FACULDADES INTEGRADAS APARICIO CARVALHO FIMCA CURSO DE BIOMEDICINA

ARLISSON CUNHA MENEZES

DOPING GENTIO E OS SEUS PRINCIPAIS GENES ALVOS

PORTO VELHO RO 2010

ARLISSON CUNHA MENEZES

DOPING GENTIO E OS SEUS PRINCIPAIS GENES ALVOS

Trabalho de Concluso de Curso apresentado ao Curso de Biomedicina como requisito parcial para obteno do grau de bacharel em biomedicina.
Orientador:

PORTO VELHO RO 2010

LISTA DE FIGURAS Figura 1: Grfico indicativo das fases dos testes clnicos de terapia gnica em andamento. Segundo o The Jornal of Gene Medicine ...................................................... 7 Figura 2: Grfico demonstrativo das indicaes de uso dos testes clnicos de terapia gnica. Segundo o The Jornal of Gene Medicine ............................................................. 7

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

COI Comit Olmpico Interanacional EPO - Eritropoietina GDF-8- Growth Differentiation Factor -8 GTWG Gene Therapy Work Gruop IGF-1 Insulin-like Growth Factor NIH National Institute of Hearth WADA World Anti Doping Agency

Resumo Esse trabalho se trata de uma reviso bibliogrfica com o objetivo de mostrar a possibilidade do uso do doping gentico, demonstrando os seus potenciais alvos. Com o avano da tecnologia gentica e, mais recentemente, a terapia gentica, acredita-se agora que as tecnologias de transferncia de gene poderiam ser indevidamente utilizadas para a melhoria do desempenho atltico no esporte. O uso no teraputico de clulas, genes, ou de modulao da expresso gnica, tendo a capacidade de melhorar o Atltico desempenho definido como Gene Doping pelo World Anti-Doping Agency (WADA). A eritropoietina (EPO), fator de crescimento semelhante a insulina -1 (IGF-1 e inibidores da miostatina foram identificados como alvos primrios para o doping gentico. A no possibilidade de deteco do doping pelo uso dessa ferramenta com tecnologia atual pode incentivar seu uso, porm o uso para finalidades no teraputicas pode trazer prejuzos a sade. Sendo de extrema importncia o desenvolvimento de tcnicas de anti doping gentico, assim como aes educativas com pessoas envolvidas em tais eventos. Palavras-Chave: Dopping Genetico Genes Alvos

Abstract This work it is a bibliographic review aim to show the possibility the use of gene doping, demonstrating their potential targets. With advancement in gene technology and, more recently, gene therapy, it is now believed that gene transfer technologies could be misused for improvement of athletic performance in sport. The non-therapeutic use of cells, genes, genetic elements, or of the modulation of gene expression, having the capacity to improve athletic performance is defined as Gene Doping by the World Anti-Doping Agency (WADA). Erythropoietin (EPO), insulin-like growth factor-1 (IGF-1), and myostatin inhibitor genes have been identified as primary targets for gene doping. The possibility of non-detection of doping by the use of this tool with current technology can encourage its use, but the use for not therapeutic purposes can bring harm to health. Being of extreme importance to develop techniques of gene anti doping well as educational activities with people involved in such events.

KEY-WORDS: Gene Doping Target Genes

SUMRIO
INTRODUO ...........................................................................................................................................1 1. 2. 3. DOPING ............................................................................................................................................3 TERAPIA GNICA...............................................................................................................................5 DOPING GENTICO ...........................................................................................................................8 4.1 4.2 4.3 5 6 eritropoietina (EPO) .............................................................................................................. 10 Fartor de Crescimento Semelhante a Insulina I (IGF-1) ........................................................ 11 Miostatina (GDF-8) ................................................................................................................ 12

METODOLOGIA.............................................................................................................................. 14 CONCLUSO .................................................................................................................................. 15

REFERNCIAS ......................................................................................................................................... 16

