UNIVERSIDAD AUTNOMA DE AGUASCALIENTES CENTRO DE CIENCIAS BSICAS DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y FARMACOLOGA LABORATORIO DE FISIOLOGA LA PREPARACIN NEUROMUSCULAR INTRODUCCIN: Las

contracciones de un msculo pueden variar de intensidad . El nmero de fibras musculares que forman los msculos es variable y puede ir desde unas cuantas fibras, como en el msculo tensor del estribo en el odo, hasta varios miles, como en el msculo cuadriceps. La activacin de una sola fibra muscular (un potencial de accin nico) en un msculo, induce una contraccin dbil y de corta duracin llamada sacudida simple, y es incapa de hacer un traba!o si esta ocurre en un msculo "rande. En el msculo nte"ro, las fibras musculares est#n dispuestas de tal manera que al contraerse actan sinr"icamente produciendo contracciones de intensidad variable (mucho m#s fuertes que la sacudida simple de una sola fibra). En otras palabras, la fuer a e!ercida por el mismo msculo puede variar en funcin del traba!o que se quiere reali ar. La "radacin de la fuer a de contraccin depende de$ %) el nmero de fibras musculares que se contraen y &) la tensin desarrollada por cada unidad motora al activarse. El nmero de fibras que se contraen dentro de un msculo depende del nmero de unidades motoras activadas. 'ada msculo est# inervado por un cierto nmero de neuronas motoras (motoneuronas). La telodendria de la motoneurona se ramifica dando lu"ar a varias terminales nerviosas, y cada terminal nerviosa inerva a una fibra muscular individual. (s, una neurona motora activada estimula a varias fibras musculares provocando la contraccin simult#nea de esas fibras. (l con!unto formado por una motoneurona y las fibras musculares que inerva se llama unidad motora ()i". %). Las fibras musculares de una unidad motora se distribuyen en la masa muscular, as, al contraerse simult#neamente provocar#n una contraccin dbil pero uniforme de todo el msculo. 'uando una contraccin muscular dbil es requerida, solo unas pocas unidades motoras se activar#n, mientras que a requerimientos de una mayor fuer a de contraccin, participar# un mayor nmero de unidades motoras. *na manera muy conveniente para estudiar las propiedades de la unidad motora es la preparacin neuromuscular. La contraccin "radual del msculo esqueltico se puede lo"rar ya sea incrementando el nmero de motoneuronas activadas simult#neamente (sumacin espacial) o incrementado la frecuencia de descar"a de las motoneuronas individuales ( sumacin temporal). La unin neuromuscular. La contraccin muscular esqueltica est# ba!o el control del sistema nervioso. El paso de la informacin de la terminal nerviosa al msculo ocurre en una estructura especiali ada llamada unin neuromuscular, sinapsis neuromuscular o placa motora terminal ()i". %).

)+,*-( %. *.+/(/E0 1232-(0 El mecanismo por el cual la motoneurona activa a la fibra muscular a travs de la unin neuromuscular, es el si"uiente ()i". &)$ 1. Al llegar el !"e#$%al &e a$$%'# al (!"'# )%#* "%$! &e la +#%'# #e+r!,+)$+lar- el !"e#$%al &e a$$%'# a$"%.a la a er"+ra &e canales de calcio voltaje dependientesr!.!$a#&! )+ %#gre)! a la "er,%#al #er.%!)a. /. E# el %#"er%!r- el calcio %#&+$e la ,%gra$%'# &e la) .e)0$+la) )%#* "%$a) r%$a) e# a$e"%l$!l%#a 1AC23 2a$%a la )+ er4%$%e re)%#* "%$a &e la ,e,(ra#a "er,%#al5+e .e 2a$%a la 2e#&%&+ra )%#* "%$a- 6 )e 4+)%!#a $!# ella- $a+)a#&! la l%(era$%'# &e AC2 !r e7!$%"!)%). 8. U#a .e9 e# el e) a$%! )%#* "%$! la AC2 &%4+#&e 2a)"a la placa motora terminal l!$al%9a&a e# la ,e,(ra#a ,+)$+lar 1,e,(ra#a !)")%#* "%$a3 e# &!#&e )e +#e a receptores colinrgicos especficos. :. La %#"era$$%'# ACh-receptor- a(re $a#ale) &e )!&%! 1 r%#$% al,e#"e3er,%"%e#&! )+ e#"ra&a a la $;l+la ,+)$+lar- r!.!$a#&! &e) !lar%9a$%'# e# el )%"%! &e a er"+ra &e l!) $a#ale) &e )!&%!- a e)"a &e) !lar%9a$%'# )e le lla,a potencial de placa terminal- 4e#',e#! e5+%.ale#"e al !"e#$%al !)")%#* "%$! e7$%"a&!r &e la) )%#a )%) #er.%!)a). S% &%$2a &e) !lar%9a$%'# al$a#9a el +,(ral &e &%) ar! &e la 4%(ra ,+)$+lar- )e &e)e#$a&e#a +# !"e#$%al &e a$$%'# 5+e .%a<a !r el )ar$! la),a 2a$%a a,(!) e7"re,!) &e la 4%(ra 6 al %#"er%!r &e la ,%),a !r l!) "=(+l!) >T?. @. A #%.el &e la triada el !"e#$%al &e a$$%'# e# l!) "=(+l!) >T? r!.!$a 5+e el retculo sarcoplsmico l%(ere al $al$%! al,a$e#a&!- 5+e &%4+#&e e %#"era$"=a $!# l!) miofilamentos de actina de la sarcmera- &e)e#$a&e#a#&! la contraccin muscular. Al ,e$a#%),! !r el $+al el !"e#$%al &e a$$%'# ,+)$+lar &e)e#$a&e#a la $!#"ra$$%'# &e la 4%(ra- )e le lla,a acople excitacincontraccin 6 !$+rre e# +# "%e, ! &e .ar%!) ,%l%)eg+#&!).

