ANTIBIOGRAMA Objetivos: Determinar a susceptibilidade de microrganismos a diferentes antibiticos por meio da tcnica de difuso em gar.

Interpretar um antibiograma em funo do dimetro do halo de inibio de diferentes antibiticos. Princpio: Os antibiticos impregnados nos discos, difundem no gar e formam um halo de inibio ao seu redor uando encontram bactrias sens!"eis. # bactrias resistentes crescem pr$imo ao disco, no ocorrendo a formao de halo Material: %lacas contendo gar &ueller'(inton, &icrorganismo isolado em cultura pura ) E.coli ou S.aureus* e suspenso em salina )inculo* Metodo: %reparo do inculo: Tomar 4 a 6 col nias do c!ltivo p!ro e inoc!lar em !m t!bo com caldo B"I# Inc!bar o t!bo por $ a % &oras at' obter !ma s!spens(o com t!rva)(o moderada# O in*c!lo deve ser ade+!adamente padroni,ado- pois caso contr.rio o res!ltado do antibio/rama poder. ser alterado si/ni0icativamente# Preparar as dil!i)1es de cada c!lt!ra em sol!)(o salina 0isiol*/ica at' +!e a t!rbide, das s!spens1es aj!stem2se a 345 bact'rias6ml# 7omparar as s!spens1es contra !m padr(o de t!rva)(o 84-%ml de Ba7l$#$"$O 4-445M em 99-%ml de "$:O4 4-;6N< preparado mensalmente# +emeadura: =tili,ar !m >s?ab@ est'ril para cada c!lt!ra- imer/indo2o no >in*c!lo@ # As/otar o eBcesso de l+!ido- apertando o >s?ab@ contra a parede do t!bo e semear cada micror/anismo em ./ar M!eller2"inton em di0erentes sentidos- asse/!rando !ma semead!ra !ni0orme# #plicao dos discos: Mantendo sempre a assepsia- depositar com !ma pin)a est'ril 8imersa no .lcool o! 0lambada na c&ama< os discos de antibi*ticos indicados sobre a s!per0cie do in*c!lo em placa de ./ar# Am se/!ida- com pin)a est'ril- eBercer !ma leve press(o sobre cada disco- para se obter !ma boa aderCncia- a 0im de permitir !m contato do disco com a s!per0cie do ./ar# 7aso contr.rio- poder. ocorrer erros na leit!ra dos res!ltados- devido a di0!s(o n(o !ni0orme do antibi*tico no ./ar# N(o se deve colocar mais de 9 discos por placas de 344mm- assim como- ' m!ito importante levar em conta a distDncia entre eles# Incubao: Eepois de trinta min!tos- as placas devem ser inc!badas invertidas a ;FG7 d!rante 36 a 35 &oras# ,eitura: Observar e medir o &alo de inibi)(o- compararando com a tabela em aneBo para determinar a s!sceptibilidade aos antibi*ticos: : 8:ensvel<- R 8Resistente< e I 8Intermedi.rio< Interpreta)(o: # interpretao dos resultados do antibiograma pelo mtodo dos discos de concentrao -nica baseada na correlao e$istente entre os parmetros seguintes, "erificados com relao a diferentes cepas bacterianas: a* Concentrao mnima inibitria )..&.I.* ' dose m!nima de antibitico ue, adicionada ao meio de cultura )l! uido ou slido*, capa/ de inibir totalmente o crescimento de um inoculum estndar. b* 0ona de inibio ) 0.I.* ' dimetro do halo estril em torno do disco, em placas semeadas com as mesmas cepas bacterianas.

# obser"ao cl!nica permitiu estabelecer, ademais, os "alores de ..&.I. correspondentes ao sucesso terap1utico, de sorte ue poss!"el inferir, pelo "alor de 0.I., ual o antibitico de escolha para a cepa bacteriana em uesto. Honas de Inibi)(o 8em mm< correspondentes a di0erentes /ra!s de :!scetibilidadeI #23I4I53I.O O6 86I&IO397:%I.O #c . nalid!$ico #mpicilina .efalotina .loranfenicol 9ritromicina 9streptomicina Centamicina Danamicina 2eomicina 2itrofuranto!na %enicilina C %olimi$ina 4 3etraciclina 3rimetoprim Gancomicina H7 I 7esistenteJ + I +ens!"elJ 7 I + ;? ;= ;> ;> ;> ;A ;< ;> ;B ;? @? ;@ ;? ;E ;@

;< ;=';> ;; ;@';< ;= ;A';B ;@ ;<';B ;< ;=';B ;; ;@';= ;@ ' ;< ;=';B ;@ ;<';E ;= ;A';> @F @;'@> > ?';; ;= ;A';> ;F ;;';A ? ;F';; I I Intermediria

