MOTILIDAD

MOTILIDAD POLARIDAD Y MIGRACIN CELULAR
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Clase 1 Bsicamente, existen tres tipos de movimientos celulares distintos. Un primer movimiento en el que la clula se desplaza, cambia de sitio. Si la clula est en un medio lquido, como por ejemplo las bacterias o los espermatozoides, se desplazan en un movimiento que se denomina movimiento de natacin. El movimiento de natacin se realiza por cilios y flagelos. La clula se desplaza por un sustrato slido, la clula repta, denominando el movimiento sobre sustrato (en algunos casos movimiento ameboide). En ambos casos las clulas cambian de forma, o bien porque las clulas mueven el flagelo o bien porque se extienden los filamentos. Pero hay otras clulas que se mueven, cambian de forma pero no se desplazan. Por ejemplo, todas las clulas del epitelio respiratorio, que tienen cilios que se estn batiendo, estas clulas estn ancladas pero los cilios se estn moviendo continuamente. Este sera el segundo tipo, clulas que se mueven pero no cambian de forma. Tambin se incluyen en este grupo clulas que estn quietas pero pueden emitir pseudpodos. En tercer lugar, todas las clulas tienen movimiento dentro de s mismas, movimiento de orgnulos y vesculas, las vesculas que se exocitan desde el Golgi, etc transporte intracelular-. Todos estos movimientos se caracterizan por presentar tres elementos bsicos. Adems, presentan una velocidad caractersticas de acuerdo con cada tipo celular. Finalmente, la direccin del movimiento tambin es una caracterstica propia de este. El movimiento es un beneficio neto. 1). Elementos bsicos de la motilidad celular diapositiva-. Vorticela. Protozoo ciliado que tiene forma de copa. En su base presenta cilios que estn batindose; a continuacin presenta un espasmonema el tallo- por el que se ancla al sustrato. El espasmonema se extiende con el objetivo de captar el sustrato por la cabeza, y si hay algn factor negativo la vorticela contrae el espasmonema. Este tipo de movimiento no tiene ninguno de los tres elementos mencionados anteriormente. Si miramos dentro del espasmonema, vamos a ver una serie de filamentos verdes, que son filamentos de espasmina, una protena distinta a la tubulina y a la actina. Y luego tiene una serie de elementos membranosos, que son tbulos que y vesculas con calcio. Son elementos del REL con calcio. As, cuando hay un estmulo negativo que detecta la vorticela, hay una cadena de sealizacin, que lleva a la membrana del REL a sacar el calcio al exterior. Este calcio contribuye a la desorganizacin de los filamentos de espasmina que mantienen rgido el tallo, de manera que el tallo se cae. Se trata de uno de los movimientos ms rpidos que ocurren. Con este ejemplo, se explica que en la mayora de los casos la evolucin de las clulas ha seguido una va de evolucin que es la comn a la mayora de los
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organismos eucariontes, y que proviene de organismos procariontes. Pero hay algunos organismos que han conseguido la motilidad de forma diferente. Otro elemento caracterstico hemos dicho que era la velocidad. Cada tipo de movimiento tiene un rango de velocidad caracterstico. En una escala se observa que la E. coli se mueve a una velocidad que est entre 10 y 102. El espermatozoide se mueve alrededor de 102 micras/segundo. La vorticela se mueve todava ms rpido ver diapositiva-. El espasmonema de la vorticela es uno de los movimientos ms rpidos que hay en toda la vida. De la misma magnitud est la contraccin muscular, de 104 y 105. Posteriormente estara el movimiento ciliar, el movimiento del flagelo bacteriano, el movimiento del fibroblasto, el movimiento axonal de tipo lento, etc. El hecho de que cada tipo celular tenga una velocidad quiere decir que tiene mecanismos moleculares ligeramente distintos unos de otros que le dan distintas caractersticas de velocidad. Por lo que se refiere al origen de la motilidad, en procariotas las bacterias se mueven gracias a un flagelo. El flagelo que no tiene nada que ver con los cilios y flagelos de clulas eucariotas, pues este es un tubo hueco de flagelina-. Este flagelo se inserta en la membrana de la bacteria por el rotor, y procede de algo parecido a las fimbrias o los pilis sexuales, que ponen en contacto las bacterias F+ con la F-, y a travs de ese pili se pasa el material gentico. El que hubiera pilis en las bacterias supuso una posibilidad de la recombinacin gentica, lo cual supuso un progreso en la evolucin. De esta manera, estas bacterias con pili empezaron a desarrollar estas estructuras para otras cosas, utilizndolo por ejemplo por las bacterias toxicas para introducir sustancias txicas. Estas fimbrias dieron lugar a los rotores de los flagelos y dieron lugar finalmente a los flagelos bacterianos. No obstante, hay clulas procariotas que carecen de mecanismos de flagelos y que presentan mecanismos de motilidad muy raros, muy nicos y muy especiales, como por ejemplo, algunas bacterias presentan burbujas gaseosas para flotar en el medio lquido o bien tienen unos flagelos que los anclan al sustrato y hacen de piececitos. En un tercer caso pueden presentar polisacridos que contraen y estiran para desplazarse por el sustrato. Hay muchsimos mecanismos distintos. Hay protenas similares a los Microfilamentos y los microtbulos en procariontes. Las eubacterias presentan el cromosoma bacteriano, que se tiene que replicar antes de dividirse. Los cromosomas bacterianos se separan por la polimerizacin de una protena que es un ancestro de la actina, que se denomina parM y de ella ha derivado la actina. Hay un cambio de forma en la bacteria. Crecen los filamentos de esta protena, empujan a la bacteria y separan los cromosomas. El surco en las
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eubacterias que forma parte de la citocinesis se lleva a cabo por una protena denominada FtsZ, que es un ancestro de la tubulina. La actina y la tubulina son las dos protenas ms conservadas en la evolucin. El ancestro de la actina est haciendo la misma funcin que hacen los microtbulos en las clulas eucariotas. Y el ancestro de la tubulina est cumpliendo en procariotas la funcin que hace la actina en eucariotas. Las protenas FtsZ forman una especie de microtbulos que es la responsable del surco por una contraccin. En los procariotas hay actina fibrosa y actina globular, pero esta actina globular participa en la transcripcin y tambin en protenas que ayudan a modificar la estructura del cromosoma bacteriano, como las topoisomerasas. Despus de replicarse el cromosoma bacteriano empieza a polimerizar ese ancestro de la actina para separar los dos cromosomas bacterianos hijos. En los eucariotas tenemos actina en el ncleo de las clulas, cosa que era impensable hasta hoy. Cumple una funcin importantsima relacionada con la motilidad de los cromosomas dentro del ncleo. Esto est acompaado de la miosina nuclear de tipo I. Adems cuando un cromosoma va a expresar unos genes, tiene que descondensarse, e ir a los sitios donde estn los complejos de transcripcin. En las clulas procariontes tambin hay ancestros de las MAPs, que juegan un papel en la motilidad. Cmo se organizaron los cilios y flagelos? El flagelo bacteriano no es el origen de los cilios y flagelos de las eucariotas. Porque tiene composicin distinta y mecanismo molecular distinto. Linn Margulis propone que primero existan una serie de organismos procariontes que eran inmviles, mientras que haba bacterias que eran mviles, espiroquetas, que no se mueven por flagelos bacterianos, sino que se mueven por unos elementos parecidos a los microtbulos que tienen en su interior, que ondulan las bacterias. NO se mueven por flagelos bacterianos. Estos dos organismos se asociaron, de manera que las espiroquetas se unan a las bacterias, las primeras movan a la clula procarionte y las segundas les daban alimento. Esta relacin fue tal que las espiroquetas fueron introducindose en el interior de las bacterias. La parte que metieron dentro dio origen al cuerpo basal de los cilios, y la parte que qued fuera fue el cilio. Linn propone la Thermoplasma acidophilum como la bacteria en la que se dio la simbiosis ancestral. Ha encontrado en organismos actuales distintos tipos de procariontes que tienen las mismas caractersticas de aquellos en los que se dio ese mecanismo simbionte, y adems ha encontrado que hay organismos que todava se han quedado en la fase I, II o III. Los flagelos procariontes no tienen nada que ver con los cilios y flagelos eucariontes.
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Clase 2 La quimiotaxis es una va utilizada por bacterias, leucocitos, para ir a los sitios. Pero tambin hay quimiotaxis en la migracin de neuronas en los organismos superiores, o los leucocitos, que se dirigen a donde estn las bacterias. Juega un papel importante en el desarrollo embrionario, como por ejemplo las clulas que se desprenden de los somitas y que migran, o las clulas de las gnadas. Todos estos son movimientos celulares migratorios que se dirigen por sustancias qumicas que atraen a ese tipo celular al sitio que van a ocupar luego. En el desarrollo nervioso tambin migran las neuronas a sitios concretos, o el cono axnico, cuando empieza a crecer, migra al sitio donde tiene que establecer la sinapsis. Todos estos mecanismos estn controlados por quimiotaxis. Los linfocitos detectan una sustancia que producen las bacterias. Las bacterias secretan pptidos al medio como parte de su actividad vital-. Estos pptidos se caracterizan porque empiezan por fermil metionina. El organismo detecta entonces que algunos de esos pptidos llevan formil metionina, y ninguno de los pptidos o protenas de su organismo empieza por fermil metionina, luego la fermil metionina es la sustancia atrayente. Los leucocitos que estn circulando la detectan y salen por diapdesis de los vasos. Las clulas que estn migrando presentan un fenotipo polarizado con forma de pera fenotipo migrador-. Estas clulas llegan a las bacterias, los fagocitan los leucocitos son macrfagos- y se acaba la infeccin. Para que una sustancia qumica le diga a una clula adnde tiene que ir, tienen que existir receptores de membrana que detecten la sustancia qumica. Luego la quimiotaxis va a precisar de receptores. Las clulas que estn migrando presentan filamentos de actina polimerizados en un extremo en el extremo al que se estn dirigiendo- y en el otro no. Si ponemos una seal en el lado opuesto, se desensamblan todos los filamentos de actina y se repolimerizan hacia el sitio donde est el nutriente. Una clula de este tipo inactiva, es decir, si no hay sustancias quimiotcticas, estn en situacin de pausa y exploracin. Estas clulas inactivas presentan debajo de la membrana plasmtica la corteza celular, una red de filamentos de actina; y adems forma filopodios de forma homognea. Si se le aade una sustancia quimiotctica, polimeriza la mayor parte de los filamentos de actina en el frente delantero, porque va a moverse hacia ese quimioatrayente. Despolimeriza la actina de la parte posterior. Las sustancias quimiotcticas, actuando sobre receptores de membrana, modifican el citoesqueleto en actina y crean el fenotipo migrador que pone la clula en movimiento. La mayora de las veces, el fenotipo migrador tiene un frente delantero con la corteza celular filamentos de actina entrecruzados formando una red- la cual extiende filopodios haz de filamentos de actina polarizados en la
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misma direccin, todos tienen el extremo positivo hacia donde crece-. Adems tenemos lamelipodios. En la parte posterior tenemos fibras de estrs, haces de filamentos de actina antiparalelos con gran separacin entre ellos con miosina tipo dos. Estos haces estn anclados por contactos focales a la membrana plasmtica. Cuando la miosina II se activa contrae los filamentos de actina antiparalelos y crea tensin. En la parte posterior tiene que haber fibras de estrs para contraer el resto de la clula que no se extiende y que esta puede continuar avanzando. Supongamos que el formil metionina es una seal. Esta seal activa un receptor. El receptor activa PI-3-quinasa, que crea PI(3,4,5)P3, el cual en la parte delantera activa Rac una GTPasa-, la cual activa la polimerizacin de actina en el frente delantero, formacin de filopodios y lamelipodios. Parte de la recepcin activa Roc en la parte posterior, que participa en la contraccin de actina y miosina en la parte posterior en las fibras de estrs. Un ejemplo. Mirando en las amebas discoideum- cuando se empez a estudiar se vio que si no tenan nutrientes las amebas iban unas detrs de otra en fila, a agruparse en una zona -el cuerpo fructfero-, que sufra una serie de transformaciones. De repente, del cuerpo fructfero salan una especie de tallo, y en la parte superior de ese tallo se formaban esporas que caan al suelo. Esas esporas eran capaces de resistir las condiciones adversas de no nutrientes. As, si el suelo est hmedo y hay nutrientes, pueden alimentarse. Pero si se seca el suelo y no tienen qu comer, forman estas estructuras. Las esporas esperan a que las condiciones sean las ideales para que las amebas vuelvan a salir. Y se repite el ciclo. La agregacin llamaba mucho la atencin a los cientficos. Al faltar nutrientes, las amebas liberaban AMPc en la parte posterior, pero tenan AMPc en la parte delantera. Y esto era lo que haca que se formaran esas filas. Vieron que si ponan AMPc en gradiente, NO en todo el medio, la ameba se mova al AMPc. El AMPc era, por lo tanto, el quimioatrayente, porque la ameba tiene receptores de AMPc. Se observ que se llenaban los receptores que estaban ms cerca del gradiente. Los receptores llenos activaban las vas de sealizacin. (formaban PI(3,4,5)P3). Por lo que si teimos PI(3,4,5)P3 con un fluorocromo se observa todo el PI(3,4,5)P3 disperso en el interior de la ameba La quimiotaxis es un proceso que tiene lugar en tres etapas diapositivas-. Cuando una clula se mueve, todo su citoesqueleto se tiene que reorganizar, no solo los filamentos de actina. Los microtbulos tienen tambin mucho que ver en el movimiento. Por lo que vamos a estudiar tambin los microtbulos. Los filamentos intermedios se reorganizan pero NO participan en el movimiento.
