Tesis 113

1
ELABORACIN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y

DOCUMENTACIN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
ESTNDAR POES E INSTRUCTIVOS DEL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGA ESPECIALIZADA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.

MNICA MARCELA ALONSO GUERRA
LINA MARIA CAMPOS CASTRO

TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de

MICROBILOGO INDUSTRIAL

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Bogot, D.C.
Enero 2008
2

NOTA DE ADVERTENCIA

Artculo 23 de la Resolucin N 13 de J ulio de 1946

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral catlica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la
verdad y la justicia.
3



APROBADO

___________________________ _________________________
Dra. Alba Alicia Trespalacios Dra. Luz Marln Acosta
Bacteriloga MSc. Candidata Bacteriloga Especialista
a PhD. en salud ocupacional

DIRECTOR CODIRECTOR

______________________________ ____________________________
Dra. Luisa Gutirrez Dra. Mnica Huertas
Bacteriloga Bacteriloga

JURADO JURADO
4



APROBADO

____________________________ __________________________

ngela Umaa Muoz Janneth Arias
MPhil MSc.
Decana Acadmica Directora de Carrera

5

DEDICATORIAS

A Dios por el camino recorrido. A mi Hijo por ser lo ms grande que tengo y
darme fuerza y templanza, A mis Padres por su apoyo todos estos aos, por su
infinito amor, comprensin y por ayudarme a que este momento llegara. A mi
Ta por ser mi segunda mam, A mi Hermana por su cario y comprensin. A
mi amor Oscar por acompaarme y apoyarme en logar este objetivo que hoy se
hace realidad. A Linis por su amistad sincera y fiel.

Mnica Alonso

A Dios por darme la fortaleza para seguir adelante con mis metas y permitirme
culminar con esta etapa de mi vida. A mi hijo por ser mi amor, fuerza y compaa
durante este camino. A mis padres quienes durante todos estos aos confiaron en
m; comprendiendo mis ideales y apoyando cada uno de ellos. A mis hermanas
por ser una ayuda incondicional, a mi novio quien durante estos meses me
motivo y acompao a cumplir este objetivo y a la flaca por su amistad y por
compartir todo este proceso.

Lina Campos

Detrs de cada lnea de llegada, hay una de partida.
Detrs de cada logro, hay otro desafo.
Si extraas lo que hacas, vuelve a hacerlo.
Sigue aunque todos esperen que abandones.
No dejes que se oxide el hierro que hay en ti.

6

AGRADECIMIENTOS

En primera medida a Dios por habernos concedido lograr este triunfo y nuestro
ms profundo agradecimiento hacia nuestras familias, quienes durante todos
estos aos nos apoyaron.
Gracias Dra Alba, por la oportunidad y la confianza que depsito en nosotras
para llevar a cabo este proyecto. A la Dra .Luisa Gutirrez por el
acompaamiento en este proceso. No tenemos letras para seguir diciendo el gran
regocijo que nos da poder terminar esta carrera en donde profesores y
compaeros dejan parte de su vida y enseanzas para que nosotras seamos
grandes profesionales.

7
TABLA DE CONTENIDO

RESUMEN
ABSTRACT
1. INTRODUCCION ------------------------------------------------------------------- 11
2. MARCO TEORICO ----------------------------------------------------------------- 13
2.1 CALIDAD ---------------------------------------------------------------------------- 13
2.1.1 Historia de la Calidad ---------------------------------------------------------- 13
2.1.2 Sistema de Gestin de Calidad ------------------------------------------------ 14
2.1.3 Modelos de SGC ---------------------------------------------------------------- 15
2.2 BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL) ----------------------- 18
2.2.1 Principios de las BPL ----------------------------------------------------------- 18
2.3 ISO- NTC-IEC 17025:2005 ------------------------------------------------------- 20
2.3.1 Requisitos de la Norma -------------------------------------------------------- 21
2.4 DOCUMENTACIN DEL SISTEMA DE CALIDAD --------------------- 22
2.4.1 Estructura de la Documentacin ---------------------------------------------- 23
2.4.2 Manual de Calidad -------------------------------------------------------------- 24
2.4.3. Procedimientos ----------------------------------------------------------------- 27
2.4.4 Instructivos----------------------------------------------------------------------- 34
2.4.5 Registros ------------------------------------------------------------------------- 35
2.4.6 Control de documentos --------------------------------------------------------- 36
2.5 BIOSEGURIDAD ------------------------------------------------------------------ 39
2.5.1 Principios de Bioseguridad ---------------------------------------------------- 40
2.5.2 Niveles de Contencin --------------------------------------------------------- 41
2.5.3 Agentes Biolgicos ---------------------------------------------------------------- 43
2.5.4 Normas Generales de seguridad biolgica en el laboratorio -------------- 44
2.5.5 Barreras Primarias -------------------------------------------------------------- 44
2.5.6 Barreras Secundarias ----------------------------------------------------------- 48
2.5.7 Gestin de residuos Slidos --------------------------------------------------- 50
2.5.7.2.2 Residuos peligrosos -------------------------------------------------------- 52
2.6 MICROORGANISMOS DE INVESTIGACIN DEL LABORATORIO
DE BACTERIOLOGA ESPECIALIZADA -------------------------------------- 62
8
2.6.1 Helicobacter pilori -------------------------------------------------------------- 62
2.6.2 Listeria monocytogenes -------------------------------------------------------- 65
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN ---------------- 69
3.1 Formulacin del Problema -------------------------------------------------------- 69
3.2 Justificacin -------------------------------------------------------------------------- 69
4. OBJETIVOS -------------------------------------------------------------------------- 71
4.1 OBJETIVO GENERAL ----------------------------------------------------------- 71
4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ---------------------------------------------------- 71
5. METODOLOGIA -------------------------------------------------------------------- 72
5.1. Lugar de estudio -------------------------------------------------------------------- 72
5.2. Anlisis de la informacin que posee el laboratorio actualmente. -------- 72
5.3. Recoleccin de informacin ------------------------------------------------------ 72
5.4 Elaboracin del Manual de bioseguridad del laboratorio de Bacteriologa
Especializada. ---------------------------------------------------------------------------- 73
5.5. Documentacin de Procedimientos Operativos Estndar e Instructivos
del Laboratorio de Bacteriologa Especializada. ---------------------------------- 73
5.6 Elaboracin del folleto informativo de Bioseguridad ------------------------ 73
6. RESULTADOS Y DISCUSIN --------------------------------------------------- 74
7. CONCLUSIONES ------------------------------------------------------------------- 87
8. RECOMENDACIONES ------------------------------------------------------------ 88
9. BIBLIOGRAFA --------------------------------------------------------------------- 89

9
LISTA DE TABLAS

Tabla 1. Requisitos tcnicos y de Gestin segn la (NTC-ISO/IEC 17025:
2005)................................. 21
Tabla 2. Formato de un POEs (OPS, 2005). (Guarnido, J . 2005) 32
Tabla 3. Situacin de los documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J . 2005) 38
Tabla 4. Identificacin de documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J . 2005)....39
Tabla 5. Lista de procedimientos operativos POEs Documentados..75
Tabla 6. Lista de Instructivos de trabajo Documentados ...77
Tabla 7. Lista de Instructivos de Operacin de equipos...79
Tabla 8. Lista de Fichas de Seguridad MSDS de reactivos Qumicos..83

10
LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Estructura de la Documentacin para un sistema de Gestin de
Calidad...23

Figura 2. Estructura de un POEs (OPS, 2005).31

Figura 3. Clasificacin de los Residuos segn su peligrosidad 51

Figura 4. POES documentados en el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada. 76

Figura 5. Instructivos documentados en el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada. 80

Figura 6 Documentacin implementada en el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada..81

11
1. INTRODUCCION

Debido a los requerimientos normativos internacionales tales como la ISO 9001:
2000, ISO 14001, NTC-ISO 17025, OSHAS 18001, entre otras normas, es
necesario que cualquier laboratorio que preste servicios, docencia e investigacin
cuente con un sistema de calidad que aumente la confiabilidad en sus resultados
demostrando competencia tcnica y administrativa.

Las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL), representan un sistema de calidad
relativo a los procesos de organizacin, bajo los cuales se ha de planificar,
ejecutar y documentar los estudios experimentales para garantizar la calidad y
validez de los mtodos y resultados, siendo la documentacin una herramienta
importante para este proceso.

Teniendo en cuenta que la bioseguridad y la documentacin son parte de los
requisitos fundamentales para la implementacin de las Buenas Practicas de
Laboratorio, es que se ve la necesidad de establecer Normas de Bioseguridad para
reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulacin de material
peligroso de acuerdo a lo establecido por la OMS (Manual de bioseguridad en el
laboratorio), CDC (Bioseguridad en el laboratorio de microbiologa), OPS
(Gestin de calidad para laboratorio). Adicionalmente documentar los
procedimientos facilita el desarrollo de las pruebas, asegura la calidad, fiabilidad,
integridad de los estudios y trazabilidad de los resultados.

Con la elaboracin del Manual de Bioseguridad para el laboratorio de
Bacteriologa Especializada, se tiene el propsito de describir la metodologa a
seguir en un programa de Bioseguridad en microbiologa, de tal forma que sirva
como gua para el trabajo seguro en el laboratorio con microorganismos
potencialmente peligrosos. Documentando los procedimientos que se realizan en
12
el Laboratorio se pretende garantizar la reproducibilidad de las pruebas y la
confiabilidad de los resultados, cumpliendo con parte de los requisitos para
implementar las Buenas Prcticas de Laboratorio y a futuro el Laboratorio de
Bacteriologa Especializada pueda acreditar sus pruebas bajo la norma NTC-ISO
17025.

13
2. MARCO TEORICO

2.1 CALIDAD

Segn la Norma ISO 9000 define Calidad como el conjunto de caractersticas de
un producto o servicio que tienen que ver con la capacidad para satisfacer unas
necesidades especficas e implcitas, que vienen definidas por una norma. Para un
laboratorio, la calidad supone conseguir resultados confiables documentado
procedimientos conforme a lo establecido por los diferentes modelos de sistemas
de calidad y normativas. (NTC-ISO 9000:2000)

2.1.1 Historia de la Calidad

La calidad como concepto y su evolucin en la historia tiene como referencia mas
cercana los planteamientos que comenzaron a principios del siglo XX,
innumerables maestros y escuelas del mundo de la administracin. Frederick
Taylor, padre de la administracin cientifica origina un nuevo concepto en la
produccin al descomponer el trabajo en tareas individuales separando las tareas
de inspeccin de las de produccin y el trabajo de planificacin del de ejecucin.
Walter Shewart, es elmas sobresaliente, considerado el padre de los sistemas de
gestin de calidad actual. Crea en 1924 las grficas de control, las cuales se hacen
muy populares a mediados de la segunda guerra mundial, con la creacin y
utilizacin de la produccin en serie Sheward crea el ciclo PHVA, que mas tarde
los japoneses rebautizaron como ciclo Deming.
Durante la segunda guerra mundial los militares Estadounidenses comienzan a
utilizar procedimientos estadsticos de muestreo creando las tablas de muestreo.
En 1944 se pblica la primera revista sobre control de calidad (Quality Control).
Sobre los aos 70 hacen suyas las ideas de control de calidad, haciendo referencia
haciendo referencia al TQC (Total Quality Control) resaltando la importancia de
14
la administracin y de las polticas operacionales. Al mismo tiempo propagan la
difusin de los crculos de la calidad.
En los aos 80 con el auge de la globalizacin de la economa y las exigencias
hechas por los proveedores militares, de la industria nuclear y aeroespacial, se
comenz a implementar una serie de normas a nivel internacional sobre
aseguramiento de la calidad, para eso se tomaron como modelo las normas
Britnicas BS5750 nacidas en 1977. En 1987 sale publicada la primera edicin de
la familia de la serie ISO 9000 y en 1994 su primera revisin. (Londoo, O. 2007)

2.1.2 Sistema de Gestin de Calidad

El sistema de Gestin de Calidad es el conjunto de elementos interrelacionados de
una empresa u organizacin por lo cual se administra de forma planificada la
calidad de la misma, en bsqueda de la satisfaccin de sus clientes. Los
principales elementos de un sistema de calidad son:

1. Estructura de la organizacin: Corresponde al organigrama donde se
jerarquizan los niveles directivos y de gestin.
2. Estructura de responsabilidades: Implica apersonas y departamentos en
explicitar las responsabilidades en calidad.
3. Procedimientos: Plan permanente de las pautas detalladas para controlar
las acciones de la organizacin.
4. Procesos: Es la sucesin completa de operaciones dirigidos a consecucin
de un objetivo especfico.
5. Recursos: Econmicos, humanos, tcnico y de otro tipo que deben estar
definidos de forma estable y circunstancial.

El sistema de gestin de calidad en una organizacin tiene como punto de apoyo
el manual de calidad, y se completa con una serie de documentos adicionales
15
como manuales, procedimientos documentados, instrucciones tcnicas, registros y
sistemas de informacin. (Londoo, O. 2007)
Normalmente sigue una norma de calidad. Una de las normas ms conocidas y
utilizadas a nivel internacional para gestionar la calidad, es la norma ISO 9001:
2000. Pero tambin existe la norma ISO-IEC 17025: 2005, que aplica para el
diseo de un sistema de gestin de calidad en laboratorios, la norma ISO 14001
que aplica para la gestin ambiental y es compatible con la gestin de calidad, as
mismo la OSHAS18000 que sirve de gua para el diseo de un sistema de gestin
de seguridad industrial y tambin es compatible con el sistema de gestin de
calidad. Adicionalmente es fundamental la planificacin, el control y mejora
continua de la gestin del sistema de calidad. En un laboratorio la
implementacin de un sistema de Gestin de Calidad esta orientado a soportar el
desarrollo ptimo y sistemtico de los ensayos que realice y debe ser diseado,
teniendo en cuenta las siguientes variables: Alcance de los ensayos, grado de
normalizacin de los ensayos y necesidad de acreditacin. (Londoo, O. 2007)
2.1.3 Modelos de SGC

2.1.3.1 ISO 9000:2000

La familia de normas ISO 9000: 2000 contempla una serie de estndares
internacionales referidos a la gestin de la calidad que tienen su origen en la
organizacin internacional de la estandarizacin (ISO). Esta familia de normas ha
sido elaborado para asistir a las organizaciones de todo tipo y tamao, en la
implementacin y la operacin de sistemas de gestin de calidad eficaces. La
norma ISO 9001:2000, norma certificable dentro de la familia ISO 9000: 2000,
establece los requisitos que deben cumplir las organizaciones al implementar un
sistema de gestin de calidad.
Los beneficios que otorgan estas normas son:

16
1. Reduccin de rechazos e incidencias en la produccin o prestacin de
servicios.
2. Aumento de la productividad
3. Mayor compromiso con los requisitos del cliente
4. Mejora continua.

Una organizacin que cumple con la ISO 9001: 2000 slo cumple con los
requisitos bsicos en cuanto a normas de calidad. Si se quisiera lograr la
excelencia debera cumplir con requisitos adicionales establecidos en la norma
ISO 9004: 2000 (gua de mejoras del funcionamiento) , esta no es una norma
certificable y su cumplimiento no puede ser requerido por una entidad
certificadora. . (NTC-ISO 9000:2000)

2.1.3.2 ISO14001:2004

ISO 14000 es un grupo de normas que describen los procedimientos tanto de
gerencia, como de administracin y de funcionamiento, que hacen una
organizacin ms efectiva, eficiente y responsable respecto al manejo del
ambiente. Al utilizar la ISO 14001:2004, norma certificable, una organizacin
puede planear, implementar y controlar su sistema de gestin ambiental de manera
que mejore continuamente el desempeo de sus procesos totales, particularmente
en lo referido al medio ambiente, pero tambin a la gestin administrativa en su
conjunto.
Esta norma internacional es aplicable a cualquier organizacin que desee
establecer un sistema de gestin ambiental.
La organizacin planifica, implanta y pone en funcionamiento una poltica
ambiental que tiene que ser apoyada y aprobada a nivel directivo y dada a conocer
al personal de la organizacin. La poltica ambiental incluye un compromiso de
17
mejora continua y de prevencin de la contaminacin, as como un compromiso
de cumplir con la legislacin y reglamentacin ambiental aplicable.
Adicionalmente la organizacin debe identificar los aspectos ambientales que
surjan de las actividades, productos y servicios, pasados, existentes o planificados
por la organizacin, y determinar los impactos ambientales significativos. (NTC-
ISO 14000:2004)

2.1.3.3 OSHAS 18001 (Seguridad y Salud Ocupacional)

Las normas OSHAS 18001 (Occupational Health and Safety Assessment Series),
es un estndar de gestin de prevencin de riesgos laborales desarrollado por un
grupo internacional de entidades de normalizacin y de certificacin.
Esta norma permite a las organizaciones adoptar un modelo de gestin de
seguridad y salud en el trabajo, cualquier organizacin puede implementar dicho
sistema.
En esta norma aplica que el personal debe ser competente para realizar las tareas
que puedan tener impacto sobre seguridad y salud ocupacional en el sitio de
trabajo. La organizacin debe establecer y mantener procedimientos para asegurar
que los empleados que trabajan en cada una de las funciones y niveles pertinentes
tengan conciencia de (OHSAS 18001, 2001):
1. La importancia de la conformidad con la poltica y los procedimientos de
seguridad y salud ocupacional y con los requisitos del sistema de gestin.
2. Las consecuencias, reales o potenciales, de sus actividades de trabajo para
la seguridad y salud ocupacional y los beneficios que tienen en el
mejoramiento del desempeo del personal.
3. Sus funciones y responsabilidades para lograr conformidad con la poltica y
procedimientos S & SO y con los requisitos del sistema de gestin incluida la
preparacin para emergencias y los requisitos de respuesta.
18
4. Las consecuencias potenciales que tiene apartarse de los procedimientos
operativos especificados. (NTC-OSHAS 18001:2001)

2.2 BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO (BPL)

La expresin Buenas Prcticas de Laboratorio, BPL o GLP de su correspondiente
en ingls Good Laboratory Practice, hace referencia a la organizacin y
condiciones de trabajo en las que los laboratorios planifican, desarrollan,
monitorean y registran sus ensayos.
Las BPL son un conjunto de reglas y procedimientos operativos que garantizan
que los datos generados por un laboratorio de control de calidad son
reproducibles y representativos, asegurando la validez y confiabilidad de los
resultados para ofrecer productos seguros e inocuos al cliente. Las BPL
involucran al conjunto de personas, instalaciones, equipos y procedimientos
necesarios para comprobar y vigilar la calidad de los productos. (TDR, 2000).