Eiscos !tili,ados no teste: O mtodo estndar recomendado pela Food and Drug Administration dos 9stados 6nidos utili/a discos de concentrao -nica, ue de"em ser conser"ados ao abrigo da umidade )dessecadores* e em temperatura bai$a ) <K. ou ' ;=K., conforme o caso*. 6tili/am'se discos de concentrao -nica e ade uada, para cada antibitico, L obteno de halos de inibio indicadores do grau de sensibilidade de diferentes bactrias: penicilina )%*, bacitracina )4* I ;F6I.J ampicilina )#*, colistina ).*, estreptomicina )+*, gentamicina )C*, rifampicina )7*, "iomicina )GI* ' ;F mcgJ eritromicina )9*, oleandomicina )O,* ' ;A mcgJ cefalotina ).9*, cloranfenicol ).,*, declomicina )D*, gabromicina )C4*, Manamicina )D*, a. nalid!$ico )2#*, neomicina )2*, no"obiocina )2O*, ro"amicina )7O*, tetraciclina )3*, "ancomicina )G* ' <F mcgJ sulfas em geral, furadantina )N* ' <FF mcg, etc. &ultidiscos so oferecidos em numerosas combinaOes, para atender a diferentes obPeti"os: infecOes urinrias, feridas supuradas, etc. Antibio/rama2 M'todos 7onvencionais e MI7 6ma das tarefas mais importantes do laboratrio de microbiologia cl!nica a"aliar a sensibilidade de microrganismos a antimicrobianos. O obPeti"o dos testes ue fa/em esta a"aliao pre"er, atra"s da reali/ao de pro"as Qin "itroR, a probabilidade de sucesso terap1utico no uso das drogas a"aliadas no tratamento de infecOes causadas pelo microrganismo a ser testado. O desen"ol"imento de no"os e "ariados mecanismos de resist1ncia pelos microrganismos tem gerado o surgimento de um n-mero cada "e/ maior de antimicrobianos. 9sses dois fatores tem le"ados L necessidade de aprimoramento constante dos testes de sensibilidade a antimicrobianos. 9$istem "arias opOes para a"aliao de sensibilidade a antimicrobianos, tais como disco'difuso, microdiluio em caldo, mtodos rpidos automati/ados e, mais recentemente, o 9 test, ue um teste comercial baseado no mtodo de difuso em gar.

