ALT/GPTLiquiform

Cat. 74
ANVISA10009010029
FINALIDADE
PRINCPIO
CARACTERSTICASDOSISTEMA
METODOLOGIA
REAGENTES
1. Reagente1 -
2. Reagente2 -
Sistema para determinao em modo cintico da alanina
aminotransferase(ALT/GPT).
Somentepara uso diagnsticoin vitro.
A ALT catalisa especificamente a transferncia do grupo
amina da alanina para o cetoglutarato, com formao de
glutamato e piruvato. O piruvato reduzido a lactato por ao
da lactato desidrogenase (LDH), enquanto a coenzima NADH
oxidadaa NAD.
A reduo da absorbncia em 340 ou 365 nm, consequente
oxidao da NADH, monitorizada fotometricamente, sendo
diretamenteproporcional atividadedaALTna amostra.
ALT
L-Alanina + Cetoglutarato Piruvato + L-Glutamato
LDH
Piruvato + NADH NAD + L-Lactato
A metodologia cintica-UV para medio da atividade da ALT
foi introduzida por Karmen , sendo posteriormente otimizada
por Henry e colaboradores . Este procedimento de medio
ganhouaceitaomundial por ser rpido, precisoe exato.
Osistema Labtest est otimizado segundo as recomendaes
propostas por Bergmeyer ,
e
.
As substncias utilizadas na reao se encontramdistribudas
adequadamente em dois reagentes para conferir maior
estabilidade na forma lquida original e manuteno de timas
condies operacionais, permitindo a utilizao direta dos
reagentes emsistemas automticos.
Ametodologia monoreagente pode ser aplicada utilizando um
Reagente de Trabalho estvel por 14 dias entre 2 - 8 C,
obtendo-se um desempenho adequado mesmo em situaes
de baixas demandas do teste. O sistema permite ainda
preparar o volume de Reagente de Trabalho necessrio para
umamedioda atividadeenzimticadaALT.
O sistema ALT/GPT Liquiform - Labtest utiliza medies em
modo cintico e pode ser facilmente aplicado emanalisadores
automticos e semi automticos capazes de medir
absorbnciaem340 ou 365 nm.
CinticaUV- IFCC.
Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm tampo Tris 100 mmol/L, L-alanina 625 mmol/L,
LDH 1250U/Le azidasdica0,095%.
Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm NADH 900 mol/L, cetoglutarato 75 mmol/L e azida
sdica0,095%.
5
3
1
4
6
International Federation of Clinical
Chemistry Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology

m
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas
condies indicadas, so estveis at a data de expirao
impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto
sujeitos a contaminaes de natureza qumica e microbiana
que podemprovocar reduoda estabilidade.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulaodo reagente.
No utilizar o Reagente de Trabalho quando sua absorbncia
medida contra gua em340 nmfor <0,8 ou quando mostrar-se
turvoou comsinais de contaminao.
Os reagentes contm azida sdica, que txica. Deve-se
tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com
os olhos, deve-se lavar imediatamente comgrande quantidade
de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar
compostos altamente explosivos comtubulaes de chumbo e
cobre. Portanto, utilizar grandes volumes de gua para
descartar o reagente.
Cuidados com o tempo de reao, temperatura de trabalho e
pipetagens so extremamente importantes para obteno de
resultados corretos.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas
condies indicadas, so estveis at a data de expirao
impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto
sujeitos a contaminaes de natureza qumica e microbiana
que podemprovocar reduoda estabilidade.
Fotmetro com cubeta termostatizada capaz de medir com
exatidoa absorbnciaem340 ou 365 nm.
Pipetas para medir amostras e reagentes.
Cronmetro.
Exerccios emexcesso (elevada atividade muscular) elevama
atividadesricada alaninaaminotransferase.
Em pessoas do sexo feminino de todas as idades, a atividade
daALT mais baixado que emindivduos do sexomasculino.