2.2.1 Principios de las BPL

2.2.1.1 Organizacin y Personal

Se requiere una estructura de la organizacin y responsabilidades claramente
definidas para el personal investigativo, se contempla en un organigrama y plan de
trabajo, este debe brindar una idea inmediata de las funciones del laboratorio y las
relaciones entre los diferentes cargos, as como la calificacin y competencias
referente a la educacin. Adicionalmente el personal debe estar capacitado y
entrenado en forma continua en las reas relacionadas con su desempeo, estas
capacitaciones deben ser evaluadas y registradas de forma peridica. (TDR,
2000).

19
2.2.1.2 Instalaciones y equipos

Las BPL enfatizan en la adecuacin de instalaciones y equipo los cuales deben ser
suficientes para el desarrollo de los estudios. Las instalaciones deben ser lo
suficientemente espaciosas para evitar problemas tales como el
congestionamiento, contaminacin cruzada, confusiones entre proyectos y
condiciones de trabajo apretadas. Los equipos deben contar con un programa de
validacin, calibracin y mantenimiento. (TDR, 2000).

2.2.1.3 Reglas

Protocolos: resume la conducta de un estudio y asegura la reproducibilidad de este
(TDR, 2000).
Procedimientos escritos: son necesarios para estandarizar ciertas tcnicas y para
facilitar la comparacin de resultados.
2.2.1.4 Caracterizacin

Para que un estudio funcione correctamente es esencial conocer sobre los
materiales que se usan en el. Se debe evaluar las condiciones de seguridad y las
propiedades de los componentes que se utilizan. Es requisito tener conocimiento
detallado sobretodos las propiedades y forma de administracin. Caractersticas
como identidad, pureza, composicin, estabilidad de todos los materiales de
referencia. (TDR, 2000).

2.2.1.5 Documentacin

La documentacin es uno de los aspectos principales de un programa de Garanta
de Calidad. Cada miembro del personal que ha realizado un determinado trabajo
debe poder demostrar que haba recibido la capacitacin necesaria, que el equipo
y los materiales que ha utilizado estaban en buen estado, que el mtodo aplicado
era apropiado para el fin al que estaba destinado y ha producido resultados fiables
20
y que se han seguido unos procedimientos operativos estndar. Una buena
coleccin de procedimientos operativos estndar es prerrequisito para el xito de
las Buenas Prcticas de Laboratorio. (TDR, 2000).

2.2.1.6. Aseguramiento de la calidad

Asegura la integridad del estudio y la viabilidad de los resultados experimentales,
a su vez debe revisar todas las fases del estudio desde la planeacin, a travs de la
inspeccin finalizando con el reporte y archivo de la documentacin (TDR, 2000).
Para lograr los puntos principales de las Buenas Prcticas de Laboratorio es
indispensable definir claramente responsabilidades, procedimientos y tareas, al
igual que un instrumento regulador de las mismas; esto puede obtenerse mediante
el sistema de gestin de calidad que articula procesos, procedimientos y tareas de
una forma sistemtica logrndose as la consecucin de las BPL(TDR, 2000).

2.3 ISO- NTC-IEC 17025:2005

La aplicacin de las BPL y el cumplimiento de los requisitos necesarios para la
acreditacin (norma ISO/IEC 17025:2005) ayudan a una correcta organizacin del
trabajo con un ahorro de tiempo y recursos, por lo que siempre resulta
beneficioso.
Un laboratorio puede alcanzar buenos resultados en sus ensayos con la aplicacin
de las BPL. Sin embargo, si tiene clientes externos que le solicitan un trabajo con
confianza demostrada, debe acreditarse. La acreditacin es un proceso que
conlleva no solo al cumplimiento de las BPL sino tambin de los requisitos
establecidos por la norma ISO/IEC 17025:2005 que es muy exigente; adems este
cumplimiento debe demostrarse ante evaluadores imparciales o llamados de
tercera partes.
La ISO/IEC 17025:2005 es la segunda edicin de esta norma elaborada por el
Comit
21
de evaluacin de la conformidad (ISO/CASCO). Contiene todos los requisitos que
deben cumplir los laboratorios de ensayo y de calibracin si desean demostrar que
poseen un sistema de gestin, son tcnicamente competentes y son capaces de
generar resultados tcnicamente vlidos.
El empleo de esta norma facilita la cooperacin entre laboratorios y otros
organismos y ayudan en el intercambio de informacin, experiencias y
procedimientos al igual que da confiabilidad en los datos y resultados obtenidos.
Esta norma especifica los requisitos generales de competencia para llevar a cabo
ensayos y/o calibraciones incluyendo el muestreo.
Esta norma es aplicable a todos los laboratorios, sin importar el nmero de
personas o la extensin del alcance de las actividades de ensayo y/o calibracin.
Esta norma se encuentra dividida en requisitos de gestin y requisitos tcnicos. En
la parte de gestin se encuentran los requisitos para la certificacin del sistema de
calidad, mientras que en la parte tcnica se describen los requisitos para el
personal, instalaciones, equipos, procedimientos, garanta de calidad e informes.
(NTC-ISO/IEC 17025: 2005)

2.3.1 Requisitos de la Norma

En el captulo 4 de esta norma, se establecen los requisitos para una gestin
slida. El captulo 5 define los requisitos para la competencia tcnica en los tipos
de ensayos o de calibraciones que el laboratorio lleva a cabo. (NTC-ISO/IEC
17025: 2005)

Tabla 1. Requistos tecnicos y de Gestin segn la (NTC-ISO/IEC 17025: 2005)

22
REQUISITOS DE GESTIN REQUISITOS TCNICOS
Organizacin
Sistemas de Calidad
Control de documentos
Revisin de solicitudes, ofertas y
contratos.
Subcontratacin de ensayos y
calibraciones
Compra de servicios y suministros.
Servicio al cliente
Quejas
Control de trabajos de ensayos y/o
calibraciones no conformes
Acciones correctivas
Acciones preventivas
Control de registros
Auditorias internas
Revisin por la alta gerencia.

Generalidades
Personal
Instalaciones y condiciones
ambientales
Mtodos de ensayo y calibracin.
Validacin de mtodos
Equipos
Trazabilidad de la medicin
Muestreo
Manejo de elementos de ensayo y
calibracin.
Aseguramiento de la calidad de los
resultados de ensayo y calibracin
Reportes de resultado.

2.4 DOCUMENTACIN DEL SISTEMA DE CALIDAD

La documentacin es base fundamental en un sistema de Gestin de Calidad y en
los principios de las Buenas Practicas del Laboratorio, es evidencia formal que
permite establecer pautas y parmetros que pueden ser ratificadas. En un
laboratorio, existen documentos de fuentes externas y elaborados internamente.
Los documentos pueden ser normas, instrucciones o recomendaciones, grficos,
catlogos, informes, hojas de seguridad de reactivos. Fundamentales en la
23
documentacin de un laboratorio son el manual de calidad y otros documentos
como procedimientos operativos, instructivos, especificaciones, formularios y
registros. (OPS, 2005).

2.4.1 Estructura de la Documentacin

La documentacin esta estructurada en tres niveles: El tercer nivel incluye la
recoleccin de planes, instructivos y registros que proporcionan detalles tcnicos
sobrecojo hacer el trabajo y se registran los resultados, estos representan la base
fundamental de la documentacin. El segundo nivel incluye la informacin
especfica sobre los procedimientos de cada rea; el primer nivel tiene la
documentacin respectiva, la poltica de calidad y los objetivos, la estructura para
el levantamiento de cada procedimiento e instructivo de trabajo. La mayora de las
normas del sistema de acreditacin requieren que dispongan de pruebas
documentales cuando se realiza la inspeccin. (OPS, 2005).

Figura 1. Estructura de la Documentacin para un sistema de Gestin de Calidad.

Que Hacer? Descripcin del
sistema, Polticas y objetivos
Informacin especificada sobre:
Quin, Cmo, Cundo, Dnde, Qu
y porqu efectuar las actividades
Proporcionan detalles tcnicos
sobre como Hacer el trabajo y
registrar los resultados
24

2.4.2 Manual de Calidad

El Manual de Calidad suministra una gua sobre polticas y procesos de un
sistema de calidad que permiten asegurar la eficacia y eficiencia de los productos
y servicios. El manual de calidad debe presentar la poltica de la calidad, describir
el sistema de calidad y mostrar la estructura de la documentacin usada en l,
incluyendo o haciendo referencia a los documentos que lo soportan, incluso los
tcnicos. En el manual se deben definir la estructura de la organizacin
(organigrama) con los roles y responsabilidades de la direccin tcnica y del
responsable de calidad, incluyendo sus responsabilidades con el cumplimiento de
esta norma. (Ramirez, E. 2005)
El manual de calidad debe estar actualizado, bajo la autoridad y responsabilidad
de una persona designada como responsable de la calidad por la direccin del
laboratorio.
El personal debe ser instruido en el uso y aplicacin del manual de calidad, y los
documentos que debe aplicar. (OPS, 2005).

2.4.2.1 Contenido del Manual de Calidad

El contenido de un Manual de Calidad de un laboratorio debera incluir los
siguientes puntos, de acuerdo con el apartado 4.2 de la Norma ISO 17025:2005,
los estndares de la OMS y OPS.
a) Introduccin. Se presenta el manual de calidad como el resumen de lo que es
un sistema de gestin de calidad de laboratorio, mostrando que elementos lo
componen y de que manera conduce a la Calidad.
b) Descripcin del laboratorio. Se indica el nombre del laboratorio, su
identificacin legal, tipo de laboratorio y principales actividades que se desarrolla.
25
Adicionalmente, se muestra la estructura funcional del laboratorio con su
respectivo organigrama donde se describe:
Las responsabilidades de la Direccin.
Las responsabilidades del Encargado del rea de Calidad y su relacin con la
Direccin.
Las responsabilidades del personal y sus capacitaciones cuando sea relevante.
c) Poltica de calidad. Se describe el conjunto de directrices, intenciones y
compromisos del laboratorio con respecto a la calidad. Se puede incluir la Misin,
la Visin y los objetivos de la Calidad. Anualmente esta poltica es revisada por la
Direccin para evaluar la necesidad de implementar cambios en los objetivos de
calidad como resultado de un proceso de mejoramiento continuo.
d) Capacitacin del personal. Se muestra cmo se desarrollan los perfiles de
trabajo para cada funcin en el laboratorio y los programas, tanto de capacitacin,
como de educacin continuada.
e) Aseguramiento de la calidad. Se describe cmo se va a proporcionar la
confianza en que se cumplirn los requisitos de calidad.
f) Control de la Documentacin. Se describe cmo se definen todos los
procedimientos de las etapas pre-analtica, analtica y post-analtica, siguiendo el
modelo establecido por la organizacin para la documentacin y como se los
organiza en un Manual(es) de Procedimientos. Se define un sistema para la
elaboracin, identificacin, liberacin, distribucin, archivo y cambio de
documentos.
g) Registros, su retencin y archivo. Se describe un sistema de identificacin,
recoleccin, ordenamiento y almacenamiento seguro y confiable de todos los
registros tcnicos y de calidad. Se adecua el tiempo de almacenamiento de los
registros de acuerdo con las exigencias de la Autoridad Sanitaria.
h) Instalaciones y condiciones ambientales. Se describen las medidas para
asegurar que los espacios y las condiciones ambientales son las adecuadas para la
26
actividad prevista y el mantenimiento de la integridad de los registros y la
proteccin de los usuarios, muestras y funcionamiento de equipos.
i) Gestin de instrumentos, reactivos y fungibles. Se hace referencia a: El
inventario con las especificaciones tcnicas de los instrumentos, reactivos y
material no reciclable (fungible); al mtodo para su adquisicin y disponibilidad
de repuestos; a la capacitacin del personal para su uso; y el programa de
calibracin y mantenimiento.
j) Validacin de los procedimientos de los exmenes y validacin de los
resultados. Se hace referencia a la determinacin de parmetros de los mtodos,
como sensibilidad, especificidad, incertidumbre, exactitud, reproducibilidad,
lmites de cuantificacin.
k) Seguridad. Se hace referencia a las medidas de bioseguridad implementadas
para proteger a las personas, muestras y medio ambiente de acuerdo a normas
nacionales y/o internacionales, segn la clase de riesgo involucrado en las
actividades del laboratorio en todas las etapas (pre-analtica, analtica y post-
analtica). Se describen brevemente las normas de higiene y proteccin. Se hace
referencia a los procedimientos para descontaminacin de reas por accidentes o
derrames, los cuales deben ser obligatoriamente registrados.
l) Aspectos medioambientales. Se muestra el compromiso de proteccin y
conservacin del medio ambiente a travs de procedimientos y programas
proactivos que evitan su deterioro.
m) Investigacin y desarrollo. Si corresponde, se muestra en qu campos y con
qu idoneidad se hacen la investigacin y desarrollo, a travs de publicaciones o
boletines institucionales registrados y accesibles.
n) Lista de procedimientos analticos.- Se muestra la lista de las tcnicas o
protocolos a realizar y los procedimientos correspondientes.
o) Protocolos de solicitud, toma y manejo de muestras. Se hace referencia a los
procedimientos para la obtencin, procesamiento, identificacin y envo de las
muestras.
27
p) Validacin de resultados. Se definen los procedimientos de verificacin,
interpretacin y validacin de resultados por el personal autorizado, previo a la
emisin de los informes.
q) Control de la calidad. Se muestra la sistematizacin de control de calidad
(interno) y la participacin en programas de evaluacin externa de la calidad. Se
hace referencia a las acciones correctivas en caso de no conformidad.
r) Sistema de informacin del laboratorio. Se describen los procedimientos
necesarios para garantizar la confidencialidad y la integridad de la informacin.
s) Informe de resultado. Se describe el procedimiento de informe de resultados,
segn un formato institucional que incluya los rangos biolgicos.
t) Acciones correctivas y manejo de reclamos. Se describen los procedimientos
para la resolucin de reclamos y el mantenimiento de sus registros, as como de
las investigaciones y las acciones correctivas tomadas.
u) Comunicacin e interaccin con usuarios, profesionales, laboratorios de
derivacin y proveedores. Se hace referencia a los procedimientos para evaluar y
seleccionar proveedores y laboratorios de derivacin, as como a los de las
encuestas de satisfaccin de los usuarios.
v) Auditorias internas. Se muestra cmo se tienen formalmente planificadas y
organizadas las auditorias y cmo se realizan, tanto a sistemas administrativos
como tcnicos.
y) tica. Se muestra a travs de un cdigo de tica, cmo el laboratorio y la
comunidad. (OPS, 2005).

2.4.3. Procedimientos

Un procedimiento es una secuencia de pasos para ejecutar una tarea de rutina. Se
prescribe como se procedera en ciertas circunstancias para producir un resultado
deseado

28
Los procedimientos del sistema de calidad son un cierto tipo de procedimiento,
cumplen una poltica de calidad y regulan procesos que producen una salida de la
organizacin, cuya calidad es esencial para la empresa. (Lenis, S. 2007)

Existen varios tipos de prcticas documentadas:

Procedimientos de divisin: Que se aplican a ms de una divisin de la compaa
y regulan actividades comunes.

Procedimientos de control, que controlan el trabajo sobre un producto a medida
que pasa entre departamentos o procesos. Deben contener como traspasar la
informacin de un departamento a otro y hacer referencia a los procedimientos de
operacin que se aplican a cada tarea. (Lenis, S. 2007)

Procedimientos de operacin, que prescriben como se realizan tareas especficas.
Subcategoras de estos procedimientos pueden incluir procedimientos de prueba,
de inspeccin, de instalacin, etc. Estos deben hacer referencia a los estndares y
guas que se necesiten para llevar a cabo la tarea, documentar los resultados y
contener los formularios utilizados para registrar la informacin. (Lenis, S. 2007)

Los estndares que definen los criterios de aceptacin para juzgar la calidad de
una actividad, un documento, un producto o un servicio.