O mtodo de disco'difuso o mais utili/ado no 4rasil e na maioria dos pa!ses. 9sse teste reali/ado atra"s da aplicao de um pe ueno disco de papel de filtro impregnado com antimicrobiano a superf!cie do gar onde o microrganismo foi inoculado. # difuso do antimicrobiano no gar le"ar a formao de um halo de inibio de crescimento. #tra"s da medida do dimetro desse halo o microrganismo ser classificado em resistente )7*, intermedirio )I* ou sens!"el )+*. S um mtodo bastante simples, fcil de ser reali/ado e ue possui acuracia e$celente uando reali/ado de maneira ade uada. 6ma des"antagem desse mtodo o fato dele fornecer apenas um resultado ualitati"o )7, I ou +* ao contrrio de outros testes ue fornecem um resultado uantitati"o e$presso no "alor da concentrao inibitria m!nima ou &I.. %orm, o conhecimento do &I. ser importante para o cl!nico em algumas situaOes espec!ficas. A importncia do !C" # !C e$pressa a concentrao mnima do antimicrobiano %ue & necess'ria para inibir o crescimento do microrganismo %ue est' sendo a(aliado. E$istem tabelas para a con(erso desses (alores em )* ! ou S* sendo %ue no +rasil & normalmente utili,ada a tabela preparada pelo -ational Committe .or Clinical /aborator0 Standards 1-CC/S2* rgo americano respons'(el pela padroni,ao de testes laboratoriais. A elaboraco dessas tabelas* le(am em considerao no somente a pot3ncia in (itro do antimicrobiano mas tamb&m o n(el s&rico alcanado pela droga %uando a dose preconi,ada & administrada. Dessa maneira* o con4ecimento do !C pode ser muito 5til em algumas situa6es* como por e$emplo in.ec6es em stios onde o antimicrobiano no apresenta boa penetrao ou no se concentra muito bem* tais como meningites e endocardites. -esses casos ser' necess'rio o uso de um antimicrobiano para o %ual o microrganismo no s se7a sens(el mas possua um !C bem mais bai$o %ue o (alor discriminante* isto &* de sensibilidade* ou do (alor %ue separa as amostras sens(eis da%uelas intermedi'rias. #utras situa6es nas %uais o con4ecimento do !C pode ser 5til so as in.ec6es urin'rias* principalmente a%uelas causadas por microrganismos resistentes. Como a maioria dos antimicrobianosa & de e$creo renal e alcana altas concentra6es na sali(a* in.ec6es urin'rias bai$as podem ser* muitas (e,es* tratadas com antimicrobiano para os %uais o microrganismo apresente resist3ncia intermediaria ou se7a at& mesmo resistente* mas apresente !C pr$imo ao (alor discriminante de resist3ncia. O conhecimento do &I. pode ser -til tambm para o acompanhamento de infecOes crTnicas eUou de dif!cil tratamento como osteomielites, por e$emplo. .omo o tratamento muito prolongado, pode ocorrer desen"ol"imento de resist1ncia, ue ser detectado somente uando a infeco recidi"ar, e$igindo rein!cio do tratamento. # deteco de aumento importante do &I. far com ue o cl!nico aPuste o es uema terap1utico antes ue a amostra se torne resistente, no sendo necessrio o reinicio do tratamento. 2os -ltimos anos tem surgido uma srie de aparelhos ue reali/am antibiograma de maneira automati/ada. 9sses aparelhos testam "rios antimicrobianos simultaneamente e de maneira mais rpida ue os mtodos con"encionais )='E horas ao in"s de ;>'@= horas*. 9sses mtodos utili/am o princ!pio da microdiluio em caldo, porm poucas diluiOes de cada antimicrobiano so testadas, de maneira ue fornecido apenas o &I. apro$imado. +ua maior "antagem mesmo a rapide/, caso sePa importante o conhecimento do &I. ou .oncentrao Inibitria &!nima especificando o antibitico ue necessita ser a"aliado. Antibio/rama para 0!n/os: Os testes de sensibilidade a antimicrobianos tambm tem se tornado importantes para a a"aliao de fungos, principalmente le"eduras ) Candida sp.* Cr0ptococcus neo.ormans, etc.* Isso se de"e tanto ao grande aumento nas opOes terap1uticas para o tratamento de infecOes f-ngicas uanto ao aparecimento e aumento progressi"o de cepas resistentes aos antifungicos dipon!"eis comercialmente. Os mesmos mtodos utili/ados para a a"ali/ao de bactrias t1m sido aplicados para a a"alio de fungos. %orm, a padroni/ao desses mtodos est sendo muito mais dif!cil de"ido a grande dificuldade encontrada na reali/ao de estudos cl!nicos. # resposta cl!nica parece, em alguns casos, estar mais relacionada ao grau de imunidade do paciente do ue a sensibilidade Qin (itro do microrganismo. Isto dificulta muito a definio dos "alores limites para classificao da amostra em sens!"el, intermediaria ou resistente. 2a "erdade, o 2..,+ preconi/a ue sePa liberado apenas o resultado do &I., ue de"era ser a"aliado e interpretado pelo medico assistente. #lguns mtodos, tais como microdiluio em

caldo e 9 test podem ser reali/ados em laboratrios cl!nicos e aPudar o clinico na escolha do antifungico mais ade uado. Os casos onde a a"aliao da sensibilidade parece ter maior utilidade seriam: a* tratamento de infecOes sist1micas por Candida sp.J b* em pacientes gra"es eUou imunodeprimidosJ c* tratamento de candid!ase em pacientes (IG positi"o. Grios estudos t1m demonstrado aumento progressi"o do &I. ou superinfeco por espcies intrinsecamente mais resistentes nesses casos. Antibio/rama para Micobacterias: De"ido principalmente L #ID+, hou"e um grande aumento na pre"al1ncia de infecOes causadas por &icobacterias, principalmente . tuberculosis e . a(ium8intracellulare. #lm disso, tem ocorrido grande aumento da pre"al1ncia de infecOes causadas por cepas resistentes, tornando cada "e/ mais importante a a"aliao da sensibilidade Q in (itroR aos antimicrobianos normalmente utili/ados no tratamento dessas infecOes. 3al a"aliao pode ser feita atra"s do mtodo das proporOes )manual* ou atra"s do aparelho 4actec =EF )mesmo aparelho utili/ado para deteco de crescimento*. De"ido as dificuldades para a reali/ao do mtodo das proporOes, muito trabalhoso, e ao custo dos testes reali/ados pelo 4actec, poucos laboratorios no 4rasil oferecem esse ser"io. 9m resumo, a terap1utica antimicrobiana de infecOes causadas por algumas bactrias, fungos, "!rus e parasitas continua a ser emp!rica por ue ainda no foram detectados problemas de resist1ncia, ou por falta de alternati"as terap1uticas. O rpido aumento na pre"al1ncia de infecOes causadas por microrganismos resistentes, porm, tem e$igido no somente o aprimoramento das tcnicas laboratoriais como tambm o maior conhecimento destas por parte do mdico assistente. 9ste de"e reconhecer as situaOes onde os diferentes testes esto indicados e saber interpretar os resultados fornecidos.