INTRODUO O esporte passou a est integrado a todos os setores de uma sociedade, atribuindo ento ao Estado a funo de zelar pelo controle de prticas antiticas e da dopagem (NETO, 2001). As definies para o que seria o doping so varias, porm se observa entre elas um ponto em comum que o intuito de melhorar o desempenho. O doping foi definido pela Declarao final da Conferncia Mundial sobre Doping no Esporte (1999), como uso de um artifcio, substncia ou mtodo potencialmente perigoso para a sade do atleta e capaz de aumentar sua performance ou a presena de uma substncia ou a constatao do uso de um mtodo presente na lista do Cdigo do Movimento Olmpico Antidoping. (SILVA, 2005). A terapia gnica pode ser definida como uma interveno mdica baseada na modificao do material gentico de clulas vivas, resultando em benefcio teraputico (NARDI, TEIXEIRA e DA SILVA, 2002). O primeiro protocolo clnico dessa tcnica foi aprovado no final da dcada de 80. Inicialmente pensada para o tratamento de doenas monognicas, atravs da insero de um gene funcional para suprir ou complementar a funo de um gene anormal, comeou a ser vista como alternativa para tratamento de vrias outras modalidades de patologias agindo de diversas maneiras (RAMIREZ e RIBEIRO, 2005). Em 2001 o Comit Olmpico Internacional (COI) realizou um dos primeiros debates sobre o doping gentico, quando declarou que a terapia gnica alm do potencial para tratamento de patologias tambm poderia est sendo usada indevidamente no esporte. E no incio de 2003 o doping gentico entrou para lista dos mtodos proibidos pelo COI (SEELANDER, JNIOR, et al., 2009). A definio de doping gentico de acordo com a World Anti Doping Agency (WADA) seria o uso no teraputico da transferncia de clulas ou elementos genticos ou o uso de agentes farmacolgicos ou biolgicos que alteram a expresso gnica com o potencial de aumentar o rendimento desportivo (ARTIOLI, HIRATA e JNIOR, 2007). Na Lista de Substncias e Mtodos Proibidos do ano de 2010 da WADA, inclui a proibio de mtodos que alteram a expresso de: peroxissome proliferator-actived receptors-PPAR e PPAR-AMP-activated protein kinase (WORLD ANTI-DOPING AGENCY (WADA), 2009). Porm estudos apontam inmeros outros genes como candidatos a terem seu uso aplicado como doping gentico. Sendo os mais estudados e

2 considerados como principais alvos para o doping gentico aqueles que codificam a EPO (eritropoietina), IGF-1 (fator de crescimento 1 semelhante a insulina), VEGF (fator de crescimento muscular) LEP (leptina), Inibidores da miostatina, Endorfinas e PPAR delta (Peroxisome Proliferator Actived Receptor delta). (UNAL e UNAL, 2004) (ARTIOLI, HIRATA e JNIOR, 2007). Diante o exposto o trabalho tem com objetivo geral demonstrar a possibilidade do uso da terapia gnica como forma de doping bem como descrever o efeito pretendido pelo o uso dos principais genes candidatos ao doping gentico. O trabalho esta dividido em seis Captulos, no captulo: 1 abordado sobre o doping e o do incio dos testes anti-doping; 2 Relata o desenvolvimento da terapia gnica; Assim como os pr-requisitos para realizao de tal. 3 Define o doping gentico mostrando a preocupao sobre o tema por parte das entidades reguladoras; 4 Apresenta o papel dos genes na performance esportiva, descrevendo o efeito dos principais candidatos ao doping gentico; 5 Apresenta a metodologia utilizada; 6 Destinado a concluses e consideraes finais.

3 1. DOPING A busca do homem em se superar, tornando-se o mais forte e o melhor observada desde antiguidade. O esporte uma referncia nesse sentido, a idia de recorde sugere a incrvel e ilimitada superao de limites. Com a profissionalizao do esporte esse ganhando o apoio do Estado, do Mercado e da Sociedade, somasse a essa idia presses econmicas e pessoais que sobrecarregam o atleta com a idia de vitoria a qualquer custa. Muitas vezes a exigncia de sucesso, que muitas vezes no alcanada atribuda a incapacidades prprias. Fazendo com que essas pessoas recorram a uma antiga prtica, a de utilizao de algum artifcio com intuito de aumentar suas capacidades, mesmo que o uso desse artifcio leve riscos a sade e a vida do atleta e de seus companheiros e adversrios (Vaz, 2005). Segundo Nbrega, 2002 Tem surpreendido a crescente disposio de atletas e pessoas associadas de arriscar cada vez mais a sade em busca da vitria. nesse contexto que o doping ganha grande importncia para nossas vidas deixando de ser tratadas apenas como atitudes antiticas e ganha status de um ato prejudicial a integridade da sade das pessoas que se sujeitam a tal prtica. A palavra doping apareceu pela primeira vez em um dicionrio ingls no ano de 1889, e tinha como significado uma mistura de narcticos feita para cavalos. Sendo que a provvel origem da palavra seria um dialeto africano onde dop era usado para designar uma infuso estimulante feita com ervas medicinal utilizada em festas religiosas (ASSOCIAO BRASILEIRA DE ESTUDOS E COMBATE AO DOPING - ABECD, 2009) O uso de substancias pelo homem para a melhora de desempenho histrico. E a sua disseminao no esporte vem ganhar importncia j no sculo XIX, perodo em que o esporte passa a ganhar grande importncia para a sociedade semelhante observada na poca greco-romana, quando morre no TOUR DE FRANCE o ciclista ingls Linton que utilizava como estimulante uma mistura de cocana e nitroglicerina. Com o acontecimento das grandes guerras o uso de drogas se disseminou entre as naes. Ainda nos anos 30 do sculo XX a sntese das anfetaminas impulsionaram ainda mais o doping. (NETO, 2001)

