UNIVERSIDAD EARTH

PRODUCCIN DE ALCOHOL ETLICO A PARTIR DE MUCLAGO DE CAF

Por

LUCAS GMEZ DELESMA JORGE ADALID NICOLS MORALES

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de INGENIERO AGRNOMO Con el grado de LICENCIATURA

Gucimo, Costa Rica Diciembre, 2006

Trabajo de graduacin presentado como requisito parcial para optar al ttulo de Ingeniero Agrnomo con el grado de Licenciatura

Profesor Asesor

__________________________ Moiss Soto, Ing. Agr.

Profesor Asesor

__________________________ Bert Kohlmann, Ph.D.

Decano

__________________________ Marlon Brev , Ph.D.

Candidato

__________________________ Lucas Gmez Delesma

Candidato

___________________________ Jorge Adalid Nicols Morales

Diciembre, 2006 iii

DEDICATORIA

A mis padres, por sus apoyo y comprensin en todo momento de mi vida y por hacer presente sus oraciones durante mi formacin profesional. Y a mi familia por su confianza y apoyo incondicional.

Lucas Gmez

Quiero dedicar este proyecto de graduacin a mis padres quienes me han apoyado durante toda mi vida de estudiante. A mis hermanos quienes de igual forma me han brindado su apoyo a lo largo de mi carrera, gracias totales.

Jorge Nicols

AGRADECIMIENTO

A Dios, por hacernos sentir su presencia durante nuestro recorrido, por estar presente en todo momento de nuestras actividades y sobre todo por darnos la valenta, fortaleza y confianza en nosotros mismos para alcanzar nuestras metas.

A nuestros padres por su apoyo y confianza y por brindarnos sus consejos y palabras de motivacin en todo momento, que se traducen en situaciones dispuestas a superarnos para un mejor futuro.

A nuestros donantes, que de manera incondicional, nos proporcionaron el apoyo para lograr nuestros estudios superiores en la Universidad EARTH.

A nuestros asesores, Ing. Moiss Soto y Ph.D. Bert Kohlmann, por su apoyo y direccin en la elaboracin de este trabajo.

A las cooperativas, COOPETARRAZ, COOPEDOTA, COOPEPALMARES y el Beneficio Santa Rosa de Turrialba, por ofrecernos apoyo durante la preparacin de las prcticas experimentales.

Igualmente, a todos los funcionarios y trabajadores que de manera directa o indirecta se involucraron en nuestra preparacin como profesionales y personas.

Lucas Gmez y Jorge Nicols (2006)

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RESUMEN

La produccin y procesamiento de caf en grandes volmenes a nivel mundial, ha generado una gran cantidad de subproductos, lo que en la mayora de los casos ha ocasionado problemas en los beneficios de caf. Estos subproductos como materia prima, son base para un valor agregado y reduccin de un impacto ambiental negativo. Este trabajo tiene como finalidad el estudiar uno de los subproductos del caf, el muclago. Para esto, se recolect la materia prima en dos Cooperativas ubicadas en los cantones de Tarraz y Dota, de la provincia de San Jos, otra Cooperativa en la provincia de Alajuela y el Beneficio Santa Rosa, ubicado en el cantn de Turrialba, provincia de Cartago, Costa Rica. El muclago se ferment anaerobicamente, tanto por el mtodo controlado, como por el no controlado, y se realiz una destilacin fraccionada. Finalmente, se analizaron las densidades, el porcentaje y el volumen de etanol, para determinar el potencial del muclago para la produccin de etanol. Se obtuvo como resultado que del muclago se puede obtener etanol por medio de los dos mtodos de fermentacin sin diferencia entre ellos. Sin embargo, por su facilidad de generacin y costo econmico es preferible el mtodo no controlado, y para lograr una mejor eficiencia de fermentacin es ms ventajoso el mtodo controlado. Por otro lado, con muclago diluido los resultados no son buenos, es ms conveniente el uso de muclago fresco, puro y con grados Brix mayores a ocho. A partir del estudio se concluye que es posible aprovechar al mximo el potencial del muclago en la produccin de etanol. Es recomendable que se determine en un estudio posterior la pureza del etanol, por medio de cromatografa gaseosa y que se realicen pruebas de ste como alcohol etlico carburante. Palabras clave: Muclago, fermentacin anaerbica controlada y no controlada, destilacin fraccionada, etanol.

Gmez, L; Nicols, J. A. 2006. Produccin de alcohol etlico a partir de muclago de caf. Proyecto de graduacin Lic. Ing. Agr. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 31 p.

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ABSTRACT

Coffee is produced and processed in great quantities around the world. Because of this, substantial waste that pollutes the environment is constantly generated. The byproducts of coffee production can be useful if value is added to them. This would

reduce the negative impact on the environment. The main objective of this research project was to study the possible benefits of the mucilage by-product and the differences in the ethanol production methods. Mucilage from four coffee cooperatives in Costa Rica was gathered. Two came from San Jos, one from Alajuela, and the other one from Beneficio Santa Rosa in Turrialba, Cartago. In the experiment, anaerobic fermentation was used for both the controlled, and the uncontrolled natural samples. Both samples were distilled. Finally an alcohol density, volume, and percentage analysis for each liquid layer was/conducted. The ethanol percentage and volume were measured to determine the potential production of ethanol from mucilage. The results of the experiment indicated that ethanol can be obtained from mucilage by both fermentation methods. The natural method is preferred because it minimizes production cost, but it is more efficient to ferment the mucilage using the controlled method. When mucilage is diluted in water, the results are not very good. It is more convenient to use mucilage that is fresh, pure, and has a minimum of 8 degrees Brix or higher. It was concluded that there is a possibility to take advantage of mucilage potential in the production of ethanol. It is advisable to determine ethanol purity in subsequent studies using the method of gas chromatography and to undertake studies of ethylic alcohol as a fuel.

Key words: Mucilage, controlled and uncontrolled anaerobic fermentation, fractionate distillation, ethanol.

Gmez, L; Nicols, J. A. 2006. Produccin de alcohol etlico a partir de muclago de caf. Proyecto de graduacin Lic. Ing. Agr. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 31 p.