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Microtbulos en el cono axnico. La neurita que va a dar el axn, cuando no hay sustancias quimiotcticas produce filopodios en muchas direcciones, los cuales estn hechos de actina. Para que el cono axonico responda al gradiente, tiene que haber receptores. Al aadir gradiente se retraen los filopodios de las zonas alejadas del gradiente y crecen los filopodios hacia donde hay mayor concentracin de gradiente. Por lo que tiene que haber despolimerizacin y polimerizacin de filamentos de actina. En el axn, adems, hay microtbulos y filamentos. Los microtbulos, cuando ya el axn ha elegido la direccin en la que quiere ir, esos microtbulos tambin polimerizan, crecen y entran en los filopodios. El centrosoma est entre el ncleo y el frente delantero. Hay pocos microtbulos que van a la parte posterior y muchos ms que van al frente delantero. Hay una interaccin entre los filamentos de actina y los microtbulos. Si ponemos una seal entre el ncleo y el centrosoma, el centrosoma pasa al otro lado del ncleo. Existen ejemplos de clulas que migran sobre otras, como neuronas que migran sobre las clulas de la gla. En la gla hay sustancias quimiotcticas que guan a las neuronas en una direccin. Las sustancias quimiotcticas tambin pueden ser protenas transmembranas de otras clulas. Sea cual sea, tiene que estar siempre en gradiente la sustancia quimiotctica. Si aadimos por todo el medio de forma homognea-, la clula no reacciona. La clula modifica su velocidad de migracin a lo largo de todo el proceso, va decelerando a lo largo del proceso de atraccin, debido a que la clula se adapta y los receptores de esa sustancia quimiotctica se adaptan, y si se adaptan, el dominio citoplsmico del receptor se activa menos, por lo que la va de sealizacin es menor, se forma menos PI(3,4,5)P3, por lo que se activan menos la Rho GTPasas, y por lo tanto se mueven menos las clulas. Clase 3 El flagelo bacteriano no tiene nada que ver con el flagelo de las clulas eucariotas. El cuerpo de la bacteria tiene una micra aproximadamente de longitud, y los flagelos como mucho tendran cinco micras. Mientras que el tamao de los espermatozoides sera mucho mayor. Si damos un corte transversal al flagelo del espermatozoide, lo que encontraremos ser el axonema con los nueve dobletes de microtbulos y el par central, mientras que si hacemos un corte transversal de un flagelo bacteriano vemos que son tubos huecos de una protena que es la flagelina El flagelo bacteriano es mucho ms largo de lo que es el cuerpo de la bacteria, y est anclado a la membrana y a la pared por el rotor, porque el flagelo se va a mover girando en un sentido y en otro. El flagelo est continuamente girando en
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sentido de las agujas del reloj (sentido horario, en verde)-. O antihorario en sentido contrario de las agujas del reloj, en rojo-. Los flagelos girando en sentido antihorario, se unen formando un haz y eso impulsa a la bactria, por lo que sta avanza. Si los flagelos giran en sentido horario, los flagelos se separan unos de otros y la bacteria gira sobre s misma tumble-. As, una bacteria con flagelos o bien avanza porque los flagelos giran en sentido antihorario- o dar vueltas sobre s mismas en el momento en el que los flagelos giran en sentido antihorario, dando el movimiento catico. El flagelo es un tubo hueco formado por flagelina. El flagelo llega hasta el codo, que es rgido mientras que el flagelo es flexible-. El codo est unido al rotor. La membrana plasmtica tiene un disco de protenas y una parte central que se contina con la capa de pptidoglicanos. Esto est unido al codo rgido. Cuando gira el rotor, gira el flagelo. Lo que hace girar el rotor es el estativo. El estativo es el lugar por donde entran protones a la bacteria, y esa es la fuente de energa de la motilidad del flagelo. El flagelo no tiene como fuente de energa ni la hidrlisis de ATP ni de GTP. La fuente de energa es el gradiente de protones. En esta membrana de la bacteria es donde se encuentran todas las enzimas de la fosforilacin oxidativa; esta membrana de la bacteria es igual que la membrana mitocondrial interna, tienen el mismo origen evolutivo. La membrana mitocondrial interna, al igual que la membrana de la bacteria, presenta los mecanismos de fosforilacin oxidativa. Una bomba de protones saca protones al espacio periplasmtico. Entran protones al protoplasma que proporcionan energa para que el flagelo gire y se mueva la bacteria. En un medio donde no tiene una seal qumica, analizamos la trayectoria de una bacteria. Sus flagelos giran en sentido antihorario durante un tiempo, y la bacteria avanza. Llega un punto donde cambia de direccin, quiere decir que los flagelos cambian el sentido de giro y la bacteria da vueltas sobre s misma. Al cabo de un tiempo acaba orientada en una direccin distinta de la que se encontraba previamente. De nuevo vuelve a avanzar porque sus flagelos giran en sentido antihorario, y por segunda vez vuelve a girar sobre s misma porque sus flagelos giran en sentido horario. Avanza, cambia el sentido de gir y avanza. Si miramos la distiancia recorrida en un momento determinado, vemos que la bacteria est muy cerca de donde empez. Se mueve, pero no va a ningn sitio. Si aadimos un quimioatrayente en gradiente y analizamos la trayectoria de la bacteria, vemos que avanza, cambia el sentido de giro, avanza. Al alejarse del gradiente, lo que hace es cambiar ms rpidamente de direccin. Una vez que recupera su direccin, avanza una longitud mayor. Pero cuando va en direccin
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incorrecta, avanza menos. Al final la distancia recorrida es mucho mayor. En definitiva, si va en la direccin correcta, nada ms tiempo que si no tiene quimiatrayente. Siempre va cambiando la direccin de giro. Si la bacteria, cuando aadimos el atrayente en gradiente, va en la direccin correcta, keep going, sigue yendo en la buena direccin. Si la bacteria estaba nadando en direccin contraria, en cuanto detecta el gradiente cambia el sentido de giro, se pone a dar vueltas sobre s misma, y si para donde mirando hacia donde est el gradiente, keep going, avanza. Cmo se produce el mensaje desde los receptores quimiotcticos hasta los rotores de los los receptores estn en la verdadera membrana de la bacteria. Hay cuatro tipos de receptores distintos. Unos unen los ligandos directamente, otros necesitan protenas adaptadoras. Pero lo que nos interesa es que son protenas transmembrana que cuando unen a su ligando activan el dominio citoplasmico del receptor, que origina una va de sealizacin de una serie de molculas que van al receptor. El repelente y el atrayente tienen efectos contrarios sobre los receptores. Vamos a estudiarlo primero con un repelente. El receptor citoplasmico en su parte citoplsmica tiene unida una protena adaptadora CheW, que tiene a su vez cheA. Esta cheA, cuando se ha unido el repelente, se fosforila, se activa y activa a una quinasa que es CheY. Esta CheY es una protena soluble que est libre en el protoplasma. As, si hay mucho CheY fosforilado, llega al rotor y le hace que se mantenga rotando en el movimiento de las agujas del reloj, dando lugar a un movimiento catico. Pero adems en el protoplasma hay unas protenas cheZ que son fosfatasas que vanquitando fosfatos a cheY. Todo esto es un equilibrio. El resultado final depende de los niveles que en ese equilibrio se alcancen. Los receptores son dmeros que estn unidos porque el ligando se une entre los dos. En la parte citoplsmica hay dos dominios: un dominio de sealizacin donde va a estar unida cheW y donde se va a llevar la activacin- y otro dominio con sitios de metilacin. Hay una serie de enzimas que van metilando estos sitios. Cuantos ms metilos haya, menos va a responder el dominio de sealizacin aunque haya ligando unido. Por eso, estos sitios de metilacin son responsables del mecanismos de adaptacin del receptor. Cuando el receptor tiene ligando mucho tiempo unido, se metila el receptor y esto es lo que provoca su inactivacin. Como hay cuatro sitios de sealizacin en cada una de estas molculas, en realidad hay ocho sitios de sealizacin porque hay dos molculas. Los receptores quimiotcticos estn en la zona opuesta en la que se van a unir los receptores en haz. CheR va a ser la encargada de metilar y cheB es la encargada
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de desmetilar. cheR est continuamente metilando, y cheB, cuando est activa cheY, va a desmetilar. Si no hay quimioatrayente, CheA acta fosforilando activamente a CheY. cheY va al rotor para hacerlo girar en sentido antihorario, luego est avanzando. Se mueve mucho en sentido antihorario, y muy poco en sentido horario, pero SIEMPRE se mueve algo en los dos sentidos. cheA tambin est fosforilando a cheB, y cheB fosforilado lo que hace es desmetilar al propio receptor. As, cheA fosforila a ambos. Y por qu cheB est desmetilando si no hay ningn ligando? Porque cheR est siempre activo, y est metilando. Si le ponemos aspartato, que es un atrayente, lo que ocurre es que cheA est ms inactivo, por lo que ya no fosforila a cheY y por lo tanto hay poco cheY que llegue al rotor. Y como cheZ sigue desfosforilando, disminuye an ms la cantidad de cheY fosforilado. El motor gira todo el tiempo en sentido antihorario y la bacteria avanza. Ocurrira lo contrario si aadirmaos un repelente, ya que se activara muchsimo el dominio transmembrana, se activara muchsimo cheA, y la bacteria gira ms tiempo en sentido horario y muchas veces sobre s misma. cheA inactivo, no fosforila a cheB. cheB desfosforilado no desmetila al receptor, y como sigue recibiendo grupos metilo por accin de cheR, lo que estamos haciendo es inactivar al receptor. Es como si hubiera desaparecido el aspartato, aunque sigue unido al receptor. El receptor sin ligando presenta una cierta actividad del dominio sealizador, y no hay dominios puestos en el dominio de metilacin. Si ponemos un quimioatrayente disminuye la actividad del dominio de sealizacin, y se empieza a metilar el receptor por cheR. El receptor, aunque tiene el ligando, como est metilado est adaptado y tiene el mismo nivel de sealizacin que tena el receptor vaco. El receptor es ms activo sin quimioatrayente que con quimioatrayente. Pero es ms activo con repelente que sin repelente.
Clase 4 La polaridad es la asimetra en la forma de la clula, en la distribucin de sus proteinas, orgnulos y por tanto las funciones que ejercen los orgnulos en cada parte de la clula tambin estn hechas de forma asimtrica. La mayora de las clulas diferenciadas son polares. Por ejemplo la clula epitelial es una clula
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polarizada, tiene uniones estrechas delimitan un dominio basolateral y un domino apical. Esta polaridad hace que las funciones de la clula tambin estn distribuidas de forma diferente. Otro ejemplo seran las neuronas. Tambin en los organismos unicelulares, las bacterias tambin es una clula polarizada. Hay dos tipos de polaridad. La polaridad apicobasal, tradicional; y la polaridad planar, en la plano perpendicular al eje de la polaridad apicobasal. Si vemos los pelos de una mosquita, vemos que hay un orden. Es la polaridad planar, hay un orden en el plano. Este orden es muy importante, y el mecanismo por el cual se establece la polaridad planar va por una va de sealizacin. Wnt se une a Frizzled. Cuando el ligando se une al receptor, el dominio intracelular se activa. Se aztiva a Dishevelled, una protena citoplasmica, la cual tiene tres dominios. Si se activan dos de ellos, se modifican la transcripcin gnica. Pero si se activan otros dos, activan a Rho, y se modifica el esqueleto de actina. Esto determina la polaridad planar por una modificacin del citoesqueleto de actina. Si nosotros mutamos Frizzled, se alteran los pelos de la mosca. Frizzled quiere decir rizado, porque riza todos los pelos, en vez de ester lisos. Si mutamos Dishevelled despeinado- se despeina la mosca. Pero esta va tambin est implicada en la polaridad planar de las clulas sensoriales de nuestro odo interno. No solo se da en la mosca. Si hay una mutacin de esta protena, estas clulas se desordenan y responden a las frecuencias desordenadamente, por lo que el individuo es sordo. La polaridad planar afecta a los cilios del tracto respiratorio, estn batiendo todos los cilios en la misma direccin. Con el batido ciliar, arrastra la mucosidad con las partculas del aire. Si los cilios estn desordenados, esto da lugar a muchas enfermedades respiratorias. Pero la polaridad ms conocida es la polaridad apicobasal. La polaridad apicobasal est determinada por un conjunto de protenas Par. En el complejo Par hay un tipo de protenas, que son Par 3 y par6, que estn siempre en el dominio anterior o apical (incluso en neuronas); mientras que Par 1 y Par 2 siempre van a estar en el dominio basolateral o posterior. Par 3 y Par 6 siempre van acompaadas por una protena quinasa inactiva, en concreto aPKC atpica-. 1. Polaridad en las clulas epiteliales. Polaridad apicobasal. Las clulas epiteliales tienen uniones estrechas, la polaridad apico-basal se establece por la presencia de uniones estrechas. La presencia de uniones estrechas determina la polaridad. Tambin existen protenas de la familia de las RhoGTPasas, como las Rac, intervienen en el proceso. En el experimento, inactivando la protena Rac, lo que ocurre es que cambia completamente la polaridad, del interior pasa al exterior, se invierte la polaridad. Si a estas
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clulas con Rac bloqueada les aado laminina un componente de la lmina basal-, se establece toda la lmina basal alrededor y esto reorganiza la polaridad. Por lo tanto, La polaridad en los epitelios viene determinada por la presencia de uniones estrechas Intevienen las protenas Par. Intervienen las GTPasas Intervienen los componentes de la lmina basal Unido a la unin estrecha se observa el complejo formado por Par 3, Par 6, y otras estructuras, como la protena quinasa atpica. Se encuentra en el sitio que define la porcin apical. Tambin presenta la Rho GTPasa. Para ver el papel de Par, explicamos otro experimento. Si tenemos la protena par4 inactiva, vemos que la clula tiene actina por toda la membrana plasmtica. Es una clula no polarizada. Pero si la protena Par est activa, la actina est en la regin anterior. En una clula no polarizada pero que es polar ya tiene las protenas de la unin estrecha bien localizadas. El lmite de sta es el lugar en el que esta clula aislada posteriormente formar la unin estrecha. Cuando inactivamos Rac, hay polaridad apicobasal pero no est correcta. Par es un componente imprescindible para la polaridad. 2. Polaridad en el cigoto C. Elegans. La zona en la que entra el espermatozoide en concreto, el sitio donde entra el centrosoma- en el vulo determina la polaridad posterior del vulo, que era apolar. Los dos ncleos van a disponer su DNA en una placa ecuatorial, que est en amarillo en la clula. El polo del huso est formado por el centrosoma de los espermatozoides, y el original del ovocito. En un principio las protenas Par estaban toda distribuidas de forma homognea asociadas a la membrana. Al entrar el esperma va a hacer que Par 1 y Par 2 queden restrigidas al polo posterior, mientras Par 3, Par 6 y la aPKC va a la regin anterior. El sitio por el que entra el centrosoma es el polo posterior. En el momento en el que entra el centrosoma y forma el ster, elimina al polo. El acontecimiento que inicia la polaridad es el lugar en el que entra el centrosoma. El ster no solo determina la composicin distinta sino tambin la distinta distribucin de elementos citoplasmicos. Hay protenas solubles que selocalizan especficamente en la parte posterior. Por ejemplo, pie 1 est en la parte posterior porque en la parte anterior hay proteasas que la degradan. Tambin estn los grnulos p, que se quedan en la parte posterior. Las protenas Par, en la distribucin de estas protenas solubles, permiten la distribucin especfica. Cuando la mitosis progrese, se van a formar clulas con composiciones de membrana
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distinta. El inicio del establecimiento de la polaridad es algo externo la entrada del centrosoma-, que determina un cambio de distribucin en la polaridad y se debe a la distribucin asimtrica de las protenas par. 3. Protenas de las neuronas. El axn es el equivalente al dominio apical, mientras que el soma sera el equivalente al dominio basolateral. Par3 y poar6 estn en el axn. En las neuronas no hay uniones estrechas, por lo que hay una barrera, que es el segmento inicial del axn. Es el lugar en el que la membrana deja de ser soma y pasa a ser axn. Es el lugar en donde se inicia el potencial de membrana. Si tienen informacin y no disparan decide callarse, y no transmite la informacin. Este segmento es responsable de la transmisionn de la informacin y la polaridad. Lo que determina la polaridad en las neuronas es el centrosoma. En la imagen, un neuroblasto con centrosoma vemos que forma un primer lamelipodio en el lugar cercano al centrosoma. A continuacin se forman lamelipodios por toda la clula, y luego se forman neuritas. Si eliminamos el centrosoma con laser, no formar el axn. Pero si tenemos un neuroblasto con dos centrosomas, darn dos axones. Un neuroblasto apolar tiene, por debajo de la membrana plasmtica, una capa de filamentos de actina, una capa de centrosoma que no llegan a contactar con la membrana. Mientras no se dispara nada, est activa la protena Rho. Si se inactiva rho y se activa cdc42 y rho, se rompe la corteza, esto permite que se polimericen microtbulos en la membrana para que puedan volver a exocitarse. Si se activan Rac y cdc42, e implica la formacin de neuritas.