Esterides anablicos, andrgenos, cloranfenicol, cloro-
tiazida, uso prolongado de aspirina, gentamicina entre outros,
podemprovocar umaumentoda atividadedaALT.
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP)
que estabelea procedimentos adequados para colheita,
preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que
os erros devidos amostra podemser muito maiores do que os
erros ocorridos duranteo procedimentoanaltico.
Usar soro ou plasma (EDTA, Heparina). Aatividade enzimtica
permanece estvel durante 4 dias entre 2 - 8 C e por 2
semanas a 10 Cnegativos.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras
de sangue no transmitem infeces, todas as amostras
devem ser consideradas como potencialmente infectantes.
Portanto, ao manuse-las, deve-se seguir as normas
estabelecidas para biossegurana.
Para descartar os reagentes e o material biolgico, sugerimos
aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteo
ambiental.
PRECAUESECUIDADOSESPECIAIS
MATERIALNECESSRIOENOFORNECIDO
INFLUNCIASPR-ANALTICAS
AMOSTRA
Instrues de Uso
INTERFERNCIAS
PREPARODOREAGENTEDETRABALHO
PROCEDIMENTO
Condiesde reao
Valores de bilirrubina at 19 mg/dL, hemoglobina at
180 mg/dL e triglicrides at 750 mg/dL no produzem
interferncias significativas.
Valores de bilirrubina, hemoglobina e triglicrides maiores que
19 mg/dL, 180 mg/dL e 750 mg/dL, respectivamente,
produzemresultados falsamenteelevados.
Para avaliar a concentrao aproximada da hemoglobina em
uma amostra hemolisada pode-se proceder do seguinte modo:
diluir 0,05 mL da amostra em 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L
(0,85%) e medir a absorbncia em405 ou 415 nm, acertando o
zerocomguadeionizadaou destilada.
Hemoglobina(mg/dL) Absorbncia x 601
Hemoglobina(mg/dL) Absorbncia x 467
Amostras fortemente lipmicas e ictricas aumentam
acentuadamente a absorbncia em 340 nm. Quando a
atividade enzimtica destas amostras estiver muito
aumentada, ocorre consumo bastante rpido do substrato sem
haver diminuio significativa na absorbncia. Nestas
amostras, quando a diferena de absorbncia por minuto
for muito pequena, deve-se repetir a determinao utilizando
a amostra diluda 1:2 com NaCl 0,85%, multiplicando o
resultado por 2.
O conjunto de um frasco do Reagente 1 e um frasco do
Reagente 2 permite preparar o Reagente de Trabalho.
Transferir o contedo de um frasco do Reagente 2 para um
frasco do Reagente 1 e homogeneizar suavemente. Anotar a
data de expirao. Estvel por 24 horas entre 15 - 25 C e por
14 dias entre 2 - 8 C quando no houver contaminao
qumicaou microbiana.
Identificar o frasco do Reagente de Trabalho para evitar
confusocomoutros frascos do Reagente1.
Para preservar seu desempenho o reagente deve permanecer
fora da geladeira somente o tempo necessrio para se obter o
volumea ser utilizado. Evitar exposio luz solar direta.
Opcionalmente pode-se preparar um menor volume do
Reagente de Trabalho utilizando a proporo de quatro
volumes do Reagente1 para umvolumedo Reagente2.
O reagente de trabalho contm tampo 80 mmol/L pH 7,8,
L-alanina 500 mmol/L, 2-cetoglutarato 15 mmol/L,
NADH 180 mol/L, LDH 1000 U/L e azida sdica
0,095%.
Ver observaes 1 e 2.
Comprimentode onda: 340 ou 365 nm.
Cubeta termostatizada a 370,2 C, com 10 mm de
espessurade soluo.
Bandade passagem: 8 nm.
Luz espria: <0,1%.
1. Em um tubo rotulado Teste pipetar 1,0 mL do Reagente de
Trabalho.