TABLA DE CONTENIDO

Pgina DEDICATORIA ...............................................................................................................V AGRADECIMIENTO .....................................................................................................VII RESUMEN .....................................................................................................................IX ABSTRACT.....................................................................................................................X LISTA DE CUADROS ..................................................................................................XIII LISTA DE FIGURAS................................................................................................... XIV LISTA DE ANEXOS..................................................................................................... XV 1 2 INTRODUCCIN...................................................................................................... 1 OBJETIVOS ............................................................................................................. 2 2.1 OBJETIVO GENERAL...................................................................................... 2 2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS ............................................................................ 2 3 REVISIN DE LITERATURA................................................................................... 3 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 4 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 5 ORGEN DEL CAF ......................................................................................... 3 TAXONOMA .................................................................................................... 3 PRODUCCIN ................................................................................................. 5 ESTRUCTURA Y COMPOSICIN DEL FRUTO.............................................. 8 USOS DEL SUBPRODUCTO DEL CAF ........................................................ 9 OBTENCIN DE LA MATERIA PRIMA.......................................................... 12 DISEO EXPERIMENTAL ............................................................................. 13 FERMENTACIN ANAERBICA CONTROLADA......................................... 15 FERMENTACIN ANAERBICA NO CONTROLADA .................................. 16 PROCESO DE DESTILACIN FRACCIONADA ............................................ 17 ANLISIS ESTADSTICO............................................................................... 17

MATERIALES Y MTODOS.................................................................................. 12

RESULTADOS Y DISCUSIN............................................................................... 18 5.1 DESTILACIN FRACCIONADA DEL MTODO CONTROLADO .................. 18 5.1.1 Anlisis de la densidad del alcohol etlico obtenido .......................... 18 5.1.2 Anlisis del porcentaje de etanol obtenido........................................ 19 5.2 DESTILACIN FRACCIONADA DEL MTODO NO CONTROLADO ........... 20 5.2.1 Anlisis de la densidad del alcohol etlico obtenido .......................... 20 5.2.2 Anlisis del porcentaje de etanol obtenido........................................ 21 5.2.3 Relacin de grados Brix con el porcentaje de etanol obtenido ........ 22

CONCLUSIONES................................................................................................... 24 xi

7 8 9

RECOMENDACIONES...........................................................................................25 LITERATURA CITADA...........................................................................................26 ANEXOS.................................................................................................................29

xii

LISTA DE CUADROS

Cuadro

Pgina

Cuadro 1. Variedades de caf provenientes de mutaciones o de clonaciones a partir de dos especies que se comercian mundialmente. ............................3 Cuadro 2. Composicin del fruto del caf en % de peso hmedo....................................8 Cuadro 3. Descripcin del proceso de fermentacin controlada. ...................................13 Cuadro 4. Descripcin del mtodo natural o no controlado............................................14

xiii

LISTA DE FIGURAS

Figura

Pgina

Figura 1. Seccin esquemtica de la composicin del fruto del cafeto............................ 5 Figura 2. Comportamiento de la produccin de caf. Cosecha de fruta de 19992000 al 2004-2005. ........................................................................................... 5 Figura 3. Produccin mundial de caf oro, cosechas 2004-2005 a 2006-2007. En millones de sacos de 60 kg............................................................................... 6 Figura 4. Comportamiento de la cosecha de caf en los principales pases productores de caf oro. En millones de sacos de 60 kg.................................. 7 Figura 5. Diagrama de flujo del proceso de fermentacin, mtodo controlado. ............. 14 Figura 6. Diagrama de flujo del proceso de fermentacin, mtodo no controlado. ........ 15 Figura 7. Densidad del etanol de tres diferentes tratamientos....................................... 18 Figura 8. Porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra destilada. ................... 19 Figura 9. Densidad del etanol de tres diferentes cooperativas. ..................................... 20 Figura 10. Porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra destilada. ................. 21 Figura 11. Efecto de grados Brix del muclago fresco con respecto al porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra. ......................................................... 22

xiv

LISTA DE ANEXOS

Anexo

Pgina

Anexo 1. Anlisis de Duncan entre las medias de las densidades de etanol. Fermentacin controlada.................................................................................31 Anexo 2. Anlisis de Duncan entre las medias del porcentaje de etanol. Fermentacin controlada.................................................................................31 Anexo 3. Anlisis de Duncan entre las medias de las densidades de etanol. Fermentacin no controlada............................................................................31 Anexo 4. Anlisis de Duncan entre las medias del porcentaje de etanol. Fermentacin no controlada............................................................................31 Anexo 5. Datos climticos de tres cooperativas y del Beneficio Santa Rosa. ................31

xv

INTRODUCCIN

El alto nmero de beneficios de caf hmedo y el incremento de la produccin ha generado gran cantidad de residuos (aguas mieles y pulpa). En la mayora de los casos las aguas residuales del caf son vertidas directamente a los ros y tierras superficiales. El muclago es uno de los residuos que genera alta contaminacin, dentro de su composicin qumica, el 35,8 % son sustancias pcticas totales, el 17 % representa celulosa y cenizas y el 45,8 % son azcares totales. Dentro de la composicin del fruto, el 16 % es muclago (mesocarpio), 42 % es pulpa (exocarpio), 18% es semilla (endospermo), el 4 % es pergamino o cascarilla (endocarpio) y el 20 % es agua.1 El procesamiento del caf en los beneficios, se realiza por medio del sistema tradicional cuando las entradas son menos de 1 000 fanegas/da, en el cual se fermenta el caf por 16 horas. El tiempo de fermentacin vara segn el clima de la zona. Sin embargo, cuando las entradas son mas de 1 000 fanegas/da, se emplea el sistema mecnico, donde no se realiza la fermentacin, sino que se procesa directamente en las desmucilagenadoras, obteniendo de esta forma muclago puro y fresco2. De ello nace nuestra iniciativa de generar un uso alternativo del muclago en produccin de alcohol etlico, para su utilizacin en combustible y a la vez brindar un uso sostenible y amigable con el medio ambiente. Cabe destacar que la pulpa y el muclago del caf poseen azcares reductores que son fcilmente convertibles en etanol durante una fermentacin anaerbica.

COOPEDOTA, 2006. Composicin qumica del fruto de caf. Santa Maria de Dota, CR. Comunicacin personal. COOPEPALMARES, 2006. Beneficiado del caf. Palmares, CR. Comunicacin personal.

OBJETIVOS

2.1

OBJETIVO GENERAL Producir alcohol etlico a partir de muclago de caf a travs del proceso de

fermentacin y destilado, para el aprovechamiento del residuo del caf y reduccin de la contaminacin ambiental.