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decorrente das qualidades educativas atribudas ao esporte e seu crescente valor econmico, o doping foi se tornando cada vez mais uma problemtica sensvel no campo do esporte, com isso foi crescendo o nmero de instituies, organismos e polticas destinadas a combater o uso dessas substncias.(TAVARES, 2002, apud SOUZA 2008, pg. 4)

J nos anos da dcada de 60 pelo exagero de seu abuso levou o Comit Olmpico Internacional (COI) implementar o controle de dopagem. Que comeou oficialmente a partir de 1968 nas olimpadas de inverno em Grenoble, porm a limitao das metodologias analticas permitiam englobar apenas algumas substancias dopantes (TAVARES, 2002). Nas dcadas subsequentes foram grandes a evoluo das tcnicas analticas possibilitando a deteco de vrias substncia nos testes antidoping, porm como afirma a World Anti-doping Agency WADA, Antes de 1998 o debate ainda se realizava em vrios fruns discretos (IOC, Federaes de Esportes, governos individuais), resultando em definies que se diferenciam em poltica, e sanes. Os acontecimentos de escndalos cada vez maiores apontavam a necessidade de uma padronizao na questo do doping. Em fevereiro de 1999 foi realizada por iniciativa do COI, Comit Olmpico Internacional a primeira Conferncia Mundial sobre esportes em Lausanne na Suia, onde foi amplamente debatida a temtica do doping. (WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA, 2010) De acordo com a Declarao final da Conferencia mundial sobre esportes de 1999, o doping foi definido como:

uso de um artifcio, substncia ou mtodo potencialmente perigoso para a sade do atleta e capaz de aumentar sua performance ou a presena de uma substncia ou a constatao do uso de um mtodo presente na lista do Cdigo do Movimento Olmpico Antidoping.

Ainda como resultado das discusses da conferncia em novembro de 1999 foi estabelecida a WADA, World Anti-doping Agency. que ficou estabelecida como:

A WADA foi criada em 1999 como uma agncia internacional independente composta e consolidada igualmente pelo movimento de esporte e os governos do mundo. As suas atividades-chave incluem a

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pesquisa cientfica, a educao, o desenvolvimento de capacidades antidoping, e monitorizao do Cdigo Mundial Anti Doping o documento que harmoniza a poltica anti-doping em todos os esportes e todos os pases. (WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA, 2009)

2. TERAPIA GNICA Resultante do imenso avano da biotecnologia principalmente das tcnicas de DNA recombinante e clonagem gnica surgi terapia gnica. De acordo com NUSSBAUM, MCINNES e WILLARD, (2002, pg. 237) A terapia gnica a introduo de um gene em uma clula com o fim de obter um efeito teraputico. J para Artioli, Hirata e Jnior (2007 pg.350)
A terapia gnica pode ser definida como um conjunto de tcnicas que permitem a insero e expresso de um gene teraputico em clulasalvo que apresentam algum tipo de desordem de origem gentica (no necessariamente hereditria), possibilitando a correo dos produtos gnicos inadequados que causam doenas.

A facilidade de se introduzir um gene em clulas em laboratrio levou a varias pessoas pensarem que seria fcil a aplicao de tal procedimento para a clnica (Read 2008). Para se elaborar um protocolo de terapia gnica necessitasse atender alguns prrequisitos bsicos. Que do conhecimento sobre o gene e sua clonagem e de sua transferncia e expresso (ARMELINI, 2007). Nos Estados Unidos, pas em que existe o maior nmero de protocolos clnicos de terapia gnica em andamento o National Institute of Healt (NIH), exige para a autorizao de uma terapia gnica: o conhecimento do gene e sua disponibilidade em forma pura, mtodo eficiente de introduo do gene na clula ou tecido, apresentar o mnimo de risco possvel, no existir alternativas de tratamento e a demonstrao de eficcia da tcnica em modelos animais (Snustand, 2008). A terapia gnica pode ser classificada em dois tipos a in vivo e a ex vivo. Essa classificao esta relacionada forma de introduo do gene na clula. Na primeira o vetor com o transgene introduzido diretamente no organismo. No caso de ex vivo so retiradas clulas do individuo que recebe o transgene in vitro e posteriormente so reintroduzidas no individuo (NARDI, TEIXEIRA e DA SILVA, 2002). Para que ocorra a introduo do gene na clula alvo se necessita de um vetor. A escolha do vetor fundamental para o sucesso da terapia. De acordo com ONO, (2008 pg. 18)

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Um vetor ideal seria aquele que pudesse acomodar um tamanho ilimitado de DNA inserido, fosse disponvel em uma forma concentrada, pudesse ser facilmente produzido, pudesse ser direcionado para tipos especficos de clulas, no permitisse replicao autnoma do DNA, pudesse garantir uma expresso gnica a longo prazo e fosse notxico e no-imunognico.

