Matakuliah Isolasi Senyawa Bioaktif Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin

PAPER ISOLASI SENYAWA ALKALOID, TERPEN, FLAVANOID, DAN FENOLIK

Oleh:

Elyza Aiman N111 11 281 KELAS A

MAKASSAR 2013

ISOLASI SENYAWA ALKALOID Judul Jurnal:

Isolasi Alkaloid Isoquinoline dari Umbi Corydalis turschaninovii dan Aktifitas Inhibitornya terhadap Oksidasi LDL (Low Density Lipoprotein) Pengolahan Sampel dan Ekstraksi: Umbi C. turtschaninovii yang dikumpulkan di Kyungdong Herb Medicine Market di Seoul pada tahun 2007. Umbi tersebut dikeringkan dan disebukkan. Bubuk umbi tersebut (3 kg) diekstraksi dengan 80% berair MeOH pada suhu kamar semalam dan kemudian disaring melalui kertas saring. Filtrat diuapkan dalam vakum dan memberikan residu kecoklatan gelap. Isolasi: Ekstrak metanol yang dihasilkan dituangkan ke dalam air asam (pH 2,5, 1,5 L), keasaman yang telah disesuaikan dengan 30% HCl, dan dicuci

dua kali dengan EtOAc (1,5 L dua kali). Lapisan berair kemudian di basakan sampai pH 11.5 menggunakan larutan NaOH 20% dan diekstraksi dengan EtOAc (1,5 L dua kali). Lapisan organik terkonsentrasi (berat: 9,3 g) yang diambil dan dilanjutkan ke kromatografi kolom (6 8 cm) yang diisi dengan silika gel (ukuran 70-230 mesh, sebanyak 250 g) dengan menggunakan eluen CHCl3-MeOH dengan perbandingan 15:01 13:01 10:01 7: 1 5:1 dan 3:1, masing-masing 1,5 L) dan MeOH (1 L) yang menghasilkan 12 fraksi (ditandai dengan nama CTE1 ~ CTE12). Peneliti membagi fraksinya dalam beberapa kelompok komponen, komponen 1 (fraksi CTE4) yang teridentifikasi ()-demethylcorydalmine, komponen 2 (fraksi CTE3) yang teridentifikasi (+)-isocorydine, komponen 3 (mengandung 7 fraksi) yang teridentifikasi (+)-stylopine, komponen 4 (fraksi CTE3-1-4) yang teridentifikasi (+)-stylopine and (-)- -N-methylcanadine, komponen 5 (CTE6-7) yang teridentifikasi pseudoprotopine, komponen 6 (CTE7-5) yang teridentifikasi sebagai tetrahydroprotopapaverine, komponen 7 (CTE7-7) yang teridentifikasi sebagai allocryptopine, komponen 8 (CTE8-5) yang teridentifikasi sebagai berberine, dan komponen 9 (CTE11-6) yang teridentifikasi sebagai pseudocoptisine. Pendekatan struktur: Umbi C. turtschaninovii diekstraksi dalam 80% MeOH, dan ekstrak yang diperoleh dipartisi menggunakan keasaman dan polaritas pelarut untuk

menghasilkan fraksi alkaloid. Kromatografi kolom SiO2 berulang untuk fraksi alkaloid menghasilkan sembilan alkaloid murni, 1 - 9. Senyawa 3, 5, 8, dan 9 telah sebelumnya diisolasi dari tanaman ini dan diidentifikasi sebagai (+)stylopine. Senyawa 1, 2, 4, 6, dan 7 diisolasi untuk pertama kalinya dari umbi C. turtschaninovii. Ketika semua senyawa hasil isolasi elusi pada kromatograf lapis tipis, mereka dilihat di bawah sinar UV dan divisualisasikan dengan penyemprotan dengan reagen Dragendorff itu, dan menghasilkan warna jingga yang menunjukkan bahwa mereka alkaloid. Senyawa-senyawa spektrum IR, tersebut kemudian dianalisis menggunakan

ditentukan berat molekulnya dengan spektrum IE-MS, dan

ditentukan strukturnya dengan NMR. Senyawa 1, bubuk amorf putih, menunjukkan band absorbansi karena gugus hidroksi (3347 cm-1) dan ikatan rangkap (1590 cm-1) dalam spektrum IR dan berat molekul ditentukan sebagai 327 dari ion molekul [M] + pada m / z 327 dalam spektrum EI-MS. Data 1H-NMR dapat diasumsikan bahwa senyawa 1 adalah jenis protoberberine isoquinoline alkaloid. Senyawa 2, jarum tidak berwarna, menunjukkan serapan band karena gugus hidroksi (3355 cm-1) dan ikatan rangkap (1606 cm-1) dalam spektrum IR. Itu puncak ion molekul [M] + pada m / z 341 mengindikasikan berat molekul menjadi 341. Data dari 1H-NMR mengasumsikan bahwa senyawa 2 adalah jenis aporphine isoquinoline alkaloid.

Senyawa 4, kristal berwarna, menunjukkan absorbansi band dari ikatan rangkap (1525 cm-1) dalam spektrum IR. The EI-MS spektrum menunjukkan puncak ion molekul [M] + pada m / z 354. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) dan Spektrum 13C-NMR mengidentifikasi bahwa ia adalah dioxymethylene dan grup quaternary-N-methyl. Senyawa 6, kristal berwarna, menunjukkan molekul ion puncak [M] + pada m / z 333 dalam spektrum EI-MS dan absorbansi karena hidroksi tersebut (3380 cm-1) dan olefin (1515 cm-1) kelompok dalam spektrum IR. Dan ditentukan bahwa senyawa 6 diidentifikasi sebagai

tetrahydroprotopapaverine berdasarkan hasil spekrtum NMR. Senyawa 7, prisma tidak berwarna, menunjukkan serapan band karena karbonil terkonjugasi (1655 cm-1) dan ikatan rangkap (1504 cm-1) dalam spektrum IR. Itu berat molekul bertekad untuk menjadi 369 dari ion molekul [M] + pada m / z 369 dalam spektrum EI-MS.dan ditentukan dengan NMR sebagai as allocryptopine, tipe protopine alkaloid. Data NMR dari setiap senyawa:

Rumus struktur dari setiap senyawa:

ISOLASI SENYAWA STEROID Judul Jurnal:

Isolasi dan karakterisasi glikosida steroid dari daun Stachytarpheta jamaicensis Linn Vahl Penyiapan sampel dan ekkstraksi: Daun segar dan batang S. jamaicensis dipanen dari Edibe - Edibe, Calabar, Palang River State, Nigeria pada tanggal 10 Januari 2008. Bahan tanaman dianalisis di laboratorium Kimia , Michael Okpara University of Agriculture , Umudike , Nigeria. Daun ( 1kg ) yang kering di laboratorium bench selama 10 hari . Sampel kering digiling dan ditumbuk menjadi bubuk ( 850g ) menggunakan Thomas Wiley Machine ( Model 5 USA ) . Sampel tanaman bubuk ( 500g ) dikemas ke dalam Soxhlet aparat

( 2L ) dan diekstraksi secara mendalam dengan 1000 ml etanol selama 24 jam . Ekstrak etanol terkonsentrasi menggunakan evaporator rotary pada 450C dan kiri di bangku laboratorium selama 2 hari untuk mendapatkan residu bergetah gelap ( 22.64g ) . Kolom itu dipadatkan dengan silika gel dan 20.0g dari residu gummy ditempatkan di atas silika gel dan dielusi dengan kloroform , ethanol , petroleum eter , ( 50:30:20 ) masing-masing untuk mendapatkan steroid senyawa 1 ( 1.53g ) dan senyawa 2 ( 1.40G ) . Pendekatan Struktur Senyawa 1 : minyak gelap kuning, ( 1,53 g ) Rf 0,20 . IR Vmax 3395,41 cm - 1 ( OH ) , 3009,84 cm - 1 , 2925,05 , 2853,95 cm - 1 ( - CH2 - ) masing-masing, 1739,38 , 1710,58 cm - 1 masing-masing ( C = O ) , 1462.89cm - 1 ( C = C aromatik ) , 1037,46 ( C - O ) eter . HREIMS m / z 971,87 dihitung untuk C49H78O19 m / z 970 . Puncak dasar m / z 301,12 . Senyawa 2 : minyak berwarna kuning terang ( 1,40 g ) Rf 0,36 ; IR Vmax 3376.68cm - 1 ( OH ) , 2925,15 cm - 1 , 2853,84 cm - 1 ( - CH2 - ) masing-masing, 1738,93 ( = C = O ) , 1402,97 ( C = C ) aromatik , 1040.28cm - 1 ( CO ) eter . HREIMS m / z 963,50 dihitung untuk C49H70O19 m / z 962 . Puncak dasar m / z 432,37 .

1H NMR dan 13C NMR disajikan dalam tabel

Rumus struktur senyawa 1

Rumus struktur senyawa 2

ISOLASI SENYAWA STEROID Judul Jurnal:

Isolasi dan elusidasi struktural flavanoid dari perairan fern Azolla microphylla dan evaluasi bebas radical aktivitas pemulungan Penyiapan sampel dan ekkstraksi: Seluruh tanaman, Azolla microphylla dicuci bersih dengan air keran yang diikuti pembilasan dengan air suling ganda dan bayangan pengeringan untuk 7days. The serbuk halus ( 60 mesh size) dipero leh dari tanaman yang dikeringkan dengan menggunakan dapur mixer penggiling (Bajaj elektronik Ltd, India). Serbuk tanaman yang disterilkan pada 121 C selama 15 menit. Ekstraksi pelarut bubuk kering (40g) Azolla microphylla dilakukan dengan menggunakan 2L dari 80% metanol (50 mL / g sampel) dalam ekstraktor soxhlet untuk 24 h. Ekstrak dipekatkan dengan penguapan (4050 C) dalam evaporator vakum rotary. Ekstrak methonolic pekat (10 ml) dihentikan pada 50 mL air suling dan selanjutnya diekstraksi berturut-turut dengan petroleum eter, kloroform, dan etil asetat. Untuk setiap pelarut,

prosedur ekstraksi diulang tiga kali untuk ekstraksi lengkap. Ekstrak petroleum eter (Fraksi-I) dibuang karena mengandung zat lemak. Uji cyanidine dilakukan untuk kloroform (Fraksi-II) dan etil asetat (Fraksi-III) ekstrak untuk seleksi lebih lanjut. Ekstrak etil asetat (Fraksi-III) dianalisis untuk flavonoid menggunakan pemisahan kromatografi. Isolasi: Pelat kaca (100 200mm) dilapisi dengan silika gel G (0.2-0.3mm) pasta dikeringkan secara alami (atmosfer). Selanjutnya mereka diaktifkan pada 100 C selama 30 menit dan didinginkan pada suhu kamar (25oC ). Ekstrak dipisahkan dengan TLC dengan fase gerak berikut: etil asetat: nbutanol: air (50:30:10 v / v), etil asetat: asam asetat: air (60:30:10) dan benzena: asam asetat : air (60:35: 5 v / v). Pelat tersebut dikembangkan dengan menggunakan asap amonia dan divisualisasikan di bawah lampu UV. Nilai Rf band dipisahkan dihitung. Pemurnian flavonoid dengan kromatografi lapis tipis preparatif (PTLC) Ekstrak dikurangi menjadi 5 mL dan dimuat dalam KLT preparatif piring dilapisi dengan silika gel GF254 (0.4-0.5mm). Kromatogram dikembangkan dengan benzena: asam asetat: air (60:35:5 v / v) dan diperiksa di bawah lampu UV. Bintik-bintik fluorescing yang dikorek keluar dari 100 piring dan diekstraksi dengan etanol. Campuran diencerkan kemudian disentrifugasi

pada 10000 rpm selama 10 menit pada 4 C. Supernatan dikumpulkan untuk lebih lanjut eksperimental (HPLC, FT-IR, NMR) analisis. Senyawa yang dielusi yang co-dikromatografi bersama dengan flavonoid standar. Pendekatan struktur: Analisis kemudian dilakukan dengan menggunakan instrumen KCKT (kromatografi cair kinerja tinggi). Senyawa hasil isolasi ( dalam etanol ) disaring melalui filter membran ( Millipore , USA ) dan disuntik ( 10L ) melalui kolom BDS Hypersil RP - C18 ( Thermo , 5m , 120A , 250mm 4.6mm ) pada kolom suhu 25 C. Fase gerak terdiri dari metanol , air dan asam format ( 70:30:1 vol . % ) Dielusi pada laju aliran 1mL/min dan effluent tersebut dipantau pada 280nm oleh detektor UV . Puncak terdeteksi dan dibandingkan dengan standar . Analisis spektral kemudian dilakukan. Senyawa terisolasi 1 dan 2 dilarutkan dalam metanol dan rentang maksimal penyerapan UV dicatat dengan menggunakan UV - Vis double- beam spektrofotometer . Senyawa 1 dan 2 dilarutkan dalam CDCl3 dan 1H dan 13C NMR spektra menggunakan spektroskopi NMR dengan TCI Cyroprobe dicatat. Tetrametilsilan ( TMS ) digunakan sebagai standar internal . Nilai-nilai pergeseran kimia dilaporkan dalam ppm ( ) unit dan konstanta kopling ( J ) dalam Hz . Spektrum FTIR senyawa 1 dan 2 diukur dengan menggunakan IR kelas kalium bromida

( KBr ) . Senyawa 1 dan 2 secara terpisah dicampur dengan 200mg KBr untuk mendapatkan putaran disc dengan bantuan pers hidrolik . Cakram bundar kemudian dikenakan FTIR di kisaran 4000 - 400cm - 1 pada resolusi 4cm 1

Senyawa-1 Cahaya kuning bubuk (etanol); m. p. 190 C; max. 300nm; mol. rumus: C27 H30 O16, IR (KBr) Vmax-cm 1: 3408, 3321 (OH stretching), 2924,2843 (CH2-peregangan), 2714 (CH ikatan), 1462 (C = O kelompok) dan 1383 (C-OH getaran) (ditunjukkan pada Gambar 3A); 1H-NMR (600MHz di CH3OD, ppm) 3,33-3,64 (m, 12H gugus gula), 3,81 (d, J = 1.15Hz, 1HRham), 1.10 (3H , d, J = 6Hz, CH3-Rham), 4,52 (4H, d, J = 7.8Hz, H-1 Glu), 5.11 (1H, d, J = 2Hz H-6), 6.19 (1H, d, J = 2Hz, H-8), 6.38 (1H, d, J = 8Hz, H5 '), 7.66 (1H, m, H-2', H-6 '); 13C-NMR (600MHz di CH3OD, ppm):

ditunjukkan pada Tabel 3. Hal ini ditandai sebagai 3, 3 ', 4', 5, 7-pentahydroxy flavon-3-rutinoside (rutin) Senyawa-2 Bubuk kuning pucat (etanol); m. p. 300 C; max. 360nm; mol. rumus: C15 H10 O7, IR (KBr) Vmax cm-1: 3428, 3369 (OH stretching), 2986 (CH2peregangan), 2872 (CH-peregangan), 1457 (C = O), 1362 (C-OH getaran ) (ditunjukkan dalam gambar 3B); 1H-NMR (600MHz di CH3OD, ppm ) 6,18 (1H, d, J = 2Hz, H-6), 6.38 (1H, d, J = 2Hz, H-8), 6.88 (1H, d, J = 8Hz, H-5 '), 7.63 (1H, d, J = 7.5Hz, H-6'), 7.72 (1H, d, J = 2Hz, H-2 '); 13C-NMR (600MHz di CH3OD, ppm ): ditunjukkan pada Tabel 3. Hal ini ditandai sebagai 2 - (3, 4-dihydroxyphenyl) -3, 5, 7-trihidroksi-4H-1 benzopyran-4-one (quercetin)

ISOLASI SENYAWA STEROID Judul Jurnal:

Isolasi, pemurnian dan struktur identifikasi dua fenolik glikosida dari akar Incarvillea younghusbandii Sprague dan aktivitas antioksidan mereka Pengolahan sampel dan Ekstraksi: Bubuk akar IYS (1 kg) diekstraksi dengan 10 L alkohol-air (80:20, v / v) pada 60 untuk 24 h. Setelah pelarut diuapkan dalam vakum pada 60 , alkohol-ekstrak (368,0 g) diperoleh. Itu alkohol ekstrak (200,0 g) dilarutkan dalam 400 mL alkohol-air (80:20, v / v) dan kemudian 1,2 L etil asetat ditambahkan. Larutan disentrifugasi pada 1 000 r min-1 selama 10 menit untuk dipisahkan ke atas lapisan dan curah hujan. Lapisan atas dikeringkan di vakum pada 60 untuk menghasilkan etil asetat-ekstrak (42 g). Etil asetat - ekstrak ( 20 g ) dikromatografi pada kolom gel silika ( 300 mm 80 mm ) , dielusi dengan gradien langkah metilen diklorida - metanol

(dari 50:1 sampai 1:1, dengan volume) sebagai fase gerak untuk menghasilkan delapan fraksi . Disaring oleh O 2 OH scavenging assay dan LPO penghambatan assay , fraksi 7 ( 11,05 g ) menunjukkan aktivitas tertinggi . Fraksi 7 ( 5,0 g ) menjadi sasaran untuk dilanjutkan ke kromatografi kolom ( 400 mm 35 mm ) , dielusi dengan gradien langkah dari 90:10 sampai 50:50 ( berdasarkan volume) air dan alkohol untuk memberikan tiga fraksi . pecahan 7-2 (2,09 g ) menunjukkan aktivitas tertinggi . Fraksi 7-2 ( 2,0 g ) selanjutnya dimurnikan pada atas fase-balik sistem HPLC semi preparatif . Kondisi : fase gerak terdiri dari 20 % asetonitril dalam air ( v / v ) ; laju alir adalah 10 mL min - 1 ; kolom oven suhu ditetapkan pada 25 . Dua senyawa , 1 ( RT = 15,279 min , 1 582 mg ) [ 3 ] dan 2 ( RT = 21,962 min , 216 mg ) diperoleh setelah puncak eluting dari kolom dan dikeringkan dalam vakum pada 60 . 1 ( atau 2 ) isi kering akar IYS dianalisis pada atas sistem HPLC dengan C18 kolom analitik ( asetonitril - air ( 25:75 ,v / v ) , 1,0 mL min - 1 , 25 ) . Pendekatan struktur: Senyawa 1 diidentifikasi sebagai acteoside . pada 1D dan 2D-NMR spektrum yang dihasilkan identik dengan yang dilaporkan dalam literatur (1H NMR, 13C NMR, 1H-1H COSY, ROESY di CD3OD , 1H NMR dan 13C NMR di piridin-d5).

ESI-MS dari 2, m / z 623,3 [M-H] -; HR-ESI-MS dari 2, m / z 647,194 9647,195 0 [M + Na] +, RDB = 11.50 (calcd. untuk C29H36O15). 1D dan 2DNMR spektra dari senyawa 2 menunjukkan bahwa senyawa 2 diidentifikasi sebagai - D-glucopyranoside, 2 - (3, 4-dihydroxyphenyl) etil 3-O-(6-deoksi-L-mannopyranosyl) -, 6 - [(2E) -3 - (3, 4 - dihydroxyphenyl)-2-propenoate] (9CI)