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)i". &. ('3+4('+5. 1*0'*L(- 62- L( 0+.760+0 .E*-21*0'*L(La transmisin del impulso nervioso a travs de la unin neuromuscular puede ser inhibida o facilitada por ciertas dro"as. El curare y el falxedil son e!emplo de dro"as bloqueadoras, las cuales actan compitiendo por los receptores de la ('h en la membrana de la placa motora. La prostigmina por el contrario, facilita el paso de los impulsos a travs de la unin por medio de la inactivacin de la en ima acetilcolinesterasa, en ima que de"rada a la ('h, permitiendo as, que esta acte m#s tiempo sobre sus receptores. La unin neuromuscular, tambin es muy sensible a la fati"a y a su medio ambiente qumico. Estmulos repetidos de alta frecuencia inducen una disminucin de la respuesta contr#ctil. ( este fenmeno se le ha llamado 8+nhibicin de 9edens:y;, y se debe a que la velocidad de liberacin y de"radacin de la ('h e<cede a la velocidad de su sntesis en las terminales nerviosas (fati"a nerviosa). OBAETIVOS$ 'aracteri ar las propiedades de la unin neuromuscular esqueltica de la rana, reali ando las si"uientes maniobras$ %. Estimular al nervio ci#tico con estmulos aislados para encontrar los estmulos subumbral, umbral, m#<imo y supram#<imos capaces de provocar la contraccin mnima y m#<ima respectivamente del msculo "astrocnemio. &. Estimular al msculo directamente con estmulos aislados para encontrar los estmulos subumbral, umbral, m#<imo y supram#<imo. =. 'aracteri ar las contracciones musculares al estimular repetitivamente al nervio. >. 'omparar el tiempo de fati"a de la unin neuromuscular y el tiempo de fati"a del msculo. ?. 2bservar el efecto del bloqueo farmacol"ico (curare) de la unin neuromuscular sobre la actividad muscular.

MATERIAL Y REACTIVOS$ BIOL I!O$ -ana E"#I$O% 'omputadora con el pro"rama 16%?@ &cq'no(ledge, transductor de tensin (30/%@?(), (mplificador /iferencial (/(%@@'), 1dulo de +nterfase *niversal, *nidad de (dquisicin de /atos 16%?@, Estimulador elctrico 0+A%@, canali ador de pulsos con electrodos de estmulo de "anchillo y de alfiler, !ue"o de pesas, estativo, tornillo de tensin, estuche de disecciones, disectores de vidrio, estilete, hilo fuerte, !erin"a de = ml, c#mara foto"r#fica y "uantes. )OL#!IO*E)$ -in"er rana a temperatura ambiente 3ubocurarina (% m"Bml) (0i"ma). $+O!E,I-IE*.O$ *tili ando el pro"rama 16%?@ (Ciopac 0ystems +nc.), instalado en la computadora, calibre el canal % utili ando el transductor de fuer a en el punto &@@ ", y con una pesa adecuada calibre la amplitud del re"istro a =@ "Bdivisin. 6repare el canal & y conecte el estimulador 0+A%@ al canal & de la *+1. /e esta manera se pueden establecer los volta!es aplicados con la ma"nitud de las respuestas y las relaciones temporales entre los estmulos y las respuestas$ fuer a de contraccin, periodos de latencia, frecuencia de estimulacin, duracin de los estmulos. 0e supone que usted es capa de mane!ar el equipo de una manera se"ura. 0i no es as, pida asesora al instructor o maestro responsable. Pre ara$%'# #e+r!,+)$+lar. /estruya el cerebro y la mdula espinal de una rana y colquela sobre la mesa de disecciones. 'orte circularmente la piel de la porcin pro<imal de uno de los muslos. D#lela hacia aba!o para retirar toda la piel del muslo y de la pierna (sale como si fuera un calcetn). 'on los disectores de vidrio diseque el msculo "astrocnemio en toda su lon"itud. (marre el tendn de (quiles (porcin distal) con un hilo doble de unos %? cm de lon"itud, de!e un pequeEo espacio entre el hilo y el tendn para que el hilo no se resbale durante las maniobras e<perimentales. 'on la solucin de -in"er rana manten"a hmeda la preparacin a lo lar"o del e<perimento. 'orte el tendn entre el nudo del hilo y su insercin en el hueso calc#neo y eleve el msculo "astrocnemio. 'oloque a la rana en decbito ventral. *tili ando los disectores de vidrio, con cuidado diseque, a todo lo lar"o del muslo el nervio ci#tico, locali ado entre los msculos semimembranoso y "lteo. (ntes de fi!ar la rana ase"rese que la tabla para rana est firmemente atornillada al estativo. 6ase un hilo de c#Eamo doble cero, alrededor de la parte pro<imal de la pierna (rodilla) y am#rrela fuertemente, en se"uida, pase el e<tremo opuesto del hilo por la hendidura de la tabla para rana y enrllelo firmemente a la rondana lateral de la mesa. -epita la maniobra para amarrar la parte distal de la pata de la rana y f!ela firmemente a la rondana lateral de la mesa. 3ome el cabo suelto del hilo amarrado al tendn y ha"a una asa >

