FILTRACION Y DESGASIFICACION DE SOLVENTES EN HPLC En la actualidad HPLC ha llegado a ser una de las Tcnicas del Laborario Moderno ms importantes

como herramienta analtica para separar y detectar compuestos qumicos. Como en todas las tcnicas analticas, los pequeos problemas a la larga pueden llegar a tener un mayor impacto en la exactitud y durabilidad del sistema. Aun con la evolucin de los cromatografos lquidos en la era de la computadora, hay aun problemas que sta no puede resolver. Hasta los Solventes para HPLC, tods filtrados cuidadosamente en la fbrica, pueden acumular partculas en suspencin que pueden ser perjudical a los componentes del sistema HPLC. Estas partculas en suspencin pueden venir de varias fuentes, incluso de la exposicin al polvo en el aire durante el trasegado de solvente en el depsito para solvente, la exposicin a partculates del aire durante el almacenamiento del solvente en el depsito del solvente, la degradacin lenta del recipiente solvente, o de condensacin y polimerizacin del solvente. Las partculas pueden ocasionar costosos daos a la bomba HPLC, al guarda columnas, y en general causar desgaste del sistema de HPLC. Los fabricantes de los instrumentos tienen en cuenta este problema y recomiendan que se filtre y desgasifique los solventes HPLC antes de usarlos. En el instante en que se abre una nueva botella de solvente para HPLC se expone el interior del solvente a la atmsfera y empieza a acumular gases disueltos que se encuentran en la atmsfera. El trasegado del solvente en el depsito solvente y su almacenamiento en estos depsitos mseste fenmeno. El Oxgeno Disuelto que constituye el 21% de la atmsfera puede producir mayor interferencia en los detectores de fluorescencia y electroqumicos. El Nitrgeno Disuelto es el otro componente de la atmsfera que puede producir burbujas en la columna de HPLC y cuando el solvente entra al detector produce picos falsos y desviaciones de la lnea base. El Dixido de Carbono disuelto algunas veces puede ser la causa de los cambios de pH en el sistema de solvente. MTODOS DE FILTRACION DE SOLVENTES EN HPLC Hay tres(3) mtodos comunes que se utilizan hoy para la filtracin previa de los Solventes en HPLC : FILTRO A LA ENTRADA DEL SOLVENTE

Este tipo de filtro usualmente se construye de acero inoxidable otra aleacin resistente a la corrosin y se situa dentro de la botella de depsito del solvente(depsito de la fase mvil) donde se une a la entrada de la presin baja est al lado de del HPLC bombea usa taladro pequeo Tefln otro tubera inerte. El filtro tiene un poro medio clasifica segn tamao que usualmente rangos de 1 a 5 micra. Debido a los mtodos industriales de fabricacin de estos filtros, slo un poro medio clasifica segn tamao se puede definir con fluctuaciones anchas en poro clasifica segn tamao algn da ocurre.El tamao absoluto del poro mnimo es usualmente alrededor de 1 micra para que materia del [particulate] abajo este mnimo puede alargar el HPLC bombea, columna, y otro componentes del sistema. Con tiempo estos tipos de filtros vigilan estorbar reducen eficacia de la bomba. FILTRACION AL VACIO Este aparato consta de un embudo de vidrio, vidrio se filtra poseedor, y frasco de la recepcin del vidrio. Se aplica vaco al frasco y solvente se filtra cuando pasa por un disco teclea membrana dentro del poseedor del filtro. Este sistema tiene la ventaja de usar membrana filtra que tiene un muchos mejor defini poro clasifica segn tamao y puede bajar a 0.2 poro de la micra clasifica segn tamao. El poro ms bajo clasifica segn tamao puede eliminar la mayora de materia del [particulate] hall en el HPLC ambiente del laboratorio. El problema con este sistema es ese que est muy frgil desde se hace fuera de vidrio y solvente necesita se transferir del frasco al HPLC botella del solvente del solvente donde se le expone a la atmsfera el solvente y puede ser fcilmente recontaminado con partculas del polvo y otros partculas de materia en el aire. FILTRACION EN LINEA Este sistema consta de un [polymer] o filtro del [inline] limpio hecho de acero que tiene un tubo tropieza con la botella solvente de la fabricante y otro funcionamiento del tubo a una presin baja bombea que dibuja el HPLC solvente por un disco se filtra alberg dentro del albergue del filtro del [inline] y lo distribuye en un frasco del almacenamiento o en el depsito solvente. Este sistema como con el sistema del embudo describi sobre, tiene la ventaja de usar disco filtra con pues defini poro clasifica segn tamao y un poro mnimo clasifica segn tamao de 0.2 micra que est 5 chronometra ms bajo que la entrada solvente filtra aparato del tipo. La desventaja si este sistema es ese que requiere una presin separada baja