Porm esse vetor ainda no disponvel, mas existem algumas variantes de sistemas vetoriais cada uma apresentando suas vantagens e desvantagens. Esses vetores so classificados como virais e no virais. Sendo que os vetores virais, tem apresentado uma caracterstica importante para o resultado da terapia, que a de um bom nvel de expresso do transgene. Entretanto os vetores virais comparado com os no virais apresenta toxicidade, um maior custo de produo e menor especificidade tecidual (AZEVEDO, 1997); (ONO, 2008). Outro fator de suma importncia para o sucesso de uma terapia gnica alm da entrega do transgene ao ncleo da clula alvo a expresso do transgene e seu controle, dependendo da finalidade da terapia pode se necessitar de uma expresso por um curto perodo de tempo ou por um tempo mais prolongado, por isso a necessidade do controle da atividade do transgene. (RANG, DALE, et al., 2007) O primeiro protocolo de terapia gnica em humano para teste foi aprovado nos Estados Unidos no final de dcada de 80 e em 1990 o primeiro caso de terapia gnica para estudo clnico (COURA, 2009). Ao decorre dos vrios ensaios de terapia gnica realizados desde ento ocorreram alguns contratempos alguns pacientes desenvolveram neoplasias e em um dos estudos a resposta imunolgica ao vetor levou a morte de um paciente. De acordo com Han (2007, pg. 91) Hoje, temos mais de mil diferentes protocolos clnicos (concludos e em andamento) no mundo todo envolvendo mais ou menos 5.000 pacientes. E em 2003 na China foi lanado o primeiro produto baseado em terapia gnica, destinado a cncer de cabea e pescoo consistia em um adenovrus utilizando o gene P53 (HAN, 2007). Os protocolos Clnicos em andamento encontramse a maioria na Fase I do estudo como demonstrado na FIGURA 1.

Figura 1: Grfico indicativo das fases dos testes clnicos de terapia gnica em andamento. Segundo o The Jornal of Gene Medicine

Pensada originalmente com o objetivo de tratamento e cura de doenas genticas, a terapia gnica vem se tornando tambm esperana para tratamento de inmeros outros distrbios e patologias, como o cncer e infeces virais usando-se de variadas estratgias (KREUZER e MASSEY, 2002). De acordo com a base de dados do site do The Journal of Gene Medicine, no qual atualizado regularmente com as informaes das agencias oficiais de regulao de terapia gnica, a distribuio dos protocolos clnicos existentes em relao s doenas esta representados conforme a FIGURA 2.

Figura 2: Grfico demonstrativo das indicaes de uso dos testes clnicos de terapia gnica. Segundo o The Jornal of Gene Medicine

8 3. DOPING GENTICO
A corrida entre os praticantes do doping e os esforos das autoridades desportivas para o desenvolvimento de mtodos eficazes de deteco de doping esta em curso, desde quando o esporte competitivo existiu. [...] O progresso exponencial da tecnologia do DNA recombinante, tornou o tedioso trabalho da deteco de doping em atletas, mais desafiador, com o desenvolvimento de uma variedade de protenas recombinantes com efeitos dopantes. (Azzazy & Mansour, 2007 pg. 951)

Segundo Unal & Unal (2004 pg. 258) Apesar de terapias genticas serem desenvolvidos para o tratamento de doenas, muito provvel que a terapia gentica possa aumentar o desempenho se usado por atletas saudveis. Com os avanos da gentica humana e mdica, principalmente pela eminncia do uso de terapias gnicas, entidades internacionais representantes dos esportes comearam a vislumbrar o uso de tal procedimento com o objetivo de obter aumento no rendimento esportivo. Tal discusso comeou em junho de 2001 quando o COI promoveu um encontro do Gene Therapy Work Gruop (GTWG), onde foi declarado que apesar dos grandes benefcios do uso da terapia gnica, na preveno e tratamento das doenas, tem um grande potencial para o uso indevido no esporte e alertou para a necessidade de desenvolvimento de formas de deteco. Naquele ano o COI submeteu a questo apreciao da WADA que, por sua vez, organizou com o apoio do COI simpsios para discusso acerca do tema. Em maro de 2002, foi promovido o primeiro encontro em Nova York com a presena de Especialistas, Cientistas, Atletas, representantes do movimento olmpico e dos governos. O segundo encontro em 2005 foi promovido com o apoio do Instituto Karolinska e da Confederao Sueca de Esportes. E o terceiro foi realizado na Rssia em 2008, com o apoio das autoridades de esportes russas. O objetivo dos simpsios realizados pela WADA a de proporcionar um intercambio abordando as atualizaes em pesquisa, a capacitao de tcnicos, as perspectivas ticas e o enquadramento jurdico da questes relacionadas ao doping genetico. Em 2004 a WADA criou um grupo de Peritos sobre o doping gentico, de acordo com a WADA (2009) A tarefa do grupo de peritos estudar os mais recentes avanos no campo da terapia gentica, os mtodos para a deteco de doping e os projetos de investigao financiados pela WADA nesta rea (WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA, 2009). Para Seealendear et.al (2009 pg. 3) A definio exata dada ao termo Doping Gentico seria:

9 "O uso no teraputico de genes, elementos gnicos e/ou clulas que tem a capacidade de aumentar a performance atltica." Segundo Rabin (2005) No momento em que a WADA introduziu o tema do doping gentico ou celular em seu programa de investigao prioritria, a questo era mais de um intelectual e futurista do que uma preocupao realidade. Em reportagem da revista Play True, Pound afirma (2005, pg.2) Ns precisamos comear a combater essa ameaa agora antes que se torne realidade. mais fcil evitar o problema do que resolve-lo. A terapia gnica com certeza um grande avano da rea biomdica sendo hoje uma realidade, mesmo ainda em aperfeioamento. Existem grande nmeros de ensaios clnicos que apresentaram sucesso, porm ainda ocorrem imprevistos como desenvolvimentos de neoplasias e at mesmo mortes.
O doping gentico uma ameaa integridade do desporto e da sade dos atletas. Como a organizao internacional responsvel pela promover, coordenar e acompanhar a luta global contra o doping no esporte em todas suas formas, a WADA est a dedicar recursos significativos e ateno para identificar formas de detectar e prevenir o doping gentico. (Play True, 2008, pg.19)

GENES CANDIDATOS Segundo Dias et. al. (2007, pg. 209) a predisposio gentica que, se no o mais importante, tem grandes implicaes na caracterizao do indivduo como um atleta de destaque. Porm mltiplos fatores so responsveis por garantir um fentipo atltico, no somente um gene, mas alguns genes associados a ao ambiental, so responsveis por uma boa performance esportiva. O interesse do esporte na gentica no algo novo apesar de tmido. Teve seu incio em 1967 com o Programa de Gentica e Biologia Humana, que visava relacionar traos genticos a habilidades esportivas alm da interao entre gentica e fatores ambientais. Devido a limitaes tcnicas da poca os resultados no foram os esperados.o que provavelmente desacreditou os organizadores a darem continuidade (RAMIREZ, 2007) De acordo com o The human gene map for performance and health-related fitness phenotypes, elaborado por Rankinen et al. estudo baseado em pesquisas publicadas que obtiveram resultado positivos ao relacionar atividade de um gene com a

10 atividade atltica, em sua ultima atualizao 2006-2007, j somava 214 genes autossmicos alm 7 ligados ao cromossomo X e outros 18 cromossomos mitocondriais. Dentre esses genes alguns ganham destaque quanto a possibilidade do seu uso em terapia gnica, sem a finalidade teraputica, eles so conhecidos como genes candidatos ao doping gentico. De Segundo SEELANDER, JNIOR, et al., (2009, pg.1) Os principais genes alvos ao doping so aqueles que proporcionam principalmente aumento na captao de oxignio com conseqente perda de peso, otimizao do metabolismo energtico e rpido ganho de massa muscular. Por isso genes como EPO, GDF-8 e IGF-1, so fortes candidatos ao doping gentico.

4.1 ERITROPOIETINA (EPO) A ertiropoietina uma glicoprotena que tem no adulto os rins como principal produtor, mais exatamente as clulas intersticiais tipo I semelhantes a fibroblastos presentes no cortex e na membrana exterior, durante a vida fetal tal funo desempenhada pelas clulas do fgado. A funo da eritropoietina o estimulo a eritropoiese, atuando na promoo da diferenciao e incio da sntese de hemoglobina, tal protena possui 193 aminoacido, com 34kDa. O gene codificante para eritropoietina est localizado no brao curto do cromossoma 7 (q11-q22), sendo composto por 5 Exes (SCHIMITD, RAMOS, et al., 2003); (BARBOSA, 2009). Em 1964 Eero Mntryanta, um esquiador finlands, foi ganhador de duas medalhas de ouro nas olimpadas de inverno com facilidade, posteriormente foi demonstrado que o atleta possua uma mutao gentica que lhe proporcionava uma quantidade eritrcitos acima da mdia. Na dcada de 70 foi relatado o uso do doping sanguineo, tcnica que consistia em uma transfuso sanguinea dias antes da competio. Uma vez que a funo dos eritrcitos de realizar o transporte de oxignio aos tecidos no cumprida temos um quadro de hipoxia. Condio essa que leva fisiologicamente a expresso do gene da eritropoietina, fazendo com que os eritrcitos se diferenciem na medula e sejam lanados na circulao, assim aumentando o nvel do hematcrito. Dessa maneira se a eritropoietina fosse liberada em condies normais de oxigenao tecidual teramos um maior aporte de oxignio. Condio essa especialmente ergognica para atletas de endurance (HAISMA, DE HON, et al., 2004); (PAPESCHI, 2010).

11 Vrias pesquisas conseguiram inserir o gene da eritropoietina em seres vivos, porm os resultados obtidos foram pouco confiveis. Em alguns estudos o aumento da EPO foi to elevado que levaria a concentrao de eritrcitos a um patamar incompatvel com a vida humana. J em outros ensaios em animais se observou o desenvolvimento de uma grave anemia, decorrente do desenvolvimento de resposta auto-imune a EPO.