Clase 5 Es importante que en un organismo la clula sea capaz de moverse porque juega un papel muy importante en el desarrollo embrionario, pues sin ello lo que tendramos sera una bola grande. Sucede porque las clulas son capaces de moverse dentro del embrin. Las clulas que se originan en la parte neural van a dar lugar a los ganglios linfticos, a las clulas sensoriales. Todos los msculos y los huesos se originan a partir de las somitas, que cuando comienzan a diferenciarse migran y dan lugar a toda esta musculatura. En un organismo adulto completamente desarrollada, la movilidad de las clulas es muy importante en la respuesta inmune, que a travs del torrente sanguneo se van desplazando, luego incluso en un individuo adulto es muy importante dicha movilidad. Existen ms situaciones en las que se da esto, como es el caso de un tumor, donde sera mucho ms favorable que las clulas no se desplazasen
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evitndose as que el tumor se origine en dos rganos que estn alejados unos de otros. Lo primero que va a hacer la clula va a ser subyacer, extravasarse y asentarse en otro sitio dando lugar al tumor secundario. Luego juega un papel muy importante en procesos patolgicos. En el citoesqueleto de la clula encontramos filamentos de actina, filamentos intermedios y microtbulos. Los intermedios estn asentados a las paredes de la clula que conectan unas clulas con otras ayudando a soportar la tensin. Si la clula careciese de aire que fuese capaz de repartir la tensin sera un sistema tremendamente raro. Los microtbulos sirven como autopista de comunicacin, vas de transporte. Por encima de ellos se van a desplazar orgnulos, vesculas Si miramos el filamento de actina en un organismo vemos que es capaz de crear microvellosidades. Los tres tipos tienen tamaos ms o menos similares, siendo los microtbulos ms grandes. Los microtbulos forman un pequeo tubo formado de monmeros y la actina son dos tubos enrollados formando una hlice dextrgira. La capacidad de movilidad de la clula depende de que se formen estructuras dinmicas. Si comparamos la estructura del queratocito de pez, vemos que el filamento de actina est concentrado en la zona de la clula que va a ser capaz de moverse, en la pared frontal. Es decir, nos est diciendo que la actina es la responsable del movimiento. Adems tiene como uniones que conectan el frente de avance con el centro de la clula y que va a ser lo que permite que la clula se mueva. Tambin es capaz de tirar del cuerpo celular. Todo el trabajo que conlleva es responsabilidad del citoesqueleto de actina. Todas las clulas tienen actina, pero no todas las clulas se mueven. La actina es responsable de la mayor parte de los cambios que se realizan durante la mitosis, de la actividad contrctil junto con la miosina (tanto en el musculo como en la formacin del anillo contrctil), participa en las interacciones de la clula con el sustrato ( la tensin que generan los filamentos favorecen a su adherencia), participa en procesos de endo y exocitosis. La actina juega un papel esencial en muchos procesos necesarios para que la clula funcione correctamente. Esto conlleva a que la actina sea capaz de estructurarse de muchas formas diferentes. Dependiendo de la funcin va a adquirir una estructura u otra diferente. Las microvellosidades de algunos epitelios estn formados por microfilamentos de actina que se ponen de forma paralela y orientados entre s. Si miramos clulas en migracin, cuando se forman fibras de estrs, la actina se ponen de forma anti paralela unas entre otras. Cuando forma el anillo contrctil tambin se disponen de
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forma anti paralela. Tambin es capaz de estructurarse en redes para dar rigidez y en forma de lamelipodios. Juega un papel importante en la formacin de los epitelios, dndolos rigidez. Forma como una malla de anillos que aporta resistencia y distribuye la tensin por todo el epitelio. La clulas migratorias, en el lugar donde aparecen las fibras de estrs, hace que la unin de la actina de forma anti paralela con la miosina produce la tensin. En la parte cortical se forma una red aparentemente desordenada, sin embargo en el frente de avance se forman en haces paralelos favoreciendo la migracin. Dependiendo de la funcin del citoesqueleto de actina en el frente migratorio va a adquirir una disposicin u otra. A la hora de estudiar el papel de los filamentos de actina, necesito poder interferir con su funcin. Lo que puedo hacer es ver si bloqueando la actina, la clula dejara de moverse, entonces sera el responsable del movimiento. La faloidina se une a la actina la bloquea y hace que la clula sea incapaz de moverse. Tambin se podra averiguar su papel mediante la unin de otra droga a los extremos positivos y haciendo que el filamento sea incapaz de crecer y se desarme. Esta droga es la citocalasina. Puedo verlo directamente, ver si el citoesqueleto cambia a la vez que la clula cambia., en una clula viva y sin fijar. Se llevara a cabo marcando la actina fluorescentemente (la GFP es una protena que produce la clula y es fluorescente en el lugar donde se encuentre sta) y construyendo una protena de fusin entre la GFP y la actina. Quitara la actina, le quito el codn de parada y le meto la GFP, construyendo as un gen artificial. Lo siguiente que tengo que hacer es meterle un promotor, de manera que tengo el cDNA de la actina unido al cDNA de la clula. La maquinaria transcripcional de la clula se va a unir al promotor y van a producir la protena, que va a ser una forma fluorescente de la actina. Cuando estimule la clula para que se mueva, ver la actina como se incorpora a las filamentos de actina siendo stos ahora fluorescentes. Aunque haya muchsima actina dentro de la clula no la ver verde, sino que hay una pequea cantidad en todo el citoplasma ya que se encuentran la mayor parte de las molculas de actina repartidas por todo el citoplasma, no estn unidas. Solo en aquellos sitios donde la actina se asocie unas con otras es donde ver la fluorescencia. Es muy importante que la actina se pliegue correctamente para que esto se pueda llevar a cabo, ya que es su correcto plegamiento el que permitir que se pues ver la actina fluorescente. Toda la actina que se est despolimerizando tiene que reutilizarla hacindola que vuelva al frente de avance, lo que despolimeriza por un lado est polimerizando por
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el otro. Es el frente y los mismos filamentos los que determinan que se lleve a cabo esto. Donde se genera la tensin, en el frente de avance, vemos que la miosina est unida a la actina. Clase 6 La actina es una molcula muy importante y hace muchas cosas muy importantes dentro de la clula. Es una protena globular de pequeo PM con una sola cadena polipeptidica que se asocia con otras molculas iguales para formar como una especie de bastoncillos. Parece un trbol y tiene cuatro dominios, entre el dos y el cuatro hay una especie de bolsillo o hendidura donde es capaz de insertarse una molcula de ATP. sta juega un papel muy importante en todos los procesos dinmicos donde se ve implicada la actina. Su hidrolisis no es necesaria para que se produzca la polimerizacin, pero si que es muy importante en la dinmica de la clula. Cuando se produce la polimerizacin, la unin de unos monmeros de actina con otros, forman estructuras que se ven como un color de cuentas, de dos cadenas que rotan una sobre la otra. A pesar de ser una estructura globular ms o menos homogneas, vemos que no es igual por un extremo que por el otro. Siempre se asocia el extremo + con el extremo -. De formas que siempre estn colocadas de la misma manera. Para comprobar si se asocian de forma ordenada, lo puedo hacer marcando la actina y vindola al microscopio. Si hiciese unirse una molcula distinta y cada vez lo hiciese por un lado diferente veramos que no tiene una estructura ordenada. Si pongo miosina I vemos unas estructuras en forma de punta de flecha apuntando hacia el mismo sitio siempre. Al extremo es hacia el que apuntan las flechas y es el lugar por el que crece ms despacio, no quiere decir que no crezca por ah sino que lo hace ms despacio. Al mismo tiempo, el extremo barbado es el extremo +, que es el lugar por el que el filamento tiene ms tendencia a polimerizar. La actina polimeriza distinto por cada uno de los extremos. Por el extremo + siempre entra la actina unida a ATP, que poco despus de unirse al filamento, el monmero de actina hidroliza el ATP y produce un cambio conformacional que facilita la polimerizacin. La aparicin de este capuchn de ATP en el extremo del filamento mantiene la tendencia de la actina a la polimerizacin, ya que si desapareciese tendera a despolimerizar ms rpido. Como hemos dicho antes, el ATP no es necesario para la polimerizacin ya que la actina puede entrar en forma de actina-GDP, lo que ocurre es que la polimerizacin sera bastante ms lenta y necesitaramos una concentracin mucho ms alta de actina libre. Para poder regular cuando crece y cuando decrece, la clula necesita crear unas determinadas condiciones determinadas.
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En una situacin estacionaria hay monmeros de actina entrando por un extremo y despolimerizando por el otro. Si la cantidad de actina que se une y la que se despolimeriza es la misma, estaramos en una situacin de equilibrio. In vivo, pongo un montn de molculas de actina-ATP y veo lo que ocurre. Evidentemente polimeriza, en principio hay una fase de retardo, luego una de crecimiento y finalmente los filamentos dejan de crecer. Los filamentos inicialmente no crecen ya que los monmeros tienen una tendencia grande a asociarse a un filamento previo pero no a unirse entre s. En un principio interaccionan entre s hasta que forman un pequeo ncleo y ya tendern a unirse a l. Vaa crecer hasta u punto en el que la cantidad de monmeros libres va a ser muy baja y la cantidad de monmeros que polimerizan por un extremo va a ser igual a la cantidad que despolimeriza por el otro. En las fases iniciales voy a tener subunidades libres que van a tener pequeos oligmeros que van a empezar a crecer hasta llegar a una situacin en la que la velocidad de entrada y de salida es la misma y el filamento ya no crece. A esta situacin es a la que se llama concentracin crtica. Lo que sucede es que la concentracin crtica para un extremo es diferente que para el otro, hacen falta muchas ms molculas de actina libre para que el extremo siga sintetizando. La concentracin crtica del filamento es en la cual la velocidad de entrada y de salida de monmeros en ambos extremos se equiparan. Cuando la concentracin es mayor a la concentracin crtica el filamento polimeriza bien en un extremo, bien en el otro o en los dos y cuando es menor despolimeriza. La incorporacin neta de molculas se produce sobre el extremo + y la salida neta sobre el extremo -. Para comprobar que eso sucede realmente, pondramos un filamento y monmeros de actina y a partir de ah, si mi hiptesis fuese cierta, no tendra fase de retardo sino que los filamentos crecen desde el principio. La concentracin crtica al final sera la misma, ya que necesitara la misma cantidad de monmeros libres con independencia de que la polimerizacin empiece antes o despus, aunque tardar menos a la hora de llegar a ella. Si decoramos el ncleo con miosina, veramos que por el extremo + ha crecido muchsimo y que por el extremo ha crecido muy poco. La concentracin crtica del filamento entero es fcil de medir pero, puedo saber la de cada uno de los extremos? Si, si que puedo. Basta con bloquear un extremo y mirar a que concentracin se estabilizan los filamentos enteros y esa sera la concentracin crtica del extremo. En una situacin de equilibrio los monmeros que entran por un extremo se van desplazando por un extremo hasta que salen por el extremo opuesto. A este proceso es a lo que se denomina tresh milling. El filamento no est
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quieto, sino que est continuamente movindose. El filamento no cambia la longitud pero hay un flujo de monmeros que se traducir en el movimiento celular. Los microtbulos igual que la actina son filamentos largos formados por monmeros , en el caso de dmeros de alfa/beta tubulina. Mientras que la actina se distribuye por toda la clula, los tbulos siempre parten de una zona de nucleacin y radian por toda la clula. La tubulina para polimerizar lo hace a partir de un anillo de gamma tubulina que acta como nucleacin y siempre est cerca del centrosoma, sellando un extremo y haciendo que crezca y decrezca por el otro lado. La dinmica sin embargo es la misma, polimerizan ante la presencia de ATP (en tubulina de GTP) y cuando se pierde la caperuza se despolimeriza fcilmente. Igual que en el caso de la actina el filamento est libre, en los microtbulos no, ya que es una estructura ms grande y sera un caos. Para que no suceda eso, se bloquea uno de los extremos. Pero tambin sabemos que los microtbulos tienen que ser dinmico y para ello se utiliza el capuchn, pues cuando ste se encuentra en forma de tubulina GDP decrece muy deprisa. Los microtbulos estn ms o menos siempre en el mismo sitio ya que despolimerizan muy deprisa hasta que vuelve a polimerizar el Gap de GTP y vuelve a crecer. Hay protenas que favorecen la desestabilizacin de los filamentos de actina, la estabilizacin, la polimerizacin dependiendo de lo que vaya a hacer la actina deber asociarse con unos filamentos o con otros de forma distinta mediante diversas protenas. La concentracin crtica es 0,1 mM aunque la concentracin intracelular es 10 mM, por ello la clula tiene que buscar una forma de impedir que la actina polimerice solo, y es esto lo que hacen protenas como la timosina, la cual se une a la actina ATP y la secuestra. Si la clula tiene toda la actina secuestrada tiene que haber otra protena que hago todo lo contrario, como la profilina. Cuando hay concentraciones altas de timosina, el filamento no es capaz de crecer mientras que si hay mucha concentracin de profilina libre, esta coge la actina y comienza a polimerizar. De esta manera la clula es capaz de regular con mucha precisin donde quiere y donde no quiere que crezcan los filamentos de actina. Hay molculas que participan especficamente en la desestabilizacin del filamento, como la cofilina, la cual se une lateralmente al filamento retorcindolo, de forma que desestabiliza las uniones monmero- monmero y facilita que se despolimerice. Otra protena que tiene la misma funcin es la gelsolina, que en presencia de calcio, corta los filamentos de actina y se queda unida al extremo +. Lo que hace es crear muchos extremos libres, que lo que harn ser despolimerizar. Esto provocar que todo el filamento de actina se desarme rpidamente.
