El ADN es una molcula presente en todas las clulas de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros

somos, desde el color del pelo hasta las protenas que tenemos en nuestra sangre. El ADN es una molcula cargada que esta asociada a protenas y en el caso de los organismos eucariontes est encerrado dentro de un ncleo. Para extraer el ADN primero es necesario romper las clulas y luego se necesita separar el ADN del resto de los componentes celulares como protenas y membranas lipdicas. Un detergente es una solucin capaz de disolver las membranas y as permitir que stas se separen del resto de los componentes. Adems este detergente es capaz de unir las protenas que estn junto al ADN. La sal de mesa tiene un catin que se une a la molcula de ADN y hace que cambie sus propiedades qumicas, permitiendo que el ADN precipite en presencia de alcohol. El alcohol adems disuelve los azcares y protenas. para esta practica se tomo 5g de levadura los cuales se maceraron en un crisol junto con 10g de arena, se hizo esto para poder macerar mas fcilmente la levadura, se agrego una solucion de EDTA en NaCl y El dodecilsulfato sdico (SDS o NaDS) La solucin de salina y El dodecilsulfato sdico

sirve para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular.

El dodecilsulfato sdico tambin conocido como laurilsulfato sdico (SLS)es un compuesto tensoactivo inico, empleado en diversos productos de higiene personal, como pasta de dientes, champ y jabones de bao, Para realizar la extraccin dodecilfulsfato

remueve grasas y protenas. separando las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la clula, posteriormente se llevo a bao de hielo por dos minutos, Los cidos

nucleicos se caracterizan por ser insolubles en disoluciones alcohlicas y solubles en medio salino diluido para el ARN y saturado para el ADN, adems que pueden disociarse de las protenas usando jabones o fenoles(Mathews, 1999). La extraccin de cidos nucleicos se optimiza cuando se controlan ciertos factores como la temperatura, por tal razn es que se emplea reactivos a bajas temperaturas y se mantiene la muestra fra para impedir su desnaturalizacin por este efecto
y se paso a un bao maria a 60oC por veinte minutos, El calor suaviza los fosfolpidos (grasas) en las membranas que rodean la clula y el ncleo. Tambin desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si estn presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeos que lo hara imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, ste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60 Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80 Celsius. se agrego cloroformo, alcohol isomilico (24.1) y perclorato de sodio 6M, se centrifugo, el

alcoholisoamilico se utiliza para desnaturalizar las protenas ya que las mismas son desnaturalizadas utilizando un disolvente no polar. al centrifugar se obtuvo tres fases la inferior cloroformica o de ARN, la intermedia protenas desnaturalizadas, y la superior que contiene ADN. se trabajo con la parte superior, a la cual en bao de hielo y por
las paredes se adiciono 70 mL DE etnol frio y se agito, El ADN se precipita en alcohol, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa. finalmente se observaron las fibrillas blancas de ADN que por medio de una nueva centrifugacin se las separo de la fase alcoholica, una vez obtenidas las fibrillas., se agrego tres mL de agua y O,5 de EDTA en solucin salina, con esta solucion generada se realizo la caracterizaciones correspondientes. Los cidos nucleicos estn formados por un azcar (pentosa), bases nitrogenadas (purinas o pirimidinas) y cido fosfrico. La hidrlisis completa de ADN ( o ARN) da: Pentosa desoxirribosa (ribosa).

Bases Nitrogenadas: Purinas: Adenina y Guanina. Pirimidinas: Citosina y Timina (Uracilo) cido Fosfrico H3PO4 (3) Una hidrlisis moderada fragmenta el cido nucleico en los nucletidos que se forman por la unin covalente de un fosfato y una base heterocclica a la pentosa. (4)

Prueba de fosfatos Se tomo 1 mL de solucion y se adiciono xxxxxx y un xxxxx Mtodo de azul de molibdeno; los ortofosfatos se transforman en cidos de fosfomolibdico con la accin del molibdato de amonio en un medio acido. Se obtiene azul de molibdeno con la adicin de medios reductores.

Desoxipentosas Se tomo un mL de solucion se adicion xxx y se calento en bao maria por 15 minutos, despues se adiciono 6 mL DEL REACTIVO DE XXX, se agito y se dejo en bao de hielo, La concentracin de ADN en la muestra se puede estimar con la reaccin de la difenilamina. Este colorante reacciona selectivamente con 2- desoxipentosas. En disolucin cida la desoxipentosa se convierte en el altamente reactivo -hidroxilevuln aldehdo, que reacciona con la difenilamina para dar un compuesto azul. El calentamiento en presencia de cidos fuertes convierte la desoxirribosa del ADN en furfural, la difenilamina reacciona con el mismo dando un color azulado permitiendo conocer la cantidad de ADN que se tiene. Como la difenilamina no reacciona con los derivados de la ribosa con este mtodo no se mide la cantidad de ARN presente, permitiendo por tanto una estimacin especfica de la concentracin de ADN. (5) El azul que presento la muestra fue tenue ya que haba baja concentracin de sustrato. REACCION DE FEUNGEN Se adicion en un tubo d eensayo el reactivo de shif se adiciono dos mL de hidrolizado (solucion) y se calento a bao maria por cinco minutos, observando una prueba positiva por medio de una coloracion roza, esta prueba es una
Tincin estequiomtrica especfica de ADN con el reactivo de Schiff: pararosanilina (rosa) o metionina (azul) Precedentes hidrlisis cida (HCl 5 M durante 1 hora a 25 C) elimina de purina bases de adenina y guanina, resultando en grupos aldehdo libres Estos reaccionan especficamente con fucsina bsica Sulfito enjuague para eliminar excedentes de tinte No hay reaccin con ARN