4.2 FARTOR DE CRESCIMENTO SEMELHANTE A INSULINA I (IGF-1) O IGF-1, tambm denominado de somatomedina c, uma protena fundamental na produo dos efeitos do hormnio do crescimento. SALMON e DAUGHADAY em 1957 observaram que o hormnio do Crescimento, GH no estimulava o crescimento de cartilagem quando adicionado ao meio de cultivo celular, porm ao ser adicionado juntamente com plasma de animal saudvel se obtinha o efeito condroestimulante esperado. O que levou a postulao da existncia de um fator plasmtico responsvel pelo crescimento que foi denominado somatomedinas. Esse fator produzido principalmente no fgado que liberados no sangue age sobre os tecidos. Foi identificado a existncia de dois peptdeos com a sequncia aminoacida bastante semelhante a da pr insulina . Os IGF-1 e IGF-2, sendo o IGF-2 exercendo grande importncia no desenvolvimento fetal, importncia essa assumida pelo IGF-1 no desenvolvimento extra-ulterino. O IGF-1 composto de 70 aminocidos e tem seu gene no brao curto do cromossomo 12 (12q23.2) (DOUGLAS, 2006). Acredita-se que fissuras adquiridas com o esforo muscular ativam um sistema de reparao onde h a regenerao da membrana com preenchimento do interior com novas miofibrilas, quando a demanda por essas miofibilas grande ocorre ativao das clulas satlites originando a hiperplasia dentre os fatores de regulao desse processo est envolvido o IGF-1 (RAMIREZ e RIBEIRO, 2005). Com o objetivo de encontrar um tratamento para doenas crnico degenerativas como distrofia muscular e prevenir perda de funo associada ao envelhecimento, algumas pesquisas utilizando terapia gnica com o IGF-1 encontram-se em andamento. A admnistro de um adenovrus associado com o gene do IGF-1 em camundongos resultou em um aumento da massa muscular, como SEELANDER, JNIOR, et al., (2009) descreve experimento de BARTON DAVIS e Colaboradores.

12 Em outro estudo observou-se que os nveis de IGF-1 os produzindo no msculo se elevava somente no prprio msculo e no na corrente sanguinea o que levaria riscos cardiacos e de neoplasias. Essa elevao somente a nvel local um bom precedente para o uso da terapia gnica para doenas que envolvavam a degradao muscular. Havendo ainda a necessidade de melhor ser testados os efeitos e a segurana do procedimento. (SWEENEY, 2004) A possibilidade de usar esse tipo de tratamento na recuperao de leses de tecidos de difcil regenerao e longo tempo de recuperao seria um grande beneficio a medicina esportiva, mas tambm abriria possibilidade do seu uso para fins de performance.
provvel que o msculo seja o primeiro tecido suscetvel ao aperfeioamento gentico, [...] bem provvel que daqui alguns anos algumas terapias gnicas mostrem-se seguras e se tornem disponvel a populao. [...] As autoridades esportivas j reconhecem que terapias gnicas que regenerem msculos podem ser uteis para ajudar atletas em recuperao de leses. (SWEENEY, 2004 pg.47)

4.3 MIOSTATINA (GDF-8) A miostatina uma protena pertencente a famlia dos TGF- (fator de 8crescimento transformante, que produzida nos micitos. O gene do GDF-8 se encontra no brao curto do cromossomo 2 (2q32.1) e resulta na traduao de 375 aminoacidos. Segundo ARTIOLI, HIRATA e JNIOR, (2007, pg351) Sua ao consiste em regular a proliferao dos mioblastos durante o perodo embrionrio e a sntese protica na musculatura esqueltica durante e aps o perodo embrionrio. A forma de atuao da miostatina ainda no conhecida, se dar-se por meio da induo de morte dos micitos, pela inbio do crescimento de celulas satlites ou pelo metabolismo protico (GENTIL, 2008). O papel de inibio exercido pela miostatina foi comprovado no final da dcada de noventa quando observado o grande ganho de massa muscular em bovinos com mutao nesse gene, a mesma mutao tambm foi observada nos ces da raa Wippet. Existe ainda em literatura a descrio de uma criana que apresentava tal fenotipo, sendo nela detectada delees do gene da miostatina. Segundo Kramm, Raboo (2010) pesquisas demonstram que o bloqueio da expresso gnica da miostatina

13 oferece uma boa estratgia para o tratamento de doenas associadas perda do tecido msculo-esqueltico. Em estudo realizado por LEE e McPHERRON, onde ratos trangenicos com super-expresso de bloquedores da miostaina como a folastatina apresentaram o fenotipo de doubling muscle, caracteristico dos casos onde h mutaes do gene da miostatina. Supostamente se o bloqueio da expresso do gene ou da protena for realizado em situao onde no ocorre a perda muscular resultar em um aumento da massa muscular. O potencial ergognico desse mtodo grande, mas ainda no existe dados de literatura dando conta da transferncia vetorial de tais genes, h a possibilidade de no se ter um controle da expresso gnica poderia levar a um descontrole do crescimento muscular.