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Clase 7 Protenas que interaccionan con los filamentos de actina. Alfa actinina: se une a la actina en forma de dmero colocando los filamentos de actina de forma antiparalela y entre ellas se sita la miosina para producir la contraccin muscular. Fimbrina: se une para formar haces paralelos y compactos con la actina, que participan por ejemplo en la formacin de microvilli. Filamina: ayuda a la actina para formar redes formando f actina en forma de gel. Enlaza las fibras de actina en ngulo recto. Si la filamina est a bajos niveles no se forman filopodios y las clulas no podrn moverse. En clulas cancerosas si no hay filaminas hay pocas posibilidades de metstasis ya que las clulas no pueden moverse. La actina en los filopodios crece de la siguiente manera: la miosina 1 y el complejo de nucleacin de la membrana se unen gracias a la formina que favorece la entrada a nuevos monmeros en el extremo +. En cambio para formar lamelipodios actan las protenas arp (1, 2,3) se unen a filamentos ya formados y favorecen la creacin de haces de fibras con un haz de 70 creando una lmina de prolongacin o lamelipodio. Las protenas arp: arp 2 y arp 3 son 2 protenas pequeas y globulares que se parecen a la actina y se unen a ella haciendo que crezca el filamento hacia delante. Dependiendo de en qu parte de la clula este la actina, esta har unas cosas u otras. En las fibras de estrs acta con la alfa actinina, en los filopodios acta con la fimbrina, y en el crtex de las clulas se une a la filamina. Cuando la clula va a moverse empuja la membrana hacia delante para que los filamentos de actina se dirijan hacia all. La clula primero necesita unirse al sustrato y despus se forman los lamelipodios formados por actina fusionada a GTP. Hay zonas del lamelipodio donde los filamentos de actina estn de manera ms compacta y son estructuras dinmicas, es decir se mueven, se fusionan, desaparecen Para que estas estructuras sean dinmicas es necesaria la actuacin de protenas como la actina y su asociacin a arp (la cual se sita prcticamente por entero en el frente de avance y que permitirn la polimerizacin de los filamentos de actina en el frente de avance). Los filamentos de actina son ms cortos en el frente posterior que en el frente delantero donde la polimerizacin es mayor.
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La actina se despolimeriza por detrs gracias a la cofilina, que est en el frente posterior para que los monmeros de actina vallan al frente de avance para polimerizar nuevas fibras de actina. En el frente de avance donde se forman los filopodios y lamelipodios hay una gran polimerizacin activa de actina. Tambin hay filamentos que ponen en contacto el frente de avance con el cuerpo central. Hay muchas molculas que participan en la organizacin del citoesqueleto. Cuando se ha producido la extensin gracias al lamelipodio creado en el frente de avance, este debe de unirse al sustrato para moverse despus. Se ancla mediante contactos focales al sustrato. En estos contactos focales hay fibras de estrs. Las integrinas participan en la formacin de los contactos focales. Son protenas transmembrana que participan en la sealizacin. Por la parte extracelular se anclan a la matriz. Por la parte interior estn en comunicacin con el citoesqueleto de actina. La integrina se une a la actina cuando por la parte extracelular est unida a la placa basal. En este proceso participan la vinculina que estimula a arp (2,3) para que se creen filamentos de actina. Se necesitan otras estructuras para estimular a arp (2,3) que harn crecer a los filamentos de actina. La unin de los contactos focales tambin se mueve, es decir estos contactos no son estticos, sino dinmicos. Una vez la clula se une al sustrato, esta tiene que moverse. Para ello tienen que actuar protenas motoras como la miosina 2 con la actina para contraer la clula en el frente trasero (en fibras de estrs entre los filamentos de actina). Tambin acta la miosina 1 pero en el frente de avance. La miosina 1 se asocia a la membrana haciendo crecer a los filamentos de actina en el frente de avance. Al anclarse a la membrana permite crecer al filamento por uno de sus extremos (el que est pegado a la membrana). La miosina 1 tira del filamento hacia la membrana que como no se puede mover, se mueve la membrana creando filopodios. La actina y la miosina interaccionan. La cabeza de miosina 2 en reposo en el frente trasero est unida a la actina. Cuando la cabeza de miosina une ATP se suelta del filamento y se hidroliza el ATP y se vuelve a unir 2 monmeros ms atrs. La hidrolisis de ATP produce en la cabeza de miosina un cambio conformacional para que la cabeza de la miosina vuelva a su posicin original 2 posiciones ms atrs haciendo avanzar al filamento de actina en una direccin. La repeticin de estos ciclos es el que permite el movimiento de los filamentos de actina hacia el extremo -. Esto era lo que ocurra en el frente posterior gracias a la miosina 2. La miosina 1 esta prxima al frente de avance. La miosina 2 est en el frente posterior.
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Todo esto tiene que producirse de manera coordinada para moverse hacia donde ella quiera moverse. Para ello se utilizan sustancias quimiotcticas para que la clula se mueva hacia ella y ya tenga una direccin hacia la cual moverse. Esto esta inducido por redes de sealizacin que pueden activarse de manera independiente para ver que parte de la va de sealizacin participa en el frente de avance o en el frente posterior. Regulacin de la dinmica del citoesqueleto de actina: esta llevada a cabo por protenas que unen GTP a la actina y son las rho GTP asas y son las rho, rac y cdc 42. Rho favorece la creacin de fibras de estrs. Rac favorece la formacin de lamelipodios en el frente de avance. Cdc 42 favorece la creacin de filopodios. Cuando estas molculas estn en el citoplasma estn unidas a GDP. Cuando llega una seal exterior se une a GTP y se unen a la membrana y reclutan protenas (cdc 42 recluta a WASp), se activan y estimulan a arp (2,3) y polimerizan actina para formar lamelipodios. Si se activa rho, se activa la formina y se favorece la formacin de fibras de estrs. Rho inhibe a rac en una zona de la clula (frente posterior) y viceversa en el frente anterior. Clase 8 Protenas motoras y su papel en la motilidad. Una protena motora es una enzima que es capaz de transformar la energa qumica del ATP en energa mecnica, mediante su hidrolisis. Son motores moleculares. El primer motor molecular descubierto fue la kinesina 1 hace 25 aos. Aunque el motor mayoritario en los organismos es la miosina 2 que acta en la contraccin de los msculos: se mueve la cabeza de la miosina para la contraccin muscular. La clula es una unidad dinmica. Se ha descubierto gracias a los avances en la micromicroscopa y la posibilidad de introducir molculas marcadas con fluorocromos para poder observarlas. En el movimiento de la clula hay protenas que actan siempre: los microtbulos, la actina y los filamentos intermedios. Las clulas se mueven, para ello tienen que comunicarse entre ellas. Hay interacciones fuertes y dbiles. Se mueven en grupo, pueden interaccionar con clulas distintas a sus clulas adyacentes. Las clulas tambin pueden moverse independientemente movindose hacia una sustancia quimiotctica. Pueden moverse separadas pero todas hacia el mismo sitio lo que nos indica que hay una comunicacin entre ambas. Si la clula se mueve el interior se mueve para que la clula pueda desplazarse. Pero tambin se mueve su interior porque necesita mover
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sus sustancias hacia distintos compartimentos celulares. Esto se realiza mediante protenas motoras que se mueven sobre microtbulos o sobre filamentos de actina. En todas las clulas se produce movimiento: migracin, crecimiento, en su interior ocurre en cualquier momento de la vida. Todos los mecanismos y cascadas de sealizacin son muy similares en los distintos tipos de organismo. Participan en el movimiento todo el citoesqueleto y las protenas motoras. Los filamentos intermedios no participan activamente en la migracin y en la polaridad celular. En lugar de experimentar con humanos se usan modelos como la Drosophila o los ratones, ya que en ambos conocemos su genoma y podemos manipularlo fcilmente. Para identificar por primera vez a las protenas motoras (1985), se hicieron experimentos que consiguieron identificar a la kinesina. Se descubri que las redes de actina y microtbulos, eran pasivas, estaban cerca del movimiento pero no lo vean implicarse en l. Descubrieron que el movimiento se produca porque haba otros elementos: protenas. Haba relacin entre el movimiento y los microtbulos y los filamentos de actina. Se descubri que haba dos tipos de transporte: antergrado y retrogrado: se demostr que las vesculas sinpticas se movan a travs de las redes de microtbulos de las clulas nerviosas. Se descubri que el transporte antergrado era ms rpido que el retrogrado. Se utilizaron neuronas porque haba modelos gigantes en el axn gigante del calamar. Se comenz a tener una idea de cmo se movan las protenas motoras a travs de los microtbulos y de los filamentos de actina: rodando. Tambin se investig en la divisin celular: se puede ver a simple vista el movimiento celular al microscopio. Se investig la divisin celular en el embrin de Drosophila. Una vez se produce la divisin estos ncleos creados en el centro del embrin migran hacia la periferia donde siguen sufriendo mitosis. Tambin se han estudiado los peces de colores que tienen en sus clulas unos pigmentos que son capaces de cambiar ante seales externas. Este tipo de organismos son melanforos. En el alga nitella tambin se ha estudiado el flujo citoplasmtico. Cargos: los distintos tipos sustancias movidas por protenas motoras. Es importante para el tipo de movimiento el tipo de red (microtbulos o actina), polaridad de las redes y el tipo de motor celular. Purificacin de la kinesina 1. Un extracto es la obtencin de un enzima fuera de las clulas para poder acceder a l. Cogemos un tejido donde este la enzima y se purifican todos los elementos que participan en la motilidad pero no se movan las vesculas. Despus adems de todo lo anterior, pusieron el citoplasma de las clulas
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nerviosas y las vesculas si se movan. Tambin pusieron despus todo lo anterior pero en lugar de ATP tiene AMPpnp (anlogo del ATP no hidrolizable por lo que no produce energa), as las vesculas se unan a los microtbulos pero no se mueven. As llegan a la conclusin de que las vesculas se movan gracias a la hidrolisis del ATP y de una sustancia que se encuentre en el citoplasma. Para purificar la kinesina se centrifugo todo y todo lo que era solido se va hacia abajo y el citoplasma se quedara arriba. Entonces sabemos que la protena motora desconocida est unida a los microtbulos y la separamos de los microtbulos y as obtenemos la kinesina que era la protena motora que mova las vesculas sinpticas sobre microtbulos. Estructura de la kinesina. Es parecida a la miosina 2. Clase 9 La clula es un entorno dinmico. Cada protena motora solo puede moverse en una orientacin determinada y sobre un tipo de fibras determinada. Para que las protenas motoras puedan mover a las sustancias a transportar es necesaria la hidrolisis de ATP. El movimiento de la protena motora con su cargo se realiza de la siguiente manera: se une la protena motora al filamento mediante la hidrolisis de ATP, esta sufre un cambio conformacional y se libera del filamento, despus vuelve a su estado conformacional inicial y vuelve a unirse al filamento. As se mueven las sustancias desde un lado de las fibras hasta el otro mediante protenas motoras. Los motores y las redes de filamentos participan en el trfico intracelular. La kinesina fue el primer motor que se descubri. Son motores citoesquelticos. Tienen que ver por ello con las redes citoesquelticas. La kinesina se parece a la miosina. La kinesina se estudi y se descubri que era un heterotetrmero con dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras. Tiene un dominio cataltico para producir la hidrolisis del ATP y unirse a la red. Es una molcula grande. Es ubicua es decir est en todas las clulas al igual que la miosina. Tiene 2 dominios uno motor: donde se une al ATP y es en la cadena pesada. Las cadenas pesadas estn unidas por alfas hlices (coil) enrolladas proporcionando rigidez a la estructura. En el otro polo esta la zona terminal donde est la zona iak que est totalmente conservada en todos los motores que hay. Aqu estn las cadenas ligeras. Esta zona se mantiene porque es indispensable para la movilidad. Podemos estudiar la funcin de cada parte de la protena: el dominio motor (400 aa), tallo, zonas de bisagra, dominio iak, dominio distintos con funciones distintas (plegamiento unin a las protenas, inactivacin). En la zona terminal es donde se une a la sustancia se va a transportar. Al descubrirse su secuencia total se pudo conocer su estructura completa.
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De las 2 cabezas, una est unida al microtbulos y la otra se mueve para que el cargo que lleve en el otro lado se mueva a travs del microtbulos. Cuando se identific la kinesina se investig para descubrir ms y se descubri que haba 3 grupos: miosina 2 o muscular (hexmero), kinesina y las dinenas (son ms complejas, tiene 11 subunidades. Tiene 2 cabezas globulares o dominios motores de unin al ATP y despus muchas subunidades). En una clula hay muchos motores celulares. En levaduras por ejemplo hay 6 kinesina 5 miosina y 1 dinena. En mamferos hay ms de 40 kinesinas, ms de 40 miosinas y 12 dinenas. Todos estos motores son ubicuos y hay otros especficos para cada proceso. El dominio motor esta tambin totalmente conservado, es decir es igual en todas las protenas motoras pero pueden cambiar de sitio (n terminal, en medio o c terminal aunque la mayora est en el extremo n terminal). Los motores positivos tienen su dominio motor en su gran mayora en el extremo n terminal. Los negativos lo tienen en el extremo c terminal. El resto de partes de las protenas motoras varan mucho de unas a otras. Las regiones rgidas son muy importantes para el transporte de las vesculas. Tambin son muy diferentes los dominios terminales ya que transportan distintos tipos de molculas, proporcionando especificidad a las protenas motoras. Si el dominio motor est en el centro suele generar tensin generalmente en la mitosis, sujetando los cromosomas. 14 tipos de kinesinas. Son motores positivos y algunos negativos. Miosinas: las ms conocidas son la 1 2 y 5. Cada una est implicada en un proceso celular: 1: lamelipodios, 2: contraccin muscular y 5 transporte. Se transportan sobre filamentos de actina en lugar de sobre microtbulos. 15 tipos de miosinas. Son motores positivos. La miosina 2 es el nico motor que siempre acta como filamentos, no como una nica molcula en el msculo. Est formada por 2 cadenas pesadas y 2 parejas de cadenas ligeras. Tiene su domino motor en el extremo n terminal y despus hay un dominio helicoidal. Las cadenas ligeras se encuentran asociadas a los dominios motores y tras ellos est la zona de bisagra o cuello. Las kinesinas son protenas motoras basadas en microtbulos. Suelen tener el dominio motor en el extremo n terminal y se dirigen hacia el extremo + de los microtbulos. Las dinenas son las protenas motoras minoritarias. Tienen dos dominios motores (es distinta de la flagelar), tiene cadenas ligeras intermedias y pesadas y forman 11 subunidades. Son 4 o 5 tipos. Son motores negativos que se mueven sobre microtbulos. Principalmente se pueden clasificar en dos grandes grupos:
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citoplasmticas: estn en casi todas las clulas eucariotas y contribuyen al transporte de vesculas y a la localizacin del aparato de Golgi. Otro tipo son las axonemales que estn especializadas en el transporte de microtbulos en los cilios y flagelos. Similitudes de los motores: cabeza con dominio cataltico y unin al ATP y otro sitio de unin al cargo, parte rgida y parte flexible. Suelen ser muy parecidas en las cabezas pero en el cuello y el tallo de los motores no est conservado. Los motores celulares transportan vesculas, organelas o cromosomas (de las miosinas solo la 5). Las miosinas 3,9 y 10 realizan el transporte mediante la traduccin de seales. La miosina 1 organiza el citoesqueleto se ancla en la membrana plasmtica y forma los filopodios. Clase 10 Fundamentalmente en el caso de Drosophila, kinesina 1 daba fallos en el transporte axonal como consecuencia de una enfermedad degenerativa y por lo tanto se vea una etapa de alarma. La kinesina 1 en el caso del ratn este muere, mientras que en los humanos depende de su mutacin, que provoca enfermedades neurodegenerativas o tambin relacionadas con degeneracin muscular. La secuencia de los dominios motores est altamente conservadas y los tallos y las colas no. El movimiento siempre es muy direccional, haba motores positivos o negativos segn el extremo de la red a la que vayan. Transportan distintas cargas como filamentos en el caso de la miosina II en el msculo, o bien vesculas, mitocondrias, complejos cromosmicos y complejos proteicos. El motor ms rpido es la miosina II que se mueve como 4.5 micrometros por segundo. La miosina II especfica de msculos de contraccin lenta o la miosina II cardiaca cuyas velocidades son 10 veces menor que la miosina II especfica de msculos de contraccin rpida. La miosina I es pequea y su velocidad es 100 veces menor que la velocidad de la miosina II especfica de msculos de contraccin rpida. La quinesina tiene una velocidad de 1.2 micrometros por segundo. La miosina II es una protena hexmero con dos subunidades que presenta distintos tipos con distintas velocidades debido a la cabeza de las mismas, que presentan una actividad ATPasa, que transforma energa qumica en energa mecnica, distinta. Existe nuna relacin directa entre velocidad y cantidad de hidrlisis por parte de la ATPasa.