Guas, que ayudan a la toma de decisiones y a la realizacin de actividades, deben
contener ejemplos, ilustraciones, indicaciones y avisos para ayudar al personal a
realizar su trabajo tan bien como sea posible(Lenis, S. 2007)
.
29
Instrucciones de trabajo, definen el trabajo requerido en trminos de quien es el
que lo realiza, cuando se comienza y se completa, que estndar tiene que cumplir
y cualquier indicacin que determine la calidad. (Lenis, S. 2007)

Los procedimientos normalizados para cada tipo de actividad deben ser
documentados en el manual de procedimientos del departamento involucrado.
Los procedimientos normalizados autorizados contribuyen a crear un sentido de
contabilizar los datos facilitando la supervisin y la auditoria. La responsabilidad
de la preparacin, aprobacin y publicacin de los manuales de procedimientos
con respecto a los diferentes elementos de la norma ISO 9000 corresponde al
departamento o grupo involucrado. (Lenis, S. 2007)

2.4.3.1. Procedimientos Operativos Estndar

Los procedimientos operativos estndar (POEs) son instrucciones escritas para
diversas operaciones particulares o generales y aplicables a diferentes productos o
insumos. La realizacin de POE es requerida por las Buenas Prcticas de
Laboratorio y por la regulacin bajo normas ISO 9000.
Se requiere que estos estn escritos y que sean seguidos fielmente por toda
persona envuelta en la operacin correspondiente. Su propsito principal es
garantizar la uniformidad, reproducibilidad y consistencia de las caractersticas
del producto lote tras lote, empleado a empleado y turno a turno.
(Guarnizo,J .2005)

Los POES deben cumplir con ciertas caractersticas:

- Ser escritos en un idioma que los que lo van a ejecutar entiendan.
-Describir los pasos para realizar cada tarea en orden cronolgico.
- Enumerar todos los materiales a utilizar.
30
- Evitar usar palabras ambiguas tales como: aproximadamente, varias, caliente o
fro, etc..
- Especificar temperatura, concentraciones, nmero de vueltas.
- Cumplir con todas las reglamentaciones (BPL, ISO, NTC etc).
- Describir claramente el uso de puntos decimales y reglas de redondeo.
- Evitar el uso de sinnimos y de la palabra etctera.
- Escribir el POE usando oraciones cortas y con verbos en modo activo.
31
INICIO
Seleccionar redactores
Capacitar Redactores
Iniciar Redaccin
Es un nuevo
procediemieno? Revisar de acuerdo
con los requisitos y
necesidades
Es
necesario
actualizar?
Es suficiente la
documentacin
disponible
Listar las actividades necesarias
y su secuencia
Elaborar diagrama de flujo Desarrollar el
POE
Revizar con personal
calificado y supervisores
Verificar pasos del POE Aplicar POE
Identificar documento Distribuir copias
controladas de POE
Capacitar personal
sobre POE
Evaluar la capacitacin
Aplicar
POE
Archivar
copia original
del POE
32
Figura 2. Estructura de un POEs (OPS, 2005)

2.4.3.2 Componentes de un POE

Tabla 2. Formato de un POEs (OPS, 2005). (Guarnido, J . 2005)
Objetivo/
proposito
Indicar el fin que se desea alcanzar con la redaccin del procedimiento
Alcance/ Campo
de aplicacin
Sealar a que (equipo, materiales, documentos)y a quien afecta el
POE
Desarrollo del
Procedimiento
Fundamento o principio: Marco o bases terico prcticas que
explican el procedimiento.

Especificaciones de desempeo del procedimiento (Limite de
deteccin, especificidad analtica, incertidumbre de la medicin).

Muestra requerida: Definir el tio de muestra y los requisitos que
esta debe cumplir.

Reactivos: Enumerar los reactivos necesarios y su calidad.

Materiales: Numerar los materiales necesarios

Instrucciones detalladas:

Indicar acciones en forma secuencial

Usar verbos en infinitivo o imperativo

Establecer que tareas se van a desarrollar y en que orden

Identificar el espacio fsico y acondiciones ambientales

Establecer las precauciones de seguridad, bioseguridad
y manejo del medio ambiente.

Definir posibles interferencias

Definir correctamente la forma de calculo de los
resultados.

Definir los intervalos de referencia, con los criterios de
aceptacin (Valores alerta).

Validacin de los resultados.

Interpretacin de los resultados.
33

2.4.3.3 Beneficios de los POES

-Los procedimientos son la primera herramienta en el entrenamiento del nuevo
personal.
-Garantizan la realizacin de las tareas siempre de la misma forma.
-Sirven para evaluar al personal y conocer su desempeo.
-Al ser de revisin peridica, sirven para verificar su actualidad y como
reentrenamiento del personal con experiencia.
-Promueven la comunicacin entre los distintos sectores de la empresa.
-Son tiles para el desarrollo de auditorias internas y externas. (OPS, 2005)

Informe y archivos de resultados.

Describir los cambios internos para cada etapa.

Calibracin de Instrumental y mantenimiento de
equipos.

Formularios y
Registros
Indicar los formularios requeridos para registrarlas actividades y los
resultados de los ensayos. Identificar los formularios.
Referencias
Mencionar los documentos y normas en las que se basa el
procedimiento.
Anexos
Utilizarlos para adjuntar diagramas de flujo y copias de formularios y
otros documentos de apoyo.
Lista de
distribucin
Definir lista de reas involucradas con su respectivo responsable al
cual se le entregar copia del procedimiento.
Redactado por,
Revisado por,
Aprobado por.
Las personas que redactaron, revisaron y aprobaron el documento lo
firmaran
Actualizaciones
Todos los POEs, sus revisiones y actualizaciones, deben cumplir con
el sistema de control de documentos y estar en el ndice maestro,
adicionalmente es conveniente que esten agrupados en un manual de
procedimientos.
Fechas
Hacer constar fechas de redaccin ,revisin, aprobacin ,vigencia y
actualizacin
34
2.4.3.4 Requisitos para el manejo de los POEs

-La distribucin de POEs debe funcionar correctamente.
-Estar registrados adecuadamente.
-Guardar un juego completo de las versiones vigentes.
-Los POEs nuevos deben ser distribuidos tan rpido como sea posible, igual que
aquellos que sean nuevas versiones de otra ya existente.
-Tener disponibles suficientes manuales en las reas de trabajo.
-Retirar las versiones anteriores de los POEs.
-Los POEs deben ser incluidos como parte del entrenamiento de normas GMP
(Good -Manufacture Practice).
-Validar su ejecucin.
-Organizacin por reas.
-No incluir varios temas diferentes en el mismo POE. (Guarnizo, J . 2005)

2.4.4 Instructivos

Por cada procedimiento se debe identificar si se requiere instruccin de trabajo. La
instruccin de trabajo es informacin que explica en detalle el como se efecta
una operacin concreta. Las modalidades comnmente utilizadas son: listas de
verificacin, flujogramas, tablas de decisin y ayudas visuales. Las instrucciones
de trabajo estn en el tercer nivel, bajo el ttulo de documentos de calidad, estas
cuando se requieran pueden referirse a los procedimientos e incluirse como anexo.
Las instrucciones deben redactarse en un lenguaje fcilmente comprensible para
los operadores del nivel mas bajo.
Una instruccin trasmite conocimientos, informacin o direcciones para el
propsito de realizar el trabajo. Los procedimientos tambin transmiten
conocimiento, informacin y direcciones, pero exponen como se realizan ciertas
35
tareas y especifican quien es el que la realiza, esta es la principal diferencia entre
estos tipos de documentos. (Lenis, S. 2007)

2.4.4.1 Estructura y formato

Se recomienda incluir el ttulo y una nica identificacin. El nivel del detalle debe
adaptarse a las necesidades del personal de la organizacin y del trabajo y
mtodos utilizados. Pueden estar incluidas en los procedimientos documentados o
hacerse referencia a ellos (Guarnizo, 2005).
2.4.4.2 Contenido

Describe solamente actividades crticas para su control. Se puede considerar el
propsito y el alcance del trabajo y los objetivos, y hacer referencia a los
procedimientos documentados pertinentes (Guarnizo, 2005).

2.4.4.3 Revisin, aprobacin y modificacin

La organizacin debe proporcionar clara evidencia de la revisin y aprobacin de
las instrucciones de trabajo, su estado de revisin y fecha de modificacin
(Guarnizo, 2005).

2.4.4.4 Identificacin de los cambios
Cuando sea factible la naturaleza de los cambios debe identificarse en el
documento o en los anexos apropiados (Guarnizo, 2005).

2.4.5 Registros

Los registros tcnicos son una acumulacin de datos e informacin resultante de
la realizacin de los ensayos o calibraciones y que indican si se alcanza la calidad
36
o los parmetros especificados de los procesos (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).
Muestra los resultados obtenidos o proporcionan evidencia que indica que se estn
realizando las actividades establecidas en los procedimientos documentados e
instrucciones de trabajo. Deben indicar el cumplimiento de los requisitos del
sistema de gestin de la calidad y de los especificados para el producto (Guarnizo,
J . 2005)

2.4.5.1 Control de registros

Los registros deben incluir la identidad del personal responsable del muestreo, de
la realizacin de cada ensayo o calibracin y de la verificacin de los resultados.
Las observaciones, los datos y los clculos se deben registrar en el momento de
hacerlos y deben poder ser relacionados con la operacin en cuestin. Cuando
ocurran errores en los registros, cada error debe ser tachado, no debe ser borrado,
hecho ilegible ni eliminado, y el valor correcto debe ser escrito al margen. Todas
estas alteraciones a los registros deben ser firmadas o visadas por la persona que
hace la correccin (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).

2.4.6 Control de documentos

Segn la NTC-ISO-IEC 17025 las ediciones autorizadas de los documentos se
deben encontrar disponibles en todos los lugares en donde se desempeen
operaciones esenciales para el funcionamiento efectivo del laboratorio, estos
documentos deben ser revisados peridicamente y en caso de ser necesario
actualizados a fin de asegurar la continua adaptabilidad y cumplimiento con los
requisitos aplicables, a su vez los documentos sin validez u obsoletos deben ser
retirados prontamente de los puntos de uso.
Todos los documentos distribuidos entre el personal del laboratorio como parte de
un sistema de gestin deben ser revisados y aprobados, para su uso, por el
personal autorizado antes de su emisin. Se debe establecer una lista maestra o un
37
procedimiento equivalente de control de la documentacin, identificando el estado
de revisin vigente y la distribucin de los documentos del sistema de gestin, la
cual debe ser fcilmente accesible con el fin de evitar el uso de documentos no
vlidos u obsoletos (NTC-ISO-IEC 17025, 2005).
Si el sistema del control de la documentacin del laboratorio permite la enmienda
de documentos en forma manual hasta la nueva expedicin de los documentos, se
deben definir los procedimientos y autoridades para tales enmiendas. Las
enmiendas deben ser claramente marcadas, firmadas y fechadas. Tan pronto como
sea prctico debe reemitirse formalmente un documento actualizado.
ISO 9001 determina que una organizacin que implante un sistema de calidad
debe establecer y mantener al da procedimientos para controlar todos los
documentos y datos relevantes para el sistema. Los documentos del sistema de
gestin generados por el laboratorio deben ser identificados unvocamente. Dicha
identificacin debe incluir la fecha de emisin o una identificacin de la revisin,
la numeracin de las pginas, el nmero total de pginas o una marca que indique
el final del documento, y la o las personas autorizadas de emitirlo (NTC-ISO-IEC
17025, 2005). El objetivo del control de la documentacin es asegurar que todos
los que realizan tareas conocen la existencia y disponibilidad de los documentos
que regulan dichas tareas.
Debe establecerse un procedimiento documentado que defina los controles
necesarios para:

-Aprobar los documentos en cuanto su adecuacin antes de su emisin.
-Revisar y actualizar los documentos cuando sea necesario y aprobarlos
nuevamente.
-Asegurarse de que se identifican los cambios y el estado de revisin actual de los
documentos.
-Asegurarse de que las versiones pertinentes de los documentos aplicables se
encuentran disponibles en los puntos de uso.
38
-Asegurarse de que los documentos permanecen legibles y fcilmente
identificables.
-Asegurarse de que se identifican los documentos de origen externo y se controla
su distribucin.
-Prevenir el uso no intencionado de documentos obsoletos, y aplicarles una
identificacin adecuada en el caso de que se mantengan por cualquier razn.

El control de documentos debe iniciarse al tiempo de su redaccin y se mantendr
hasta que sean descartados. Los documentos que deben controlarse no se limitan a
las especificaciones que genera el departamento de diseo. Todos los documentos
que definen el producto, o que sean necesarios para el funcionamiento eficaz del
sistema de la calidad, deben incluirse dentro del sistema de control. (Guarnizo, J .
2005)

Tabla 3 . Situacin de los documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J . 2005)
VIGENCIA
El documento tiene pleno efecto. Se debe especificar desde
cundo.

REVISION
Se incluye en este concepto la revisin peridica de los
documentos (POE) para evaluar la validez del
procedimiento, sin necesariamente traducirse en una
modificacin.
En la medida en que se realizan mejoras a los
procedimientos, los documentos deben ser actualizados.

SUSPENSIN
El documento pierde vigencia momentneamente por un
motivo determinado. Se debe establecer y comunicar la
fecha de suspension.

ANULACIN
El documento es suprimido definitivamente del sistema.

ACTUALIZACIN,
MODIFICACIN
El documento sufre una modificacin para hacerlo ms
apropiado.

39
Tabla 4 . Identificacin de documentos (OPS. 2005) (Guarnizo, J . 2005)
TIPO
MC Manual de Calidad (nivel 1).
PC Proceso (nivel 2).
PO Procedimiento operativo estndar (nivel 3).
F Formulario (nivel 4).

REA
Define el rea y puede expresarse con letras o nmeros, por
ejemplo:
1 o T Toma de muestra
2 o C Procesamiento analtico
5 o I Emisin de informe
3 o E Entrega de informe.

NMERO
Identifica el nmero consecutivo / correlativo del documento
o procedimiento. En los formularios, al nmero se agrega una
letra (puede haber varios formularios para un mismo
proceso).

VERSIN
Se identifica con nmeros que van precedidos por una barra.

2.5 BIOSEGURIDAD

La bioseguridad, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes
biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la prevencin de impactos nocivos,
asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten
contra la salud y seguridad del personal del laboratorio.
Adicionalmente debe entenderse como una doctrina de comportamiento
encaminada a lograr actitudes y conductas que disminuyan el riesgo del personal
del laboratorio de adquirir infecciones en el medio laboral. Compromete tambin
a todas aquellas personas que se encuentran en el ambiente asistencial, por lo que
las reas, espacios o entornos asistenciales deben estar diseados de tal forma que
faciliten la disminucin o control de los riesgos inherentes a la actividad
propiamente dicha. (Dagmar, L.2004).
El concepto de bioseguridad surge a nivel internacional cuando se desarrolla la tcnica
40
del DNA recombinante en 1972, y con sta, las nuevas biotecnologas.
En 1975 se reunieron los 40 cientficos de todo el mundo que trabajaban con el DNA
recombinante. De esta reunin proviene la primera gua de bioseguridad. Estas normas
tratan de minimizar los riesgos de estas nuevas tecnologas. (Dagmar, L.2004).
2.5.1 Principios de Bioseguridad

La sociedad espaola de enfermedades infecciosas y microbiologa clnica (2003)
define cuatro principios en bioseguridad:
A) Universalidad: Las medidas deben involucrar a todas las reas del laboratorio,
el personal, pacientes, visitantes de todos los servicios, independientes o
dependientes. Todo el personal debe seguir las precauciones que se aclaran en un
manual de bioseguridad, de forma rutinaria para prevenir la exposicin de la piel y
de las membranas mucosas, en todas las situaciones que puedan dar origen a
accidentes.
B) Uso de barreras: Comprende el concepto de evitar la exposicin directa a
agentes biolgicos y muestras orgnicas potencialmente contaminados o de
riesgo, mediante la utilizacin de materiales o barreras adecuadas que se
interpongan al contacto de los mismos, disminuyendo las consecuencias de
accidente.( Arias, J . 2005).
C) Medios de eliminacin de material contaminado: Contiene el conjunto de
dispositivos y procedimientos adecuados a travs de los cuales los materiales
utilizados en la atencin de pacientes, toma de muestras y eliminacin de muestras
biolgicas son depositados y eliminados sin riesgo.

d)- Evaluacin de riesgos
La evaluacin de riesgos corresponde a un proceso de anlisis de la probabilidad
que ocurran daos, heridas o infecciones en el laboratorio. La evaluacin de los
riesgos debe ser efectuada por el personal de laboratorio que realiza los procesos
con los agentes de riesgo, el uso del equipamiento e insumos, los modelos y la
41
contencin correspondiente. Una vez establecido, el nivel de riesgo debe ser
reevaluado y revisado permanentemente. La evaluacin de riesgos estar
sistemticamente asociada con el manejo de los mismos, con el objeto de formular
un plan de mitigacin
Deben conocerse los tipos de accidentes (fsicos, qumicos o biolgicos) que
pueden generarse en el laboratorio segn los procedimientos que all se realicen,
para analizar la probabilidad de que estos realmente ocurran. (OMS, 2005)
2.5.2 Niveles de Contencin

El primer principio de Bioseguridad, es la contencin. El trmino "contencin"
se emplea para describir los mtodos que hacen seguro el manejo de materiales
infecciosos en el laboratorio. El propsito de la contencin es reducir al mnimo la
exposicin del personal de los laboratorios, otras personas y el entorno a agentes
potencialmente peligrosos. (Arias, J . 2005)
2.5.2.1 Caractersticas de los Niveles de Contencin

Se describen cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica, que consisten
en la combinacin, en menor o mayor grado, de los tres elementos de seguridad
biolgica descritos: tcnica microbiolgica, equipo de seguridad y diseo de la
instalacin. Cada combinacin est especficamente dirigida al tipo de
operaciones que se realizan, las vas de transmisin de los agentes infecciosos y la
funcin o actividad del laboratorio.
a) Nivel de contencin 1:
Es el nivel de seguridad requerido para los agentes biolgicos del grupo 1, es decir,
los que no producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad
conocida y estable a los antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los
laboratorios de prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean
42
cepas no patgenas. (Escherichia coli, B. subtilis, Naegleria sp, Saccharomyces
cerevisiae, etc.). (OMS, 2005.)
b) Nivel de contencin 2 :
Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que, perteneciendo a la
propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patologa infecciosa
humana de gravedad moderada o limitada. Deben ser manipulados por personal
especializado (tcnicos de laboratorio, especialistas en Microbiologa) y son los
que con ms frecuencia se estudian en el Laboratorio de Microbiologa Clnica:
Staphylococcus, Salmonella, Toxoplasma, Hepatitis B , etc.(OMS.2005.)
c) Nivel de contencin 3:
Debe utilizarse cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3,
microorganismos que cursan con patologa grave, de difcil y largo tratamiento,
que pueden causar secuelas y son capaces de producir la muerte. El mayor y ms
frecuente peligro que entraan stos es la infeccin adquirida a travs de aerosoles
y por fluidos biolgicos. Por ello, las principales medidas a tomar en este caso son
la correcta manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En los
Laboratorios de Microbiologa Clnica los ejemplos ms tpicos de este tipo de
microorganismos son M. tuberculosis, Brucella, Coxiella burneti, St. Louis virus,
etc. Slo pueden ser procesados por personal calificado y en una zona con la
infraestructura recirculacin de aire, con gradiente de presin, cabinas de
bioseguridad, etc. (OMS, 2005).
d) Nivel de contencin 4:
Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se sospecha un agente
especialmente patgeno e infectocontagioso, extico o no, que produce alta
mortalidad y para el que no existe tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente
43
son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel
tambin puede utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados
por microorganismos del grupo 4. (OMS, 2005).
2.5.3 Agentes Biolgicos

Se entiende por agente biolgico cualquier microorganismo, incluyendo los
genticamente modificados, cultivo celular, animal o planta o producto de estos,
capaz de producir cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad en humanos,
animales u otros seres vivos. (OMS; 2005)

2.5.3.1. Clasificacin de los Microorganismos por Grupo de Riesgo

Se clasifican los agentes biolgicos en cuatro grupos:
- Agente biolgico del grupo 1. Aqul que resulta poco probable que cause una
enfermedad en el hombre.
- Agente biolgico del grupo 2.Aqul que puede causar una enfermedad en el
hombre y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable
que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis tratamiento
eficaz.
- Agente biolgico del grupo 3. Aqul que puede causar una enfermedad grave
en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que
se propague a la colectividad y existiendo frente a l generalmente profilaxis o
tratamiento eficaz.
- Agente biolgico del grupo 4. Aqul que causando una enfermedad grave en el
hombre supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades
de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente frente a l
profilaxis o tratamiento eficaz. (Weng, Z. 2005).

