PRCTICA N 3 CARIOTIPO HUMANO II CROMATINA SEXUAL

INTRODUCCIN
En las clulas cuyo complemento de cromosomas sexuales es XX, uno de los cromosomas X puede mantenerse espiralizado formando el corpsculo de Barr. Las clulas con cromosomas sexuales XY, no presentan este corpsculo, ya que el nico cromosoma X que contienen se ha desespiralizado. El numero de corpsculo de Barr en una clula es igual al nmero de cromosomas X menos uno. Las clulas ms empleadas para la verificacin del corpsculo de Barr es el epitelio de la mucosa bucal. En el ser humano se presenta 22 pares de cromosomas que forman parejas idnticas (autosomas), mientras que el par 23 conocido como par de heterocromosomas puede estar formado de una pareja de cromosomas idnticas (XX) en la mujer o puede ser desigual (XY)como se presenta en el hombre. Las fibras de cromatina estn constituidas por una sucesin de estructuras redondeadas, los nucleosomas. stos tienen un ncleo llamado octmero, formado por cuatro pares de histonas; otra histona, la H1, mantiene unidos los octmeros. Doscientos pares de nucletidos de ADN rodean las protenas para completar cada nucleosoma. Visto al microscopio electrnico tiene el aspecto de un collar de cuentas. Para formar los cromosomas, las fibras se disponen en bucles que se sujetan a un armazn de protenas no histnicas. El cuerpo de Barr puede estudiarse en tres tipos de clulas: Clulas nerviosas, Clulas epiteliales y Leucocitos polimorfonucleares; y la manera de estudiarse es en el epitelio de la mucosa bucal es el tejido ms adecuado para la demostracin de la cromatina sexual. Los cuerpos de barr pueden ser teidos con gran nmero de colorantes nucleares tales como violeta de crecilo, tionina, hematoxilina y verde de metilo, y con tcnica de Feulgen seguida por una hidrlisis cida. Se analizan al microscopio entre 50 y 100 clulas y debido a que la cromatina X se observa menos frecuente en este tipo de tejido.

OBJETIVOS
1. Reconocer alteraciones cromosmicas numricas y/o estucturales en cariotipos y su implicancia clnica. 2. Sealar la nomenclatura de distintas alteraciones cromosmicas de acuerdo a normas del SINCH.

3. Identificar el corpsculo de Barr o cromatina sexual en clulas nucleadas femeninas. 4. Comprender el proceso de diferenciacin sexual y el proceso de inactivacin del cromosoma

FUNDAMENTO TEORICO:
CROMATINA

La cromatina es el conjunto de ADN, histonas y protenas no histnicas que se encuentra en el ncleo de las clulas eucariotas y que constituye el cromosoma eucaritico. Las unidades bsicas de la cromatina son los nucleosomas. stos se encuentran formados por aproximadamente 146 pares de bases de longitud (el nmero depende del organismo), asociados a un complejo especfico de 8 histonas nucleosmicas (octmero de histonas). Cada partcula tiene una forma de disco, con un dimetro de 11 nm y contiene dos copias de cada una de las 4 histonas H3, H4, H2A y H2B.
CROMOSOMAS SEXUALES

En muchos organismos, uno de los pares de los cromosomas homlogos es distinto al resto, realizando la determinacin gentica del individuo. A estos cromosomas se les llama cromosomas sexuales o heterocromosomas e incluso gonosomas, porque determinan el sexo por la proporcin de los dos cromosomas homlogos.
Sistema de determinacin XY: es propio del ser humano y muchos otros animales. Las hembras, siendo XX, darn gametos iguales con cromosoma X, sexo homogamtico y los machos, siendo XY, darn dos tipos de gametos, uno con el cromosoma X y otro con el cromosoma Y. La probabilidad de que en la fecundacin, al unirse los gametos, resulte una combinacin XX (hembra) o XY (macho) es aproximadamente del 50%. Sistema de determinacin XO: otras especies (peces, insectos, anfibios) que no tienen el cromosoma Y, determinndose el sexo por el nmero de cromosomas X, macho XO y hembra XX.