2.2

OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar el potencial del muclago del caf para producir etanol en tres cooperativas y un beneficio.

Evaluar el etanol a travs de la densidad y porcentaje de etanol obtenido de las muestras destiladas.

Evaluar el contenido de etanol con respecto a los grados Brix del muclago, obtenido por medio de un refractmetro.

Comparar los procesos de fermentacin anaerbica de dos mtodos: controlado y no controlado.

3 3.1 ORGEN DEL CAF

REVISIN DE LITERATURA

El caf es originario de Abisinia (Moderna Etiopa), desde donde se extendi su cultivo por Arabia y el resto de Oriente Medio. Lleg a Europa en el siglo XVI por mercaderes venecianos. Los holandeses lo introdujeron en las colonias de Amrica del Sur, Guayana, Colombia y las Antillas. Amrica es por su climatologa y orografa, donde la semilla del caf encontr el lugar idneo para su cultivo (ADECAFEH 2005). 3.2 TAXONOMA El caf se clasifica en el Orden Rubiales, perteneciente a la familia Rubiaceae, en la que se incluyen ms de 500 gneros y alrededor de 800 especies, de los cuales, 66 pertenecen al gnero Coffea. Estas especies, se explotan comercialmente en el mundo: arabica y canephora, as como tambin la liberica. En el Cuadro 1, se clasifican algunas variedades de caf provenientes de las especies de cafs comercializados mundialmente. Cuadro 1. Variedades de caf provenientes de mutaciones o de clonaciones a partir de dos especies que se comercian mundialmente3. Especies Coffea arabica Variedades Typica Bourbn Catuai Mundo novo Camern Uganda T -3752, T -3753

Maragogipe Catimor Caturra T -3754 T -3756 T -3757

Coffea canephora

La especie C. arabica es la que presenta mayor nmero de variedades de caf debido a las innumerables mutaciones que ha desarrollado; algunas de estas mutaciones se pueden observar en el cuadro anterior, destacando que existen otras

Guillermo, L. 2006. Jefe de Oficina regional Turrialba. Instituto del Caf (ICAFE). Turrialba, CR. Comunicacin personal.

que no presentan mayor prestigio, debido a sus caractersticas deficientes o baja calidad en taza. Para fines de estudio e investigacin el banco de germoplasma del CATIE, ha desarrollado cinco clones (T-3752, T-3753, T-3754, T-3756 y T-3757) a partir de C. canephora (cafeto robusto) y otras que se han desarrollado por mutaciones en Camern y Uganda. Con el fin de un mejoramiento gentico para crear resistencia a ciertas plagas y enfermedades se han realizado entrecruzamientos, creando de esta forma nuevas variedades de caf, tal es el caso del cruce de Mundo novo con Caturra dando como resultado el Catuai, Timor con Caturra obteniendo Catimor y Typica con Bourbn para obtener Mundo novo. El sistema radical de un cafeto vara segn la gentica de la planta y de las condiciones ambientales. Del 90 al 98 % de las races absorbentes se encuentran en los primeros 30 cm de profundidad y el resto se localiza hasta los 40 cm. El tallo central es erecto y de crecimiento indefinido. En el tallo se producen tres tipos de yemas: las que se originan en el tallo central o eje ortotrpico, las que producen las ramas o bandolas que son los ejes plagiotrpicos, y, finalmente, aqullas que producen las hojas. Las bandolas se distribuyen en forma alterna y opuesta a lo largo del tallo y entre ellas se presenta una serie de nudos. Las hojas son opuestas, de forma elptica y alargadas en ambos extremos (Campos 1989). Las yemas florales aparecen en series en las axilas de las hojas. Las flores son hermafroditas, de color blanco. El fruto del caf (Figura 1), es de forma ovoide y est formado por el epicarpio o pulpa, el mesocarpio o muclago, el endocarpio o pergamino, espermodermo o pelcula plateada y el endospermo o semilla (Campos 1989).

Epicarpio

Endosperma Espermodermo

Mesocarpio Endocarpio

Figura 1. Seccin esquemtica de la composicin del fruto del cafeto. 3.3 PRODUCCIN El caf es uno de los principales productos de exportacin para muchos pases del mundo. En Costa Rica, en cuatro aos consecutivos (2002 2005), la produccin de caf ha disminuido para un acumulado de 22,7% (Prez y Molina 2005). En la Figura 2, se puede observar que para la cosecha 2004-2005, la produccin de caf fue de 2,6 millones de fanegas. Esto explica cmo la produccin ha venido decreciendo, debido a que los caficultores han abandonado sus fincas e incluso hasta las han eliminado para dedicarse a otro rubro a causa de la crisis sufrida en estos ltimos aos.

Fuente: Instituto del Caf de Costa Rica (ICAFE), 2005.

Figura 2. Comportamiento de la produccin de caf. Cosecha de fruta de 19992000 al 2004-2005. 5

Estos altos volmenes generan una gran cantidad de subproductos. Si bien es cierto, las buenas producciones de caf estn reguladas por el manejo y tratamiento que se le brinda ao tras ao a la plantacin, este efecto da como resultado el incremento o descenso de las producciones. En base a datos proporcionados por los pases a la Organizacin Internacional del Caf (OIC), se estima que la produccin mundial del ao, cosecha 2006/07 ser aproximadamente de 121 millones de sacos de 60 kg de caf oro, un 12,93 % superior a lo registrado en la cosecha anterior que fue de 107,15 millones de sacos (Figura 3). La cosecha de la especie Arbica, fue de 69 millones de sacos, lo cual corresponde al 64,31 % del total, mientras que 38 millones de sacos fueron de la especie canephora (cafeto robusta), lo que significa el 35,69 % del total cosechado en este perodo. Un anlisis de la evolucin de la produccin de caf robusta indica un aumento de la proporcin que le corresponde en la produccin mundial de caf, al pasar de 18,35 % en 1965 a 35,69 % en la cosecha 2005/06. Este aumento en la produccin de la especie canephora se debi a la constante bsqueda de especies ms resistentes a plagas y enfermedades (hongos, bacterias y nematodos), que afectan la produccin de caf, siendo que esta muestra mayor resistencia (PROMECAFE 2006). En la siguiente figura, se puede observar el comportamiento de la produccin de caf en el mundo, y el pronstico de produccin para la cosecha ao 2006-2007(*).

Fuente: Organizacin Internacional del Caf (OIC), 2006.

