabolismo que el moho vierte en el medio. Puede interesar el ajuste del substrato a un determinado pH, lo que fcilmente se consigue valindose de un cido orgnico tal como el trtrico o el ctrico o con hidrxido sdico, segn los casos. En cuanto a las condiciones de temperatura, las especies de Penicillium en general vegetan bien entre 15 y 25; a temperaturas de 10 12 grados por encima o por debajo de estos lmites, el desarrollo se detiene.La temperatura ptima es ordinariamente de 20 a 23. Para la siembra y purificacin de los cultivos se emplean los mtodos generales de la Microbiologa y an es preciso exagerar los cuidados y precauciones, pues los conidios de los mohos infestan el aire, ropas, objetos, etc. de tal modo que dificultan mucho la conservacin de cultivos propios. Para observar el desarrollo del moho y los caracteres del micelio formado, lo ideal sera partir de una sola espora. Esto es difcil, pues de ordinario son sembrados a la vez varios conidios juntos. Germinan pronto, absorbiendo agua, hinchndose, rompiendo su cubierta y emitiendo brotes que se alargan en filamentos micelianos.

Si la temperatura es favorable, estas hifas crecen con rapidez y se ramifican y extienden, formando un velo blanquecino, bien perceptible a simple vista, en la superficie del substrato, entre el 2." y 3." da despus de la siembra.

3.7.

AMBIENTE El Penicillium crece sobre los alimentos preparados o sus

materias primas, ya sean de origen vegetal o animal, si hallan la actividad del agua y los nutrientes necesarios. En el cuadro 1 se resumen datos sobre los lmites de temperatura y desarrollan algunas especies. Cuadro 3: Temperatura y actividad del agua necesarias para el crecimiento de algunas especies dePenicillium (Corry 1987, Lacey 1989).
TEMPERATURA C PTIMO MNIMA - 2 a 32 23 12 - 30 23 <5 - 37 26 - 30 0 37 25 jun-37 20 - 25 -3 a 35 25 26 10 42 31 <5 - 35 25 0 31 20 ACTIVIDAD DEL AGUA PTIMA MINIMA 0,81 - 0,83 0,98 0,80 - 0,82 0,99 0,80 - 0,84 0,85 0,9 0,99 0,82 - 0,83 0,99 0,83 - 0,86 0,83 0,99 0,8

entre los que

ESPECIES RANGO P. aurantiogriseum P. brevicompactum P. citrinum P. commune P. digitatum P. expansum P. islandicum P. roqueforti P. verrucosum

3.8.

MICOTOXINA EN PENICILLIUM SPP Y SU TOXICIDAD El mayor riesgo de la contaminacin alimenticia por hongos

miceliares es la posible formacin de micotoxinas. Las micotoxinas son metabolitos secundarios txicos para mamferos y otros animales al ser introducido en el organismo por una ruta natural,

fundamentalmente la va oral a travs de los alimentos.

El gnero Penicillium contiene un gran nmero de especies toxgenas yla capacidad que tienen las Penicillium spp de producir diferentes micotoxcinas es superior a la existente en cualquier otro gnero fngico. Las principales micotoxinas producidas por

Penicillium spp son las presentadas en el cuadro 4. Cuadro 4: Especies de Penicillium y sus micotoxinas. Micotoxina Acido ciclopiazonico Acido penicilico (AP) Citrinina (CIT) Ocratoxina A (OA) Patulina Penitrems Roquefortina C Toxina PR subgnero Penicillium Penicillium Furcatum Penicillium Furcatum Penicillium Penicillium Penicillium Furcatum Penicillium Penicillium Principales especies productoras P. camemberti, P. commune, P.griseofulvun P. aurantiogriseum, P. viidicatum P. simplicissimum P. expansum, P.verrucosum P. citrinum P. verrucosum, P. nordicum P. expansum, P. griseofulvum P. crustosum, P. glandicola P.canescens, P. janczewskii P. chrysogenum, P. crustosum, P. expansum P. griseofulvum, P. hirsutum, P. hordei P. roqueforti P. roqueforti

Figura 4: Especies de Penicillium.

Penicillium camemberti

Penicillium chrysogenum

Penicillium commune Penicillium expansum

Penicillium Penicillium restrictum roqueforti

Penicillium rugulosum Penicillium simplicissimum

Penicillium spinulosum

Penicillium thomii

Penicillium verrucosum

Todas estas substancias son originadas por los hongos para afianzarse en su ambiente natural inhibiendo a otros organismos que compiten por el substrato. Las micotoxinas tienen diversa estructura qumica, su peso molecular es relativamente bajo y se difunden en el medio. Algunas existen en cantidades significativas en el ambiente natural como para influir en la salud del hombre y otros animales, pero es prcticamente imposible inactivarlas por los tratamientos trmicos que se aplican corrientemente en la elaboracin y conservacin de los alimentos (Samarajeewa 1991). Para conocer la capacidad de producir micotoxinas de una cepa, se la suele sembrar en arroz con agua (1+2 en peso) o en medio YES (extracto de levadura 2% y sacarosa 15%) con una