1.- Cromosoma X: En cada pareja de cromosomas de un nuevo individuo, uno de los cromosomas tiene origen paterno (p) y el otro procede maternalmente (m). Por ello, de una madre XX y un padre XY pueden derivarse combinaciones XmXp (hembras) o XmYp (varones). Pero se sabe que las hembras, a pesar de poseer dos cromosomas X, en sus clulas somticas no tienen el doble de genes X activos que los varones (quienes cuentan con un solo cromosoma X). Ello se debe a que, durante el desarrollo embrionario femenino, en algunas clulas embrionarias se inactiva, se silencia, el cromosoma Xp, mientras que, que en el resto de clulas embrionarias, el que se silencia es el cromosoma Xm. Por ello, en las mujeres adultas algunas clulas somticas expresarn el cromosomas Xm y otras el cromosoma Xp, aunque las clulas sexuales s expresen ambos XmXp. Esta es la razn de que cuando existen alteraciones patolgicas en el cromosoma Xm, stas se transmiten a los hijos varones (en los varones no hay silenciamiento), mientras que las hijas no sufren la enfermedad (poseen bastante expresin de Xp), pero son portadoras del problema.
2.- Corpsculo de Barr o Cromatina Sexual:

En 1923, Painter demostr ciotolgicamente la existencia de los cromosomas X y Y en el humano. En 1949, Barr y Bertram descubrieron masas de cromatina sexual (cuerpos de Barr) en clulas en interfase femeninas y no en masculinas. A esta observacin sigui el desarrollo de una tcnica sencilla que permita detectar cuerpos de Barr en clulas de mucosa oral. Como resultado de su aplicacin se reconoci que las clulas femeninas eran cromatina positiva mientras que las masculinas eran cromatina negativa, pero que existan excepciones: las pacientes con sndrome de Turner no tenan cuerpos de Barr y los pacientes con sndrome de Klinefelter si los presentaban. El anlisis citogentico de estos pacientes explic la discrepancia aparente al demostrarse que el sndrome de Turner tena un complemento cromosmico 45, X y el de Klinefelter 47, XXY. Estos hallazgos tambin demostraron que en presencia de un cromosoma Y, independientemente del nmero de cromosomas X, el embrin humano se desarrolla como macho, mientras que en ausencia del Y se desarrolla como hembra.

El siguiente paso en el entendimiento de los cromosomas sexuales humanos fue la explicacin de la cromatina sexual en trminos de la inactivacin del cromosoma X. La hiptesis de Lyon establece que en las clulas somticas de mujeres normales, y no en las de hombres normales, un cromosoma X es inactivado al azar para compensar la dosis gnica en ambos sexos. El cuerpo de Barr representa al cromosoma X inactivo de replicacin tarda. En pacientes con cromosomas X supernumerarios, todos los cromosomas en exceso de uno son inactivados y forman cuerpos de Barr. La diferenciacin sexual es un proceso dinmico sujeto a un programa secuencial, ordenado e interrelacionado que se lleva a cabo en varias etapas consecutivas: el establecimiento del sexo cromosmico durante la fertilizacin, la etapa pregonadal, el desarrollo del sexo gnada, y la definicin de los genitales internos y externos, que condicionan el sexo fenotipo. Los individuos con reversin sexual (varones XX, mujeres XY y hermafroditas verdaderos XX) aparentemente rompen la regla de que el cromosoma Y controla la diferenciacin testicular. En el caso de los varones XX, se ha demostrado que el 80% presenta secuencias derivadas del cromosoma Y translocadas al cromosoma X por una recombinacin ilegtima durante la meiosis paterna.

MATERIAL Y MTODO
Materiales Fotografas de cariotipos con alteraciones cromosmicas. Lminas preparadas de extendidos de mucosa oral y extendidos crvicouterinos (papanicolau).

Mtodo 1. Observar cuidadosamente los cariotipos presentados y determinar qu tipo de alteracin cromosmica presenta. 2. Observar al microscopio de luz las lminas de extendidos de mucosas oral y crvicovaginal identificando en las clulas, la cromatina sexual como un corpsculo intensamente teido adherido a la pared del ncleo. 3. Revisar las normas del SINCH y realizar la nomenclatura de los casos propuestos.

TAREA A REALIZAR
1. Describir las siguientes frmulas de cariotipos: 46,XY,del(4)(p16.3): Cariotipo masculino anormal, con 46 cromosomas que muestra una delecin terminal del brazo corto del cromosoma 4, con punto de quiebra en la sub-banda 3 de la banda 6 de la regin 1. 47,XY,+21/46,XY: Mosaico con dos lneas celulares.; una con 47 cromosomas por la presencia de un cromosoma 21 adicional; y otra con 46 cromosomas. 45,XY,-13,-14,t(13q;14q): Cariotipo masculino anormal con 45 cromosomas, con translocacin en el cromosoma 14 de la banda 4, region 1 del brazo largo q al cromosma 13 de la banda 4, region 1 del brazo largo q. 46,XX,t(2;6)(q35;p21.3): Cariotipo femenino anormal, con 46 cromosomas que muestra una translocacin balanceada entre los cromosomas 2 y 6, con puntos de quiebre en la banda 5 de la regin 3 del brazo largo del cromosoma 2 y la subbanda 3 de la banda 1 de la regin 2 del brazo corto del cromosoma 6. 46,XX,dup(1)(q22-q25): Cariotipo femenino anormal, con 46 cromosomas que muestra una duplicacin en el cromosoma 1 que va desde la banda 2 de la regin 2 hasta la banda 5 de la regin 2 del brazo largo. 46,XY,del(5)(p14): Cariotipo masculino anormal, con 46 cromosomas que muestra una deleccin terminal del brazo corto del cromosoma 5, con punto de quiebre en la banda 4 de la regin 1. 46,XY,r(7)(p22q36): Cariotipo masculino anormal, con 46 cromosomas, que incluye un cromosoma 7 en anillo, con puntos de quiebra en la banda 2 de la regin 2 del brazo corto y en la banda 6 de la regin 3 del brazo largo.

2. Cuntos corpsculos de Barr esperara encontrar en los siguientes individuos : XY = 0 corpsculos de Barr normal

XX = 1 corpsculo de Barr normal XXX = 2 corpsculos de Barr anormal XO = 0 corpsculo de Barr anormal (Sndrome de Turner) XXXY = 2 corpsculos de Barr anormal XXXX = 3 corpsculos de Barr anormal XXY = 1 corpsculo de Barr anormal (Sndrome de Klinefelter)

3. Mediante un dibujo, explicar la formacin de: un cromosoma anular, un isocromosoma. Cromosoma anular: El trmino cromosoma "anular" se utiliza para describir un cromosoma cuyas extremidades se fragmentaron y se unieron para formar un crculo o "anillo". Debido a la rotura de las extremidades, la informacin gentica se pierde. Los anillos tambin pueden formarse sin que las extremidades se rompan: el brazo p y el brazo q se "pegan" sin prdida aparente de material gentico. En algunos casos, los anillos (independientemente de cmo se originaron) provocan problemas en el desarrollo del beb. Esto se debe a que el anillo interfiere en la divisin celular y puede provocar que los genes no funcionen de manera adecuada debido a su reordenamiento.