14 5 METODOLOGIA Almejando alcanar os objetivos propostos neste trabalho foi realizada uma pesquisa bibliogrfica. Trata-se de levantamento da bibliografia j publicada sobre o assunto em questo, que busca proporcionar um estudo geral acerca de determinado tema (LAKATOS e MARCONI, 2001). Para isso utilizou-se como base de fonte de dados livros peridicos cientficos e vrias bases de dados da internet usando em suas ferramentas de busca as palavras chaves doping gentico (gene doping); doping e terapia gnica.

15 6 CONCLUSO A grande vantagem para o praticante de doping no uso do doping gentico seria a no existncia de formas de deteco. Isso devido aos produtos derivados da terapia gnica serem semelhantes aos produzidos pelo corpo do atleta. Acredita-se que a cincia evoluir em breve para o uso de terapias gnicas seguras assim como tambm consiga desenvolver mtodos para a deteco do doping gentico. No entanto para que ocorra o desenvolvimento para mtodos de deteco, necessrio o desenvolvimento de marcadores que assegurem confiabilidade aos testes, alcanado com bons nveis de especificidade e sensibilidade, alm de a obteno da amostra para realizao do teste deve ser obtida de forma no invasiva no gerando riscos a sade do atleta. As terapias gnicas so desenvolvidas para pessoa com algum tipo de patologia no conhecendo os riscos associados ao seu uso em pessoas sadias. Outro fator que para realizao desse tipo de procedimento esto envolvidos alto grau de controle toxicidade e segurana do procedimento o que envolve laboratrios certificados. O uso para o doping gentico no passaria por esse controle, assim botando em risco a sade dos atletas. Vrios so os genes que se usados como terapia gnica teriam capacidade de promover ganhos no desempenho atltico. Com isso existe a necessidade de regulao proibitiva para esses procedimentos e mtodos que possibilitem a sua deteco. Apesar de no evitar que o doping ocorra formas de deteco associadas a sanes punitivas inibiriam seu uso. Tambm de suma importncia polticas de educao, que visem demonstrar, para atletas e treinadores dentre outros, os riscos que a terapia gnica tem em relao a sade.

16 REFERNCIAS ARMELINI, M. G. Terapia Gnica: Onde Estamos e Para Onde Iremos: Esperana ou Iluso. Novas Tecnologias na Gentica Humana: Avanos e Impactos Para a Sade. Rio de Janeiro: Gestec-Nit. 2007. p. 87-90. ARTIOLI, G. G.; HIRATA, R. D. C.; JNIOR, A. H. L. Terapia gnica, doping gentico e esporte: fundamentaes e implicaes para o futuro. Revista Brasileira de Medicina do Esporte, Set/Out 2007. 349-354. ASSOCIAO BRASILEIRA DE ESTUDOS E COMBATE AO DOPING - ABECD. A Histria do Doping. Site da Associao Brasileira de Estudos e Combate ao Doping - ABECD, 2009. Disponivel em: <http://antidoping.com.br/main/historia.php>. Acesso em: 20 Setembro 2010. AZEVEDO, E. S. Terapia Gnica. Revista Biotica, Braslia - DF, 1997. BARBOSA, C. M. B. D. R. Estudo do Cotrole da Expresso da Gnica da Eritopoietina Humana por uma Pequena Grelha de Leitura a Montante da Grelha Principal. Universidade de Lisboa Departamento de Biologia Vegetal. Lisboa. 2009. CERVO, A. L.; BERVIAN, P. A.; SILVA, R. D. Metdologia Cientfica. 6 Edio. ed. So Paulo: Person Prntice Hall, 2006. COURA, R. D. S. Estabelecimento de um Protocolo Pr Clnico de Terapia Gnica, Baseada em Vetores Adeno-Associados, Direcionados Para o Tratamento das Manifestaes do Sistema Nervoso Central em um Modelo Murino de Mucopolissacaridose Tipo I. Universidade Federal do Rio Grande do Sul Departamento de Gentica. Porto Alegre. 2009. DIAS, R. G. et al. Polimorfismos Genticos Determinantes de Performance Fsica em Atletas de Elite. Revista Brasileira de Medicina do Esporte, Mai/Jun 2007. 209-216. DOUGLAS, C. R. Homnio do Crescimento ou Somatotrofinas. In: ______ Tratado de Fisiologia Aplicado as Cincias Mdicas. 6 Edio. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Kogan, 2006. p. 1026-1032. GENTIL, P. Miostatina. Site EducacaoFsica.org, 2008. Disponivel em:

<http://educacaofisica.org/joomla/index2.php?option=com_content&do_pdf=1&id=94> . Acesso em: 10 Outubro 20010.