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La miosina II tiene 4 subunidades reguladoras, la miosina XV tiene 10 subunidades reguladoras, la quinesina tiene 2 subunidades reguladoras y la dinena tiene 7. Todo esto se conoci por un experimento en el que pegaban en un cubre los motores y aadir filamentos fluorescentes marcados, de esta forma se poda observar una secuencia en la que el filamento se una en presencia de ATP a los motores y de esta forma, se produca movimiento. NO TODOS LOS MOTORES SE MUEVEN A LA MISMA VELOCIDAD. Algunos motores provocan tensin o mantienen estructuras, pero en general se mueven y transportan vesculas. Dentro de una clula en reposo, dentro de un fibroblasto, si teimos su interior, veramos que la miosina IIA en el frente de migracin y que la miosina IIB en el frente de retraccin. Las ATPasas son dependientes de actina y de tubulina, la miosina IIA es ms rpida que la miosina IIB debido a una mayor actividad ATPasa y una mayor afinidad a la actina. La ausencia de miosina IIA permite que la clula viva, la clula es capaz de moverse y la miosina IIB est localizada en distintos puntos incluyendo el frente de migracin. En el caso de una clula en divisin, la miosina II se localiza en el lugar de la divisin celular y la separacin, la miosina II se encuentra en las zonas donde se da la mitosis y la miosina I se hallar en los extremos. La miosina II funciona en forma de filamentos en cuyos extremos estn las cabezas de miosina y que se hallaran entre los filamentos de actina. La quinesina est dispuesta por toda la clula cuando esta est en reposo. El cargo se sita de manera distinta si est unida a ATP o a ADP. El movimiento de estos motores con sus cargos y unidos a filamentos se corrobor con la cristalizacin de los motores. En el caso de la quinesina, lleva a cabo un movimiento giratorio, intercalando distintos sentidos, para poder evitar un enrollamiento. Esto tambin ocurre con la miosina V. La miosina II adopta distintas formas segn se encuentre unida a ATP o a ADP y lleva a cabo un movimiento ondular, por lo que sus filamentos pueden llegar al centro. Hablamos de un movimiento vascular en el caso de unin a dos filamentos por parte de motor. Los motores se mueven de manera procesiva, ya que lo hace con la misma vescula, como sucede con la quinesina 1 o la miosina V, cosa que no sucede con motores no procesitos que son aquellos que saltan.
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Clase 11. Para eliminar una protena sin modificar el gen que codifica para ella, se utiliza un anticuerpo, que se pega a la protena y esta se elimina, otra forma sera eliminar el ARN mensajero, introduciendo en la clula una secuencia complementaria al anticuerpo llamada antisense. Gracias a esto se pudo conocer que la quinesina 1 estaba implicada en el transporte antergrado axonal, en el transporte macromolecular como los cromosomas o complejos proteicos y un papel fundamental en la mitosis. Tambin se pudo mutar el gen o eliminarlo, pero esto resultaba mucho ms caro.
Cuando desaparece la quinesina 1 en Drosophila, esta tiene parlisis distal progresiva, presenta una grave distrofia neurodegenerativa, debido a una acumulacin de mitocondrias y de vesculas, que se encuentra en relacin con el transporte axonal y con las propias sinpasis entre neuronas.
Los motores tienen dos estados, uno activo y otro inactivo. En el caso de la quinesina 1 (tetrmero con dos cadenas pesadas y con dos cadenas ligeras, con el dominio del tallo, regin ATPasa y con zonas donde se rompa la estructura de hlice y era menos rgida, destaca la regin YAK con isoleucina, lisina y alanina situada cerca de la zona de cadenas reguladas), el motor puede estar inactivo si se impide la entrada del ATP, y de esta forma no se puede mover. Para activarse necesita la unin del cargo y la interaccin con el microtbulo. En algunos casos, la activacin solo necesita la unin al cargo y en otros adems, necesita modificaciones como fosforilaciones o cambio de pH para la activacin del motor. A veces tambin hay protenas adicionales que participan en el proceso, como sucede en Drosophila con CED-1.
Para un mismo motor, existen diversos adaptadores (partners) distintos. En el caso de la miosina V tiene muchos adaptadores sinaptobrevina, MAP-27, sinaptolisina, calmodulina-kinasa, A ella tambin se le une la cadena pesada de la quinesina y la cadena ligera de la dinena. Esto se puede explicar por la red de microfilamentos que es mucho ms enrevesada que la red de microtbulos, la cual es muy lineal.
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Un motor se une a muchos adaptadores a travs de diversos sitios de unin en la cola, con los que mueve diversos cargos, el sitio de unin del adaptador al motor vara y un motor se une a otros motores.
Las protenas de andamiaje o adaptadoras son multifuncionales, con diversos dominios de unin tanto para la quinesina, como para protenas codificadoras o para receptores transmembrana que les permiten conectar con la membrana. La protena adaptadora tiene lpidos de unin par la membrana y tambin permite la unin de protenas reguladoras.
La unin entre motor y vescula es muy variable y esto ha sido estudiado en levaduras. En estas, la miosina V mueve muchos cargos diferentes y est relacionada con procesos secretores y en ellas, hay una vacuola muy grande. Cuando se produce la divisin de la levadura a travs de una gemacin, la vacuola migra y ocupa la parte de la yema que se est formando como consecuencia de la gemacin. En este proceso est implicada la miosina V con dos dominios, uno para la vescula secretora y otro para la vacuola. Todo esto est regulado por la protena MAP-7. Es citable la capacidad del transporte de cascadas de reacciones, hasta que se llega al ncleo para disparar la expresin de un gen, gracias a protenas de anclaje.
Las zonas de las sinapsis de las clulas nerviosas tienen en el axn microtbulos y cuando llegan a la zona de la sinapsis tienen microfilamentos. En muchos casos, las protenas o vesculas que transportan tienen motores de un tipo y del otro. Las vas de microtbulos son ms rpidas que las de los microfilamentos. La organela est preparada para viajar con distintas redes.
La fuerza total que tiene que generar un sistema para mover la vescula requiere muchos motores a la vez. Clase 12 El movimiento ciliar tiene 2 fases: Batido efectivo: esta recto y se dobla. Recuperacin. Una vez doblado, se pega a la superficie y se vuelve a estirar. La partcula que ha arrastrado el cilio se queda donde se ha movido.
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El flagelo se mueve por ondas, una principal y una inversa que se propaga a lo largo del flagelo. La curvatura es lo que produce el movimiento. En una superficie ciliada, el movimiento ciliar est coordinado. El axonema del flagelo son 9 dobletes de microtbulos perifricos (uno completo el a y el b incompleto. Del a sale un brazo interno y uno externo. Del interno tiene 2 motores y del externo 3 motores. La nexina esta entre los microtbulos a. tambin los monmeros a unen al centro con protenas radiales) y 2 microtbulos centrales. Hay otro tipo de cilios son 9+0 y a veces no son mviles ya que no tienen brazos de dinena, otros si los tienen. Los dobletes del cilio se continan con los tripletes del centriolo o cuerpo basal. Los cilios y los flagelos se diferencian en su longitud, tienen el axonema ambos. Entre la membrana y el axonema en el flagelo hay fibras longitudinales y alrededor tienen un collar de mitocondrias. Clamidomonas: organismo unicelular con 2 cilios que se insertan con un ngulo. Une sus cilios para mover al organismo. Los puentes de dinena, nexina y los radios estn a una cierta distancia. La dinena se mueve hacia el extremo negativo de los microtbulos del cilio movindolo hacia abajo. Para doblar el cilio la dinena intenta subir una pareja de microtbulos, pero la nexina no le deja y entonces se dobla. Los brazos de dinena en un movimiento no estn todos activos, solo se activan los de una parte y los de la otra parte estn sueltos. El movimiento coordinado de los cilios se debe a la ordenacin en el mismo sentido del par central. Formacin de los cilios: las clulas que tienen un cilio o cilio primario. El centrosoma de la clula g0 se mueve uno de los centriolos y se coloca en la membrana plasmtica y sus microtbulos a y b polimerizan para formar un nuevo cilio. Si esta clula se dividiera se pierde el cilio y el centriolo vuelve a tomar la funcin del centrosoma y se replica en la fase s del ciclo celular. Despus se forma el huso mittico. En clulas madre que tambin tienen cilio primario (la explicacin anterior) cuando la clula madre se divida puede dar una clula madre o una que se va a diferenciar en otra cosa como una clula del odo interno (cilio primario es el quiniocilio), o una clula ciliada (con muchos cilios), para formar todos estos cilios puede pasar que del centrosoma inicial, los centriolos formen procentriolos (muchos) y que cada uno de lugar a un cilio formando su cuerpo basal. En otros casos pueden formarse los cilios a partir del material pericentriolar y a partir de l se forman muchos
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centriolos que emigraran a la membrana plasmtica para formar el cuerpo basal de los cilios. Una vez en contacto con la membrana los microtbulos a y b empiezan a polimerizar para formar el cilio. Se inicia la polimerizacin de los dobletes por el extremo +. Suben por entre el espacio de la membrana plasmtica y los dobletes todos los elementos del axonema por un transporte intraciliar o intraflagelar gracias a la kinesina 2. Tiene que haber un recambio de los componentes por lo que acta la dinena especial para eliminar los componentes antiguos y son restablecidos por la kinesina de nuevo. Los componentes que tienen que subir son protenas, membrana las partculas del transporte intraciliar (IFT) son los componentes que van a la punta y all se incorporar. La membrana del cilio es distinta del resto de la membrana plasmtica y separndolo de la membrana del cilio esta el complejo del poro ciliar el cual reconoce las sustancias que tienen que entrar al cilio y las deja pasar. Las partculas ift pueden ir en varias direcciones. Los exosomas son vesculas que se geman de las membranas de los cilios primarios de algunas clulas. Los cilios primarios suelen tener una funcin sensorial produciendo una respuesta en la clula que los tiene gracias a win y hegesot. Clamidomonas: marcamos sus flagelos en 2 distintas en una los cortamos un poquito y se regeneran. Se fusionan en la reproduccin sexual y dan lugar a un individuo con 4 flagelos. Si se espera un tiempo los flagelos cortados recuperan su forma pero con la del otro color ya que se haba inhibido la sntesis de las protenas flagelares del individuo al que le hemos cortado los cilios, pero al unirse aparece la maquinaria del individuo normal.
Clase 13 Se dobla por su base esa es la fase de batido efectivo. Ejemplo: imaginaos que delante de mi mano hay una partcula Qu hace el movimiento de batido efectivo? Mueve la partcula. La segunda fase del movimiento ciliar es una fase de recuperacin entonces el cilio se pega a la superficie y se va doblando hasta llegar a su posicin inicial (antes de empezar a doblarse). Estas son las dos fases. En la de recuperacin la partcula que ha empujado el cilio en la fase de latido se queda en el sitio y no es arrastrada por el cilio que se pega a la superficie, esta es la diferencia entre las dos fases del movimiento ciliar.
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El movimiento del flagelo es distinto, va haciendo ondas que se propagan a lo largo de la longitud del flagelo. Posee dos ondas: una onda principal y una onda inversa, las dos ondas se van propagando a lo largo de la longitud del flagelo. Tanto el movimiento ciliar como el flagelar se reducen a que el cilio se doble o que el flagelo tenga dobleces en unos puntos o en otros, esta curvatura del cilio o del flagelo se va transmitiendo de unos sitios a otros del cilio o del flagelo. Luego el movimiento del cilio y del flagelo se reduce a que se cubre la estructura del cilio y del flagelo en determinados puntos. Si vemos unas superficies ciliadas, por ejemplo las superficies del epitelio respiratorio, vemos como el movimiento ciliar est coordinado no bate cada cilio para donde quiere sino que est muy organizado. Si cada cilio est en una fase distinta del movimiento ciliar quiere decir que son metacrnicos, sin embargo si todos los cilios estn en la misma fase del movimiento ciliar decimos que son sincrnicos. La organizacin sincrnica y metacrnica a la vez hace que el movimiento de partculas de polvo vaya siempre hacia fuera del epitelio respiratorio. Tambin tienen cilios las clulas nodales en el embrin; este cilio bate y va moviendo partculas y molculas, todo este movimiento est relacionado con el establecimiento de la simetra en la estructura de derecha-izquierda del embrin.
Estructura del cilio o del flagelo.

