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O que eletroforese e para que usada? |

O que eletroforese e para que usada?

ABR 10 Publicado por Moderador A

Gel de eletroforese. Note as bandas marcadas (Foto: PNNL - Pacific Northwest National Laboratory)

eletroforese em gel uma tcnica usada para separar molculas com tamanhos e cargas diferentes. Ela bastante til quando queremos analisar o tamanho das molculas obtidas ou checar o resultado de uma amplificao de DNA. Basicamente consiste em aplicar um gel que servir como matriz (algo semelhante um mingau de maisena) para separar diferentes molculas atravs do seu peso molecular por meio da aplicao de um campo eltrico. Cada mistura de DNA ou protenas colocada em poos diferentes do gel, e o gel ento colocado em placas de vidros que contm solues tampes onde submetido diferena de potencial. Molculas de pequeno peso molecular iro migrar para o plo oposto mais rapidamente que molculas maiores. Pense no emaranhado de cordas em que os menores conseguem atingir o outro lado mais rapidamente, pois ficam menos retidos nos obstculos formados passagem.
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Depois que a corrida das molculas est terminada, gel exposto luz UV e os fragmentos so vistos no gel em bandas, que correspondem a diferentes tamanhos dos fragmentos de molculas utilizadas. Existem duas variantes da tcnica. Abaixo trataremos resumidamente: Eletroforese para anlise do DNA O DNA apresenta uma carga essencialmente constante por unidade de massa, assim estas molculas podem ser separadas em gis de agarose ou de poliacrilamida em funo somente de seu tamanho ou conformao espacial. Os gis so utilizados como matriz, por onde sero corridas as amostras com fragmentos de diferentes tamanhos, neste sentido os gis atuaram com crivos moleculares, impedindo o deslocamento das molculas de um plo ao outro da cuba de eletroforese. Quanto maior for a molcula mais difcil ser a passagem da mesma pelo emaranhado do gel. O procedimento para separar RNA e protenas segue o mesmo princpio. Eletroforese para anlise de protenas A eletroforese tambm pode ser utilizada para a anlise de protenas. Protenas apresentam diferentes, cargas totais lquidas dependendo do conjunto de aminocidos que as compem, assim como conformaes espaciais que varia de acordo com suas funes desempenhadas no organismo. O desenvolvimento de tcnicas para se separar protenas somente foi possvel com a utilizao de um detergente denominado SDS (Dudecil Sulfato de Sdio) que carrega as protenas negativamente. Esta tcnica utiliza o gel de poliacrilamida como matriz, que apresenta ligaes altamente cruzadas, que dificultam a passagem das molculas e tornando mais eficaz a separao de fragmentos menores. A tcnica mais comumente chamada de eletroforese de poliacrlamidaSDS. As molculas de SDS quando em soluo ligam-se s regies hidrofbicas das molculas proticas, causando o seu desdobramento em cadeias polipeptdicas mais simples e estendidas e carregando-as negativamente a protena. Alm do detergente SDS adicionado tambm o - mercapto etanol, um agente utilizado para romper as ligaes dissulfeto nas protenas (formado entre tomos de enxofre representado por S-S). Funcionamento da tcnica As protenas do mesmo tamanho molecular tendem a migrar a velocidades similares j que todas se encontram em conformaes espaciais simples. As protenas ligam-se a mesma quantidade de SDS tendo, portanto a mesma carga lquida total. Protenas com cargas maiores tendem a ter sua migrao retardada na sua passagem pela matriz do gel.

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Cubas onde realizada a tcnica

Imagens: Flickr sob licena CC Fonte: A Biologia Molecular da Clula Albert, Bruce, Bruce Albert, Alexander Johnson, Julian Lewis (Artmed). (http://links.lomadee.com/Z0FBLTthNUFSb2dL ODsxMDYyMzk1ODswOzE3NjszMzQwNzM5NTswO0J S.html)

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Posted on 10 de Abril de 2009, in Princpios de Gentica and tagged gentica molecular, Princpios de Gentica, tcnicas de gentica molecular. Bookmark the permalink. 1 Comentrio.

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Comentrios (1)
darlen | 1 de Julho de 2010 s 11:53 Em alguns laboratrios de Biologia Molecular, em vez de adicionar ao Gel de Agarose o Brometo que cancergeno, adicionado no Gel um reagente chamado SYBR safe que tambm possui afinidade pelo DNA, mas no cancergeno. Dessa forma a revelao do Gel no feita em luz UV, e sim em luz azul no nociva. O SYBR safe um reagente caro, mais que confere segurana aos que trabalham no laboratrio. Abrao.

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