Figura 3. Produccin mundial de caf oro, cosechas 2004-2005 a 2006-2007. En millones de sacos de 60 kg.

Se conoce como caf oro el grano o almendra de caf libre de las capas que lo recubren, como el pergamino y la pelcula plateada, y que est listo para ser tostado. Tambin se le denomina caf verde, o caf trillado. Por otro lado, en la Figura 4, se destaca la produccin en los primeros tres pases con mayor produccin de caf en el mundo, para la cosecha 2005-2006.

FUENTE: Organizacin Mundial del Caf.

Figura 4. Comportamiento de la cosecha de caf en los principales pases productores de caf oro. En millones de sacos de 60 kg. Considerando los efectos de la sequa en la cosecha de Vietnam y que la produccin de Brasil del ao cosecha 2005/2006, est afectada por un ciclo bienal pronunciado debido al tamao de la cosecha anterior, la OIC estima la cosecha 2005/2006 en 106 millones de sacos, lo que significa una disminucin del 6,3 por ciento con respecto al perodo anterior. Se calcula que la produccin de Vietnam ser de 11 millones de sacos, frente a 12,5 millones de sacos en el ao 2004-05, lo que representa un descenso del 12 % (PROMECAFE 2005), (Figura 4). Sin embargo, la suma total de produccin de caf en el mundo es alta, partiendo del fruto del caf en uva, al momento del beneficiado hmedo del mismo, se generan o eliminan cantidades altas de pulpa, aguas mieles y muclago, considerados como subproductos (Cuadro 2).

Desde el punto de vista ambiental, si estos desechos no son manejados adecuadamente, crean un problema de contaminacin en las corrientes de los ros y arroyos (Villalobos 1985). Cuadro 2. Composicin del fruto del caf en % de peso hmedo. Fraccionamiento del fruto del caf Pulpa (residuos) Muclago y azcares solubles Cascarilla (residuos) Semilla Agua Total
FUENTE: COOPEDOTA R.L. 2006. Santa Maria de Dota, CR.

% en peso (Hmedo) 42,0 16,0 4,0 18,0 20,0 100,0

3.4

ESTRUCTURA Y COMPOSICIN DEL FRUTO Desde una perspectiva botnica, el fruto del caf es una drupa (Villalobos 1985)

constituida por: Epicarpio o cscara, es la piel firme y colorida que envuelve el fruto. Es el primer producto que se obtiene en el mtodo usado para el procesamiento del grano de caf y representa en base seca alrededor del 29 % del peso del fruto. El epicarpio est constituido en su mayor parte por material lignino-celulsico. El mesocarpio o muclago, est localizado entre la pulpa y la cscara del grano y representa alrededor del 5 % del peso del grano de caf. El muclago constituye una capa de (0,5 a 2) mm de espesor que est fuertemente adherido a la cscara del grano de caf. Desde el punto de vista fsico, el muclago es un sistema coloidal lquido, bioflico, siendo por lo tanto un hidrogel. Qumicamente, el muclago contiene agua, pectinas, azcares y cidos orgnicos. La fraccin del mesocarpio que queda adherida a la cascarilla en el despulpamiento, est constituida por tejidos hialinos que no contienen cafena y taninos, es rica en azcares, pectinas y nitrgeno (0,15 % en base seca).

El endocarpio, recibe el nombre de pergamino. Es la membrana cartilaginosa que envuelve a cada semilla de caf. Su principal constituyente es de naturaleza celulostica.

Espermodermo, conocido tambin como pelcula plateada. ste rodea la endosperma y se elimina cuando el caf en oro entra en proceso de tostado.

Las endospermas, albminas, almendras o caf oro, estn envueltas en una pelcula plateada, y es la parte esencial que se consume en la preparacin del caf.

3.5

USOS DEL SUBPRODUCTO DEL CAF Durante el proceso del beneficiado del caf se derivan una serie de

subproductos, los cuales se emplean en diferentes usos, despus de haberles dado un manejo estratgico y adecuado. La pulpa es uno de los subproductos que presenta una gran variedad de alternativas para ser recicladas en su totalidad (Restrepo 2000), as como en: La transformacin de la misma en humus a partir del cultivo de lombrices. Su participacin en la elaboracin de abonos orgnicos fermentados tipo bokashi. Proceso de elaboracin de aboneras (composteras). Su utilizacin como de substrato para oryzae, la reproduccin Bacillus biolgica, y

principalmente

Aspergillus

megatherium

Saccharomyces cerevisiae, lo que es deseable para obtener abonos orgnicos de muy buena calidad. Adems, el abono orgnico se puede emplear en cultivos de musceas (banano, pltano), ya que este producto es rico en contenido de potasio. La pulpa de caf puede reemplazar hasta un 20 % de los concentrados comerciales en la alimentacin del ganado lechero, sin efectos perjudiciales y con un ahorro del 30 % (Rathinavelu y Graziosi 2005).

El muclago por su alto contenido de diferentes tipos de azcares, es un excelente medio para la elaboracin de biofertilizantes enriquecidos con minerales, y as llegar a ser utilizado en los cultivos del propio caf y de musas. En la preparacin de abono orgnico tipo bokashi, se recomienda usar el muclago o aguas mieles directamente, sustituyendo al mximo el volumen de agua que se desee. El muclago es un excelente sustrato para el crecimiento de hongos, bacterias y otros microorganismos benficos y deseables para la recuperacin de la calidad de vida de suelos deteriorados por las malas prcticas de la agricultura convencional. Por otro lado, del muclago pueden obtenerse, en distintos estados de pureza (Rathinavelu y Graziosi 2005), los siguientes tipos de sustancias: Pectinas sin refinar: Estas pectinas pueden estar en forma de gel soluble termorreversible o en forma de eslabn en cruz no reversible, que tienen un sabor distinto. Azcares naturales del fruto del caf, procedentes principalmente del agua del despulpe reciclada: son en su mayor parte monosacridos, glucosa, galactosa, ramnosa y arabinosa, con un sabor distinto, que recuerda al de las ciruelas, y podran comercializarse como una novedad para el connoisseur de caf ms refinado. Compuestos antioxidantes y flavonoides: stos son principalmente los compuestos de antocianina de color del fruto, pero tambin contienen todos los dems polifenlicos, tales como los cidos clorognicos y, por supuesto, cafena. Estas sustancias pueden combinarse de varias maneras para hacer una serie de aditivos de los alimentos que pueden tener inters para la industria del alimento saludable. Pro-antocianinas incoloras: podran usarse como recurso bsico para la fabricacin de otros alimentos o quiz para la sntesis ms sofisticada de otras sustancias qumicas. El pergamino del caf se emplea para la preparacin de abonos orgnicos fermentados, ya que sta cascarilla del caf o pergamino, constituye una fuente excelente de celulosa, lignina, slice y cenizas, as como otros compuestos en menor cantidad. ste se emplea en los abonos orgnicos, ya que permite dar una mejor 10

homogenizacin y aireacin al prepararlo; adems, aumenta hasta el 30 % el volumen total del mismo. Por otro lado, cuando el pergamino del caf se humedece con un poco de suero de leche, levadura y melaza de caa o aguas mieles provenientes del propio beneficio del grano, ste constituye un excelente medio de cultivo para la multiplicacin diversificada de microorganismos en constantes sucesiones biolgicas, las cuales favorecen la rpida recuperacin de los suelos degradados. El agua residual del caf es otra fuente potencial para la produccin de biogs, as como tambin los slidos de la pulpa de caf para ensilaje.

11

MATERIALES Y MTODOS

4.1 OBTENCIN DE LA MATERIA PRIMA El muclago fresco fue recolectado en tres cooperativas diferentes y en beneficio. La primera recoleccin fue en la Cooperativa de Palmares (COOPEPALMARES). Esta cooperativa est ubicada en el distrito de Zaragoza, perteneciente al cantn de Palmares de la provincia de Alajuela, Costa Rica. Las zonas cafetaleras cuentan con las condiciones climatolgicas ptimas para la produccin de caf de alta calidad, destacndose su ubicacin a una altitud que oscila entre los (1 000 a 1 200) msnm, las tierras son frtiles con lluvias adecuadas en ciertas pocas del ao (INFOCOOP 2006). La segunda recoleccin fue en COOPEDOTA. Esta cooperativa est ubicada en el distrito de Santa Mara, perteneciente al cantn de Dota de la provincia de San Jos, Costa Rica. La zona se encuentra a una altitud de 2 000 a 2 100 metros sobre el nivel del mar, la temperatura mxima es de 25 C con una mnima de 10 C. La precipitacin anual va de (1924 a 2006) mm y el promedio anual de brillo solar es de 4,5 horas, siendo lo ptimo para el cultivo del caf. Se realiz otra recoleccin en COOPETARRAZ, la cual se localiza en el distrito de Santa Mara, perteneciente al cantn de Tarraz de la provincia de San Jos, Costa Rica. Se encuentra a una altitud de 1 200 a 1 700 metros sobre el nivel del mar y presenta una precipitacin media anual que va de (1 565 a 2 052) mm. La temperatura media anual de esta regin va de (21 a 26) C, con un brillo solar anual de 5,8 horas luz. Por otro lado, tambin se hizo una recoleccin de muclago en el beneficio Santa Rosa, ubicado en el Cantn de Turrialba, que se encuentra a una altitud de 670 msnm, con una precipitacin de 2 200 mm anuales, con temperaturas que oscilan entre los 22 a 30 C. Las muestras en estas cooperativas, se obtuvieron al fin de la cosecha, donde no se encuentra la mayor concentracin de azcares, ello debido a la fecha de inicio de la investigacin. Mientras que las muestras del Beneficio Santa Rosa, Turrialba, se obtuvo al inicio de la cosecha, ambos casos no son las mejores en cuanto a grados de madurez del fruto, el cual se difiere en el momento de mayor volumen de cosecha y en cuanto a la mayor madurez del fruto.

12

De las regiones de COOPEPALMARES, COOPEDOTA Y COOPETARRAZ, son zonas de mayor altura en comparacin al Beneficio Santa Rosa de Turrialba. Sin embargo, en lo referente a la altura la variedad de caf sembrada no es la misma, ya que las variedades de caf se adaptan a cierto tipo de altura, resistencia a plagas y enfermedades con respecto a su productividad. Mientras mayor sea la altitud en la que se encuentre sembrado el caf, mayor es el contenido de azcares en el fruto del caf y por ende mayor es la cantidad de muclago presente en el fruto. 4.2 DISEO EXPERIMENTAL Para el proceso de fermentacin controlada, se utilizaran tres litros de muclago fresco diluido, por cada tratamiento sumando en total nueve litros de muclago del beneficio Santa Rosa, Turrialba (Cuadro 3). Cuadro 3. Descripcin del proceso de fermentacin controlada. Tratamientos T-1 T-2 T-3 Porcentaje (%) de S. cerevisiae 2 4 6 Beneficio Santa Rosa 3 L muclago 3 L muclago 3 L muclago

Para el tratamiento 1 se realiz el proceso de pasteurizacin y se inocul con un 2 % de levadura (Saccharomyces cerevisiae), lo mismo que para el tratamiento 2, slo que aqu se inocul al 4 % de levadura y para el tratamiento 3 se inocul con un 6 % de levadura. El desarrollo de este proceso se rigi por el diagrama de flujo presentado en la Figura 5. Para la descripcin de los tres tratamientos del proceso de fermentacin no controlado, se utilizaron 3 litros de muclago fresco, en donde cada zona de cooperativa representa un tratamiento, sumando 9 litros de muclago en total (Cuadro 4). Para este mtodo no se emple el proceso de pasteurizacin, ni de inoculacin, siendo as un proceso de fermentacin natural, misma que se rigi a partir del diagrama de flujo presentado en la Figura 6.

13

Muclago fresco
- 3 L muc[ilago - Medicin de Brix 72 C a 80 C/1 min.
o o o

Pasteurizacin

Enfriado
A temperatura ambiente

Saccharomyces cerevisiae

Inoculado

Fermentacin anaerbica

48 a 50 horas

Separacin de slidos y lquidos

Colado

Destilacin fraccionada
150 mL de muestra

Figura 5. Diagrama de flujo del proceso de fermentacin, mtodo controlado. Cuadro 4. Descripcin del mtodo natural o no controlado. Tratamientos T-1 T-2 T-3 Zona COOPEPALMARES COOPEDOTA COOPETARRAZ Cantidad 3 L muclago 3 L muclago 3 L muclago

Una vez fermentado el producto (esto puede variar de acuerdo a la zona o diferencia de tratamientos respecto al contenido de grado Brix del muclago), se realiz la destilacin fraccionada en el laboratorio de suelos de la Universidad EARTH. Por cada tratamiento se tomaron 150 mL de muestra de producto fermentado para la destilacin, con tres repeticiones cada una. Este principio de destilacin fraccionada aplica tanto para el mtodo de fermentacin anaerbica controlada y como la de fermentacin no controlada.
Muclago fresco

- 3 L mucilago - Medicin de Brix

o

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Fermentacin anaerbica

Colado
150 mL de muestra

Separacin de slidos y lquidos

Destilacin fraccionada

Figura 6. Diagrama de flujo del proceso de fermentacin, mtodo no controlado. 4.3 FERMENTACIN ANAERBICA CONTROLADA Segn Gonzlez (1998), la fermentacin puede definirse como un proceso en el cual se llevan a cabo cambios qumicos en un substrato orgnico, ya sea un hidrato de carbono, protena, grasa o algn tipo de materia orgnica. Estos cambios se llevan a cabo por catalizadores bioqumicos conocidos como enzimas, que son elaboradas por tipos especficos de microorganismos vivos. El mtodo de fermentacin anaerbica controlada, consiste en primera instancia del pesado inicial del producto, para luego llevar a cabo el proceso de pasteurizacin de (72 a 80) C por un periodo de un minuto, para eliminar microorganismos antagnicos, posteriormente se deja enfriar el producto a temperatura ambiente y una vez efectuado esto, se inocula con levaduras (Saccharomyces cerevisiae) previamente activadas para la preparacin del inculo, en primera instancia, se pesa la levadura en (2, 4 y 6) % P/P por separado, luego se disuelve en un poco de agua tibia y despus se le adiciona inmediatamente al muclago pasteurizado. Finalmente, se deja el muclago en proceso de fermentacin anaerbica. Para la destilacin fraccionada se toman 150 mL de muestra previamente colada, el efecto de realizar el proceso de colado del producto fermentado reduce el tiempo de volatilizacin del etanol al momento del proceso de destilacin, debido a que en ella no hay presencia de slidos pesados, los cuales dificulten el proceso de evaporacin al momento de la destilacin.

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En lo que se refiere a la pasteurizacin, no se deben rebasar los 80 C, con el fin de evitar que el producto se caramelice por efecto del contenido de azcares bajo un proceso de alta temperatura; es necesario mantener el rango de temperatura para eliminar la mayor cantidad posible de microorganismos. Una vez enfriado el producto, la levadura se debe activar con agua tibia y posteriormente diluirla en el muclago previamente pasteurizado. Por otro lado, es importante monitorear frecuentemente el tiempo de fermentacin, ya que sta puede ser lenta o rpida, dependiendo de la agilizacin de los agentes descomponedores y del medio cido en que se encuentren. 4.4 FERMENTACIN ANAERBICA NO CONTROLADA En el mtodo no controlado, en primera instancia, se midieron los grados Brix del muclago, para luego dejar fermentar el producto en ausencia de oxgeno sin pasteurizar. Mencionamos que el tiempo de fermentacin vara dependiendo de los grados Brix del muclago. Una vez logrado esto, se realiza la destilacin fraccionada, tomando tres repeticiones de 150 mL de muestra para cada cooperativa, no olvidando que sta debe estar previamente colada. En el diagrama de flujo mostrado anteriormente, se pueden observar los pasos a seguir para el desarrollo de la fermentacin natural hasta la destilacin fraccionada (Figura 6). En este diagrama se descarta el proceso de pasteurizacin, el enfriado e inoculacin por ser un proceso de fermentacin anaerbica no controlada. Es importante considerar que el muclago a recolectar debe ser fresco y puro, debido a que en ello se encuentra el mayor contenido de azcares. Al igual que en el mtodo controlado, el tiempo de fermentacin en el mtodo natural o no controlado puede variar, pudiendo ser ms lento por el hecho de no estar inoculado con levaduras, ya que stos son parte del proceso de la aceleracin de la fermentacin. Al momento que se observe que la salida de CO2 en el proceso de fermentacin es ausente, el producto est listo para destilar.

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El principio de la fermentacin bajo condiciones anaerbicas, la glucosa es convertida en etanol y dixido de carbono (CO2) mediante el fenmeno denominado gluclisis en el ciclo de fermentacin Embden y Meyerhof (Gonzlez 1998). En teora se obtiene la siguiente ecuacin: C6H12O6 > 2C2H5OH + 2CO2 + ENERGA 4.5 PROCESO DE DESTILACIN FRACCIONADA Despus de haber fermentado el producto con el mtodo controlado y no controlado (natural) y previamente colado, se procedi a realizar la destilacin fraccionada. a. Antes de llevar el producto fermentado en el baln, se realiz una separacin de slidos y lquidos, por medio de un colado. El producto a fermentar en lquido, ser ms fcil de evaporarse al momento de la destilacin, sin la presencia de slidos pesados. b. Se coloc una primera muestra de 150 mL de producto fermentado en un baln de destilacin y se le agregaron ncleos de ebullicin. c. Se calent muy suavemente el contendido del baln de destilacin y se mantuvo as hasta que llegar a los 75 C, sin dejar que pasara de los 90 C. d. e. Posteriormente se recolect el lquido destilado entre (75 a 90) C. Se repitieron los pasos anteriores para las dems muestras a destilar, tomando nuevamente 150 mL de muestra, logrando as las tres repeticiones por cada tratamiento. 4.6 ANLISIS ESTADSTICO Para determinar la variabilidad de los resultados de porcentaje y densidad del etanol en las muestras, estas fueron analizadas a travs de un Anlisis de Varianza, empleando el programa de computo SAS (Statistical Analysis System). Los promedios fueron sometidos a una prueba de Duncan, la cual nos permite definir si las diferencias son significativas o no (p < 0,05). Adems, se emple el programa MS Excel 2002.

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5 5.1

RESULTADOS Y DISCUSIN

DESTILACIN FRACCIONADA DEL MTODO CONTROLADO Segn Fessenden y Fessenden (1982), el alcohol etlico es un lquido incoloro,

lmpido y voltil, de olor etreo y sabor picante, que tiene aplicaciones en la industria como disolvente y como materia prima para la sntesis de una gran variedad de compuestos. Se utiliza ampliamente en medicina, en la preparacin de bebidas para consumo humano y ms recientemente en la formulacin de combustibles. De las variables a discutir a continuacin son efecto de las diferentes concentraciones de inculo que van del (2, 4 y 6) % P/P de Saccharomyces cerevisiae. 5.1.1 Anlisis de la densidad del alcohol etlico obtenido En la Figura 7, de lo tres tratamientos con S. cerevisiae, se puede observar que el tratamiento 3 (6 % de S. cerevisiae P/P), obtuvo un leve aumento con respecto a la densidad de etanol de 0,861 gr/mL en comparacin con los tratamientos 1 y 2 (2 y 4 % de S. cerevisiae P/P respectivamente), que fueron de 0,847 gr/mL y 0,842 gr/mL respectivamente. Sin embargo, los tres tratamientos estn por encima de la densidad real del etanol, siendo sta de 0,791 gr/mL. Esto significa que estos resultados no concuerdan con lo reportado por Fessenden y Fessenden (1982).
1,000

Densidad (gr/mL)

0,800 0,600 0,400 0,200 0,000 2% S. cerevisiae 4% S. cerevisiae 6% S. cerevisiae

Tratamientos

Figura 7. Densidad del etanol de tres diferentes tratamientos. El resultado de las densidades altas en cada uno de las medias de los tratamientos con respecto a la densidad real del etanol, difiere significativamente, 18

debido a que el muclago fresco estaba diluido con agua y esto provoc que el contenido de azcares disminuya. Por haber poca glucosa, el proceso del fermento por medio de la gluclisis, produce poco alcohol. Adems, al momento de realizar la destilacin fraccionada se comienza a evaporar agua y se volatiliza el etanol, y stos al mezclarse, sus densidades comienzan a equilibrarse, asemejndose a la densidad del agua. Segn Villalobos (1985), los mejores resultados se obtienen cuando se utiliza muclago fresco y puro, sin diluir. Finalmente, entre las medias de la densidad de etanol obtenido, no hay diferencia significativa, ya que los tres tratamientos presentan un mismo

comportamiento, segn el anlisis de Duncan (Anexo 1). 5.1.2 Anlisis del porcentaje de etanol obtenido En la siguiente figura, podemos observar que en el tratamiento con 6 % de Saccharomyces cerevisiae P/P, se obtuvo un 1,37 % de etanol a partir de 150 mL de muestra destilada, mientras que con los tratamientos del 2 y 4 % de S. cerevisiae P/P, los porcentajes de etanol son de 1,28 % y 1,32 % (Figura 8). Esto significa, que de 150 mL de muestra destilada se obtiene un rango de (1,9 a 2,1) mL de alcohol etlico, lo cual traducido a 1 000 L de muclago diluido se obtendran en promedio 13,35 L de etanol. Sin embargo, si el muclago es fresco y puro, sin diluir, el resultado de obtener alcohol etlico sera siete veces mayor (Villalobos 1985).

1,20

% de etanol

0,80

0,40

0,00 2% S. cerevisiae 4% S. cerevisiae 6% S. cerevisiae

Tratamientos

Figura 8. Porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra destilada.

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Estudios realizados por Villalobos (1985), muestran que el concentrado de inculo (S. cerevisiae), afecta significativamente el rendimiento expresado en volumen de etanol, debido a que al haber mayor cantidad de levadura presente aumentar la produccin de etanol, as como tambin la eficiencia de fermentacin. Mencionamos que esta afirmacin parece apoyarse con los resultados obtenidos en la Figura 8. Sin embargo, por medio del anlisis Duncan podemos observar que entre las medias de los tres tratamientos no hay diferencia significativa, ya que el porcentaje de etanol obtenido (2, 4 y 6) % de S. cerevisiae, es prcticamente igual (Anexo 2). 5.2 DESTILACIN FRACCIONADA DEL MTODO NO CONTROLADO

5.2.1 Anlisis de la densidad del alcohol etlico obtenido Segn los resultados de densidad que se muestran en la Figura 9, stos oscilan entre (0,766, 0,826 y 0,791) gr/mL para Coopetarraz, Coopedota y Coopepalmares respectivamente. Segn Fessenden y Fessenden (1982), mencionan que la gravedad especfica (densidad) del etanol es de 0,79 gr/mL. Los resultados obtenidos no fueron exactamente iguales, a excepcin de la Cooperativa Coopepalmares que fue de 0,791gr/mL.
1.000

Densidad (gr/mL)

0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 Coopetarraz Coopedota Coopepalmares

Tratamientos

Figura 9. Densidad del etanol de tres diferentes cooperativas. Es importante considerar que estos resultados son de la fermentacin no controlada, lo que no nos permiti manejar la cantidad de cultivo a utilizar en cada

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tratamiento; por otro lado hay que tener en cuenta la temperatura y tiempo al momento de la destilacin, ya que stas son variables muy importantes que determinan la densidad requerida que debe tener el etanol. Otra observacin que consideramos de mucha importancia es que todos los fluidos recolectados estaban diluidos, ya que difcilmente se puede obtener muclago puro directamente de la mquina desmucilagenadora del grano, sta es otra de las razones por las cuales la densidad puede variar. Por lo tanto, en este caso hay diferencia significativa entre las medias de los tratamientos, ya que se puede observar un cambio gradual de densidad entre las tres cooperativas, que va de Coopetarraz con 0,766 gr/mL, Coopepalmares con 0,791 gr/mL y Coopedota con 0,826 gr/mL, segn el anlisis de Duncan (Anexo 3). 5.2.2 Anlisis del porcentaje de etanol obtenido Los porcentajes de alcohol etlico obtenidos en las tres diferentes cooperativas se muestran en la grfica siguiente que son de (1,22, 1,53 y 1,31) % para Coopetarrazu, Coopedota y Coopepalmares, respectivamente. En este tratamiento no se utilizaron cultivos de Saccharomyces cerevisiae (Figura 10).
1,60 1,20 0,80 0,40 0,00 Coopetarraz Coopedota Coopepalmares

% de etanol

Tratamientos

Figura 10. Porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra destilada. Si vemos esto de otra forma y lo analizamos ms a fondo a partir de 1 000 L de muclago se obtendran, para el caso de Coopetarraz 12,2 L de alcohol etlico, para Coopedota 15,3 L y Coopepalmares 13,13 L. Es importante considerar que la cantidad

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de muclago que se necesita para producir esta cantidad es relativamente alta, considerando que el muclago se encuentra diluido, en cambio si el muclago es puro y fresco y sin diluir, la cantidad sera menos. Entre tanto, las medias entre los tres tratamientos no presentan ninguna diferencia significativa, ya que tanto Coopetarraz, Coopedota y Coopepalmares presentan el mismo comportamiento con respecto al porcentaje de etanol obtenido, segn la prueba de Duncan (Anexo 4). 5.2.3 Relacin de grados Brix con el porcentaje de etanol obtenido Segn Chan (2006), por cada 2 grados Brix se obtiene un 1 % de alcohol etlico. Para el caso de Coopetarraz nosotros encontramos que el muclago contena 5,2 grados Brix y que nuestra produccin de etanol sera tcnicamente de 2,6 %. Por otro lado, para el caso de Coopedota que presenta 7,8 grados Brix la produccin de etanol sera de 3,9 %, y para el caso de Coopepalmares, si los grados Brix son 5,8, la produccin de etanol, sera de 2,9 %. Sin embargo en la Figura 11 mostramos los resultados de porcentajes de etanol obtenidos. Tenemos que para Coopetarraz se obtuvo un 1,22 % de etanol, un 1,31 % para Coopepalmares y un 1,53 % para Coopedota, que en comparacin a los resultados tericos, stos son inferiores con respecto a lo citado por Chan (2006).
Vol/etanol (mL) 8,00 6,00 4,00 2,00 0,00 COOPETARRAZ COOPEDOTA Tratamientos COOPEPALMARES Grados Brix

Figura 11. Efecto de grados Brix del muclago fresco con respecto al porcentaje de etanol obtenido en 150 mL de muestra.

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El efecto de los porcentajes de etanol obtenidos en 150 mL de muestra destilada de las tres cooperativas, pudo haber sido el resultado de mltiples factores, uno de ellos es con respecto a la altitud en la que se encuentran establecidas las plantaciones de cafeto. Tal es el caso de Coopedota, que se encuentra a una altitud que oscila entre (2 000 a 2 100) msnm y cuya relacin de grados Brix es de 7,8, la cual es la ms alta, en comparacin con las cooperativas Coopetarraz y Coopepalmares que se encuentran a una altitud de (1 200 a 1 700) msnm y (1 000 a 1 200) msnm, respectivamente; con grados Brix de 5,2 y 5,8. Mientras para el Beneficio Santa Rosa, Turrialba que est a una altitud de 670 mnsm, presenta 3,65 grados Brix en el muclago (Anexo 5). Otra variable importante que determina el porcentaje de etanol, es qu tan diluido se encuentre el muclago, ya que al momento del proceso de la desmucilaginacin, el muclago tiende a mezclarse con el agua, lo que ocasiona que la concentracin de grados Brix del muclago disminuya. Tambin es importante considerar que durante el proceso de fermentacin anaerbica no controlada pueden haber efectos en la baja produccin de etanol, debido a los microorganismos antagnicos, que afectan el proceso de la gluclisis, o sea, de la transformacin de los azcares presentes en el muclago. Por otro lado, se puede mencionar que el equipo del laboratorio de suelos y aguas de la Universidad Earth, no son los adecuados para llevar a cabo este tipo de experimentos, ya que el proceso de fermentacin y destilado requiere de equipos precisos para lograr que los resultados mostrados en la grafica anterior se asemejen al supuesto de que por dos grados Brix se produce un grado de alcohol. Si la situacin terica resultase aplicable y que una fanega de caf en cereza produce 40 litros de muclago concentrado, con una concentracin de 8,58 grados Brix; cuando el grado de madurez de la cereza es mximo, se podra mantener hasta un 4,27 % de alcohol. Ello quiere decir, que con cada litro de muclago se obtendran 42,7 mL de alcohol 42,7 litros de etanol en un metro cbico de muclago. Para una produccin de Coopalmares y Coopedota, de alrededor de 40 000 fanegas al ao, se podra esperar una produccin de 68 320 litros de alcohol, resultado de la fermentacin de 1 600 metros cbicos de muclago. Entonces, la produccin de etanol para Coopetarraz con 120 000 fanegas, ser tres veces mayor.

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CONCLUSIONES

Para fines de produccin de etanol por medio del proceso de fermentacin controlada, se pueden emplear cualquiera de los tres tratamientos (2, 4 y 6) % de cultivo de S. cerevisiae.

Del muclago de Coopedota se obtuvo el ms alto porcentaje de etanol, 1,53 %. Expresado en volumen es de 2,30 mL de 150 mL de muestra destilada, lo que significa que entre mayor sea la altitud del caf, mayor es la cantidad de grados Brix presente en el fruto del caf, lo cual se refleja en el volumen de etanol obtenido.

El control de temperatura influye gradualmente en el proceso de la destilacin fraccionada, ya que a temperaturas inferiores a 70 C se destila metanol, y por arriba de los 70 C se destila etanol. Considerando que la temperatura de ebullicin del etanol es de 78 C.

Monitorear que la temperatura no baje de los 70 C y no pase de los 90 C, para evitar cambios en la pureza y densidad del etanol.

El muclago diluido afecta proporcionalmente la densidad, grados Brix porcentaje del etanol.

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RECOMENDACIONES

Se recomienda llevar a cabo el proceso de fermentacin con ayuda de levaduras Saccharomyces cerevisiae, as estamos asegurando que el mtodo sea controlado.

Que el muclago con el que se trabaje sea puro y no est diluido para que los resultados a obtener sean excelentes.

Se recomiendan realizar anlisis de pureza del alcohol etlico, por medio de cromatografa gaseosa, para determinar el grado del etanol.

Es recomendable llevar a cabo el proceso de pasteurizacin, ya que as estamos asegurando la pureza del inculo (Saccharomyces cerevisiae), adems se recomienda que el tiempo de pasteurizacin no sea inferior a un minuto, ni menor a 72 C, lo cual es suficiente para la eliminacin de las bacterias.

Es importante planificar bien las actividades de recoleccin del muclago, considerando que las nicas fechas en las que se consigue este subproducto (desecho) del caf son en los meses de noviembre a diciembre y de enero a febrero.

Realizar ensayos experimentales con frutos de cafs bien maduros, para obtener la mayor concentracin de azucares (grados Brix) y por lo tanto de etanol.

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LITERATURA CITADA

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ANEXOS

Anexo 1. Anlisis de Duncan entre las medias de las densidades de etanol. