PRACTICA N1 Estandarizacin del Trabajo en Inmunohematologa Apellidos y Nombres: Ortiz Gomez Tamin Nohely. Profesor: Lic.

Roci Crdova Fecha de prctica: 28 de Agosto del 2013 I. Introduccin

La concentracin adecuada de la suspensin de hemates para el trabajo en el laboratorio de Inmunohematologa es muy importante ya que nos permite evidenciar de manera correcta un resultado positivo y diferenciarlo de uno negativo. Esto resulta de gran importancia ya que tanto la aglutinacin en lmina como la aglutinacin en tubo son pruebas ampliamente empleadas en este laboratorio.

II.

Teora
a. Definicin de aglutinacin:

La aglutinacin es un agregado de clulas o partculas debido a una formacin entrelazada. El fundamento de la aglutinacin es una reaccin inmunoqumica que produce la agregacin de partculas o clulas recubiertas de antgeno o anticuerpo. La reaccin de la aglutinacin se divide en dos fases, la primera en la que se produce el contacto antgenoanticuerpo sobre la superficie de la partcula (o clula) empleada, y la segunda en la que las partculas se agregan y se puede visualizar la aglutinacin. Tambin es un fenmeno natural referente a los glbulos rojos pero igualmente a los glbulos blancos y a las plaquetas, que se produce cuando los anticuerpos presentes en el plasma se unen a antgenos transportados por estas clulas sanguneas (la aglutinacin puede tambin producirse con bacteria sometidas a la accin de anticuerpos). Se trata, pues, de un proceso a la vez inmunolgico (reaccin antgenoanticuerpo) y fsico (modificacin del medio). Se puede observar generalmente a simple vista cuando se trata de la aglutinacin de glbulos rojos.

b. Ejemplos: Aglutinaciones en Lmina:

Es una prueba rpida y especfica para despistaje. Los valores positivos deben ser interpretados clnicamente y/o evaluados con pruebas ms sensibles, como son las aglutinaciones en tubo. Aglutinacin en Tubo:

Las Aglutinaciones en Tubo proporcionan un menor nmero de reacciones falsas negativas/positivas. Para la aglutinacin en tubo de glbulos rojos la reaccin antgeno anticuerpo puede manifestarse bajo la forma de hemolisis o aglutinacin. Escala recomendada para la lectura de aglutinacin: 4+ 3+ 2+ 1+ 0 Botn slido, sobrenadante claro. Grumo grande y varios pequeos o varios grandes, fondo claro. Varios grumos de diferentes tamaos, fondo ligeramente turbio. Grumos pequeos, glbulos rojos libres, fondo turbio. Negativo

III.

Mtodo experimental

Se cont con las siguientes muestras de sangre: Muestra A, Muestra B y Muestra C. Tambin se cont con el reactivo 1 y 2.

Procedimiento: A. Determinacin en placa: Sobre una placa de vidrio se realiz la aplicacin las muestras y reactivos como se indica en el siguiente cuadro: Prueba Testigo Muestra A 1 gota 1 gota Reactivo 1 gota -Sol. Salina -1 gota Mezclar con la ayuda de una baqueta Aplicar suaves movimientos ondulatorios Esquema 1 Repetimos el mismo esquema para la muestra B. Anotamos los resultados de ambas muestras. B. Determinacin en tubo: Rotulamos dos tubos de vidrio uno para la muestra y otro para el testigo, agregamos la muestra y los reactivos como indica el siguiente cuadro: Prueba Testigo Muestra A 1 gota 1 gota Reactivo 1 gota -Sol. Salina -1 gota Centrifugar a 3500 rpm x 15 segundos Esquema 2 Repetimos el mismo esquema para la muestra B. Anotamos los resultados de ambas muestras. C. Preparacin I : Colocamos 10 gotas de la muestra A en un tubo, llenamos el tubo hasta 5mm del borde con solucin salina. Colocamos parafilm y mezclamos por inversin. Centrifugamos a 3,500 rpm por minutos. Aspiramos en sobrenadante y nos quedamos con los hemates lavados. Transferimos en un nuevo tubo una gota de los hemates y 19 gotas de solucin salina, esta nueva muestra fue considerada nuestra suspensin de trabajo. A la suspensin de trabajo de la muestra A le aplicamos los esquemas 1 y 2. D. Preparacin II: Transferimos una gota de la suspensin de trabajo a un tubo y adicionamos 4 gotas de solucin salina.

Al nuevo preparado le aplicamos los esquemas 1 y 2. E. Para la lectura e interpretacin de la reaccin antgeno anticuerpo en tubo: En tubos de vidrio colocamos las muestras y los reactivos como se indica en el siguiente cuadro: A C Muestra A al 5% 1 gota -Reactivo 1 2 gotas -Muestra C -1 gota Reactivo 2 -2 gotas Centrifugar a 3500 rpm x 15 segundos Anotamos los resultados.

IV.

Resultados

Para la Muestra A: Lmina Aglutinacin positiva Aglutinacin positiva Aglutinacin dbilmente positiva Tubo 1+ 4+ 3+

Basal Preparado I (Muestra A 5%) Preparado II

Para la Muestra B: Lmina Aglutinacin negativa Tubo 2+

Basal

Para la lectura e interpretacin de la reaccin antgeno anticuerpo en tubo: Muestra A 5% Muestra C (ya se encuentra al 5%) 4+ negativo

V.

Discusin de los resultados

La muestra A nos di un resultado positivo tanto en lmina como en tubo, a diferencia de la muestra B, la cual tena un resultado negativo en lmina pero cuando se realiz la prueba en tubo nos dio positivo. Lo que corrobora la sensibilidad de la prueba en tubo. Luego de observar los resultados de la muestra A en las tres diferentes concentraciones en la prueba de lmina evidenciamos que la mejor concentracin para dar un resultado es la muestra al 5%. Lo mismo hemos observado y con ms

contundencia para la prueba en tubo ya que la muestra A al 5% nos da una aglutinacin 4+. Para la lectura e interpretacin de la reaccin antgeno anticuerpo en tubo tuvimos en cuenta antes que nada la correcta evaluacin del resultado en la prueba de tubo, tuvimos que leer cada tubo independientemente, rotndolo suavemente para que se desprenda el botn, colocar el tubo de forma horizontal y observar tomando en cuenta la escala de lectura de la aglutinacin mencionada anteriormente. Los resultados observados fueron positivo 4+ para la muestra A al 5% y negativo para la muestra C que tambin se encontraba al 5%. VI.

Conclusiones

La prueba en lmina nos puede dar falsos negativos, siempre debe confirmarse el resultado mediante la prueba en tubo. La concentracin ptima de la muestra sangunea debe ser 5% para poder evidenciar de forma clara las reacciones de aglutinacin tanto en tubo como en lmina. Es muy importante hace una lectura adecuada del resultados teniendo en cuenta los movimientos, orientacin del tubo y escala de medicin.

VII.

Bibliografa
1. Dr. Guillermo Rodrguez Magaa. Manual de Practicas Clnicas de Inmunohematologa. Universidad Veracruzana. 2012. 2. Teora sobre aglutinacin disponible en: http://inmunomesa7.blogspot.com/2012/03/definicion-la-aglutinacion-es-unde.html. 2012. 3. Mg. Jos Antonio Paredes Arrascue. Manual de Practica de Inmunologa e Inmunoterapia. UNMSM. 2013.