44
2.5.4 Normas Generales de seguridad biolgica en el laboratorio

La peligrosidad de un agente est directamente relacionada con el tipo de
manipulacin a la que es sometido. Por ello es bsico conocer:
1. Los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
2. La metodologa de trabajo del laboratorio.
3. El equipamiento del laboratorio.
4. Las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Las leyes relacionadas con la seguridad Biolgica.
6. Respetar y verificar el cumplimiento de todo lo anterior.

Para que se produzca un accidente por agente biolgico deben ocurrir bsicamente
cuatro elementos. Un husped susceptible, un agente infeccioso, una
concentracin suficiente de ste y una ruta de transmisin apropiada. De todos
ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de transmisin
(Arias, J . 2005).
2.5.5 Barreras Primarias

Tal como su nombre lo indica, las llamadas barreras primarias son la primera lnea
de defensa cuando se manipulan materiales biolgicos que puedan contener
agentes patgenos. El ejemplo ms claro de contencin primaria lo constituyen las
cabinas de seguridad biolgica.
Cuando no es posible el aislamiento del foco de contaminacin, la actuacin va
encaminada a la proteccin del trabajador mediante el empleo de prendas de
proteccin personal. En la mayora de las ocasiones se practica la combinacin de
ambos tipos de medidas, tal como puede ser el empleo de la cabina junto con
guantes y mascarilla. Todo ello sin olvidar que la mxima contencin del riesgo
biolgico slo se da cuando, adems, se emplean las tcnicas de trabajo correctas
45
unidas a un diseo del laboratorio acorde con el nivel de riesgo. (Chavez, E.
2006).
Las barreras de contencin primaras son:
-Tcnicas de laboratorio e higiene personal
-Equipos de proteccin personal (EPP)
-Inmunizacin
-Limpieza, desinfeccin y esterilizacin
2.5.5.1 Tcnicas de Laboratorio Estndar

Las tcnicas de laboratorio estndar se refieren al seguimiento estricto de las
buenas prcticas de laboratorio y tcnicas de laboratorio. Como parte de estas
prcticas esta el desarrollo en cada laboratorio de procedimientos escritos de
rutina, en el que se especifiquen los pasos para minimizar riesgos biolgicos,
qumicos y fsicos.(OMS, 2005)

2.5.5.2 Equipos y Proteccin Personal

Redefine el equipo de proteccin personal como cualquier equipo destinado a ser
llevado por el trabajador para que le proteja de uno o varios riesgos que puedan
amenazar su seguridad o su salud, as como cualquier complemento o accesorio
destinados a tal fin. (OMS, 2005)

2.5.5.2.1 Cabinas de Seguridad Biolgicas

Son cmaras de circulacin forzada que, segn sus especificaciones y diseo,
proporcionan diferentes niveles de proteccin. Son fundamentales en un
Laboratorio de Microbiologa y se clasifican segn el nivel y tipo de proteccin.
Las cabinas de Seguridad Biolgica son recintos ventilados diseados para limitar
al mximo el riesgo del personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos.
Las CSB disponen de dos sistemas que impiden la salida de contaminacin: las
barreras de aire y los filtros. (Chavez, E. 2006).
46
Las CSB se dividen en tres categoras: Clase I, Clase II y Clase III.
- Cabinas de Clase I. Son cmaras cerradas con una abertura al frente para
permitir el acceso de los brazos del operador. El aire penetra por este frontal,
atraviesa la zona de trabajo y todo l sale al exterior a travs de un filtro HEPA.
La velocidad del flujo de aire es de unos 0,40 m/s (75 pies/m). Son apropiadas
para manipular agentes biolgicos de los grupos 1, 2 3. La mayor desventaja que
presentan es que no proporcionan proteccin al material con el que se trabaja, no
evitando por lo tanto que ste se pueda contaminar. (Chavez, E. 2006).
- Cabinas de Clase II. Se diferencian principalmente de las de clase I en que,
adems de al operario y su entorno, ofrecen proteccin al producto frente a la
contaminacin. La superficie de trabajo est baada por aire limpio que ha
atravesado un filtro HEPA. La salida del aire se produce a travs de otro filtro
HEPA. Son equipos vlidos para el manejo de agentes biolgicos de los grupos 1,
2 3. Existen varios tipos de cabinas de clase II, A, B1, B2 y B3, segn sus
caractersticas de construccin, flujo de aire y sistema de extraccin.(Chavez,E.
2006).
- Cabinas de clase III. Constituyen el mximo nivel de seguridad. Son recintos
hermticos en presin negativa y, por ello, su interior est completamente aislado
del entorno.(Chavez, E. 2006).

2.5.5.3 Inmunizacin

Inmunizacin es el proceso que permite generar resistencia a una enfermedad
infecciosa y se divide en Inmunizacin activa e inmunizacin pasiva.
La inmunizacin activa consiste en la produccin de anticuerpos como respuesta
a la administracin de productos biolgicos de origen heterlogo (vacuna,
antitoxina), en cuyo caso es artificial. La natural se adquiere por padecimiento de
la enfermedad.
47
La inmunizacin pasiva, es la transferencia de la inmunidad temporal mediante la
administracin de anticuerpos o antitoxinas preformadas, en cuyo caso es artificial.
La natural es la transferencia de anticuerpos maternos al feto. (OMS, 2005)

2.5.5.4 Limpieza, Desinfeccin y Esterilizacin

Limpieza: Es el conjunto de operaciones que permite eliminar la suciedad visible
o microscpica de una superficie. Una limpieza regular peridica tiene un efecto
adems higienizante ya que reduce la presencia de microorganismos patgenos
disminuyendo a su vez la necesidad de desinfectar. Deben utilizarse materiales
que sean qumicamente compatibles con los germicidas que vayan a utilizarse
despus. Es muy frecuente utilizar el mismo germicida qumico para la limpieza
previa y la desinfeccin. (Delgado, E.2006)

Desinfeccin: Es un proceso fsico o qumico que destruye la mayora de
microorganismos patgenos y no patgenos, pero rara vez elimina las esporas. Por
esta razn a los objetos que se van a desinfectar se les debe evaluar previamente el
nivel de desinfeccin que requiere, para lograr destruir los microorganismos que
contaminan los elementos. La desinfeccin puede hacerse por contacto directo,
aspersin. (Delgado, E.2006)

Esterilizacin: Es una operacin que comprende todos los procedimientos fsicos,
qumicos o mecnicos, que se emplean para destruir, inactivar agentes biolgicos
en general y patgenos en particular. La esterilizacin por calor es el agente fsico
ms utilizado para la descontaminacin de patgenos. Existen dos tipos de
esterilizacin: por calor seco y por calor hmedo. El calor seco, que no es en
absoluto corrosivo, se utiliza para tratar muchos objetos de laboratorio que pueden
soportar temperaturas de 160 C o ms durante dos a cuatro horas. La combustin
o incineracin es tambin una forma de calor seco. El calor hmedo es
especialmente eficaz cuando se utiliza en autoclave. (Delgado, E.2006)
48

2.5.6 Barreras Secundarias

La magnitud de las barreras secundarias depender del tipo de agente infeccioso
que se manipule en el laboratorio. Dentro de ellas se incluyen la separacin de las
zonas donde tiene acceso el pblico, la disponibilidad de sistemas de
descontaminacin (autoclaves), el filtrado del aire de salida al exterior, el flujo de
aire direccional, etc.
El diseo y construccin de un laboratorio (lo que en Seguridad Biolgica se
conoce como barreras secundarias) contribuye a la proteccin del propio
personal del laboratorio, proporciona una barrera para proteger a las personas que
se localizan fuera del laboratorio. (NTC- ISO/IEC 17025). Adicionalmente son
requisitos establecidos por las Buenas Prcticas de Laboratorio (BPL).
Localizacin. Es aconsejable que el Laboratorio de Microbiologa localice fuera
del trfico y que no sea un lugar de paso para otras dependencias en las que no
exista restriccin para su acceso (cafeteras, almacenes, bibliotecas,
aparcamientos). (NTC- ISO/IEC 17025).

Acceso de personal. En general, debe ser restringido a las personas formadas para
el manejo de agentes infecciosos. Para un nivel 2 de contencin es suficiente que
la puerta del laboratorio pueda cerrarse con llave, mientras que para el nivel 3 la
puerta ha de ser doble adems de recomendarse un cambio de ropa. (NTC-
ISO/IEC 17025).
Lavado. Debe existir uno en el mismo laboratorio. Estar dotado de grifos que
puedan accionarse sin utilizar las manos y situado preferiblemente cerca de la
puerta de salida.
Lava ojos. Se recomienda que exista uno dentro del laboratorio como equipo de
emergencia.
49
Superficies interiores. Los suelos, paredes y techos deben ser impermeables al
agua y resistentes a diferentes productos qumicos, de forma que permitan una
limpieza a fondo y una posterior descontaminacin. En el nivel 3 de contencin,
adems, todas las penetraciones deben ir selladas.
Superficies de trabajo. Las mesas y bancos de trabajo deben ser resistentes al
calor moderado, a disolventes orgnicos, cidos y lcalis.
Sealizacin. Siempre que el trabajo est en marcha, debe colocarse en la puerta
del laboratorio la seal reglamentaria de peligro biolgico.
Presin negativa. Se recomienda que el laboratorio se mantenga a una presin
negativa con respecto al exterior del mismo, es decir, con respecto a los pasillos u
otras zonas del edificio, de manera que exista un flujo de aire desde las zonas
menos contaminadas hacia las de mayor riesgo de contaminacin. Las puertas y
ventanas del laboratorio han de permanecer cerradas si se quiere mantener esa
presin negativa. No es aconsejable la recirculacin de aire.
Filtros HEPA. Las normas internacionales que rigen a las cabinas a nivel
mundial, en el caso de las cabinas de flujo laminar, se basa en las
recomendaciones para el diseo y fabricacin por la norma Federal Standard 209E
(ISO-14644). (Arias, J .2005)
Para las cabinas de Seguridad Biolgica, la fabricacin y el diseo debe cumplir
con las recomendaciones de la norma internacional ANSI/NSF Standard 49.
En ambos casos, y de acuerdo con las normas mencionadas, lo principal es que
estos equipos provean clase 100 para la proteccin al producto, y esto se logra con
un filtro HEPA con eficiencia del 99.99% sobre 0,3 micrones, no requiriendo otro
tipo de filtracin. Recuerde que la norma exige clase 100 y sta se consigue con
un filtro HEPA, sin importar la cantidad de tiempo de trabajo en el equipo o la
toxicidad o riesgo biolgico, ya que la filtracin HEPA es la recomendada por la
norma y sta provee la clase 100 requerida.
50
Las cabinas de flujo laminar deben tener un filtro HEPA del 99.99% de eficiencia
sobre 0,3 micrones, y un prefiltro de alta eficiencia, sinttico.
Las cabinas de seguridad Biolgica, Clase II Tipo A2, tienen dos (2) filtros HEPA
del 99.99% de eficiencia sobre 0.3 micrones. ( Dagmar, L. 2004).
Todos los filtros HEPA deben controlarse y certificarse una vez al ao. Sus fundas
estn diseadas para permitir descontaminar el filtro in situ antes de quitarlo.
Tambin se podr retirar el filtro colocndolo en un contenedor sellado hermtico
a los gases para su futura descontaminacin o su destruccin mediante
incineracin. (OMS 2005)

2.5.7 Gestin de residuos Slidos

2.5.7.1 Generalidades

La gestin de residuos debe ser considerada como una parte muy importante de la
seguridad en el Laboratorio de Microbiologa. Muchos de los desechos que se
generan pueden estar contaminados por microorganismos o contener sustancias
qumicas txicasy peligrosas. En menor medida, el personal del laboratorio puede
estar expuesto a los efectos de las radiaciones ionizantes.
Los casos de infecciones o intoxicaciones en el laboratorio son conocidos desde
antes, lo que hace obligada la adopcin de medidas de proteccin para la persona
que trabaja en este mbito. La proteccin debe ampliarse con prcticas tendentes a
preservar la salud de los compaeros de trabajo. Adems, aunque la visin que
aqu se pretende dar est sobre todo encaminada a la proteccin del personal de
los laboratorios, no debemos olvidar que las actividades que en ellos se realizan
pueden afectar a la salud comunitaria.
La mejor manera de racionalizar los residuos es mediante una gestin integrada
cuyos pilares bsicos son la minimizacin, la segregacin y la eliminacin
51
controlada (disposicin). El personal del laboratorio debe ser consciente de que la
puesta en marcha de normas de buena prctica en la gestin de los residuos
repercute poderosamente sobre su salud y la de los que lo rodean, a la vez que
contribuye a la reduccin de costos. (Decreto 2676 de 2000).

2.5.7.2 Clasificacin de los Residuos segn su peligrosidad

Segn el Decreto 2676 de 2002 expedido por el Ministerio del Medio ambiente y
Ministerio de Salud, los residuos se clasifican en:

Figura 3. Clasificacin de los Residuos segn su peligrosidad
2.5.7.2.1 Residuos no peligrosos:

Son aquellos producidos por el generador en cualquier lugar y en desarrollo de su
actividad, que no presentan ningn riesgo para la salud humano y/o el medio
ambiente. . (Decreto 2676 de 2000).
52
Cualquier residuo no peligroso sobre el que se presuma el haber sido mezclado
con residuos peligrosos debe ser tratado como tal.
Los residuos no peligrosos se clasifican en:
- Biodegradables: Son aquellos restos qumicos o naturales que se descomponen
fcilmente en el ambiente. En estos restos se encuentran los vegetales, residuos
alimenticios, papeles no aptos para reciclaje, jabones y detergentes biodegradables,
madera y otros residuos que puedan ser transformados fcilmente en materia
orgnica.
- Reciclables: Son aquellos que no se descomponen fcilmente y pueden volver a
ser utilizados en procesos productivos como materia prima. Entre stos se
encuentran: papel, plstico, chatarra, telas y radiografas.
- Inertes: Son aquellos que no permiten su descomposicin, ni su transformacin
en materia prima y su degradacin natural requiere de grandes perodos de tiempo.
Entre stos se encuentran: el icopor, papel carbn y los plsticos.
-. Ordinarios o comunes: Son aquellos generados en el desempeo normal de las
actividades. Estos restos se producen en oficinas, pasillos, reas comunes,
cafeteras y en general en todos los sitios del establecimiento del generador. .
(Decreto 2676 de 2000).
2.5.7.2.2 Residuos peligrosos
Son aquellos residuos producidos por el generador con alguna de las siguientes
caractersticas: infecciosas, combustibles, inflamables, explosivas, reactivas,
radioactivas, voltiles, corrosivas y/o txicas, que pueden causar dao a la salud
humana y/o al medio ambiente. As mismo se consideran peligrosos los envases,
empaques y embalajes que hayan estado en contacto con ellos. Se clasifican en:
- Residuos Infecciosos o de Riesgo Biolgico: Son aquellos que contienen
microorganismos tales como bacterias, parsitos, virus, hongos, virus oncognicos
53
y recombinantes como sus toxinas, con el suficiente grado de virulencia y
concentracin que pueden producir una enfermedad infecciosa en huspedes
susceptibles. Cualquier residuo hospitalario y similar que haya estado en contacto
con residuos infecciosos o genere dudas en su clasificacin, por posible
exposicin con residuos infecciosos, debe ser tratado como tal. . (Decreto 2676 de
2000).