e introd cala en la palanca del transductor de fuer a. +nserte los electrodos de estmulo de alfiler en los e<tremos distal y pro<imal de la masa muscular. 'on cuidado monte el nervio ci#tico sobre los electrodos de "anchillo, teniendo cuidado que el electrodo no toque nin"n otro te!ido de la rana. Estable ca la velocidad del re"istro a &@ se"Bdivisin y realice las si"uientes maniobras$ NOTA$ a) 6ueden cambiarse la sensibilidad y la velocidad del re"istro se"n las caractersticas particulares del e<perimento. b) (se"rese de conocer las posiciones de la palanca del canali ador de pulsos para diri"ir los estmulos elctricos al nervio o al msculo. %) E)"%,+la#&! al #er.%!. /eterminacin de la intensidad de los estmulosF subumbral, umbral, m#<imo y supram#<imo del nervio a travs de su efecto sobre la contraccin muscular (sumacin espacial). 'on el tornillo de tensin a!uste la tensin del msculo y estimule el nervio con estmulos aislados de & mse" de duracin y con volta!e creciente, desde cero hasta observar las respuestas mnima (umbral) y m#<ima del msculo (est/mulo m0ximo). (note la intensidad de los diferentes estmulos aplicados y la ma"nitud de las contracciones. 'on los datos llene la 3abla % e identifique los volta!es de los estmulosF umbral, m#<imo y supram0ximos. &) E)"%,+la#&! al ,=)$+l!. /eterminacin de la intensidad de los estmulosF subumbral, umbral, m#<imo y supram#<imo estimulando directamente al msculo (sumacin espacial). Estimule directamente al msculo con estmulos nicos de & mse" de duracin y con volta!e creciente desde cero hasta observar las respuestas$ mnima (umbral) y m#<ima del msculo. (note la intensidad de los diferentes estmulos aplicados y la ma"nitud de las contracciones. 'on los datos llene la 3abla & e identifique los estmulos umbral, m#<imo y supram#<imo. =) E4e$"! &e e)"0,+l!) re e"%"%.!) al #er.%! (sumacin temporal). 'on el estmulo m#<imo del nervio, estimule con frecuencias de =, ?, G.?, %@, %?, &@ y &? pulsosBse" durante = se" en cada punto. 6ermita que la preparacin descanse ? se" entre cada tren de estmulos. 2bserve la suma de las contracciones y determine si se han presentado el ttanos y la fati"a. >) Fa"%ga &e la +#%'# #e+r!,+)$+lar (efecto de estmulos repetitivos al nervio)$ (se"rese de que el canali ador de pulsos este conectado al nervio