Tanto el cilio como el flagelo tienen una parte comn que es el axonema. Tenemos la membrana plasmtica, 9 dobletes de microtbulos y una par central, esto es lo que llamamos axonema 9+2. El par central tiene una vaina y de los dobletes un microtbulo el A es entero y el B est como adosado al A y no tiene todos los dmeros de tubulina. Del A salen los brazos de dinena, de cada microtbulo A sale un brazo externo y un brazo interno. La dinena ciliar son distintas, las del brazo interno tiene dos cabecitas, es decir, tiene dos motores y la del brazo externo tiene tres motores. Uniendo el microtbulo A de un doblete con el microtbulo B del adyacente encontramos los puentes de nexina. Tambin del microtbulo A sale un radio que va hacia el par central, que tiene su vaina y que tiene y un puente. Hay otro tipo de cilios que son 9+0, es decir, que no tiene par central; estos cilios a veces no son mtiles, no se pueden mover, porque no tiene brazos de dinena, aunque tambin hay cilios 9+0 que no tiene par central pero que si tienen brazos de dinena y que si se mueven, esto es ms raro. Cuando son 9+0 suelen ser inmviles y no tienen brazos de dinena. Por debajo del cilio est un centriolo que se denomina cuerpo basal del cilio y es el que le ha dado origen, el que ha formado el cilio. Los dobletes del cilio que tenan
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microtbulos A y B se continan con los tripletes del centriolo o cuerpo basal el centriolo tiene tres microtbulos, es decir, est formado por 9 tripletes de microtbulos y el microtbulo C se termina cuando comienza el cilio. El cilo est metido en el citoplasma. El centriolo en su parte ms distal al microtbulo forma una estructura en rueda de carro. Un cilio de un flagelo se diferencia: En la longitud, los cilios son cortitos tiene pocas micras de longitud y el flagelo es largusimo, por ejemplo los flagelos de los espermatozoides dependiendo de la especie puede ser muy largo. Pero ambas estructuras tienen el axonema 9+2. Entre el axonema y la membrana plasmtica en el cilio no hay nada, hay un espacio muy pequeo, mientras que en el flagelo hay una serie de fibras longitudinales, tambin hay algunas circulares y en la parte ms cercana al ncleo encontramos el collar de mitocondrias.
Clamidomonas.
Es un organismo unicelular que tiene dos cilio, se les llama a veces flagelos pero son cilios porque no tienen fibras longitudinales ni mitocondrias. Tiene dos cilios insertados con un cierto ngulo.
Mecanismo molecular del movimiento ciliar.

Los brazos de dinena estn situados a ciertos intervalos, no estn todo el rato, ese intervalo es siempre constante. La nexina tambin est a un cierto intervalo que es distinto de al que se sitan los brazos de dinena. Los radios tambin estn situados a determinados intervalos. Entonces lo que nosotros vemos realmente en el esquema donde vemos a la vez los brazos externos e internos de dinena, la nexina y los radios no se da en la realidad porque a lo mejor el plano de corte que hemos cogido slo se ve la dinena o viceversa, pero que no los veamos no implican que no estn. El esquema junta todo pero los cortes transversales de cilios no muestran todos los componentes pero esto no implica que no estn. (Todo esto se ve en una de las diapositivas). El dominio motor del brazo externo de la dinena est anclada all microtbulo A de un doblete hace contacto en determinados momentos con el microtbulo B del doblete adyacente y lo mueve. Como la dinena es un motor negativo se va a mover hacia el extremo negativo de los microtbulos del cilio que estn orientados con su extremo positivo en la punta, por lo que la dinena si es un motor negativo va a bajar un dmero de tubulina hacia el centriolo.
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Cuando el cilio se dobla y no hay nexina ocurre lo siguiente queees que una vez que el brazo de dinena se ha desplazado un dmero y vuelve a su posicin inicial desplaza un dmero al microtbulo B, es decir; el microtbulo B se desplaza un dmero hacia el extremo positivo. Pero si est la nexina lo que sucede es lo siguiente, no lo pueden desplazar y es cuando el cilio se curva. Este es el concepto de cmo se mueve el cilio. Este experimento se ha hecho in vitro se disolvi la membrana plasmtica del cilio, se accedi al axonema, se proteoliz especficamente la nexina, se aadi una sustancia para que se genere el movimiento con la dinena y se vio este movimiento que se denomina telescpico, cuando se mantuvo la nexina lo que se vio es que se doblaban unos dobletes de microtbulos respecto a otros. Si el cilio se desplaza hacia un lado o hacia otro los brazos de dinena que intervienen son los que se localizan en el lado opuesto al que se va a doblar el cilio. Estos son los brazos que estarn activos, uniendo sus motores al microtbulo B adyacente y haciendo que se muevan. Los de la zona opuesta han de estar suelto, es decir, que no contactarn. Esto se ir transmitiendo a lo largo de la longitud del cilio o del flagelo conforme la curvatura se desplace en la longitud. La nexina es una protena que se extienda, hace como los muelles, se estira y este estiramiento es el que impide que se desplacen hacia arriba o hacia abajo unos dobletes respecto a otro, haciendo por tanto que se doblen. En las superficies ciliadas la coordinacin de todos los cilios la lleva a cabo la orientacin del par central, ms concretamente el sentido del par central coordina el sentido del batido ciliar.
Cmo se forman los cilios.

Hay muchos cilios que no se mueven pero que poseen funciones muy importantes, muchas veces son funciones sensoriales, ya que en la membrana del cilio hay receptores que estn sensando el ambiente. En nuestro cuerpo casi todas las clulas tienen un cilio, esto es algo que hasta no hace mucho no se tena seguro. Antes se estudiaban las clulas ciliadas, las que tenan bastantes cilios y que estaban localizadas en determinados tejidos como el epitelio respiratorio, etc. Pero cuando se ha ido empezando a ver con ms detenimiento se ha visto que todas o casi todas las clulas de nuestro cuerpo incluidas las neuronas tienen un cilio cuando solo hay un cilio se suele llamar cilio
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primario y esas no se llaman clulas ciliadas, en estas clulas que tiene un cilio cuando la clula empieza a diferenciarse, en la fase G1 del ciclo celular, sale del ciclo y comienza la fase G0 (una vez diferenciada). El centrosoma de la clula que est en G1 se mueve, uno de los centriolos, el ms antiguo, se coloca debajo de la membrana plasmtica y es el que va a formar el cilio porque sus microtbulos A y B de cada triplete van a polimerizar. Si esta clula que se ha diferenciado en muchos casos nunca ms se va a dividir, pero algunas clulas diferenciadas pueden volver al ciclo si tiene una serie de seales; para que la clula en la fase G0 vuelva al ciclo e necesario que la clula retraiga el cilio, lo pierda, y entonces el par de centriolos, en el cual uno de ellos estaba formando el cuerpo basal del cilio, vuelve a tomar la posicin del centrosoma y se duplica en la fase S del ciclo, posteriormente pasaremos a tener cuatro centriolos, una vez pasado la fase S en G2, estos centriolos son los que forman el huso mittico. Por lo tanto el proceso de ciliognesis cuando slo hay un cilio consiste en que un centriolo se coloca paralelo a la membrana plasmtica y empieza a polimerizar. Las clulas madre tambin tienen cilio primario y el proceso de formacin es el explicado anteriormente. Cuando esta clula se divida dar o bien una clula madre igual que ella que formar tambin un cilio primario, o bien una clula que se va a diferenciar en otra cosa porque ya no es clula madre, esta clula se puede por ejemplo diferenciar en una clula del odo interno que tiene tambin un cilio primario que es el quinocilio (es donde detectamos el sonido), tambin puede diferenciarse en una clula del nodo que tambin tiene cilio primario o una clula ciliada que tenga muchsimos cilios. En este ltimo caso el mecanismo de formacin de los cilios es un poquito distinto; puede suceder que quede el centrosoma original que d lugar al centriolo. Hay dos caminos: Del centrosoma original, un centriolo forma un procentriolo, otro procentriolo, etc. y el otro centriolo forma otro procentriolo y otro procentriolo, etc., es decir, de cada centriolo se forman muchsimos procentriolos, pero a partir del centrosoma original; todos estos procentriolos primero son pequeitos y luego se terminan de formar y emigran a la porcin apical de la clula donde cada centriolo ya maduro forma un cilio. Esto quiere decir que desde el centrosoma de esa clula (la va centriolar) se forman muchsimos centriolos y cada centriolo va a ir a formar un cilio como cuerpo basal del cilio. En otros casos no es a partir del centriolo, sino que es a partir de una estructura densa que est formada por material pericentriolar, esa masa densa donde se originaban los microtbulos, se originan muchos centriolos formando una estructura radial que se llama el deltorosoma? Pero aqu no hay un centriolo, por eso esta va se llama acentriolar.
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El resultado de ambas vas es el mismo, tenemos muchos centriolos que van a ser los cuerpos basales de muchos cilios que se van a formar en los epitelio ciliares. Por tanto tenemos dos vas de formacin de cilios siempre a partir de un centriolo que es su cuerpo basal: una cuando el centriolo es parte del centrosoma que puede ser o que uno de los centriolos sea el cuerpo basal del cilio (si es un solo cilio) o cuando el centriolo origina muchos centriolos que darn lugar a todos los cilios, y la va acentriolar a partir de un material denso se originan mltiples centriolos que van a la membrana plasmtica y empiezan a polimerizar los microtbulos A y B, dando lugar a los dupletes que formaran los cilios. Los fotorreceptores de la retina tienen un segmento que corresponde a una estructura del cilio, y en la parte externa es donde se localizan los fotorreceptores. La polimerizacin de los dobletes se hace incorporando dmeros de tubulina por el extremo positivo que es el que polimeriza bien, para ello tienen que subir en el espacio que queda entre los dobletes y en la membrana plasmtica los dmeros de tubulina los lazos de nexina, los bracitos de dinena, los radios, la quinesina, todos los elementos del axonema tienen que subir e incorporarse a la punta.
Transporte intraciliar o intraflagelar.

Mientras crece el cilio predomina el transporte de la base a la punta y este transporte como es hacia el extremo positivo lo realiza la quinesina (protena motora), en concreto la quinesina 2, esto es lo que forma el transporte intraciliar que es igual al interflagelar. Cuando tenemos al cilio en su longitud normal, vemos que en las clulas ciliadas la longitud de todos los cilios es la misma, por tanto la longitud de los cilios est regulada. Y en estos cilios que se mantienen a lo largo del tiempo siempre con la misma longitud tiene que haber un recambio de los componentes, porque los componentes tienen una vida media; por lo tanto el transporte intraciliar sigue funcionado aunque ya el cilio no cambie de longitud para reciclar los componentes, entonces, hay un transporte hacia la punta llevada a cabo por la quinesina 2 pero los componentes viejos que se han de reciclar bajan por el axonema en direccin al centrosoma por una dinena, ms concretamente una dinena especial deistinta de la dinena ciliar que forma los bracitos. El cilio se tiene que reabsorber, cuando una clula que se ha diferenciado vuelve a entrar en el ciclo celular para dividirse. Este cilio se pierde o reabsorbe tambin debido al transporte intraciliar, se van eliminando poco a poco los elementos desde la punta y bajan hacia la placa basal. Los componentes que forman el cilio han de llegar primero al cuerpo basal y luego ir ascendiendo a partir de l, Qu tipos de
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componentes? Por ejemplo los dmeros de tubulina que se sintetizan por ribosomas del citoplasma; tambin tiene que moverse componentes membranosos porque para que crezca el cilio tiene que haber un aporte de membrana, ese aporte de membrana viene de vesculas que se forman el Golgi y que se dirigen a exocitarse a la base el cilio y as hay membrana disponible para que crezca el cilio mientras se polimerizan los microtbulos del axonema; estas vesculas se transportan por una dinena citoplasmtica que es distinta de la dinena del transporte intraciliar y que es distinta tambin de la dinena que forma los bracitos. El transporte intraciliar se da entre el transporte que queda entre el doblete y la membrana plasmtica. La dinena y la quinesina transportan componentes denominados partculas del transporte intraciliar (IFT la F viene de flagelos porque primero se descubrieron en los flagelos que son ms grandes). Todos los componentes van siendo movidos en un sentido o en el otro, es decir o hacia la punta o hacia el citoplasma. La membrana del cilio es un dominio de membrana distinto a todo el resto de la membrana, tiene una composicin especfica, para que haya un dominio de membrana tiene que haber algo que separe los lpidos de cada dominio de membrana, esto se encuentra en la base del cilio y consiste en un complejo del poro ciliar (impide que los lpidos y protena de la membrana ciliar entren en contacto con los lpidos y protenas de la membrana plasmtica), que posee unas fibras impidiendo el paso a la membrana plasmtica. Las vesculas del Golgi se exocitan en la membrana ciliar, son reconocidas por protenas especficas del dominio de membrana ciliar, pasa el complejo del poro ciliar y los componentes de las protenas IFT tiene que pasar una especie de aduana en este complejo del poro ciliar, todo est regulado, no se deja pasar libremente ni componentes de membrana ni componentes que van a pasar a formar parte el axonema. En la punta del cilio hay una estructura que es la que modifica, hace la reversin de en vez de un transporte hacia la punta un transporte hacia la base. Las partculas IFT se sueltan del motor, se reincorporan al axonema o bien cambian de direccin. Las partculas que se estn reciclando se sueltan del axonema, toman la direccin de la dinena que se est encargando del transporte de estas partculas.
Exosomoas.
Los exosomas son unas vesculas que geman la membrana plasmtica de algunas clulas y especficamente se ha visto que geman de las membranas de estos cilios primarios, de esa variedad de clulas que en nuestro organismo poseen estos cilios primarios. A estas vesculas o exosomas se les est dando muchsima importancia
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en medicina por varios motivos: primero porque eran un elemento desconocido, segundo porque llevan componentes de la clula que pueden influenciar a clulas cercanas. En la membrana ciliar, que como hemos dicho que es un dominio de membrana especial, hay receptores por los cuales los cilios, especialmente los cilios primarios, tiene una funcin sensorial por el que los cilios tensan el ambiente, se unen a determinados ligandos o molculas del medio extracelular y producen una respuesta en la clula que tiene ese cilio primario generalmente a travs de la va de Wing y de la va Hetch Hold.? Clamidomonas. Tenemos dos clamidomonas con sus dos flagelos, a uno de ellos lo marcamos con rosa y al otro de ellos los marcamos con verde, los hemos marcado con dos clorocromo diferentes para verlos. Al rosa le hemos cortado un trocito de sus flagelos y los flagelos de clamidormonas regeneran hasta recuperar esa longitud normal del flagelo que es tpica, las clamidamonas adems se fusionan en el proceso de reproduccin sexual y dan lugar a un clamidomonas con cuatro flagelos de cada par de cada uno de los individuos que se fusionan. Si despus de una vez fusionados esperamos un tiempo vemos como los dos cromosomas que estaban marcados con verde o rosa recuperan la longitud normal y los vemos marcado con molculas de fluorocromo verde, esto es porque en este experimento lo que hemos hecho es inhibir la sntesis de protenas del que tenamos marcado en rosa. Si nosotros hemos inhibido la sntesis de protenas del individuo al que hemos cortado uno de los flagelos, pero hemos impedido que siga sintetizando protena, componentes del cilio, del axonema; este otro individuo que tiene los flagelos intactos y al que hemos marcado con fluorocromo estas protenas concretas, cuando hagamos la fusin lo que pasa es que al ponerse en contacto los dos citoplasmas ahora estos dos flagelos pueden transportar hacia la punta componentes que estn marcados y que son del otro individuo, en este experimento es en el que vemos la punta verde cuando antes eran rojos. Otra cosa que se ha hecho con clamidomonas muy fcilmente es cortar los flagelos, quitar la membrana plasmtica, y cuando ya tenemos slo el axonema hacer un gel bidimensional, una cromatografa bidimensional que se corre primero por carga y luego por peso molecular, as se identificaron 200 manchitas que corresponden a 200 polipptidos, esos 200 polipptidos unos corresponden a los dmeros de tubulina, a la protenas asociadas a los microtbulos, etc., es decir, todo el componente del axonema. Adems las clamidomonas son organismos a los que se
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pueden inducir mutaciones muy fcilmente, entonces son algunos mutantes que son inmviles y en seguida se ve que se ha mutado algo que no se mueve, se selecciona ese individuo, se corta los flagelos, se corre un gel y entonces vemos que polipptidos nos faltan; tambin podemos hacer microscopa electrnica en esos flagelos y correlacionar que polipptidos faltan y que estructuras del axonema faltan.