incubacin de 7 - 12 das a 25C. Se puede emplear cloroformo para extraer las toxinas (Betina 1985). En el caso de ocratoxina A, cido peniclico y citrinina, que son substancias cidas, se las suele reextraer por particin con una solucin de bicarbonato de sodio para eliminar impurezas (Steyn et al. 1991). LA CITRININA Es un metabolito de P. citrinum, un moho ubicuo mesfilo, y de las especies psicrotrficas P. verrucosum y P. expansum, que incorporado a la dieta de animales monogstricos puede causarles la muerte por degeneracin renal. En aves de corral produce adems diarrea acuosa. La dosis letal (DL50) por va oral en ratn es 110 mg/kg de peso corporal (Pitt & Leistner 1991). EL CIDO PENICLICO Es una lactona mutagnica con una dosis oral letal (DL50) en ratn de 600 mg/kg de peso corporal. Las especies productoras de cido peniclico son P. aurantiogriseum, comn en granos, frutas, hortalizas y carnes, y P. simplicissimum, un mesfilo poco frecuente. Las especies productoras de cido peniclico crecen a 5C (Pitt & Hocking 1997). La exposicin a los vapores de amonaco exalta la fluorescencia celeste de la toxina en la placa de gel de slice (Ciegler & Kurtzman 1970). LA PATULINA Es una lactona txica (fig. 5.3) producida por P. griseofulvum, comn en cereales y nueces, P. expansum, frecuente en manzanas, P. gladioli y P. sclerotigenum asociado a rizomas y bulbos, P. claverigenum, P. vulpinum, P. concentricum, P. coprobium, P. glandicola, P.formosanum y P. carneum. La mayora de las especies productoras de patulina crecen a la temperatura de refrigeracin (Frisvad et al. 2000). A lo largo de los aos este compuesto recibi

varios nombres segn la fuente, entre otros clavacina, claviformina, expansina (Moss & Adak 1986). OCRATOXINA Esta toxina (fig. 4.4) es formada por dos especies de penicilios: P. verrucosum cuya colonia sobre Sacarosa-Diclorn (cap. 3) o el mismo medio sin inhibidores, tiene el reverso pardo obscuro y forma citrinina (Pitt 1987) y P. nordicum con el reverso de la colonia de color crema plido en dicho medio. Las cepas de P. verrucosum contaminan cereales y a veces quesos, las de P. nordicum estn presentes sobre quesos y carnes (Larsen et al. 2001). Cada conidio contiene 0,4-0,7 pg de ocratoxina A (Skaug et al. 2001). La actividad del agua para la produccin de ocratoxinas es 0,87-0,90 segn la temperatura (Corry 1987). IV. 4.1. Materiales Aislamiento directo: Asa de siembra. Agar Mechero bunsen. Naranja contaminada con Penicillium. Aislamiento a un microcultiv Cultivo de Penicillium spp puro. Agar ogy. Asa de siembra. Porta objeto. Cubre objeto. Varillas. Papel filtro. Pinza. Placa de Petri. Mechero bunsen. MATERIALES Y MTODOS

4.2.

Procedimiento

Aislamiento directo del Penicillium spp. 1. Tomar con el asa en punta previamente esterilizado, un inoculo del moho previamente obtenido de la naranja.

Figura 5: naranja contaminada con Penicillium spp. 2. Inocular por estra en la placa con agar ogy. 3. Dejar en incubar a temperatura ambiente por 5 a 7 das.

Aislamiento del Penicillium spp a un microcultiv.

1. Cortar cuadros de PDA de una caja Petri de 1 cm de lado y 3 mm de espesor con un bistur estril y caliente.

Figura 5: Forma en que se cortan los cuadros de agar par el microcultiv.

2. Colocar el cuadro de OGY en un portaobjetos que est sobre una varilla de vidrio doblada en forma de V en una caja de Petri (previamente esterilizada).

Figura 7: Material para el microcultiv y puesta del cuadro de agar. 3. Tomar con el asa l inoculo del moho previamente seleccionado. 4. Inocular por picadura en cada uno de los lados del cuadro de agar y por estra en la superficie. 5. Colocar sobre el agar un cubreobjetos y presionar ligeramente para que se adhiera al medio. 6. Adicionar agua hasta humedecer el papel filtro que se

encuentra en la caja Petri. 7. Incubar la caja a temperatura ambiente durante 7 a 10 das.

V. -

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Se logr aislar Penicillium spp en la cascara de naranja en descomposicin para luego aislarlo en agar OGY, de esa manera dejarlo a temperatura ambiente durante 15 das.

Despus de 10 se observ al microscopio con lugol. Lectura del Penicillium

Cuadro 6: Caractersticas morfolgicas obtenidas en el laboratorio. Reverso Color Verde amarillento Verdoso Entero Circular Convexaza Superficie Verde oscuro Verdoso Entero Circular

Aspecto Borde Forma Elevacin

VI.

CONCLUSIONES

En este trabajo se concluy que se pudo obtener con gran satisfaccin los Penicillium spp de la naranja.

La tcnica de microcultivo es un mtodo lento pero eficaz para determinar con exactitud gnero y especie de diferentes tipos de hongos aunque en esta prctica nose pudo determinar la especie, por lo menos fueron se determin que los diferentes hongos encontrados a pesar del mismo gnero presentaban diferencias notables entre ellos,

lamentablemente no se encontr con exactitud la especie de la que se hablaba por lo que se decidi omitirlo. Aun as este mtodo representa varias ventajas en el estudio de los hongos filamentosos en especial que se mantengan intactas sus estructuras. Se conocieron los mtodos de aislamiento de los mohos como el Penicillium spp., como asi tambin sus caractersticas morfolgicas y la importancia que en la industria alimentaria.

VII. -

REVISION BIBLIOGRAFICA

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http://www.vi.cl/foro/topic/8265-virus-tratamiento-del-hiv-captulos-demicrobiologa/

ANEXOS