Los residuos infecciosos o de riesgo biolgico se clasifican en:
Biosanitarios: Son todos aquellos elementos o instrumentos utilizados durante la
ejecucin de los procedimientos asistenciales que tienen contacto con materia
orgnica, sangre o fluidos corporales del paciente tales como: gasas, apsitos,
aplicadores, algodones, drenes, vendajes, mechas, guantes, bolsas para
transfusiones sanguneas, catteres, sondas, material de laboratorio como tubos
capilares, de ensayo, lminas porta objetos y laminillas cubre objetos, sistemas
cerrados y sellados de drenajes y ropas desechables o cualquier otro elemento
desechable que la tecnologa mdica introduzca para los fines previstos en el
presente numeral.
- Anatomopatolgicos: Son aquellos provenientes de restos humanos, muestras
para anlisis, incluyendo biopsias, tejidos orgnicos amputados, partes y fluidos
corporales, que se remueven durante cirugas, necropsias, u otros.
- Cortopunzantes: Son aquellos que por sus caractersticas punzantes o cortantes
pueden originar un accidente percutneo infeccioso. Dentro de stos se
encuentran: limas, lancetas, cuchillas, agujas, restos de ampolletas, pipetas,
lminas de bistur o vidrio y cualquier otro elemento que por sus caractersticas
cortopunzantes pueda lesionar y ocasionar un accidente infeccioso.
-. Animales: Son aquellos provenientes de animales de experimentacin,
inoculados con microorganismos patgenos y/o los provenientes de
animalesportadores de enfermedades infectocontagiosas, o cualquier elemento o
sustancia que haya estado en contacto con stos. . (Decreto 2676 de 2000).
54

Residuos qumicos: Son los restos de sustancias qumicas y sus empaques
cualquier otro residuo contaminado con stos, los cuales, dependiendo de su
concentracin y tiempo de exposicin pueden causar la muerte, lesiones graves o
efectos adversos a la salud y al medio ambiente.
Frmacos parcialmente consumidos, vencidos y/o deteriorados: Son aquellos
medicamentos vencidos, deteriorados y/o excedentes de las sustancias que han
sido empleadas en cualquier tipo de procedimiento.
Citotxicos: Son los excedentes de frmacos provenientes de tratamientos
oncolgicos y elementos utilizados en su aplicacin tales como: jeringas, guantes,
frascos, batas, bolsas de papel absorbente y dems material usado en la aplicacin
del frmaco.
Metales Pesados: Son cualquier objeto, elemento o restos de stos en desuso,
contaminados o que contengan metales pesados como: Plomo, cromo, cadmio,
antimonio, bario, nquel, estao, vanadio, zinc, mercurio.
Reactivos: Son aquellos que por s solos y en condiciones normales, al mezclarse
o al entrar en contacto con otros elementos, compuestos, sustancias o residuos,
generan gases, vapores, humos txicos, explosin o reaccionan trmicamente,
colocando en riesgo la salud humana o el medio ambiente.
Contenedores Presurizados: Son los empaques presurizados de gases anestsicos,
xidos de etileno y otros que tengan esta presentacin.
Aceites Usados: Son aquellos con base mineral o sinttica que se han convertido o
tornado inadecuados para el uso asignado o previsto inicialmente. . (Decreto 2676
de 2000).

Residuos Radiactivos: Son las sustancias emisoras de energa predecible y
continua en forma alfa, beta o de fotones, cuya interaccin con la materia, puede
dar lugar a la emisin de rayos x y neutron. . (Decreto 2676 de 2000).

55
2.5.7.3 Gestin de Residuos
Definicin
De una forma conceptual, podemos considerar que un residuo infeccioso es todo
aquel material capaz de producir una enfermedad infecciosa. Sin embargo, a
diferencia de los residuos qumicos y radiactivos, los desechos infecciosos y sus
riesgos asociados no pueden ser identificados de una forma objetiva. La
posibilidad de contraer infecciones en el laboratorio a travs de los cultivos
microbiolgicos desechados o tras una puncin o herida accidental es algo bien
conocido. No ocurre lo mismo a la hora de evaluar el riesgo que las actividades
del laboratorio puedan tener sobre la salud de la comunidad. (Decreto 2676 de
2000).

Manual de Procedimientos para la Gestin Integral de Residuos
Hospitalarios y Similares MPGIRH

Es el documento expedido por los Ministerios del Medio Ambiente y Salud,
mediante el cual se establecen los procedimientos, procesos, actividades y
estndares de microorganismos que deben adoptarse y realizarse en los
componentes interno y externo de la gestin de los residuos provenientes del
generador. . (Decreto 2676 de 2000).

Plan de Gestin Integral de Residuos Hospitalarios y Similares PGIRH:

Es el documento diseado por los generadores, los prestadores del servicio de
desactivacin y especial de aseo, el cual contiene de una manera organizada y
coherente las actividades necesarias que garanticen la Gestin Integral de los
Residuos Hospitalarios y Similares, de acuerdo con los lineamientos del presente
manual. . (Decreto 2676 de 2000).
56

Todo Laboratorio de Microbiologa debera elaborar un manual o protocolo para
la gestin de estos residuos, siguiendo las directrices generales contenidas en el
Plan de Residuos de cada institucin. Esta recomendacin puede ser norma
obligada en el caso de que el laboratorio pretenda certificarse o acreditarse. Entre
los diferentes aspectos que debe contener dicho manual se pueden citar los
siguientes:
Estrategias de minimizacin de los residuos, incluyendo la reduccin en origen.
Segregacin de los residuos infecciosos de los no infecciosos.
Identificacin y tipificacin de los residuos infecciosos y su riesgo relativo.
Algunas Comunidades Autnomas disponen de reglamentaciones que pueden ser
orientadas.
Normas de sealizacin, rotulacin, almacenamiento y transporte.
Plan de formacin de todas las personas expuestas a estos residuos.
Normas de actuacin en caso de vertidos o roturas accidentales.
Plan de contingencia ante el fallo de las medidas de contencin habituales.
(Decreto 2676 de 2000)..
2.5.7 .4 Gestin de Residuos Qumicos

Al igual que con los residuos infecciosos, se recomienda abiertamente la
elaboracin de manuales, procedimientos o protocolos destinados a la gestin de
los residuos qumicos. Debern ser acordes y formar parte del Plan de Gestin de
Residuos de cada institucin. Antes de su elaboracin, debe hacerse una auditoria
interna del laboratorio para identificar todos aquellos residuos peligrosos que sean
susceptibles de atencin. A modo de ejemplo, algunos de los aspectos a considerar
en el manual podran ser:
- Enumeracin de los residuos qumicos peligrosos, resultado de la encuesta
previa.
- Descripcin individualizada de su peligrosidad.
57
- Mtodos para reducir su produccin.
- Sistemas de eliminacin controlada.
- Normas de actuacin en situaciones accidentales.
- Plan de formacin del personal. . (Decreto 2676 de 2000).
2.5.7.4.1 Residuos Qumicos Peligrosos y su Tratamiento

El Laboratorio de Microbiologa no es un generador de grandes cantidades de
residuos qumicos, salvo casos concretos, aunque algunos de ellos pueden ser
nocivos y peligrosos. En otras ocasiones el peligro viene por situaciones
accidentales. Se recomienda disponer en la Estacin de Seguridad de material
absorbente inerte especfico para productos qumicos.
En general, el tratamiento de estos residuos por parte del propio laboratorio no
suele ser aplicable por razones prcticas, siendo materia de especialistas
(gestores). En ocasiones forman parte de reactivos comerciales, por lo que deben
leerse con atencin los prospectos y las fichas de seguridad respectivas. Las ms
de las veces pueden eliminarse despus de un sencillo tratamiento en el propio
laboratorio. Cuando no es posible, debe consultarse a las autoridades locales para
su vertido controlado. Seguidamente, exponemos algunos ejemplos que pueden
plantearse en el Laboratorio de Microbiologa (Arias, J . 2005).
cidos inorgnicos
Salvo roturas accidentales, no suele ser frecuente tener que eliminar cidos
concentrados (HC1, HNO3, H2SO4, etc.), aunque s soluciones diluidas. Como
norma aproximada, no deben eliminarse directamente aquellas soluciones cuya
concentracin sea mayor de 1N. Los cidos ms concentrados se diluyen con agua
al 1:5 (atencin con el cido sulfrico), se neutralizan a pH 6,8 con soluciones de
hidrxido sdico, se vuelven a diluir al 1:10 en agua y ya pueden eliminarse por
los desages. Las soluciones ms diluidas se neutralizan con sosa, se diluyen con
agua y se eliminan.(Arias, J . 2005).

58
Bases inorgnicas, sales bsicas y disoluciones bsicas

Rige un procedimiento paralelo al de los cidos. Las bases y sales bsicas se
neutralizan con cido sulfrico diluido. Si son muy concentradas, se diluyen
previamente con agua al 1:5. Una vez neutralizadas se vuelven a diluir con agua
(1:10) y se eliminan directamente.

Fenoles

El fenol y sus derivados son irritantes y txicos. No deben eliminarse a travs de
los desages, ni siquiera diluidos. Los procedimientos de destruccin qumica
estn fuera de las posibilidades de los laboratorios. Lo ms aconsejable es
separarlos en recipientes especficos y transferirlos a un gestor autorizado de
residuos.(Arias, J . 2005).

Azida sdica

Est presente en muchos reactivos comerciales como conservante. Nunca debe
eliminarse directamente por desages de plomo pues se forman derivados
altamente explosivos. Adems, la azida sdica es altamente txica y un poderoso
agente mutgeno. Es conveniente contactar con las autoridades locales o gestores
autorizados para recabar normas especficas, pues la destruccin qumica con
nitrito sdico no resulta prctica en los laboratorios diagnsticos.

Aldehdos, cetonas y disolventes orgnicos
El residuo ms importante dentro de este grupo que puede ser generado en el
laboratorio de microbiologa es el formaldehdo. No debe ser eliminado
directamente por los desages. Conviene almacenarlo en recipientes seguros para
luego ser eliminado de forma controlada. La destruccin con permanganato
59
potsico es compleja. La eliminacin controlada tambin es aconsejable para los
diversos disolventes orgnicos (acetona, cloroformo, xileno y otros derivados
bencnicos, etc.) utilizados en el Laboratorio de Microbiologa.

Bromuro de etidio

Es un poderoso mutgeno de efecto acumulativo utilizado en tcnicas de biologa
molecular. Deben seguirse de forma estricta los procedimientos de manipulacin
que eviten el contacto del usuario con esta sustancia (guantes, etc.), as como la
exposicin del resto de trabajadores del laboratorio. Los geles teidos con
bromuro de etidio no deben eliminarse como una basura convencional, sino a
travs de los sistemas de eliminacin de mutgenos y citostticos propios de cada
institucin. Los tampones de electroforesis que lo contienen no deben eliminarse
por los desages, sino que deben tratarse con carbn activo (100 mg por cada 100
ml de solucin), filtrar la suspensin formada a travs de un filtro de papel y
depositar el conjunto en el cubo de eliminacin de citostticos. Las superficies
pueden descontaminarse aplicando una papilla de carbn activo: dejarla actuar,
retirarla y depositar los restos en el cubo de eliminacin de citostticos.
Colorantes utilizados en las tinciones Gram, Giemsa, Papanicolau y similares
No deben ser eliminados directamente por los desages. Se recomienda efectuar
las tinciones en cubetas que drenen sobre botellas o bidones y entregarlos a un
gestor de residuos autorizado.
Tincin de auramina
Cabe aplicar las mismas recomendaciones que con las otras tinciones, si bien aqu
la recomendacin es ms rigurosa.
Naranja de acridina
Tambin es un mutgeno. Es recomendable almacenar los restos en recipientes
adecuados y eliminarlos a travs de un gestor autorizado.(Arias, J , 2005).
Metales pesados, mercurio y compuestos rganomercuriales
60
Se incluyen dentro de este grupo las pilas y elementos afines, para los que ya
existen planes locales de recogida controlada. Por otra parte, es difcil que se
generen en el laboratorio otros residuos que contengan estos metales, pero hay que
recalcar que nunca deben eliminarse a travs de los sistemas de desage. La rotura
de termmetros y manmetros puede ser una causa de exposicin al mercurio. Se
recomienda recoger los restos ms visibles y depositarlos en un recipiente cerrado.
Los menos visibles pueden recogerse con ayuda de polvo absorbente o azufre y
guardar el conjunto en otro envase. Entre los derivados organomercuriales que
podemos encontrar en el Laboratorio de Microbiologa destaca el mertiolato. Los
residuos deben ser almacenados y eliminados de forma controlada.(OPS, 2005)
Residuos Reactivos
No es necesario insistir en sus peligros. En los Laboratorios de Microbiologa se
generan residuos radiactivos de moderada o baja intensidad, y cada vez hay mayor
tendencia a sustituir las tcnicas radiomtricas por mtodos alternativos. La
eliminacin debe hacerse de acuerdo con el plan especfico de cada institucin. La
recoleccin y gestin de los residuos radiactivos es competencia exclusiva del
laboratorio.
2.5.7.4.2 Recomendaciones para la Manipulacin de Residuos Qumicos

La mejor prevencin es la educacin. El laboratorio deber contar con manuales o
protocolos de gestin de los residuos biolgicos y qumicos .Dichos documentos
debern contar con normas especficas de actuacin en caso de accidentes y
establecer un plan de formacin del personal.
Es obligado que todos los trabajadores del laboratorio conozcan y entiendan su
contenido. El laboratorio debera entregar un ejemplar a cada nuevo trabajador en
el momento de su incorporacin. (OMS, 2005).
Los recipientes para desechar los residuos de riesgo o especficos (grupos III y IV)
en el rea de trabajo deben ser rgidos, impermeables, resistentes a cidos y
61
lcalis, de cierre hermtico para ser incinerados. As est ya establecido en la
reglamentacin de algunas Comunidades Autnomas. Los residuos sanitarios que
genera el laboratorio debern identificarse y segregarse en concordancia con las
normas generales del Plan de Residuos de cada centro, con especial atencin a los
residuos grupos III y IV. El almacenamiento y transporte debern hacerse en
condiciones seguras (OMS, 2005).
Debern existir zonas acotadas para su almacenamiento intermedio, especficas
para esta funcin si los residuos son de riesgo (grupos III y IV).
El tiempo de almacenamiento en el laboratorio (almacenamiento intermedio) no
debera superar las 24 h. El tiempo se cuenta una vez el recipiente se ha llenado y
cerrado. . (Decreto 2676 de 2000).
Los recipientes con residuos nunca se apilarn o se colocarn en zonas elevadas,
tanto durante su almacenamiento intermedio como durante el transporte. Los
residuos que puedan originar txicos voltiles se almacenarn en un rea bien
ventilada. (OMS, 2005). . (Decreto 2676 de 2000).
Deber evitarse la proximidad de los residuos inflamables a cualquier fuente de
calor. Si, adems, son voltiles, se almacenarn en una habitacin bien ventilada.
El transporte fuera del laboratorio debera estar encomendado a personas con
formacin especfica y con los medios adecuados, por lo general dentro del
contexto de la gestin general de residuos de cada centro sanitario.
Para los residuos no especficos se utilizarn bolsas diferenciadas de colores. Si
los residuos son punzantes o cortantes debern utilizarse recipientes rgidos
resistentes a la perforacin cuyo volumen no supere los 2 L. (OMS, 2005). .
(Decreto 2676 de 2000).
Los residuos de las clases III y IV se transportan en los propios recipientes en los
que se depositan. No se recomiendan recipientes de un volumen superior a los
60L. El transporte puede efectuarse en carros especficamente destinados a tal fin.
No se transportarn a la vez residuos de riesgo junto con residuos no especficos.
Si los recipientes son los adecuados y se manipulan correctamente, no es
62
necesario establecer circuitos especiales, aunque muchas veces sea recomendable
por razones estticas. (OMS, 2005). . (Decreto 2676 de 2000).
Deber evitarse originar aerosoles durante el transporte de los residuos biolgicos,
muy en especial de aquellos que contengan patgenos cuya va de transmisin sea
la area. Los recipientes que los contengan se manipularn sin hacer movimientos
bruscos. Como resulta obvio, no es apropiada la utilizacin de bajantes para el
transporte de los residuos de riesgo o especficos. (OMS, 2005). . (Decreto 2676
de 2000).
2.6 MICROORGANISMOS DE INVESTIGACIN DEL LABORATORIO
DE BACTERIOLOGA ESPECIALIZADA

2.6.1 Helicobacter pilori

H. pylori es una bacteria Gram negativa de forma espiral, de alrededor de 3
micras de largo con un dimetro aproximado de unas 0,5 micras. Tiene unos 46
flagelos. Es microaerfila, es decir, requiere oxgeno pero a ms bajas
concentraciones de las encontradas en la atmsfera. Usa hidrgeno y
metanognesis como fuente de energa. Adems es oxidasa y catalasa positiva.
(Lpez,M. 2004)

Es una bacteria que infecta el mucus del epitelio estomacal humano. Muchas
lceras y algunos tipos de gastritis son debidas a infecciones por H. pylori. En
muchos casos, los sujetos infectados nunca llegan a desarrollar ningn tipo de
sntoma. Esta bacteria vive exclusivamente en el estmago humano, siendo el
nico organismo conocido que puede subsistir en un ambiente tan
extremadamente cido. Es una bacteria espiral (de esta caracterstica morfolgica
deriva el nombre de Helicobacter). ( Lpez, M. 2004)

63
El mecanismo patognico responsable de la amplia diversidad de manifestaciones
clnicas de H. pylori an no est totalmente esclarecido.