Ciliopatas.
Son enfermedades que tienen que ver con alteraciones, mutaciones en el cilio. Las que ms vamos a ver son las que estn relacionadas con el batido ciliar en el epitelio respiratorio. Si el flagelo del espermatozoide no se mueve hay esterilidad masculina. Pero hay otras muchas enfermedades que no conocemos an que estn relacionadas con las alteraciones de los cilios y estas se refieren generalmente a los cilios primarios. Por ejemplo las clulas nodales si estn alteradas hay problemas en el desarrollo embrionario. Por ejemplo, si en las clulas renales que poseen cilio primario este cilio no es correcto se da la patologa denominada rin poliqustico. Si el cilio del fotorreceptor tambin est alterado hay ceguera, por ejemplo la retinitis pigmentosa esto se debe a un fallo en el transporte intraciliar. Hay muchas enfermedades que ahora se estn viendo que estn relacionadas con alteraciones en la estructura o en los cilios primarios de los no mtiles.
Clase 14 Como el transporte que se produce en un punto de la clula de molculas orgnulos y estructuras es lo que determina como estn localizadas las distintas organelas dentro de la clula. Luego veremos el transporte a lo largo del axn que se denomina transporte axoplsmico que se ha estudiado mucho y que tiene muchsima importancia en lo que ha llegado a la sinpsis a otras neuronas y en lo que de la sinpsis vuelve al soma para arreglarse, y realizar determinados mecanismos. Veremos tambin un poquito del control y regulacin de este transporte y lo explicaremos mediante los grnulos de pigmento que se localizan en los melanforos, de los peces sobre todo
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porque son muy fciles de estudiar, no hay que manipular nada y esos grnulos al tener melanina se ven perfectamente. Los nanotubos son unas estructuras que se han descrito recientemente y que tambin tiene importancia en el transporte intracelular e intercelular como vesculas o partculas que se estn transportando dentro de la clula pueden pasar a otras a travs de estas estructuras de tamao nanomtrico, es decir, que hasta que no ha habido microscopios suficientemente pequeos que pudieran analizar estas estructuras de una manera especfica no se ha podido ver.
Transporte intracelular y localizacin de organelas.

En una clula no muy polarizada, en clulas ms o menos apolares, tendra el centro organizador de microtbulos, el centrosoma, en el centro y alrededor de esa zona estaran todos los extremos negativos de los microtbulos que radian desde ese centrosoma, y los extremos positivos estaran hacia toda la periferia de la clula. Cerca del centrosoma y del ncleo, ya que el centrosoma se localiza en las proximidades del ncleo celular, se localiza el complejo de Golgi que se origina de las vesculas secretoras, la localizacin del Golgi depende de microtbulos y de protenas motoras, es decir, del transporte intracelular, tanto su organizacin y su localizacin, y lo mismo el retculo endoplsmico, tanto el liso como el rugoso. En la membrana del retculo hay protenas transmembrana que son reconocidas por algunos motores y que son transportadas sobre los microtbulos. Concretamente el retculo endoplsmico lo que hace es extenderse por toda la clula porque est unido a protenas de quinesina, motores positivos, que empujan las membranas del retculo y las estiran hacia la periferia extendiendo el retculo por toda la clula. Si nosotros despolimerizamos los microtbulos lo que sucede con el retculo es que se colapsa, tanto el liso como el rugoso, alrededor del centro organizador de microtbulos porque ya no estn las protenas motoras llevando el retculo sobre los microtbulos y extendindolo hacia la periferia. Del Golgi se origina unas vesculas secretoras que van hacia la superficie para ser exocitadas por motores positivos, quinesina, se acercan a la membrana plasmtica y se exocitan, tanto las vesculas de secrecin constitutiva como las reguladas. Y de la membrana plasmtica se endocitan vesculas, dictiosomas tempranos o tardos que viajan a lo largo de los microtbulos hacia el centro organizador de microtbulos, hacia el centrosoma, por motores negativos, es decir, dinenas. La localizacin de las mitocondrias coincide muchsimo con la de los microtbulos, es decir, colocaliza (tiene la misma direccin). Si teimos los microtbulos y teimos las mitocondrias veremos que estn en los mismos sitios, y las mitocondrias adems tienen la misma localizacin que los microtbulos porque se
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estn transportando por protenas motoras de tipo positivo o negativo sobre los propios microtbulos. Los grnulos de pigmento tambin se transportan por motores positivos y negativos (hacia el centro por los motores negativos hacia la zona de la periferia por los motores positivos). Prcticamente, toda la distribucin de orgnulos de la clula depende en su mayor parte de la red de microtbulos que tenga esta clula, de cmo sean, y de los motores. En el aparato de Golgi si nosotros despolimerozamos los microtbulos, al contrario que lo que ocurre con el retculo que se colapsa cerca del centrosoma, como el Golgi normalmente est situado cerca del centrosoma organizado en dictiosomas, si despolimerizamos los microtbulos vemos como se dispersa por toda la clula formando vesculas, es decir, el Golgi se desorganiza y se dispersa por la clula. Esto se debe a que desde el RER se formaban estas vesculas, vesculas de transicin, que se unan, se fusionaban dando lugar al ERGIC (compartimento intermedio entre el retculo y el Golgi), y esto por protenas motoras se mova por microtbulos y esto se iba desplazando hasta formar la cara cis del Golgi, las cisternas cis el Golgi; si despolimerizamos los microtbulos lo que sucede es que estas vesculas no pueden moverse por lo que no pueden llegar a formar la cara cis del Golgi y lo que pasa con el dictiosoma es que el dictiosoma en la cara trans estar formando vesculas de secrecin o lisosomas y se ir deshaciendo, la cara intermedia se transformar en trans, la cara cis en intermedia, pero no llegar una nueva cara cis y al final tendremos muchas vesculas, las que se han originado de la cara cis y todas las vesculas sueltas que no se pueden integrar. Por eso al despolimerizar los microtbulos se despolimerizan o desorganizan los dictiosomas. En las clulas polarizadas que poseen dos dominios de membrana uno apical y el otro basolateral formaban en el Golgi dos tipos de vesculas, unas secretoras que se exocitban por el dominio apical y otras tambin secretoras constitutivas que se exocitaban por el dominio basolateral. Este transporte intracelular de este tipo de vesculas se debe a que las vesculas y los componentes de la vescula tienen seales para ser clasificados y dirigidos por los microtbulos a ser transportados o bien hacia el dominio apical o hacia el dominio basolateral. Hay una regulacin todava ms especfica de que vesculas van a qu dominio. Si el transporte falla en estas clulas tan polarizadas y una vescula con un componente especfico no va al dominio al que tiene que ir eso produce enfermedades, es decir, que la regulacin de este transporte intracelular est ligada al desarrollo de muchsimas enfermedades, como por ejemplo en el rin poliqustico se pueden producir otro
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tipo de mutaciones que afectan al transporte intracelular, dentro de lo que es la clula del rin; estas mutaciones son por ejemplo la policistina que afecta al fallo de unas protenas que deben exocitarse en una parte concreta, esto produce tambin el rin poliqustico. Son mutaciones que producen un fenotipo del rin con muchos quistes. Los orgnulos se transportan a travs de microtbulos hacia un determinado polo que puede ser tanto el negativo como el positivo, pero cuando llegan a su destino tiene que soltarse, entonces tiene que haber primero seales, por ejemplo, en una vescula para que se una al microtbulo, para que se transporte hacia el pollo del microtbulo determinado y cuando llega a su sitio se tiene que soltar, entonces esto se debe a que estos motores generalmente cuando no estn unidos a su cargo ( vesculas, etc.) generalmente estn inhibidos, es decir, que tienen una conformacin distinta, estn como cerrados; cuando aparece la carga por ejemplo las vesculas secretoras que hay que transportar al polo apical, la unin a la carga hace que se active el motor y al activarse el motor este se une al microtbulo y empieza a caminar por l con el gasto de ATP correspondiente, pero luego tiene que haber una seal, por ejemplo en el microtbulo, para que se separe el motor de la carga, de la vescula. Este motor ha de hacer dos cosas: Ser reciclado, y para ser reciclado es necesario que vuelva a su lugar de origen y para ello se une a una protena motora que la devuelva a su lugar (por ejemplo si el motor es positivo ser transportado por un motor negativo y viceversa). Los motores pueden ser reciclados despus de ser utilizados y de llegar a una zona donde lleva el cargo. Pueden ser degradados. Tambin tenemos que tener en cuenta que en el microtbulo hay una serie de modificaciones, la tubulina, puede acetilarse, unir glutamil, puede tener una serie de modificaciones postraduccionales (PTM), la quinesina slo se une a los microtbulos que tienen estas modificaciones postraduccionales, luego slo llevara su cargo por esos microtbulos, es una quinesina especfica; otra cosa que puede suceder es que los microtbulos tengan unidos otras protenas asociaqdas a los microtbulos, las MARs, ocurre que algunas protenas motoras caminado por el microtbulo se encuentran con una MAR, como por ejemplo la TAU, sucede que la interaccin entre la MAR y la protena motora separa por el dominio motor la quinesina del microtbulo y por tanto se separa la carga del motor, esto quiere decir que la presencia de TAU va a impedir el transporte de las vesculas porque va a soltar a esa vescula que se estaba transportando por el microtbulo.
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El control del transporte de oragenelas, vesculas, etc. est muy controlado a travs de la red de microtbulos y a travs de la red de microfilamentos (que se conoce un poco menos). No slo se transportan organelas membranosas sino que tambin se transportan macromolculas, generalmente son complejos de cidos de ARN unidos a protenas, complejos de ribonucleoprotenas, y estos complejos se transportan por los mismos tipos de motores explicados anteriormente (quinesina y dinena) sobre microtbulos y miosina sobre microfilamentos. Los RNA tienen que estar en sitios concretos muchas veces para que all se produzca la sntesis de protenas concretamente. En las neuronas tiene que haber la sntesis de unas protenas especficas en las dendritas para que funcione bien la neurona, entonces los RNAm que se deben sintetizar especficamente en las dendritas tienen que ser transportados hasta all para que puedan activarse con ribosomas que haya en las dendritas y producirse la traduccin de esas protenas. Es importante el transporte de RNA especficos a sitios especficos en determinados tipos celulares. Mecanismo por el cual un RNA viaja hasta su lugar especfico. Hay na secuencia e localizacin en el propio RNA que es reconocido por una protena especfica, y esta protena especfica a su vez es reconocida por una protena adaptadora que est unida a un motor concreto, como la miosinaa tipo 5 y se va atransportar hacia el final de las dendritas, hacia las espinas de laas dendritas donde no hay microtbulos por lo que el transporte se lleva a cabo por los microfilamentos.
Transporte axoplsmico.
Al final del axon se localiza unas ramificaciones donde estn los terminales sinpticos donde se localizan lass vesculas sinpticas que haran contacto con dendritas, espinas dendrticas, de otras neuronas. A lo largo del axn hay dos tipos de transporte: Uno que va del cuerpo celular a las terminaciones sinpticas denominado transporte antergrado. Va al revs, en las terminaciones sinpticas se captan cosas o han llegado mitocondrias que ya estn deterioradas y deben reciclarse y volver al soma, este es el transporte retrgrado. En el axn lo que generalmente hay es microtbulos, hay pocos microfilamentos de actina, estos microtbulos tienen una orientacin particular, y se van transportando por quinesinas y dinenas. En el axn todos los extremos negativos del microtbulo estn lo ms cerca posible del centrosoma y todos los extremos
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positivos estn lo ms lejos posibles del centrosoma. No hay ningn microtbulo que llegue desde el centrosoma hasta las terminales sinpticas, porque esto a veces son distancias infinitas para lo que puede ser un microtbulo (como es el caso de muchas neuronas cuyo soma se encuentra en la mdula y el soma llega hasta la punta del dedo gordo del pie), por lo que estn cortados. En las dendritas sin embrago, hay microtbulos con las dos orientaciones, unos que tienen el extremo negativo cerca del centrosoma y otros que tienen el extremo negativo lo ms alejado del centrosoma. Si hiciramos un video de cmo se transportara una vescula mediante un transporte antergrado a travs de los microtbulos veramos como esa vescula avanza por los microtbulos a travs de motores de quinesina por los microtbulos, y como no existe un microtbulo que llegue desde el soma hasta el final del axn, la vescula salta de un microtbulo a otro, cuando termina un microtbulo saltar al microtbulo contiguo y as sucesivamente hasta que llegue hasta la terminal sinptica. Por microscopa veramos que la vescula caminara a lo largo del microtbulo y cuando llegara al final tendra que buscar el extremo negativo de un microtbulo que sea el ms cercano al microtbulo en el que se origina y muchas veces se ve obligada a retroceder un poquito hasta que lo encuentra. El mecanismo que tienen para saltar de un lado a otro es que se suelta el motor del microtbulo y tiene que encontrar otro microtbulo para unirse y volver a caminar por l hacia el extremo positivo. Cuando estudiamos el transporte axoplsmico una preparacin muy utilizada es inyectar, en uno de los ganglios donde estn los cuerpos neuronales de las neuronas, aminocidos radioactivos que son captados por esas neuronas e incorporados a sus propias protenas y de ese modo estn utilizando protenas radioactivas, estas protenas radioactivas van caminado por los axones hacia la terminacin. Pasado un tiempo despus de la inyeccin de esos aminocidos radiactivos se obtiene el nervio citico en animales de experimento y se parte en trocitos y a partir de ellos medir o analizar la radioactividad. Hay protenas que son muy rpidas, otras intermedias y oras protenas que se han quedado en el soma, esto nos quiere decir que no todo lo que viaja por el axn lo hace a la misma velocidad, esto se puede deber a que cada motor especfico tiene una velocidad de transporte especfica. Cuando empezaron a realizarse estos estudios no se conocan los motores, ni que existan protenas motoras, en este momento se clasific al transporte axoplsmico en: rpido, intermedio y lento y al final se qued rpido e intermedio junto y lento como otra categora; porque lo que se vio en el transporte rpido e intermedio es que eran organelas, vesculas, mitocondrias, etc. mientras que lo que se mova lentamente eran los propios elementos del citoesqueleto.
