Marco Teórico
(Lehninger, 2001)
(Horton, 1995)
(Horton, 1995
DESNATURALIZACION Y RENATURALIZACION
ESPECTRO FOTOMETRIA
A = am l c ó I = I0 e - A
Donde: A = Absorbancia.
Io = Intensidad de la luz irradiada a la muestra.
I = Intensidad de luz transmitida a través de la muestra.
am = Coeficiente de Absorción. (E)
l = Longitud del camino recorrido de la luz a través de la cubeta.
c = Concentración del material absorbido en la muestra.
El coeficiente de absorción o extinción es una constante que define la
eficiencia de absorción de una molécula en una longitud de onda específica. Las
unidades de E dependen de las unidades del ancho de la muestra y de la
concentración de ésta. Si la concentración es expresada en molaridad entonces E
será coeficiente de absorción molar y si es expresado en g/litro E será coeficiente de
absorción específica y si la concentración es expresada en % w/v, entonces el
coeficiente de absorción está dado como E %. Al tener 2 compuestos A y B con
concentraciones [A] y [B] y coeficientes de absorción am1 y am2 respectivamente, se
tiene que las absorbancias individuales en cada caso son:
Compuesto A
L
I0 I
1 am1 A = am1 L [A]
I = Io e - A = Io e -am1 L [A]
Compuesto B
L
I0 I
I = Io e - A’ = Io e - am2 L [B]
A B
I0 Io’ I
1 2
I0’ = I0 e - a m 1 L [A]
I = I0 e - am1 L [A] e - am2 L [B]
I = I0 e - (A + A’) = Io e - Atotal
Obviamente en caso de verter la mezcla con las mismas diluciones “a” y “b”, en
una cubeta de ancho L, se tendría que la absorbancia total sencillamente es
(aA+bA’) / 2.
Objetivos
3. Determinar la acción que tiene el pH, el calor, los metales pesados sobre las
proteínas.
MATERIALES
Materiales Reactivos
Agitador de vidrio
METODOLOGIA
TUBO PROCEDIMIENTO
1er. tubo de ensayo Se pone al baño de maria
2. tubo de ensayo Se agrega 1 ml de Acido tricloroacético
3er. Tubo de ensayo Se agrega 1 ml de Hidroxido de
Sodio(Na(OH))
4º. Tubo de ensayo Se agrega 2 ml de acetona
5º. Tubo de ensayo 1 ml Acetato de plomo
RESULTADOS
TUBO resultado
1er. tubo de ensayo La proteína se desnaturalizo, la solución
de albumina se endurece y pasa de ser
translucido,a blanco solido.
2. tubo de ensayo la proteína se desnaturaliza, cambiando
de un color transparente a un color
blanco en una única fase.
3er. Tubo de ensayo se desnaturalizo la proteína, cambia
bruscamente de pH,
4º. Tubo de ensayo Se desnaturalizó pasa a un color blanco
claro.
5º. tubo de ensayo Toma un color azul claro
6º. Tubo de ensayo Azul claro.
7º.Tubo de ensayo Violeta claro
8º. Tubo de ensayo Violeta
ANALISIS
(Peña, 2004)
Tubos 7, 8, 9 y 10 Biuret
En el tubo 10 dio mas fuerte el color ya que hay mayor densidad de proteína
albumina
CUESTIONARIO
3. Da un color azul claro. El tubo Blanco con el reactivo y agua era de un color
celestito pero mucho más claro, porque el reactivo es de ese color. Al
mezclarlo con las muestras si se hace mucho más intenso
4. Es mas sensible hallar con Biuret ya que el análisis de Bradford se ha convertido
en el método preferido para cuantificar la proteína en muchos laboratorios. Esta
técnica es más simple, más rápidamente, y más sensible que el método de Lowry.
Además, en comparación con el método de Lowry, está conforme a menos
interferencia por los reactivo comunes y los componentes sin proteínas de muestras
biológicas, En contraste, la forma azul más aniónica del tinte, que ata a la proteína,
tiene un máximo de la absorbencia en 590 nm mientras que la de biuret es de 400nm.
BIBLIOGRAFIA
Campbell Mary k. Bioquimica. Editorial Thompson internacional. Estados Unidos
Traducido en Mexico. Páginas 41- 51. Cápitulo 2. 2005
Briceño, Carlos, Rodríguez Lilia. Quimica Organica e inorgánica Editorial Educativa
ltda. Colombia. Páginas 520-521. Capitulo 2. . 1999.