17 HAISMA, H. J. et al. Gene Doping. Netherlands Centre for Doping Affairs. Amsterdam. 2004. HAN, S. W. Terapia Gnica Para Isquemia de Membros. Novas Tecnologias na Gentica Humana: Avanos e Impactos Para a Sade. Rio de Janeiro: Gestec-Nit. 2007. p. 91-96. KRAMM, E. C.; RABBO, M. D. A. G. Miostatina da Terapia Gnica ao Doping Gentico. Efdeportes, Buenos Aires, Novembro 2010. ISSN ISSN. KREUZER, H.; MASSEY, A. Engenharia Gentica e Biotecnologia. 2 Edio. ed. Porto Alegre: Artmed, 2002. LAKATOS, E. M.; MARCONI, M. A. D. Metodologia do Trabalho Cientfico. 6 Edio. ed. So Paulo: Atlas, 2001. NARDI, N. B.; TEIXEIRA, L. A. K.; DA SILVA, E. F. . Terapia Gnica. Cincia & Sade Coletiva, 7 (1) 2002. 109-116. NETO, F. R. A. O Papel do Atleta na Sociedade e o Controle da Dopagem No Esporte. Revista Brasileira de Medicina Esportiva, 7 (4) Jul/Ago 2001. 138-148. NUSSBAUM, R. L.; MCINNES, R. R.; WILLARD, H. F. Thompson & Thompson Gentica Mdica. 6 Edico. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Kogan, 2002. ONO, H. Y. Transfernica Gnica in vivo Por Meio de Eletroporao em Msculo Sleo de Ratos Wistar. Universidade Federal de So Paulo Instituto de Cincias Biomedicas. So Paulo. 2008. PAPESCHI, J. Eritropoietina. Site EducaoFsica.org, 02 Outubro 2010. Disponivel em: <http://educacaofisica.org/joomla/index.php?option=com_content&task=view&id=395 &Itemid=2>. Acesso em: 10 Outubro 2010. RAMIREZ, A. Aspectos Histricos da Pesquisa Gentica em Atletas e a Participao do Comit Olimpico Internacional. Seminars Spain-Brasil university and Olimpics Studies. Barcelona: [s.n.]. 2007. p. 449-457. RAMIREZ, A. DOPING GENTICO: SITUAO ATUAL E NECESSIDADES EDUCATIVAS. Revista Brasieira de Cincias da Sade, julho 2009. 3-5.

18 RAMIREZ, A.; RIBEIRO, . Doping Gentico e Esporte. Revista Metropolitana de Cincias do Movimento Humano, junho 2005. 9-20. RANG, H. P. et al. Farmacologia. 6 Edio. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2007. SCHIMITD, C. A. et al. Avaliao da Atividade e Caracterizao da Eritropoietina Recombinante Humana em Produtos Farmacuticos. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia, Santa Maria, Abril 2003. 183-189. SSEELANDER, M. C. L. E. A. et al. Manipulao de Genes e Desempenho Esportivo: Tendnica ou Realidade? Educao Fsica em Revista, Jan/Fev/Mar/Abr 2009. SILVA, M. R. S. Doping Consagrao ou Profonao. Revista Brasileira de Cincias do Esporte, Setembro 2005. 9-22. SOUZA, K. F. D. A. Doping: Hitricos e Conceitos Atuais. Universidade Metodista de Piracicaba UNIMEP. Piracicaba. 2008. SWEENEY, H. L. Doping Gentico. Scientific American Brasil, n. 27, p. 41-47, Agosto 2004. TAVARES, O. Doping: Argumentos em Discusso. Movimento, Porto Alegre, janeiroabril 2002. 41-55. UNAL, M.; UNAL, D. O. Gene Doping in Sports. Sports Medicine, 34 (6) 2004. 357362. VAZ, A. F. Doping, Esporte, Esporte: Notas Sobre os "Limites" do Corpo. Revista Brasileira da Cincia do Esporte, Campinas, 23-36 Setembro 2005. WELLS, D. J. Gene Doping: the hype and the reality. British Journal of Pharmacology, 154 2008. 623-631. WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA. About WADA. Site da World Anti Doping Agency WADA, 2009. Disponivel em: <http://stage.wada-ama.org/en/AboutWADA/>. Acesso em: 19 Setembro 2010. WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA. Gene Doping. Site da World Anti Doping Agency WADA, 2009. Disponivel em: <http://stage.wada-

ama.org/en/Science-Medicine/Science-topics/Gene-Doping/>. Acesso em: 19 Setembro 2010.

19 WORLD ANTI DOPING AGENCY - WADA. A Brief History of Anti-Doping. Site da World Anti Doping Agency - WADA, 2010. Disponivel em: <http://stage.wadaama.org/en/About-WADA/History/A-Brief-History-of-Anti-Doping>. Acesso em: 19 Setembro 2010. WORLD ANTI-DOPING AGENCY (WADA). The World Anti-Doping Code, The 2010Prohibited List. [S.l.]. 2009.