El mantenimiento de la integridad de la mucosa gstrica es un proceso biolgico
que depende del balance entre proliferacin y muerte celular programada, o
apoptosis. La progresin tumoral es un proceso multipaso en el que la regulacin
de la proliferacin y la muerte celular programada est alterada. . (Lpez, M.
2004)

El papel de H. pylori en carcinognesis gstrica se apoya, casi exclusivamente, en
datos epidemiolgicos y estudios prospectivos histopatolgicos. Pero no hay
evidencia de que H. pylori o sus productos citotxicos tengan efecto mutagnico.
La apoptosis es un proceso codificado genticamente, irreversible, activo y
fisiolgico que se caracteriza por distintos cambios morfolgicos y bioqumicos
en la clula. Este proceso juega un importante papel en la homeostasis y
desarrollo de los tejidos, incluyendo el tracto gastrointestinal. (Lpez, M. 2004)

2.6.1.1 Cncer y H. pylori
El cncer gstrico y el linfoma de MALT (linfoma de la mucosa asociada al tejido
linfoide), han sido relacionados con H. pylori, por lo que esta bacteria ha sido
catalogada en el grupo I de carcingenos por la Agencia Internacional de
Investigacin del Cncer (IARC). Mientras que la asociacin de estas
enfermedades con H. pylori est apoyada por sospechas razonables, no est
totalmente claro que haya una relacin causal involucrada. (OMS, 2005)
Linfoma gstrico tipo MALT
Varios estudios apoyan la asociacin con esta enfermedad puesto que tras la
erradicacin de la bacteria se ha observado cmo ha existido regresin del linfoma.
64
Este tipo de linfoma se localiza preferentemente en el antro del estmago, dado
que es la zona donde existe ms tejido linfoide. Prolifera tras un proceso
inflamatorio crnico
2.6.1.2 Diagnostico en el Laboratorio

Para diagnosticar la infeccin por H. pylori se han empleado cultivos
microbiolgicos, estudios histopatolgicos, test del aliento, test rpido de la
ureasa, test serolgicos, test de antgeno en heces y ms recientemente pruebas
moleculares de ADN y ARN. Hoy da, el diagnstico definitivo de la infeccin
por H. pylori ha estado basado principalmente en el aislamiento de la bacteria en
cultivos microbiolgicos o la deteccin del microorganismo en preparados
histolgicos, ambos mtodos provenientes de muestras de biopsias gstricas
obtenidas por procesos invasivos como la endoscopia. Sin embargo, existen otros
mtodos uya determinacin se correlaciona con la infeccin por este
microorganismo pero con la diferencia que la obtencin de la muestra no es de
forma invasiva, es as el caso de los exmenes serolgicos, el test del aliento o el
test de la ureasa. (Premoli, G. 2004)
Los cultivos microbiolgicos y los exmenes histolgicos requieren de
condiciones especiales y perodos de incubacin largos (3-7 d), ambos con buena
sensibilidad (90-98 %) y especificidad (98--100 %).
El diagnstico por PCR de H. pylori tiene una sensibilidad y especificidad de
95 % y su principal ventaja es que se puede detectar el microorganismo sin
importar la viabilidad de la bacteria en las muestras. (Premoli, G. 2004)

2.6.1.3 Bioseguridad

Desde su descubrimiento en 1982, Helicobacter pylori ha recibido cada vez ms
atencin como agente de gastritis. El hbitat principal del H. pylori es la mucosa
gstrica humana. La infeccin humana con H. pylori puede tener una duracin
65
prolongada, presentando pocos o ningn sntoma, o puede presentarse como una
enfermedad gstrica aguda. Se han informado infecciones humanas de laboratorio
accidentales y experimentales con H. pylori. El agente puede estar presente en
secreciones gstricas u orales y en las deposiciones. Si bien no se comprende
totalmente, se piensa que su transmisin es por va fecal-oral u oral-oral. (CDC.
2005)
Riesgos de laboratorio: El agente puede estar presente en secreciones gstricas y
orales y en materia fecal. La ingestin es el principal riesgo de laboratorio
conocido. No se conoce la importancia de la exposicin a los aerosoles. (CDC.
2005)
Precauciones Recomendadas: Para las actividades con materiales y cultivos
clnicos que contienen los agentes o que puedan contener los agentes, se
recomiendan las prcticas, el equipo de contencin y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad 2. ( CDC. 2005)
Para las actividades con animales infectados natural o experimentalmente, se
recomiendan las prcticas, el equipo de contencin y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad Animal 2. Actualmente, no hay vacunas disponibles para su uso en
humanos. (CDC. 2005)

2.6.2 Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes es una bacteria que rara vez causa un brote a un nmero
grande de poblacin (14). L. monocytogenes es una bacteria gram positiva, bacilo
o cocobacilo, anaerobio facultativo, psicotrfico que posee motilidad a
temperatura ambiente. Esta bacteria tolera condiciones extremas de temperatura (-
1.5 C a 45.0C) y pH (4.3-9.1). ( Hernandez, M. 2006)
Los brotes de listeriosis en humanos pueden ser tanto invasivos como no
invasivos. Los brotes invasivos causan meningoencefalitis, encefalitis, septicemia
y abortos con una alta tasa de mortalidad (20-30%); este tipo ocurre
66
principalmente en 10 grupos especficos de personas como: nios, ancianos,
mujeres embarazadas e inmuno comprometidos. En las mujeres embarazadas no
solamente puede causarle aborto sino que se corre el riesgo de que la criatura
nazca muerta o con septicemia an cuando la mujer experimente sntomas leves
parecidos a un resfriado. La listeriosis no invasiva causa diarreas, fiebre, dolores
musculares, dolores de cabeza, nauseas, vmitos y dolores abdominales an en
adultos saludables. La dosis infecciosa para L. monocytogenes es desconocida y
depende de la susceptibilidad del individuo. Su modo de accin es mediante la
invasin del epitelio gastrointestinal y una vez invade a la clula hospedera se
riega en la sangre y se convierte en septicemia. Por lo tanto, tiene un fcil acceso
al cerebro o traspasar a la placenta y migrar hacia el feto. ( Hernadez, M. 2006)
Se han aislado asociados a enfermedades en peces, aves y mamferos. En el
hombre se trata de una enfermedad profesional (personas que trabajan con
animales) y tambin se transmite por alimentos, sobre todo leche y derivados
lcteos.
2.6.2.1 Diagnostico en el Laboratorio
L. monocytogenes se asla fcilmente de muestras orgnicas habitualmente
estriles como sangre, lquidos cefalorraqudeo y amnitico, placenta y tejido fetal.
Estas muestras deben ser remitidas al laboratorio y procesadas tan pronto como
sea posible o en su defecto conservarse a 4C durante un mximo de 48 h. Las
muestras clnicas habitualmente estriles pueden ser inoculadas directamente en
medios habituales como el agar sangre. Las muestras de sangre pueden inocularse
en cualquier sistema convencional de hemocultivos. ( Chavez, E. 2006)
Para el estudio de portadores las muestras de heces son ms productivas que las
torundas rectales. Las muestras de heces deben ser inoculadas en un medio de
enriquecimiento selectivo, de los que existen diversas formulaciones. ( Chavez, E.
2006)
67
Las muestras no estriles pueden conservarse a 4C durante 24-48 h como
mximo. Si se va a producir una mayor demora en su procesamiento deben ser
congeladas a -20C para evitar el sobrecrecimiento bacteriano. Este tipo de
muestras, asi como las alimentarias, deben ser enriquecidas con un medio
selectivo para Listeria spp. antes de sembrarse en placas.( Chaves, E. 2006)
2.6.2.2 Bioseguridad
Listeria monocytogenes, es considerado como un microorganismo del grupo II por
su baja incidencia, parece llamado a convertirse en un importante factor de riesgo
en un futuro plazo.
Listeria monocytogenes representa un peligro potencial para el personal de
laboratorio.. Se han aislado bacterias del suelo, del polvo, de alimentos para
consumo humano, de animales y de humanos asintomticos. La mayora de los
casos de listeriosis ha surgido como consecuencia de consumir alimentos
contaminados, en su mayora quesos blandos, carne cruda y vegetales crudos no
lavados. Si bien los adultos y nios sanos pueden contraer una infeccin con
Listeria, generalmente, la enfermedad no es grave. Quienes corren riesgo de
contraer una enfermedad grave por esta causa son las mujeres embarazadas, los
recin nacidos y las personas cuya funcin inmune est deprimida. (CDC 2005)

Riesgos de laboratorio: Listeria monocytogenes se puede encontrar en las heces,
en lquido cefaloraqudeo y en la sangre, as como en los alimentos y en
materiales ambientales. Los animales infectados natural o experimentalmente son
una fuente de exposicin para quienes trabajan en el laboratorio y para el personal
encargado del cuidado de animales y para otros animales. La ingestin es la forma
ms posible de exposicin, pero la Listeria tambin puede provocar infecciones
oculares y de la piel despus de una exposicin directa. Las infecciones con
Listeria monocytogenes en mujeres embarazadas se producen con mayor
68
frecuencia en el tercer trimestre del embarazo y pueden adelantar el parto. La
transmisin transplacentaria de L. monocytogenes representa un grave riesgo para
el feto y puede tener como resultado abscesos que contribuyen con una tasa de
mortalidad de casi el 100%. (CDC, 2005)
Precauciones Recomendadas: Para las actividades realizadas con especimenes y
cultivos clnicos que contienen el agente o que puedan contenerlo, se recomiendan
las prcticas, el equipo de contencin y las instalaciones del Nivel de
Bioseguridad 2.(CDC, 2006)

69
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN

3.1 Formulacin del Problema

Debido a que el laboratorio de Bacteriologa Especializada de la Facultad de
Ciencias de la Pontificia Universidad J averiana, careca de un Manual de
Bioseguridad y de Procedimientos Operativos Estndar POEs e Instructivos
documentados; se requera la elaboracin e implementacin de estos, teniendo en
cuenta los parmetros establecidos por el Sistema de Gestin Documental del
departamento de Microbiologa y adicional a esto para cumplir con las exigencias
requeridas por la norma ISO- NTC-IEC 17025 y las Buenas Prcticas de
Laboratorio (BPL).
La falta de Documentacin favoreca los errores en los procedimientos, en la
manipulacin de reactivos y materiales, e inadecuado uso de equipos, generando
poca trazabilidad en sus resultados, problemas de Bioseguridad e incremento de
costos.

3.2 Justificacin

Segn la norma ISO- NTC-IEC 17025 y las Buenas Prcticas de Laboratorio
(BPL), los Procedimientos Operativos Estndar POEs, Instructivos y el Manual de
Bioseguridad, son elementos importantes en el momento que un laboratorio de
ensayo quiera acreditarse. Es por eso que en el laboratorio de Bacteriologa
Especializada, ha surgido la necesidad de elaborar e implementar un Manual de
Bioseguridad que mejorar las actividades y procedimientos de seguridad
biolgica, pudiendo as brindar un mejor y ms seguro ambiente laboral, evitando
accidentes que generen problemas en la salud del investigador.

70
Documentar los procesos que se realizan en el laboratorio permite garantizar que
el personal que realiza los anlisis dentro del mismo, tenga una descripcin
precisa, concisa y clara del material, equipo, condiciones, actividades y
requerimientos para obtener un producto o un servicio de una calidad definida y
finalmente ayudar a prevenir errores.

Es muy importante mencionar que la evidencia documentada permite tener
trazabilidad dentro de los procesos que se lleven a cabo en el laboratorio,
asegurando as la calidad de los anlisis, de manera tal que si se llega a encontrar
errores se pueda llegar a determinar los puntos en los cuales se cometi el error y
as mismo desarrollar acciones correctivas sobre el mismo. (Trazabilidad y
repetitividad).

71
4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GENERAL

Elaborar el Manual de Bioseguridad y documentar los Procedimientos Operativos
Estndar POEs del Laboratorio de Bacteriologa especializada de la Facultad de
Ciencias de la Pontificia Universidad J averiana.

4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Elaborar el Manual de Bioseguridad del Laboratorio donde todo el personal,
pueda identificar los riesgos fsicos, qumicos y biolgicos que pueden
representar un peligro y de esta manera tomar medidas preventivas.

Documentar los procedimientos que se realizan en el Laboratorio de
Bacteriologa Especializada bajo el esquema de gestin documental establecido
por el Departamento de Microbiologa de la Facultad de Ciencias en
Procedimientos Operativos Estndar POEs, Instructivos de trabajo y de
operacin de equipos, formatos y registros.

Realizar un folleto que resuma y de a conocer de manera rpida y clara las
actividades y precauciones de bioseguridad que se deben llevar a cabo en el
laboratorio de Bacteriologa Especializada.

72
5. METODOLOGIA

5.1. Lugar de estudio

El proyecto se desarroll en la Pontificia Universidad J averiana, en el laboratorio
de Bacteriologa Especializada de la Facultad de Ciencias. Ubicado en el Edificio
51 Laboratorio 236.

5.2. Anlisis de la informacin que posee el laboratorio actualmente.

Se elaboraron dos listas de chequeo. Una para identificar los procedimientos que
se llevan a cabo en el laboratorio y que deban ser documentados, como
Procedimientos Operativos Estndar POEs, Instructivos de soporte de trabajo,
Registros y Hojas de Vida de equipos. Otra para hacer un diagnstico en materia
de seguridad biolgica que se lleva acabo en el laboratorio y poder establecer las
normas de bioseguridad que aplicaran para este.

5.3. Recoleccin de informacin

Se realiz revisin bibliogrfica acerca de BPL, sistemas de gestin de calidad y
normas como la ISO 9001, NTC 17025, ISO 14001 y NTC-OHSAS 18001 para
establecer la estructura y contenido de los procedimientos e instructivos.
Adicionalmente en cuanto a bioseguridad se tomaron como referencia documentos
internacionales y nacionales como CDC (Centro de Control de Enfermedades),
OMS (Organizacin Mundial del la Salud), Instituto Nacional de Salud,
Organizacin Panamericana de la Salud, Decreto 2676/ 2002 , MPGRHS entre
otros.
73
5.4 Elaboracin del Manual de bioseguridad del laboratorio de Bacteriologa
Especializada.

De a cuerdo a la informacin recolectada y analizada se procedi a redactar el
Manual de Bioseguridad del laboratorio de Bacteriologa Especializada,
estableciendo las normas generales de seguridad biolgica frente a los riesgos
fsicos, qumicos y biolgicos. Como anexo del manual se elaboraron las fichas de
seguridad de los reactivos qumicos presentes en el laboratorio.

5.5. Documentacin de Procedimientos Operativos Estndar e Instructivos
del Laboratorio de Bacteriologa Especializada.

Despus del reconocimiento e identificacin de los procedimientos o tcnicas que
se realizan en el laboratorio, se procedi a documentar bajo la estructura
establecida en el Sistema de Gestin Documental del Departamento de
Microbiologa (Guarnizo. 2005). Clasificando los procedimientos en POES,
Instructivos, Registros, Formatos y Hojas de Vida para equipos.

5.6 Elaboracin del folleto informativo de Bioseguridad

Se elabor un folleto teniendo en cuenta las normas principales de bioseguridad
para facilitar, incentivar y promover la divulgacin de la informacin presente en
el Manual de Bioseguridad.

74

6. RESULTADOS Y DISCUSIN

Los procesos documentados son elementos del sistema de calidad que representan
una herramienta para reducir los errores relacionados con la manipulacin y las
variaciones de las tcnicas dentro del Laboratorio de Bacteriologa Especializada.
Estos documentos son ms que instrucciones para cumplir una determinada tarea,
constituye una gua que establece las expectativas de la direccin con respecto al
trabajo. Se entiende entonces que una buena documentacin es esencial para el
sistema de calidad constituyendo el nico modo de asegurar que se cumpla con la
poltica de calidad establecida por el laboratorio.
Adicionalmente el diseo de la documentacin es una tarea fundamental que
requiere de varias etapas de prueba antes de su aprobacin e implementacin,
dando as cumplimiento a requisitos de las BPL e ISO NTC 17025.
Despus de analizar el sistema actual de documentacin y las normas de
bioseguridad del Laboratorio de Bacteriologa Especializada, se realizaron las
listas de chequeo correspondientes, indicando cual era la situacin con respecto a
los cuatro niveles de documentacin previstos para el Sistema de Gestin
Documental del Departamento de Microbiologa y la situacin referente a las
normas de seguridad biolgica y su respectiva implementacin.
A partir de los procesos y tcnicas que se desarrollan en el laboratorio se elabor
la lista de chequeo (Ver Anexo A) sobre la documentacin, indicando para cada
caso que tipo de proceso era (central o de apoyo), para as poder clasificarlos
segn el tipo de documento:
POEs (Procedimiento Operativo Estndar), como procedimiento o protocolo de
mayor complejidad, incluyendo aquellas tcnicas referentes a Extraccin de DNA,
PCR, electroforesis, entre otras para la Identificacin de Helicobacter pylori y
Listeria monocytogenes .Bajo este esquema de POES, se documentaron 18
pruebas, siguiendo el modelo establecido en el 2005 por Guarnizo J .(Figura 2.)
75
Tabla 5 Lista de Procedimientos Operativos POES Documentados
Procedimiento Operativo (POES) NMERO

RECOLECCIN Y TRANSPORTE DE
BIOPSIAS GSTRICAS

DM-LBE-PT-001
PROCESAMIENTO DE BIOPSIA PARA
CULTIVO

DM-LBE-PT-002
PRUEBA DE UREASA A PARTIR DE
BIOPSIAS

DM-LBE-PT-003
EXTRACCIN DE ADN A PARTIR DE
CULTIVO

DM-LBE-PT-004
CUANTIFICACIN DE DNA Y RELACIN
DNA/RNA A PARTIR DE CULTIVO

DM-LBE-PT-005
ELECTROFORESIS EN GEL DE
AGAROSA PARA VERIFICAR CALIDAD
DE DNA

DM-LBE-PT-006
AMPLIFICACIN POR PCR DE
CEBADORES CagA y VacA

DM-LBE-PT-007
AMPLIFICACIN POR PCR (REACCIN
EN CADENA DE LA POLIMERASA)

DM-LBE-PT-008
ELECTROFORESIS PARA PRODUCTOS
DE PCR

DM-LBE-PT-009
TCNICA DIFUSIN EN AGAR
MTODO KIRBY BAUER

DM-LBE-PT-010
Determinacin de la resistencia de
Helicobacter pylori por medio de la tcnica E
test

DM-LBE-PT-011
CONGELACIN DE CEPAS
DM-LBE-PT-012
EXTRACCIN DE DNA CROMOSOMAL
DE BACTERIAS

DM-LBE-PT-013
AISLAMIENTO DE DNA TOTAL DE Pichia
pastoris

DM-LBE-PT-014
EXTRACCIN DE DNA PLASMIDICO DE
BACTERIAS

DM-LBE-PT-015
EXTRACCIN DE DNA DE Listeria
monocytogenes A PARTIR DE QUESO,
LECHE Y CARNE

DM-LBE-PT-016
PCR PARA Listeria monocytogenes
DM-LBE-PT-017
PRUEBBAS DE IDENTIFICACIN DE
Helicobacter pylori
DM-LBE-PT-018
76

PORCENTAJE DE PRUEBAS DOCUMENTADAS
BAJO EL NIVEL DE POES
0%
100%
ANTES
DESPUS

Figura 4. POES documentados en el Laboratorio de Bacteriologa Especializada.