a) 0eleccione en el estimulador, estmulos de & mse" de duracin, cero de frecuencia y el volta!e del estmulo m#<imo al nervio. b) +niciando con @ de frecuencia, incremente "radualmente la frecuencia de los estmulos hasta alcan ar una contraccin tet#nica sostenida. 1anten"a el ttanos hasta que la fuer a de la contraccin del msculo haya cado a la mitad de la amplitud m#<ima. c) -#pidamente a!uste el volta!e del estmulo m#<imo al msculo y cambie la palanca del canali ador de pulsos para que los estmulos pasen directamente al msculo. 2bserve como se incrementa la amplitud de la contraccin tet#nica. Esta mayor capacidad de respuesta del msculo a la estimulacin directa se debe a que la unin neuromuscular se ha fati"ado. 6ara comprobarlo, cambie al volta!e del estmulo m#<imo al nervio y cambie el canali ador de pulsos para estimular al nervio y observe como la amplitud de la contraccin tet#nica disminuye an m#s. 6ase de nueva cuenta a estimular el msculo directamente y observe el resultado. Con cuidado desmonte la preparacin neuromuscular y vuelva a montarla en la otra pata. (ntes de continuar a!uste la tensin de reposo del msculo y encuentre los estmulos m#<imo del nervio y del msculo, capaces de provocar una contraccin muscular m#<ima. (!uste la velocidad del re"istro a %@ 0e"Bdivisin. ?) Cloqueo de la unin mioneural$ a) 'on la !erin"a de % ml, inyecte %@@ Hl de la solucin de tubocurarina directamente en la porcin media del msculo y espere %A& minutos para ase"urarse de que la dro"a haya difundido al interior de la masa muscular. b) Estimule directamente al nervio con estmulos de & mse". de duracin y frecuencia de &Bse" durante = se" cada %@ se". 2bserve la respuesta contr#ctil conforme avan a el tiempo y contine estimulando hasta que ya no haya m#s contracciones. c) 'on el canali ador de estmulos pase a estimular directamente al msculo con el estmulo m#<imo del msculo y observe la amplitud de las contracciones. 'omo un control, reestimule al nervio con el mismo volta!e usado en el msculo. 2bserve el bloqueo completo de la unin neuromuscular.

RESULTADOS: 3(CL( %. -espuesta contr#ctil del msculo a la estimulacin nerviosa en la preparacin neuromuscular. /eterminacin de los estmulos$ umbral, m#<imo y supram#<imo. 42L3(DE (voltios) (16L+3*/ /E L( '2.3-(''+5. (")

'on los datos de la 3abla %, ha"a una "r#fica con el volta!e en las abscisas y la amplitud de las contracciones en las ordenadas. E<prese la fuer a de contraccin en "ramos. 0eEale en la curva los estmulos subumbrales, umbral, m#<imo y supram#<imos 3(CL( &. -espuesta contr#ctil del msculo a la estimulacin muscular directa. /eterminacin de los estmulos$ umbral, m#<imo y supram#<imo. 42L3(DE (voltios) (16L+3*/ /E L( '2.3-(''+5. (")

'on los datos de la 3abla &, ha"a una "r#fica con el volta!e en las abscisas y la amplitud de las contracciones en las ordenadas. E<prese la amplitud en "ramos. 0eEale en la curva los estmulos subumbrales, umbral, m#<imo y supram#<imos

'omplete los si"uientes datos. )uer a m#<ima de la contraccin de la sacudida simple$ a) al estimular el nervioJJJJJJJJ" b) al estimular directamente al msculoJJJJJJJ" )uer a de la contraccin m#<ima durante el ttanos al estimular$ a) al nervioJJJJJJJ" b) al estimular el msculoJJJJJJJJ". -elacin de la fuer a de contraccin en ttanosBsacudida simple al estimular el nervioJJJJJJJJ. 3iempo de fati"a aisladosJJJJJJJJs. de la unin neuromuscular con estmulos repetitivos

3iempo de fati"a de la unin neuromuscular con estmulo tet#nico JJJJJJJJs. CUESTIONARIO$ %) E<plique porque al incrementar la intensidad del estmulo al nervio se incrementa la amplitud de las contracciones. &) E<plique porque al incrementarse la intensidad del estmulo al msculo se incrementa la amplitud de las contracciones. =) K( qu se debe que la intensidad del estmulo umbral sea diferente en el nervio y en el msculoL >) K6or qu al incrementar la frecuencia de los estmulos al nervio se obtiene una mayor fuer a de contraccin en comparacin con la de la sacudida simpleL ?) K'uales son las causas de la fati"a de la unin neuromuscular y cuales las de la fati"a muscularL I) E<plique el mecanismo de accin del curare en el bloqueo de la unin neuromuscular. G) +nvesti"ue los efectos de la to<ina botulnica, del veneno de la araEa viuda ne"ra y el "as mosta a sobre la unin neuromuscular. M) /escriba en que consiste la enfermedad autoinmune conocida como 1istenia "ravis. N) 'omo e<plica que fue el curare el responsable del bloqueo neuromuscular y no la fati"a de la unin neuromuscular la causa del bloqueo neuromuscular. C+CL+2,-)O($ %) (ndreP C.L. 1uscle and .erve. +n$ E<perimental 6hysiolo"y. 'hurchill Livin"stone. Edinbur"h. pp %NA?G. %NG&. &) ,anon 9.). .euromuscular 3ransmission. +n$ -evieP of 1edical 6hysiolo"y. Lan"e. .eP Qor:. pp %%@A%%&. &@@%.

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