Isocromosomas. Estos se forman cuando el centrmero, en lugar de dividirse longitudinalmente, lo hace en forma transversal

4. Elaborar un esquema que explique la va de determinacin del sexo en humanos. Indicar procesos a nivel molecular.

5. Elaborar un esquema que explique la inactivacin del cromosoma X o denominada Hiptesis de Lyon. Hiptesis propuesta por Mary Lyon en relacin a la inactivacin al azar que ocurre en uno de los heterocromosomas X en clulas somticas de hembras de mamferos (cuerpo de bar). Ocurrira en etapas tempranas del desarrollo como respuesta a una compensacin de dosis, dado que los machos slo presentan un heterocromosoma X. Se desconoce la base molecular de la inactivacin, pero involucra a una regin del cromosoma llamada XIC (Centro Inactivacin X) en el extremo proximal del brazo p. El locus que controla los procesos de inactivacin del cromosoma X se denomina XIC (X Inactivation Center) y tiene la estructura que muestra la siguiente figura. Adems de los genes XIST y TISX, tambin incluye una regin importante para controlar el contaje y la eleccin del cromosoma que se va a inactivar, llamada X-inactivation Controlling Element (XCE).

El proceso de inactivacin del cromosoma X, debido a la transcripcin del gen XIST, va a transformar la cromatina de este cromosoma que inicialmente esta acetilada en forma de eucromatina en una heterocromatina facultativa de replicacin lenta, compactada y desacetilada.

El paso inicial en este proceso es la transcripcin del gen XIST y el transcrito va a recubrir todo el gen X, desencadenando toda una serie de modificaciones epigenticas y de otros tipos.

INACTIVACIN DEL CROMOSOMA X

6. Realizar un dibujo de su observacin microscpica del corpsculo de Barr en lminas de extendidos de mucosas oral y crvicovaginal.

7. En los siguientes cariotipos, determinar de qu tipo de alteracin cromosmica se trata y realizar la nomenclatura correspondiente. Indicar al menos 3 caractersticas clnicas en cada uno de ellos.

SINDROME DE PATAU: 47, XX, +13 Anomalas en el sistema nervioso Retraso mental Dilatacin de la bifurcacin ventricular Anomalas cardacas Comunicacin interventricular

B.

Tetraloga de Fallot

SNDROME DE KLINEFELTER
47,XXY Talla elevada en la edad adulta. Suelen tener mayor estatura que sus padres y hermanos Mayor acumulacin de grasa subcutnea y mayor tendencia al sobrepeso. Los varones XXY poseen un cuerpo ms redondeado, en forma de pera, caracterstico de la mujer

C. SINDROME DE CRI DU CHAT O MAULLIDO DEL GATO: 46, XY, del (5)(p) Marcado sentido del humor. Cario y afectividad.

Miedo a determinados objetos.

Timidez Conductas desafiantes. Agresiones y autolesiones: araazos, golpes en la cabeza, mordiscos en las muecas.

D. SINDROME DE DOWN: 47, XY +21 Su cabeza y cara son redondas y pequeas. Los ojos tienen una inclinacin hacia arriba y hacia fuera, tipo oriental, con un pliegue en el ngulo interno (epicando). Su nariz es pequea y chata; el tabique nasal es ancho y ligeramente reprimido. Las orejas son pequeas y su contorno (hlix) aparece doblado. La piel tendr diferentes tonalidades, por lo que se dice que tiene aspecto a mrmol.

E SINDROME DE TURNER: 45,XO Las nias con sndrome de Turner presentan estatura baja proporcionada no suelen desarrollar los caracteres sexuales secundarios estas mujeres suelen padecer antes los sntomas menopasicos que la menarqua.

CONLUSIONES

El desarrollo sexual humano es un proceso complejo que comprende un numero significativo de genes presentes en los dos sexos y necesarios para el desarrollo de los tejidos testiculares y ovricos.

Los genes sexuales ejercen una influencia muy poderosa sobre la constitucin de los cromosomas sexuales.

La hiptesis de Lyon establece que en las clulas somticas de mujeres normales, y no en las de hombres normales, un cromosoma X es inactivado al azar para compensar la dosis gnica en ambos sexos.