J. D. C.
El encargado del transporte antergrado sera la quinesina convencional, pero las vesculas aunque se estn transportando en la direccin antergrada a travs de la quinesina mantienen unidas a ellas la dinena aunque en una conformacin inactivas y esta vescula cuando llegue a la terminacin sinptica y cumpla all su funcin puede ser devuelta al soma y en este caso el motor que funcionar ser la dinena y la que se inactivar ser la quinesina. Luego organelas que se transportan desde el soma hasta la sinpsis llevan los dos tipos de motores, negativos y positivos, mientras funciona el transporte antergrado son las quinesinas las que estn actuando y las dinenas inactivas, dependiendo del tipo de organela que se estn transportando intervendrn un tipo de quinesina especfica u otra y cuando vuelven hacia el soma en un transporte retrgrado ocurre lo contrario. As es como funciona el transporte antergrado rpido o intermedio. El lento transporta por ejemplo microtbulos; estos microtbulos se transportan de la siguiente manera: los que se originan en el centrosoma polimerizan mucho por el extremo positivo, pero en determinados momentos hay una protena que es la catalina que los rompe y al romperlos, los fragmenta haciendo que de un microtbulo se originen varios (todos con sus extremos negativos mirando hacia el centrosoma), los fragmentos de microtbulos se transportan sobre otros microtbulos. En el caso de concreto de los microtbulo que es donde ms claro est el citoesqueleto se transporta sobre el propio citoesqueleto, los microtbulos se transportan sobre los microtbulos, como se transporta hacia la sinpsis por quinesinas y lo que tenga que ser devuelto al soma lo har mediante dinenas, en general se ha estudiado ms el transporte axoplsmico antergrado lento. Por tanto tenemos transporte antergrado rpido de organelas, vescula, mitocondrias, etc. y un transporte lente antergrado en el que se transporta el citoesqueleto de microtbulos que se transportan sobre ellos mismos que se fragmentan y los que se transportan realmente son estos fragmentos sobre los microtbulos. Este transporte lento axoplsmico de microtbulos es el que explica cmo estn los microtbulos localizados en el axn, que se han roto, se han seguido transportado y fragmentando porque si no slo habra microtbulos en la primera parte del axn. Y este transporte de microtbulos es el responsable del crecimiento del axn , cuando la neurona se empieza a diferenciar y hacer crecer su axn, aunque estos microtbulos no crecen indefinidamente debido a lo explicado anteriormente con la catalina. Si nosotros cortamos un axn este se retrae y la retraccin tambin est motivada por el transporte de fragmentos de microtbulos hacia el extremo negativo, por dinenas. La retraccin de los axones cuando se produce
J. D. C.
fisiolgicamente o cuando se produce un corte tambin se debe a un transporte retrgrado de los microtbulos. Al final del axn no llegan los microtbulos y para realizar la sinpsis es necesario que muchas partculas que viajan a lo largo del axn por medio de los microtbulos lleguen a las terminaciones sinpticas, slo hay filamentos de actina. La vescula que va viajando a lo largo del microtbulo por medio de quinesinas ha de tener tambin motores de tipo miosina para que una vez que llega al extremo positivo del ltimo microtbulo pueda unirse a los microfilamentos de actina, donde llega a la terminacin sinptica y ser exocitado por el neurotransmisor. Las vesculas sinpticas que se secretan en el Golgi viene vacas y se transportan mediante un transporte axoplsmico rpido, luego se asocian a la red de actina, llegan a la sinpsis donde se reciclan y se llenan del neurotransmisor para despus liberarse en la seal sinptica. Este transporte axoplsmico es el responsable de la transmisin sinptica por nuestro cerebro, si falla este transporte nuestras neuronas dejan de funcionar correctamente. El transporte axoplsmico es un tipo de transporte intracelular en el que intervienen protenas motoras especficas de neuronas. El transporte intraciliar tambin es un tipo de transporte intracelular en el que intervienen otro tipo de protenas especficas. Cada carga tiene una protena motora especfica a la que se une porque hay una seal en la membrana de la vescula, que es reconocida por el dominio motor especfico o por protenas adaptadoras en algn caso. Control. Una vescula anclada a una protena motora especfica cuando llega una determinada seal se separan de la protena motora mediante un mecanismo por fosforilacin, esta es la calcio fosfoquinasa 2 que fosforila un componente de la protena adaptadora a la que se une el motor y en el momento en el que fosforila al motor que ya no puede unirse a la protena adaptadora y la vescula se suelta. Se va a soltar para pasar de unos microtbulos a otros, pero cuando se va a soltar por ejemplo para pasa a lo microfilamentos de actina es por algo en la sinpsis; en otros casos otros tipos de vesculas sinpticas, porque depende del tipo de neurona lo que tiene es una protena Rab que cuando se hidroliza el GTP que lleva unido se suelta la vescula de la protena adaptadora que lleva unida. En otros casos cuando se est llevando por el axn una mitocondria y en una determinada zona hay un aumento localizado de la concentracin de calcio, este aumento de [Ca++] hace variar la conformacin de una protena y separa el motor del microtbulo. Estos son tres ejemplos por los cuales el transporte a travs de axn estn estrictamente regulados y son especficos de cada tipo neuronal y especficos de cada tipo de cargo que estn transportndose a lo largo del axn de esa neurona.
J. D. C.
Transporte de grnulos con pigmentos.

Cuando aumenta la concentracin de cAMP en la clula los grnulos se dispersan y cuando disminuye la concentracin de cAMP los grnulos se agregan. Se dispersan y se agregan porque la dispersin que necesita una alta concentracin de cAMP activa quinesina y miosina V e inactiva la dinena mientras que la agregacin implica la disminucin de cAMP y todo lo contrario que la anterior, inactiva la quinesina y la miosina V y activa la dinena. Esto es as porque los grnulos de pigmento llevan asociados todos los motores que necesitan (por eso cuando se hace fluoresciencia se divisan los motores de quinesina y miosina V juntas adosadas a las mismas vesculas) adosados a su membrana, entonces tiene un complejo de agregacin en el cual va la dinena y un complejo de dispersin en el cual va la miosina V y la quinesina. Las concentraciones de cAMP van a activar quinasas que van a fosforilar los motores y si esas quinasas no estn activas los motores estn desfosforilados, luego la activacin y la inhibicin llevan a cabo miosina V y quinesina que forman el complejo de dispersin dependen de fosforilaciones y desfosforalizaciones que vienen determinadas por la activacin, el aumento o la disminucin de cAMP. La fosforilacin de la dinena que est formando parte del cuerpo de agregacin separa la dinena del grnulo y entonces est inactiva, est separada y no puede. La fosforilacin de la miosina que est formando parte del complejo de dispersin tambin la separa del grnulo y tampoco puede funcionar. Si no est funcionando la miosina puede agregarse. La disminucin y el aumento de la concentracin de cAMP depende de muchsimas cosas puesto que es una respuesta a hormonas, ya que es un segundo mensajero que se produce de muchas cascadas de sealizacin. En estos melanforos se ha estudiado y cuando la melanina se une al cAMP va aprovocar agregacin porque lo que va hacer es disminuir la concentracin de cAMP inhibiendo la adenilato ciclasa, esta disminucin de la concentracin de cAMP va a inhibir la proptena quinasa A y al no estar activa la protena quinasa A las fosfatasas que estn siempre constitutivamente activas van a desfosforilar la quinesina y a miosina V y las van a activar entonces esto va a producir la reordenacin. Otra hormona la hormona estimuladora del melanocito al unirse a su receptor va a estimular la adenilato ciclasa, aumentar la concentracin de cAMP y por tanto activar la protena quinasa A y si es al contrario fosforilando la dinena que se inactiva quedando activo el complejo de dispersin.
Nanotubos.
J. D. C.
Los nanotubos son unas prolongaciones de tamao nanomtrico y de ah su nombre. Se han descrito muy recientemente en algunas clulas. Son muy pequeitos y padecen filipodios , pero no son filipodios porque son mucho ms pequeos; tiene algunos filamentos de actina pero muy poquitos y en ocasiones algn microtbulo. Por estos filopodios pueden viajar partculas o complejos macromoleculares sobre esos microtbulos y filamentos de actina. Si dos de estos nanotubos se forman en dos clulas que estn cercanas y se fusionan no van a dar lugar solamente al transporte dentro de una clula sino tambin van a poder pasar vesculas de una clula a otra, es decir, los nanotubos van a ser responsables del transporte intercelular. En un principio se pensaba que estos nanotubos eran unos artefactos, y ahora se han descrito en muchos tipos celulares identificados esos componentes que son los filamentos de actina, microtbulos, etc. y se han divisado con microscopa ptica, de barrido y microscopa de todo tipo. Se ha visto estn conectando muchsimos tipos celulares concretamente tambin neurona, clulas del sistema inmune, no slo transportan por dentro del nanotubo sino que algunos elementos que se unen a la membrana plasmtica en la clula por fuera pueden moverse por la membrana de ese nanotubo y llegar a alcanzar otra clula. Es un mecanismo de infeccin vrica de unas clulas a otras; esto est siendo cada vez ms interesante. Entre las neuronas este tipo de estructura, los nanotubos, parece que sera la forma que los priones cuando han adquirido su forma inactiva; los priones son protenas que se localizan en nuestras clulas en una conformacin normal, pero si esa conformacin cambia a una forma infectiva, a partir de ese momento todas las protenas que tenemos empiezan a plegarse de esa forma anormal, entonces dentro de una clula la conformacin infecciosa de la clula se transmite a las dems protenas celulares; pero lo que no se entenda como esa conformacin infecciosa poda transmitirse de neurona en neurona , finalmente se vio que se produce a travs de estos nanotubos que conectan las neuronas. De hecho es una nueva estructura que permite el transporte intracelular y el intercelular.
Clase 15 Etapas de la metstasis Un tumor puede extravasarse e ir a otros tejidos creando tumores secundarios o metstasis. Mientras una clula no se convierte en clula invasora el tumor es benigno y se puede curar con la extraccin del tumor. Si es maligno sus clulas tienen la capacidad de invadir otros tejidos vertindose a la sangre o la linfa para llegar a otros tejidos producindose la metstasis.
J. D. C.
El primer paso es la invasin: es la etapa ms eficiente. Las clulas adquieren un fenotipo motil para poder migrar y hacer el resto de las etapas. El tumor primario tiene que adquirir este fenotipo motil. El tumor primario se origina en un sitio. El proceso de invasin implica acontecimientos como que se tienen que alterar los procesos de adhesin clula-clula y clula-matriz. Los procesos de adhesin clula-clula pierden su funcin. Las clulas del tumor primario pierden la adhesin y se disgregan. Tambin tienen que romper las barreras fsicas para invadir otros tejidos. La barrera es la lmina basal. Se ponen marcha actividades proteolticas para romper la lmina basal. Se degrada la matriz extracelular y se adquiere la capacidad de migracin. Este proceso de invasin tumoral conlleva a un cambio en el fenotipo de las clulas que es la transicin epitelio mesnquima o tem, las clulas tumorales tienen un gran parecido a las clulas mesenquimales. No lo hacen solo las clulas tumorales sino que tambin se produce en el desarrollo embrionario como en la gastrulacin para la formacin de la lnea primitiva: las clulas del ectodermo que son epiteliales se invaginan para formar el mesodermo que son clulas mesenquimatosas. Es un proceso tem. Si se interrumpe este proceso en el embrin, no progresa. Tambin esto se produce en la migracin de las clulas de la cresta neural. En el embrin la migracin de las clulas de la cresta neural ocurre porque las clulas del ectodermo sufren un proceso tem y adquieren las caractersticas de clula mesenquimal para, entre otras cosas, migrar. Este proceso conlleva tambin la perdida de la polaridad celular apicobasal de las clulas epiteliales, aumento de la motilidad y reorganizacin del citoesqueleto. Perdida de adhesin clula-clula. Las molculas de adhesin celular son receptores especficos y median los procesos de reconocimiento intercelular y reconocimiento de las clulas con la matriz. Los principales elemento son las cadherinas, las inmunoglobulinas. Hay procesos de adhesin clula-clula en las que participan molcula de la misma familia y es adhesin homoflica. Otras veces se da en receptores de distintas familias y se llama heteroflicas (clula-matriz y se lleva a cabo por las integrinas). Las adhesiones clula-clula que dependen de cadherinas son muy fuertes y dependen de calcio. Actan sobre todo en los tejidos epiteliales. Para mantener las interacciones clula-clula se crean los desmosomas que es donde se sitan las cadherinas. Tambin forman parte de las uniones adherentes. La ms importante en la unin de clulas es la cadherina e (clulas epiteliales) y esta expresada en todos los tejidos epiteliales. Son uniones homoflicas. Presentan el extremo carboxilo hacia el interior y el extremo n terminal hacia el exterior por
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el cual se unen a las cadherinas de las clulas contiguas. La fuerza de adhesin viene dada por su asociacin al citoesqueleto de actina gracias a las cateninas. Esta interaccin hace que el citoesqueleto de actina se organice como actina cortical. Cuando las clulas han establecido contactos, actan las cadherinas para unirlas con ms fuerza. Es decir solo se organiza cuando las clulas ya han establecido contactos focales. La e cadherina acta desde la mrula para la compactacin e implantacin de embriones y mantiene todos los epitelios tanto embrionarios como adultos. Si se pierde en un embrin la cadherina e no es capaz de evolucionar. En las zonas tem no hay organizacin de cadherinas porque tienen que migrar. La prdida funcional de cadherina e es un evento clave para tem. La cadherina e tiene un papel importante en la evolucin de los carcinomas (o tumores de tejido epitelial). Si hay una prdida de expresin o funcin de la cadherina e hay una relacin con la desdiferenciacion del tumor: a mas desdiferenciacion menos expresin de cadherina e. la perdida de cadherina est relacionada con la invasin tumoral. As la cadherina e es un gen supresor de la invasin tumoral. Hay diferentes niveles de regulacin: Genticos: mutaciones, es infrecuente. En carcinomas lobulillares de mama. Epigentico: metilacin del promotor de la e cadherina. Transcripcional: en este proceso estn implicados los represores: snail, slug, e-47 y zeb . Se reprime la expresin del gen. En el estado embrionario cuando no acta cadherina e acta snail. Los genes de la familia snail son imprescindibles para los procesos tem. Post-transcripcionales: modificaciones en la e-cadherina que la hacen no funcional.

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Transporte intracelular y localizacin de organelas.

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