2. Adicionar 0,1 mL de amostra, homogeneizar e transferir
imediatamente para a cubeta termostatizada a 370,2 C.
Esperar 1 minuto.
@
@
4 0 5
4 1 5
m

"
"
"
"
3. Fazer a leitura da absorbncia inicial (A ), disparando
simultaneamente o cronmetro. Repetir a leitura aps
2 minutos (A ).
Para verificar a linearidade da reao, fazer tambm uma
leitura com intervalo de 1 minuto e verificar se a diferena de
absorbnciaemcadaminuto constante.
Como ocorre em toda medio da atividade enzimtica, a
rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao
de grande importncia para a qualidade dos resultados
obtidos.
O procedimento sugerido para a medio adequado para
fotmetros cujo volume mnimo de soluo para leitura igual
ou menor que 1,0 mL. Deve ser feita uma verificao da
necessidade de ajuste do volume para o fotmetro utilizado.
Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados
proporcionalmente semprejuzo para o desempenho do teste,
mantendo-se em 1:11 a relao amostra/reagente. O
procedimento de clculos se mantm inalterado. Em caso de
reduo dos volumes fundamental que se observe o volume
mnimo necessrio para a leitura fotomtrica. Volumes da
amostra menores que 0,01 mL so crticos em aplicaes
manuais e devemser usados comcautela porque aumentama
imprecisoda medio.
Ver linearidade
A - A
A/minuto(Teste) =
2
AatividadedaALT= A/minuto(Teste) x 1746
O fator 1746 foi obtido nas condies propostas para a
medio em 340 nm. Deve-se recalcular o fator quando for
efetuada qualquer modificao em um dos parmetros
utilizados para calcul-lo. Ver procedimento para clculo do
fator.
A =0,934
A =0,864
ATeste=(0,934- 0,864)/2=0,035
ALT(U/L) =0,035x 1746=61
VTx 1000
Fator =
x VAx d
VT=volumetotal do ensaio(1,1 mL)
VA=volumeda amostra(0,1 mL)
1000=conversode U/mLpara U/L
d =espessurada soluo(1 cm)
=absortividademilimolar do NADH(6,3)
1
2
1 2
1
2
Absorbncia inicial (A ) 0,8 um indicativo de que a
amostra tematividade elevada da ALT. Neste caso, diluir a
amostra e repetir a medio (ver linearidade). Os
fotmetros semi-automticos podem fornecer a
mensagem: substratoesgotado.
CLCULOS
Exemplo
Mtodopara oclculodofator para mediesem340 nm.
Quando a medio for realizada em365 nm, utilizar o fator
3333.
1

D
D
D
e
e
TEMPERATURA
Exemplo
CARACTERSTICASDODESEMPENHO
Exatido
Especificidade
Repetitividade- Imprecisointra-ensaio
Reprodutibilidade- Imprecisototal
Sensibilidademetodolgica
Atabela abaixo permite converter a atividade medida em uma
determinada temperatura para o valor que seria obtido na
mediorealizadaemoutras temperaturas.
A atividade enzimtica obtida em 37 C deve ser multiplicada
por 0,70 para se obter a atividade em30 Cou por 0,51 para se
obter a atividadeem25 C.
Em duas amostras com concentraes da alanina amino
transferase iguais a 47 e 185 U/L foram adicionadas
quantidades diferentes da enzima, obtendo-se recuperaes
entre 92 e 100%. Oerro sistemtico proporcional mdio, obtido
emumvalor de 200 U/L, foi igual a 6,0 U/Lou 3,0%.
O mtodo proposto foi comparado com um mtodo similar
utilizando 60 amostras com valores situados entre
4,0 e 360 U/L. A comparao resultou na equao da
regresso: y = 1,04x - 1,1 e um coeficiente de correlao (r)
igual a 0,998. O erro sistemtico total (constante e
proporcional) verificado no nvel de deciso (200 U/L) foi igual
a 6,9 U/L ou 3,45%. Como as amostras foram selecionadas
aleatoriamente em pacientes de ambulatrio e pacientes
hospitalizados, pode-se inferir que o mtodo tem uma
especificidademetodolgicaadequada.
Uma amostra protica no contendo alanina amino
transferase foi utilizada para calcular o limite de deteco do
ensaio, tendo sido encontrado um valor igual a 1,0 U/L,
equivalente mdiade 20 ensaios mais dois desvios padro.
Utilizando-se como parmetro a absorbncia mnima
detectvel emfotmetros, verificou-se que o limite de deteco
fotomtrica de 0,175 U/L, correspondendo a uma
absorbnciaigual a 0,0001.
1 0
CALIBRAO
Calibraesmanuais
Sistemasautomticos
Intervalode calibraes
LINEARIDADE
CONTROLEINTERNODAQUALIDADE
INTERVALODEREFERNCIA
CrianaseAdolescentes
Adultos
A absortividade milimolar do NADH utilizada como sistema
de refernciapara a calibraodo ensaio.
Verificar o fator de calibrao quando o instrumento for
submetido manuteno ou nas modificaes de
aplicao.
Usar Calibra 1He Calibra 2H- Labtest. Aatividade daALT
nestes calibradores rastrevel absortividade milimolar
do NADH.
Calibraode 2 ou 3 pontos ao mudar de lote;
Calibrao de 2 ou 3 pontos quando o controle interno
da qualidadeindicar.
O resultado da medio linear at 400 U/L. Para valores
maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%),
realizar nova medio e multiplicar o resultado obtido pelo fator
de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado
se situe entre 60 e 200 U/L. Sugerimos a verificao da
linearidade metodolgica e fotomtrica, no mnimo
semestralmente, utilizando amostras com atividades at
400 U/L.
Sugere - se utilizar as preparaes estabilizadas da linha
Qualitrol - Labtest para controle interno da qualidade em
ensaios de qumicaclnica.
Mulheres 10 - 37 U/L
Homens 11 - 39 U/L
Converso: Unidades Convencionais (U/L) x 16,7 = Unidades
SI (nkat/L).
"
"
"
"
12,13
Olaboratrio deve manter umprograma de controle interno da
qualidade que defina claramente os regulamentos aplicveis,
objetivos, procedimentos, critrios para especificaes da
qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas e registro
das atividades. Materiais de controle devemser utilizados para
avaliar a impreciso e desvios da calibrao. Sugere-se que as
especificaes para o coeficiente de variao e o erro total
sejam baseadas nos componentes da variao biolgica
(VB) .
Os intervalos devem ser usados apenas como orientao.
Recomenda-se que cada laboratrio estabelea, na
populaoatendida, seus prprios intervalos de referncia.
9 , 1 0 , 11
Amostra 3 10 164 1,21 0,70
MDIA N DP CV(%)
Amostra 1 10 28 0,37 1,32
Amostra 2 10 63 0,58 0,90
Amostra 3 10 167 1,80 1,10
MDIA N DP CV(%)
Amostra 1 10 27 0,77 2,80
Amostra 2 10 62 1,12 1,80
25 C 30 C 37 C
25 C ---- 1,37 1,96
30 C 0,73 ---- 1,43
37 C 0,51 0,70 ----
Fatores de correo da temperatura
Temperatura
de trabalho
26 - 55 26 - 61
1 - 30 dias
1 - 3 anos
4 - 11 anos
12 - 15 anos
1 - 6 meses
7 - 12 meses
20 - 54 21 - 54
26 - 59 26 - 55
24 - 49 24 - 49
24 - 59 19 - 44
19 - 59 24 - 59
Masculino (U/L) Idade Feminino (U/L)
6. The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for
Clinical Chemistry and Clinical Physiology. Recommended
methods for the determination of four enzymes in blood.
ScandJ ClinLab Invest 1974;33:291.
7. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of clinical chemistry, 2
edio, Philadelphia: W.B. Saunders,1986:788-797.
8. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-
Chilcott Laboratories, Diagnostics Reagents Division,
Scarborough, Canada, 1972.
9. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem
1981;27:493-501.
14. Labtest: Dados de arquivo.
Algumas apresentaes podemser disponibilizadas somente
medianteconsulta.
A Labtest Diagnstica garante o desempenho deste produto
dentro das especificaes at a data de expirao indicada
nos rtulos, desde que os cuidados de utilizao e
armazenamento indicados nos rtulos e nestas instrues
sejamseguidos corretamente.
Telefone0800-31-3411 - LigaoGratuita
e-mail: sac@labtest.com.br
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
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Lagoa Santa - Minas Gerais - Brasil - 33400-000
www.labtest.com.br
APRESENTAO
Esto disponveis aplicaes para sistemas automticos
e semi-automticos.
O nmero de testes em aplicaes automticas depende
dosparmetrosde programao.
INFORMAESAOCONSUMIDOR
Termose Condiesde Garantia
ServiodeApoioaoCliente
Labtest DiagnsticaS.A.
10. Soci edad Espaol a de Bi oqu mi ca Cl ni ca y
Patologa Molecular, Base de Datos de Variacin Biolgica.
Disponvel em:<http://www.seqc.es/article/articleview/
330/1/170>(acessoem04/2006).
11. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica.
Labtest Diagnstica2005.
12. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference
Intervals, 5.ed. Washington: AACCPress, 2005. P.3-4.
13. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2
edio, Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211.
74-4/30
4 x 6 mL
4 x 24 mL
Catlogo
Reagente 1
Reagente 2
Reviso: Abril, 2004 Copyright by Labtest Diagnstica S.A.
Ref.: 091006 Reproduo sob prvia autorizao
Efeitosda diluioda matriz
SIGNIFICADOCLNICO
OBSERVAES
REFERNCIAS
Duas amostras com valores iguais a 180 e 210 U/L foram
utilizadas para avaliar a resposta do sistema nas diluies da
matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando fatores de
diluio que variaram de 2 a 16, encontrou-se recuperaes
entre100 e 109%.
Elevaes das transaminases ocorrem nas hepatites (viral e
txica), na mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma
heptico primrio ou metasttico, pancreatite, traumatismo
extensoe no choqueprolongado.
Valores daALTso iguais ou superiores aos daASTna maioria
dos pacientes com hepatite viral, ictercia ps-heptica ou
colestase intra-heptica. Nos casos de cirrose heptica,
hepatite alcolica ou carcinoma metasttico, os valores daALT
so inferiores aos daAST.
Elevaes da ALT tambm so relatadas na polimiosite,
dermatomiositee rabdomilise.
No infarto agudo do miocrdio os valores deALTencontram-se
dentroda faixade refernciaou ligeiramenteaumentados.
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so
fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e
obtenode resultados corretos.
2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade
adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e
usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos
<0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua
pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou
condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar
gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua
capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com
liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande
poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes
em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de
modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um
programade controleda qualidadeda gua.
3. Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e
medicamentosas de interferncia nos resultados e na
metodologia sugere-se consultar Young DS,
, 3 edio, Washington: AACC
Press, 1990.
1. Bergmeyer HU, Scheibe P, Wahlefeld AW. Clin Chem
1978;24:58.
2. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. Samples: from
the patient to the laboratory. Darmstadt: GITVerlag, 1996:78.
3. Henry RJ, Chiamori N, Golub O, Berkman S. Amer J Clin
Path1960;34:381.
4. IFCC Method for Alanine Aminotransferase. J Clin Chem
ClinBiochem1986;24:481:495.
5. KarmenA. J ClinInvest 1955;34:131.

Effects of Drugs
on Clinical Laboratory Tests