A los 18 POES documentados se les formulo el objetivo, alcance, responsabilidad,
frecuencia, condiciones generales de bioseguridad, manejo de residuos,
documentos de referencia y el contenido que incluye: Fundamento, definiciones,
materiales, procedimiento y por ltimo anexos especficos para cada prueba.
Los procedimientos operativos estndar que se elaboraron para el laboratorio
facilitan la comprensin y brindan trazabilidad a las acciones, permiten al
investigador conocer conceptos importantes para el desarrollo del procedimiento,
al mismo tiempo que orientan en bioseguridad, manejo de residuos y da a conocer
el fundamento de la tcnica estableciendo objetivos claros. Estos documentos
permitirn la reproducibilidad, consistencia y uniformidad de los distintos
procesos en el laboratorio.
Instructivos, como documentos donde se encuentran las actividades que soportan
el desarrollo de procedimientos tcnicos (POES), o actividades de menor
complejidad, como preparacin de soluciones, medios de cultivo, manejo de
equipos entre otros. Sobre este esquema se documentaron 32 instructivos de
trabajo y 15 instructivos de operacin de equipos
77
Tabla 6 Lista de Instructivos de Trabajo Documentados
Instructivos de Trabajo NMERO
Preparacin de caldo Brucella Glicerol
al 20%
DM-LBE-INT-001
Cadena de Fro para Toma de muestras DM-LBE-INT-002
Preparacin del Medio Wilkins
Chalgren Modificado para
Helicobacter pylori
DM-LBE-INT-003
Preparacin de Isovitalex DM-LBE-INT-004
Preparacin del suplemento selectivo
de Helicobacter pylori
DM-LBE-INT-005
Preparacin del caldo Urea DM-LBE-INT-006
Prueba Bioqumica de Ureasa a partir
de Cultivo
DM-LBE-INT-007
Coloracin de Gram DM-LBE-INT-008
Prueba de oxidasa DM-LBE-INT-009
Prueba de Catalasa DM-LBE-INT-010
Preparacin de etanol al 75% DM-LBE-INT-011
Preparacin de Hidrxido de Sodio
(NaOH) al 2M y 8mM
DM-LBE-INT-012
Preparacin de la solucin Buffer TAE
(Amortiguador TRIS-cido Actico-
EDTA)
DM-LBE-INT-013
Preparacin del Amortiguador TRIS-
EDTA (TE)
DM-LBE-INT-014
Preparacin del Amortiguador TRIS
(Hidroximetil amino metano)
DM-LBE-INT-015
Preparacin de la Solucin EDTA DM-LBE-INT-016
78
(cido Etiln-Diamino-Tetra-Actico)

Preparacin del Amortiguador TRI-
HCl y TRIS NaCl
DM-LBE-INT-017
Preparacin del Buffer de carga 6X
amortiguador de muestra para
electroforesis
DM-LBE-INT-018
Preparacin del Gel de Agarosa 2%
para electroforesis
DM-LBE-INT-019
Preparacin de la cama electroforetica DM-LBE-INT-020
Preparacin de Bromuro de hexadecil
Trimetil Amonio (CTAB)
DM-LBE-INT-021
Preparacin de Primes para PCR DM-LBE-INT-022
Preparacin de la TucanTaq
Polimerasa
DM-LBE-INT-023
Preparacin de dNTPs (2-
deoxynucleoside 5-triphate)
DM-LBE-INT-024
Preparacin de Cloruro de magnesio
MgCl
2

DM-LBE-INT-025
Preparacin de SDS (Dodecil Sulfato
de Sodio)
DM-LBE-INT-026
Preparacin del Medio de Cultivo
Mueller-Hinton
DM-LBE-INT-027
Microaerofila Sobres CampyPack DM-LBE-INT-028
Preparacin de Escala de McFarland DM-LBE-INT-029
Prueba E-TEST DM-LBE-INT-030
Coloracin con Bromuro de Etidio DM-LBE-INT-031
Manejo de desechos con Bromuro de
Etidio
DM-LBE-INT-032
79
Tabla 7 Lista de instructivos de Operacin de Equipos
Instructivo de Operacin de
Equipo
NMERO
Balanza Analtica DM-LBE-INT 01
Centrifuga DM-LBE-INT 02
Centrifuga Refrigerada DM-LBE-INT 03
Cmara Electroforetica DM-LBE-INT 04
Espectrofotmetro DM-LBE-INT 05
PHmetro DM-LBE-INT 06
Potenciometro DM-LBE-INT 07
Lector de Placas DM-LBE-INT 08
Termociclador PCR TR DM-LBE-INT 09
Termociclador DM-LBE-INT 10
Transiuminador DM-LBE-INT 11
Bao Termosttico DM-LBE-INT 12
Cabina de Seguridad Biolgica DM-LBE-INT 13
Microscopio DM-LBE-INT 14
Documentador de Geles DM-LBE-INT 15
Autoclave DM-LBE-INT 15

80
PORCENTAJE DE INSTRUCTIVOS
DOCUMENTADOS
0%
100%
ANTES
DESPUS

figura 5. Instructivos documentados en el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada.
La totalidad de instructivos se documentaron siguiendo el formato establecido en
el 2005 por Guarnizo, J ., el cual es mas sencillo que el de los procedimientos, ya
que incluyen nicamente el fundamento y procedimiento para llevar a cabo una
tarea determinada. Estas instrucciones de trabajo facilitan la preparacin de un
determinado reactivo, medio o solucin sin necesidad de tener que buscar dentro
de un procedimiento o varios para elaborarlos y el fundamento da al investigador
una informacin terica facilitando la interpretacin de los resultados obtenidos
despus de realizada la tcnica. Los instructivos documentados bajo este formato
tratan principalmente sobre la preparacin de reactivo y operacin de los equipos
relacionados con los POES para Helicobacter pylori y Listeria monocytogenes
Los instructivos de operacin de equipos fueron diseados para apoyar los
procedimientos operativos permitiendo conocer el funcionamiento de los equipos
y sus requerimientos. Estos a su vez estn apoyados por las Hojas de Vida de cada
equipo, donde se muestra todas las caractersticas tcnicas, marca, serial, cdigo,
modelo, datos del fabricante y su historial.

Los formatos y registros, como documentos fueron creados para tener una
evidencia de las actividades efectuadas, de sus controles y de sus resultados. Estos
81
fueron diseados bajo el modelo establecido por Guarnizo, J . El formato
pertinente a los POES e Instructivos contienen los siguientes campos:
Identificacin (Organizacin, numeracin, paginado y fecha), titulo, autora,
revisin, aprobacin y actualizaciones con fechas estipuladas por el director del
laboratorio, como tambin la identificacin de cambios y localizacin. Los
formatos son los documentos en blanco que una vez diligenciados se convierten
en registros dando una evidencia objetiva para garantizar que toda actividad o
procedimiento se esta realizando, apoyando el sistema de calidad, permitiendo
llevar a cabo auditorias internas y externas, para comprobar el funcionamiento del
control de documentos dentro del laboratorio. Estos registros no deben ser
modificados y deben estar firmados y fechados al momento de ser archivados, en
forma segura.
Sintetizando todo el proceso de documentacin que se realizo para el Laboratorio
de Bacteriologa Especializado, cabe aclarar que todos los documentos realizados
fueron sometidos a una revisin por un miembro del comit de calidad y la
directora del laboratorio, resultando un 30% de Procedimientos Operativos
(POES), 50% de Instructivos de tcnicas y operacin de equipos y finalmente un
20 % de formatos y registros. Contribuyendo de esta manera a un requisito del
sistema de gestin de calidad para laboratorio ISO-NTC 17025: 2005, BPL, ISO
9000:2000, entre otras.
PORCENTAJE DE DOCUMENTOS VS TOTALIDAD
DE DOCUMENTACIN
30%
50%
20%
POES
INSTRUCTIVOS
FORMATOS Y
REGISTROS

82

Figura 6 Documentacin implementada en el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada.

La documentacin elaborada facilitara el desempeo de las labores diarias,
minimizando riesgos, contaminacin cruzada y permitiendo garantizar la
reproducibilidad y consistencia de las actividades, adems es una herramienta para
que los resultados de las tcnicas o procedimientos sean ms confiables, con
mayor trazabilidad y por consiguiente se disminuyen las perdidas econmicas
porque se reducen los errores.
Este proceso de documentacin permiti organizar la informacin que dispona el
laboratorio para que as mismo se rigiera a las normas que en cuanto a
documentacin tiene el Departamento de Microbiologa, lo cual permite que el
Laboratorio de Bacteriologa Especializada entre a la uniformidad que se esta
obteniendo por parte de los laboratorios de la Facultad de Ciencias para llegar a
una posible acreditacin.

En cuanto a bioseguridad se realiz una lista de chequeo (Ver Anexo B), donde se
identificaron los principales riesgos fsicos, qumicos y biolgicos, para establecer
las respectivas normas que involucran los aspectos que deben considerarse en el
trabajo del laboratorio para dar cumplimiento a los requisitos de calidad que se
establecen en la Buenas Practicas de Laboratorio (BPL) relacionados con la
bioseguridad. En el Manual de Bioseguridad se establecieron y se implementaron
procedimientos generales y especficos para el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada. Adicionalmente es importante destacar que el laboratorio dispone
de equipos de bioseguridad y de instalaciones que dan suficientes garantas para
ejecutar un trabajo seguro y con la calidad requerida. Adems se analizaron
aspectos fundamentales referidos a la bioseguridad que estn ligados con el
83
cumplimiento de normas para la proteccin del personal, la conservacin de las
cepas, de la comunidad y del medio ambiente.
El Manual de Bioseguridad elaborado, esta encaminado a disminuir el riesgo del
personal del laboratorio durante el desempeo de sus actividades. El manual se
diseo bajo los parmetros establecidos para los laboratorios de la Facultad de
Ciencias: Objetivo, alcance, frecuencia, responsabilidad, condiciones generales,
documentos de referencia, fundamento, definiciones y el contenido que incluye;
conceptos bsicos de bioseguridad en el laboratorio, el nivel de contencin de
acuerdo a los objetivos de trabajo y el tipo de microorganismos que se manipulan
(Helicobacter pylori y Listeria monocytogenes), uso de barreras que involucra
tcnicas estndares, proteccin personal, inmunizacin y limpieza y desinfeccin
de equipos y superficies; barreras secundarias donde se analiza y evala el diseo
y construccin del laboratorio y por ltimo dispone las pautas para el manejo de
residuos infecciosos y qumicos y la sealizacin que tiene y que es necesaria para
el laboratorio. Finalmente se adjuntaron las respectivas fichas de seguridad de
cada uno de los reactivos presentes en el laboratorio siendo 46 en total.

Tabla 8 Lista de Fichas de seguridad MSDS de Reactivos Qumicos

REACTIVO QUIMICO NMERO
1 ACETONA
DM-LBE ESP-001
2 ACIDO ACETICO GLACIAL
DM-LBE ESP-001
3 CIDO SULFRICO
DM-LBE ESP-001
4 ACIDO TRICLOROACETICO
DM-LBE ESP-004
5 ALCOHOL ISOAMILICO
DM-LBE ESP-005
6 AZIDA SDICA
DM-LBE ESP-006
7 AZUL DE LACTOFENOL
DM-LBE ESP-007
8 BARBITAL SDICO
84
DM-LBE ESP-008
9 BISACRLAMIDA
DM-LBE ESP-009
10 BROMURO DE ETIDIO
DM-LBE ESP-010
11 CITRATO DE SDIO

DM-LBE ESP-011
12 CLORURO DE CALCIO

DM-LBE ESP-012
13 CLORURO DE MAGNESIO

DM-LBE ESP-013
14 CLORURO DE POTASIO
DM-LBE ESP-014
15 DI-AMONIO OXALATO MONOHIDRATO

DM-LBE ESP-015
16 DICLOROMETANO

DM-LBE ESP-016
17 4-DIMETILAMINOBENZALDEHIDO
DM-LBE ESP-017
18 ETANOL
DM-LBE ESP-018
19 ETER ETILICO
DM-LBE ESP-019
20 FUCSINA

DM-LBE ESP-020
21 FORMOL
DM-LBE ESP-021
22 GLICEROL
DM-LBE ESP-022
23 GLUCOSA ANHIDRA

DM-LBE ESP-023
24 L - CYSTINE
DM-LBE ESP-024
25 LUGOL

DM-LBE ESP-025
26 METAVANADATO DE AMONIO
DM-LBE ESP-026
27 NITRATO DE PLATA

DM-LBE ESP-027
28 PEROXIDO DE HIDROGENO

DM-LBE ESP-028
29 PERHYDROL

DM-LBE ESP-029
85
30 POLIETILENGLICOL

DM-LBE ESP-030
31 POLIOXIETILENE SORBITAN

DM-LBE ESP-031
32 POLISORBATO
DM-LBE ESP-032
33 POTASIO DIHIDROGENO FOSFATO

DM-LBE ESP-033
34 ROJ O DE METILO
DM-LBE ESP-034
35 SILICA GEL

DM-LBE ESP-035
36 SAFRANINA DE GRAM

DM-LBE ESP-036
37 SODIO HIDROGENO FOSFATO
DM-LBE ESP-037
38 CARBONATO DE SODIO

DM-LBE ESP-038
39 SODIO TIOSULFATO PENTAHIDRATO

DM-LBE ESP-039
40 SULFATO DE ZINC
DM-LBE ESP-040
41 TETRAMETHYL BENZIDINE
DM-LBE ESP-041
42 THREALOSE

DM-LBE ESP-042
43 TRIBUTIRINA

DM-LBE ESP-043
44 UREA
DM-LBE ESP-044
45 VERDE BRILLANTE
DM-LBE ESP-045
46 YODO

DM-LBE ESP-046

Con el Manual de Bioseguridad se garantiza la disminucin de costos e impactos
dando estricto cumplimiento a las normas establecidas en este; con el fin de
eliminar los riesgos para el personal, la comunidad y el medioambiente, que
pueden ser producidos por agentes infecciosos, fsicos y mecnicos.
Adicionalmente la bioseguridad se debe desarrollar en conjunto con el personal,
86
que debe seguir las normas, la direccin que debe instrumentar los medios que
faciliten el cumplimiento de este; para este fin se desarrollo un folleto que le
permite al responsable de la bioseguridad capacitar didcticamente al personal que
trabaja o ingresa al laboratorio acerca de las normas establecidas en cuanto a
bioseguridad dentro del laboratorio.

87
7. CONCLUSIONES

Con la documentacin de los procedimientos y la elaboracin del manual en el
Laboratorio de Bacteriologa Especializada, se aproximo a ste al cumplimiento
de algunos requisitos de las Buenas Prcticas de Laboratorio.
El Manual de Bioseguridad contiene la informacin necesaria para que el
laboratorio comience a implementar un programa de seguridad biolgica que
sirva como gua para el trabajo seguro con microorganismos potencialmente
peligrosos.
Con la documentacin de las actividades realizadas en el laboratorio se da la
importancia de implementar el sistema de gestin de calidad para laboratorios
ISO-NTC/ 17025: 2005 para que los ensayos sean de mayor calidad y el
laboratorio sea mas competitivo.
Con la gestin documental de los procedimientos se llego a unificar la
informacin, dando una mayor organizacin al trabajo tcnico que se realiza en
el laboratorio.
Los procedimientos documentados representan una herramienta para reducir los
errores relacionados con la manipulacin, variaciones en la tcnica permitiendo
la trazabilidad en los resultados.

88
8. RECOMENDACIONES

Se recomienda actualizar anualmente la documentacin y el manual de
bioseguridad segn lo estipulado con el sistema de gestin documental del
Departamento de Microbiologa de la Facultad de Ciencias.
Se recomienda la implementacin del programa de limpieza y desinfeccin y el
programa de gestin de residuos para el Laboratorio de Bacteriologa
Especializada, dando as cumplimiento a las Buenas Practicas de Laboratorio
(BPL).
Se recomienda archivar y revisar peridicamente la documentacin con el fin de
que el laboratorio tenga conformidad en las auditorias internas y externas a las que
se vea expuesto.
Es necesario crear un comit de bioseguridad que controle y haga cumplir todas
las normas estipuladas en el Manual de Bioseguridad.
Es recomendable capacitar continuamente al personal que trabaja en el
Laboratorio para garantizar la trazabilidad y la seguridad biolgica en las pruebas
y ensayos que se realizan en el laboratorio.
Se recomienda elaborar un manual de calidad que incluya polticas de calidad,
organigrama, procesos, etc., para seguir implementando los requisitos que exigen
las Buenas Practicas de Laboratorio y as mismo acercarse cada vez ms a una
acreditacin.

89
9. BIBLIOGRAFA

ANGELINI,N. 2005. Aseguramientote Calidad y Validacin de Metodologa
para anlisis Qumico. [en linea]:Consultora internacional de la FAO.
http://www.rlc.fao.org/prior/comagric/codex/rla3013/pdf/faobpl.pps#299,1, taller
subregional.[Consulta: 25 de Agosto. 2007].

ARIAS, J. 2005. Guas de Bioseguridad en el Laboratorio: Memorias.
Microbiologa Industrial. Pontificia Universidad J averiana. Facultad de Ciencias.
Bogot. Colombia. Pp 8-80

CENTRO DE CONTROL Y PREVENCION DE ENFERMEDADES (CDC).
2006. Bioseguridad en Laboratorios de Microbiologia y Biomedicina [En linea],
Cuarta Edicin. http://www.cdc.gov/od/ohs/pdffiles/bmbl4_spanish.pdf [Consulta:
23 de Agosto de 2007]. Atlanta.

CHAVEZ, E. GARCIA, F. ROJAS, N. 2006 Bacteriologa Diagnstica,
Universidad de Costa Rica .Facultad de Microbiologa. Costa Rica. Pp 10-35

DECRETO 2676 DE 2000: Manual de Procedimientos para la Gestin Integral
de Residuos Hospitalarios y Similares MPGIRH

DAGMAR. L, 2004. Manual de bioseguridad para Operaciones en Laboratorios
de Biotecnologa y tipo Biolgico, Universidad Politcnica de Valencia.
Departamento de Biotecnologa. Pp 20- 193

DELGADO, E. DIAZ, P. 2006. Elaboracin y Documentacin del Programa de
Limpieza y Desinfeccin de los Laboratorios del Departamento de Microbiologa
de la Pontificia Universidad J averiana. Tesis de Grado. Microbiologa Industrial.
Facultad de Ciencias. Pontificia Universidad J averiana. Bogot.
90

GUARNIZO J. 2005. Elaboracin y documentacin del programa de gestin y
control documental en los laboratorios del departamento de Microbiologa que
prestan servicios de la facultad de ciencias en la Pontificia Universidad J averiana,
de acuerdo con los requisitos de la norma NTC-ISO-IEC 17025:1999.
Microbiologa Industrial. Pontificia Universidad J averiana. Facultad de Ciencias.
Departamento Microbiologa. Bogot.

HERNANDEZ, M. 2006. Incidencia de patgenos Listeria Monocytogenes y
Salmonella spp en Hospitales. Bacteriologa. Universidad de Puerto Rico
Mayagez . Facultad de Ciencias y Tecnologa. Puerto Rico. Pp 5-10

LENIS, S. PARRA, A. 2007. Documentacin de los Procedimientos Operativos
Estndar e Instructivos del Laboratorio de Parasitologa Molecular Perteneciente
al Departamento de Microbiologa Facultad de Ciencias Pontificia Universidad
J averiana. Tesis de Grado. Microbiologa Industrial. Facultad de Ciencias.
Pontificia Universidad J averiana. Bogot.

LONDOO, O. ROZO, D. 2007. Documentacin de los Procedimientos
Operativos Estndar e Instructivos del Laboratorio de Virologa de la Pontificia
Universidad J averiana. Tesis de Grado. Microbiologa Industrial. Facultad de
Ciencias. Pontificia Universidad J averiana. Bogot

LPEZ, M. 2004. Epidemiologa de la infeccin por Helicobacter pylori.
Segunda Edicin. Editorial Doyma. Espaa. Pp 175-194

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC-ISO 9000:2000. Sistemas de
gestin de la calidad. Fundamentos y vocabulario. Editada por ICONTEC.
Bogot. Colombia.

91
NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC-ISO 9001:2000. Sistemas de
gestin de la calidad. Requisitos. Editada por ICONTEC. Bogot. Colombia.

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC-ISO 14001:2004. Sistema de
gestin ambiental. Requisitos con orientacin para su uso. Editada por ICONTEC.
Bogot. Colombia.

NORMA TECNICA COLOMBIANA NTC- ISO / IEC 17025.2005 Requisitos
generales para la competencia de los laboratorios de Ensayo y Calibracin.
ICONTEC. Colombia.

NORMA TECNICA COLOMBIANA NTC-OHSAS 18001:2001. Sistema de
gestin en seguridad y salud ocupacional. Editada por ICONTEC. Bogot.
Colombia.

ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD (OMS).2005. Manual de
Bioseguridad en el Laboratorio. Tercera Edicin. Suiza. Ginebra. Pp 97-129

ORGANIZACION PANAMERICANA DE LA SALUD (OPS).2005, Curso de
Gestin de Calidad para Laboratorios,[En lnea] rea de tecnologa y prestacin
de salud. http://www.paho.org/Spanish/AD/THS/EV/labs-CGC-Completo.pdf
[Consulta: 23 de Agosto de 2007]. Washington. D.C.

OTEO, J. 2003. Listeria y Listeriosis, [En lnea] Control de Calidad SEIMC.
http://www.seimc.org/control/revi_Bacte/listeria.htm [Consulta: 4 de septiembre
de 2007. Madrid .Espaa.

PREMOLI, G. GONZALEZ, A. MENDOZA, B. 2004. Diagnostico de H.
pylori mediante la reaccin en cadena polimerasa. Revista Cubana Medica. Vol.
56 (2). Pp 85-90
92

RAMIREZ, E. 2005. Documentacin del Sistema de Calidad. [En linea]
Instituto de Salud Pblica. Chile. OPS.
http://www.paho.org/spanish/ad/ths/ev/labs-slides-cgc-mod3.pdf. [Consulta: 24 de
Agosto de 2007.] Chile.

WENG.Z. 2005. Riesgos en los Laboratorios; Higiene y Sanidad Ambiental.
Revista Cubana de Higiene y Epidemiologa. Vol.43. No 3. Habana. Cuba. Pp 4

WHO/UNDP/WORLD BANK. 2001. Handbook, Good Laboratory Practice
(GLP). TDR. Ginebra Suiza.

1
ANEXO A

LISTA DE CHEQUEO DOCUEMENTACIN DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA
ESPECIALIZADA

DOCUMENTOS A VERIFICAR POE INSTRUCTIVO FORMATO REGISTR0

TCNICAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO

RECOLECCIN Y TRANSPORTE DE BIOPSIA X NA NA NA
Cadena de Fro NA X NA NA
Preparacin del caldo Brucella Glicerol 20% NA X NA NA
PROCESAMIENTO DE BIOPSIA PARA CULTIVO X NA NA NA
Sistema Microaerofilia sobres CampyPack NA X NA NA
Preparacin del Isovitalex NA X NA NA
Preparacin del Medio de cultivo Wilkins Chalgren Modificado para Helicobacter pylori NA X NA NA
PRUEBA DE UREASA A PARTIR DE BIOPSIAS X NA NA NA
Preparacin de Caldo Urea NA X NA NA
PRUEBAS DE IDENTIFICACIN PARA Helicobacter pylori X NA NA NA
Coloracin de Gram NA X NA NA
Prueba de Ureasa NA X NA NA
2
Prueba de Oxidasa NA X NA NA
Prueba de Catalasa NA X NA NA
EXTRACCIN DE DNA A PARTIR DE CULTIVO X NA NA NA
Preparacin de NaOH 8 m M NA X NA NA
Preparacin de Etanol al 75% NA X NA NA
CUANTIFICACIN DE DNA A PARTIR DE CULTIVO X NA NA NA
ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA PARA VERIFICAR LA CALIDAD DE
DNA X NA NA NA
Preparacin de la Solucin Buffer TAE NA X NA NA
Preparacin del Buffer de carga 6X NA X NA NA
Preparacin de Geles de A garosa al 2% NA X NA NA
Coloracin con Bromuro de Etidio para Electroforesis NA X NA NA
Manejo de Desechos de Bromuro de Etidio NA X NA NA
Preparacin de la cama electrofortica NA X NA NA
AMPLIFICACIN POR PCR X NA NA NA
Preparacin de la Taq Polimerasa NA X NA NA
Preparacin de dNTPS NA X NA NA
Amortiguador TRI - HCl y TRIS- NaCl+B3 NA X NA NA
Cadena de Frio NA X NA NA
Solucin EDTA NA X NA NA
Preparacin de Cloruro de Magnesio MgCl2 NA X NA NA
AMPLIFICACIN POR PCR DE LA Cag A y VacA X NA NA NA
Prepracin de los Primers NA X NA NA
ELECTROFORESIS PARA PRODUCTOS DE PCR X NA NA NA
Preparacin del Patrn Peso Molecular NA X NA NA
Preparacin de controles espcificos para productos de PCR de Helicobacter pylori NA X NA NA
TCNICA DE DIFUSIN KIRBY BAUER X NA NA NA
3
Preparacin de medio de Cultivo Mueller Hinton NA X NA NA
Patron de Mc Farland NA X NA NA
TCNICA DE E- TEST X NA NA NA
Tiras de E- TEST NA X NA NA
CONGELACIN DE CEPAS X NA NA NA
EXTRACCIN DE DNA CROMOSOMAL DE BACTERIAS X NA NA NA
Preparacin del CTAB NA X NA NA
Preparacin de TE NA X NA NA
Preparacin SDS NA X NA NA
EXTRACCIN DE DNA DE LEVADURAS X NA NA NA
EXTRACCIN DE DNA DE Listeria monocytogenes A PARTIR DE QUESO, LECHE Y
CARNES X NA NA NA
PCR PARA Listeria monnocytogenes X NA NA NA
EXTRACCIN DE DNA PLASMIDICO X NA NA NA
EQUIPOS

HOJ AS DE VIDA DE EQUIPO NA NA X X
INT DE MANEJ O DE EQUIPOS NA X NA NA

BIOSEGURIDAD

MANUAL DE BIOSEGURIDAD NA X NA NA
FICHAS DE SEGURIDAD DE REACTIVOS QUMICOS NA X NA NA
FORMATO REPORTE DE ACCIDENTES E INCIDENTES NA NA X NA
FORMATO ACTUALIZACIN DE BOTIQUIN NA NA X NA
FORMATO CONTROL DE VACUNACIN NA NA X NA
FORMATO DE INSPECCIN DE ELEMENTOS DE SEGURIDAD NA NA X NA
4
FORMATO DE USO DE PRODUCTOS QUMICOS NA NA X NA
FORMATO DE AUSENCIA DE PERSONAL POR ENFERMEDAD NA NA X NA
FORMATO DE CAPACITACIN DE PERSONAL EN BIOSEGURIDAD NA NA X NA
FORMATO DE CONTRL DE LECTURA DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD NA NA X NA
FORMATO DE RECOLECCIN Y CUANTIFICACIN DE RESIDUOS NA NA X NA
CONTROL E INSPECCIN DEL EXTINTOR NA NA X NA
FORMATO DE CONTROL DE DOCUMENTOS

Observacin: NA (No aplica), X (Corresponde)

1
ANEXO B

ASPECTOS A VERIFICAR SI/NO OBSERVACIONES

1 ADMINISTRACIN EN BIOSEGURIDAD NO
1,1
Existe un plan operativo de actividades de
bioseguridad
NO
1,2
Existe un Comit de Bioseguridad con sus
respectivas responsabilidades
NO
Tiene un cordinador responsable de las
actividades dentro del laboratorio
1,3
Cuenta el laboratorio con capacitacin en cuanto a
bioseguridad
NO
1,4
Tiene Identificado el nivel de contencin y riesgos
fsicos, qumicos y biolgicos.
SI
Tienen identificado el nivel segn los
microorganismos que manipulan
1,5
Posee un programa en cuanto organizar, prevenir,
actuar, controlar y vigilar.
NO
1,6
Tiene el laboratorio establecidas e implementadas
las normas de bioseguridad.
NO
Conocen algunas normas bsicas pero
an le faltan otras y no las tienen
establecidas
2 NORMAS GENERALES EN BIOSEGURIDAD
2,1 Acceso limitado de personal al laboratorio SI
Solo ingresa personal autorizado,
profesores, estudiantes, tesistas.
2,2
Identificacin de los agentes biolgicos que se
manejan y sus respectivas medidas
SI
Se manipulan dos microorganismos
Helicobacter pylori y Listeria
monocytogenes y se conoce sus riesgos
2,3
Elementos de proteccin para evitar riesgos que
atente contra la salud de las personas que laboran
dentro del laboratorio
SI
Usan proteccin personal como bata,
guantes, tapabocas y gorro, gafas de
seguridad dependiendo el riesgo y la
tcnica
2,4 Medidas de prevencin contra accidentes. NO
No conocen las acciones para prevenir un
accidente por inhalacin, salpicadura,
ingestin, quemadura, entre otro para
remitir luego a urgencias.
2,5
Identificacin de riesgo biolgico al personal ajeno
del nivel de bioseguridad y su proteccin.
NO
En la puerta de acceso no cuenta con el
smbolo de riesgo biolgico, el nivel de
contencin y proteccin personal para
ingresar.
3 NORMAS ESPECIFICAS
3,1 Barreras Primarias
LISTA DE CHEQUE
BIOSEGURIDAD
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA ESPECIALIZADA
2
3,1,2
Cuenta el laboratorio con un seguimiento estricto
de BPL y tcnicas de laboratorio
NO
No tiene establecido las BPL y no tiene
POEs de sus procedimientos o tcnicas
para evitar contaminacin, mala
manipulacin y mayor trazabilidad de
resultados. Segn lo establecido por el
sistema de gestin documental del Dto. De
Microbiologa, para que el trabajo sea ms
seguro.
3,1,2
Tiene una segura manipulacin de muestras
biolgicas para evitar riesgos al personal y al
medio que lo rodea
SI
Las muestras biolgicas se manejan con
medidas de bioseguridad y se asegura la
inactivacin de estas para su descarte.
3,1,3
Tiene implementado tcnicas de lavado de manos
garantizando que esta sea efectiva.
NO
Se hace lavado de manos pero no se
conoce si es efectiva ni hay un instructivo
que indique un buen lavado de manos.
3,1,4
Posee Cabina de seguridad especial para el nivel
de contencin y tcnicas para su empleo.
SI
3,1,5
Tiene implementado elementos de proteccin
adecuados para cada tcnica o prctica y
SI
Aunque no se vigila que todo el personal
las cumpla.
3,1,6 Posee un programa de inmunizacin NO
No tienen un programa de vacunacin de
su personal
3,1,7
Posee un programa de Limpieza y desinfeccin
para equipos y superficies
NO
Tienen que implementar el programa de
Limpieza y Desinfeccin del Departamento
de Microbiologa, Aunque se realiza
limpieza, esterilizacin y desinfeccin de
equipos y superficies.
3,2
Barreras Secundarias -Diseo y Construccin
del Laboratorio

3,2,1
Cumple con los requisitos para instalaciones de las
BPL
SI
Aunque tiene que mejorar algunas que
exige las BPL
3,2,2
Posee pisos y paredes lisos , con terminaciones
medio caa y en materiales adecuados.
SI
3,2,3 Cuenta con una iluminacin adecuada SI
3,2,4 Cuenta con lavaojos, ducha, botiqun y extintor SI
3,2,5
Las instalaciones tienen un flujo continuo sin
regreso para evitar contaminacin
NO
Lo que puede aumentar la contaminacin,
no cuenta con reas separadas para
procedimientos.
3,2,6
Cuenta con agua potable y lavamos de
accionamiento mcanico
SI/NO
No tiene Lavamanos de accionamiento
mecnico
3,2,7
Las zonas de trabajo (mesones) son de altura ,
materiales adecuados para limpieza y
desinfeccin.
SI
3,2,8
La puerta de entrada salida debe ser de cierre
automtico.
SI
3,2,9
Las ventanas deben tener proteccin para insectos
y permitir una buena ventilacin
SI
3

3,2,1
0
Dispone de un suministro de electricidad seguro y
suficiente
SI
3,3 Equipos
3,3,1
Programa de mantenimiento y calibracin de
equipos
NO
Es importante para cumplir con las BPL y
para una posible certificacin ISO 17025
3,3,2 Hojas de vida de Equipos NO
Esto facilitara identificar proveedor o
fabricantes, como el mantenimiento que se
le hace al equipo.
3,3,3 Instructivos de funcionamiento de equipos NO
Permite darle un mejor funcionamiento a
estos para evitar que se desacalibren.
3,3,4
Registros de control de equipos, uso diario y de
mantenimiento y calibracin.
SI
Pero no bajo el formato que exige el
Departamento de Microbiologa.
4 NORMAS PARA EL PERSONAL
4.1
Identificar los riesgos biolgicos, fsicos,
qumicos.
NO
Un grupo de Tesistas esta desarrollando la
matriz de Riesgos para el laboratorio.
4.2
Tiene establecido la accin para cada tipo de
riesgo sea biolgico, fsico o qumico
NO
4.3 Cuenta con un servicio de emergencia NO
5. GESTIN DE RESIDUOS
5.1 Cuenta con un programa de residuos slido NO
Las biopsias son inactivadas antes de
eliminarlas.
5.2
Tiene un adecuado manejo de eliminacin de
residuos infecciosos
SI
5.3
Cuenta con envases adecuados para eliminacin
de residuos segn su clasificacin (MPGRHS)
SI
5.4
Tiene manejo y almacenamiento de sustancias
qumicas
Si
Las sustancias qumicas son almacenadas
dependiendo la clasificacin de la ONU
5.5
Posee fichas de seguridad de reactivos qumicos
hojas MSDS
NO
Estas son importantes para saber que
medidas tomar con cada reactivo.
5.6
Tienen un adecuados manejo de residuos
qumicos
NO
Reactivo ms txico es Bromuro de Etidio
el cual se inactiva antes de su eliminacin.

Tesis 113

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Tesis 113

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

1

ELABORACIN DEL MANUAL DE BIOSEGURIDAD Y

Anda mungkin juga menyukai