bombea y si construy de [polymers polypropylene] tal como y/ o niln que contaminara solventes seguros orgnicos. . MTODOS DE DESGASIFICACION DE SOLVENTES EN HPLC Existen cuatro(4) mtodos comunes usados para desgasificar solventes en HPLC previos a su uso: SONIFICAZION Se usa un bao de ultrasonido a a [sonicate] los solventes en consecuencia de esto convierten gases disueltos en burbujas diminutas que flotan a la superficie del solvente y se eliminan. Este mtodo es en vigor en quitar disolvi gases pero el grado de quitar depende del tiempo de sonificacin, tamao del bao de ultrasonido, tipo de solvente a procesado , y volumen de solvente. Estas variables pueden conducir a veces a situaciones donde el solvente es slo parcialmente desgasificado causando problemas en el sistema de HPLC. A menudo es difcil saber cuando el solvente est completamente desgasificado. HELIO SPARGING En este mtodo se hace burbujear gas de helio de alta pureza en el depsito solvente. El helio desplaza los gases disueltos que estn emiti en el espacio de la cabeza del depsito solvente, donde se dispersan en la atmsfera. Este mtodo puede ser muy efectivo en la desgasificacin de los solventes en HPLC pero si se usa contnuamente puede ocasionar frecuentes reemplazos de los cilindros del helio. Estos reemplazos son fastidiosos y caros. Burbujear gas de helio en algunas mezclas solventes puede causar evaporacin selectiva de los solventes ms voltiles. A veces, si la presin en la lnea de helio linea cae, el solvente vigilar se dibuja arriba en el helio lnea causa tiempo fuera de servicio posible por mantenimiento. DEGASIFICACION ELECTRONICA EN LINEA DEL FLUJO Es el mtodo ms nuevo disponible para desgasificar solventes en HPLC. Se situa la unidad de desgasificacin entre el depsito solvente y la entrada a la bomba de HPLC . Como los flujos del solvente del depsito solvente embotellan a la bomba, entra contacto con una membrana fluoropolmerica que deja difundir los gases disueltos por la membrana en una cmara al vaco. Este mtodo es muy conveniente y ofrece una desgasificacin

contnua del solvente cuando entra a la bomba. La eficacia de la degasificacin con este mtodo no es tan alta como con algunos otros mtodos sobre todo a altas velocidades de flujo (alrededor de 1ml por minuto). La inversin inicial esta por encima de $2,000 por este sistema y que es tambin un problema para los laboratorios que tienen un presupuesto fijo o bajo. INLINE DEGASSING USA Un VACIO SOURCE Se describi este mtodo sobre debajo de mtodos por filtracin de la partcula. Brevemente, este mtodos utilizan un vaco actu disco del [inline] filtra que simultneamente quita suspendi partculas mientras [degassing] el solvente. Pruebas han mostrado que este mtodo est uno del ms en vigor en quitar mximo suma de comn disolvi gases. La limitacin de esta mtodo es que usualmente se hace en un frasco del vaco separado y subsiguientemente el solvente desgasificado se tiene que verter en el depsito del solvente (depsito de la fase mvil) donde puede ocurrir la recontaminacin del solvente. PROBLEMAS MAS COMUNES EN HPLC Esta es una lista de los problemas normalmente encontrados en HPLC, sus posibles causas posibles, y cmo solucionarlos. PRESION ALTA
o o

Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC columna o Guarda Columna por partculas. Solucin: Invierta la Columna y Flush con solvente, desconectada del detector. Si sto no funciona reemplaze el fritado a la entrada de la columna. Si la presin sigue alta reemplaze la columna. Solucin a largo plazo: Asegurese que todas las fases mviles se filtren apropiamente antes que entren a la bomba de HPLC . Filtre todas las muestras anter de inyectarlas.

PRDIDA DE LA RESOLUCION
o o o

Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC columna o del Guarda Columna por partculas. Solucin: ver Presin Alta Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases mviles en el sistema de HPLC.

PICOS HENDIDOS
o o

Posible causa : Obstruccin de la Columna de HPLC o del Guarda Columna por partculas. Solucin: Marcha atrs columna roja con presin baja est al lado de abre. Si es necesario reemplaze el fritado de la entrada o la columna. Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases mviles en el sistema de HPLC.

VARIACION EN LOS TIEMPOS DE RETENCION

o o o

Posible causa : Aire atrapado en la bomba debido a gases disueltos en fase mvil. Solucin: Bomba primera y est fases seguras tan mviles es propiamente [degassed] Solucin a larga plazo: Asegurese fase tan mvil est propiamente y adecuadamente desgasificada. Si usa desgasificacin electrnica en lnea asegura esa cadencia del flujo no es demasiado alto para evita [degassing] completo.

VARIACIONES EN LA LINEA BASE

o o

Posible causa: Burbujas del aire atrapados en la celda del detector debido a una mala desgasificacin de los solventes de la fase mvil. Solucin: Asegurese que todas las fases mviles estn debidamente desgasificadas y considerar el uso de un restrictor de la presin a toma de corriente del detector.

LINEA BASE CON MUCHO RUIDO

o o

Posible causa: Aire atrapado en celda del detector o en la bomba. Solucin: Sistema rojo y HPLC primero bombean. Degass solventes adecuadamente corresponder fluir cadencia de fase mvil en sistema.

PICOS FALSOS (Detectores Electroqumicos y de Fluorescencia)

o o

Posible causa: Oxgeno Disuelto Solucin: Desgasificar adecuadamente las fases mviles para reducir la concentracin de oxgeno disuelto.

Solucin a largo plazo: Agregar un sistema de filtracin al vaco en lnea. Peridicamente chequear el nivel de oxgeno disuelto.

BAJO O NIGUNA PRESION

o o

Posible causa: trabaje bomba sella o pistones debido a exposicin del trmino larga a suspendi partculas en fase mvil Solucin: Reemplace los sellos o pistones, si es necesario.

MANTENER PUREZA SOLVENTE DURANTE ALMACENAMIENTO EN VASIJA del DEPOSITO SOLVENTE Aun cuando se haya filtrado adecuadamente antes de introducir el solvente en el depsito de la fase mvil , no significa que la fase mvil quede libre de partculas de materia. Abrir los depsitos de la fase mviles depsitos con tapas provisionales hechas de Papel Aluminio otros materiales dbiles pueden llevar a la reintroduction de partculas contaminantes de polvo del aire como la fase mvil sienta en el depsito. Igual cuando se provee una tapa por el depsito, aire todava sube porque el depsito necesita respirar relevar cualquiera presin interior negativa como el HPLC bombea quita fase mvil del depsito. Un agujero pequeo en la tapa del depsito con aire gotea en est todo que aficionarse de [recontaminate] la fase mvil.
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/filtro.htm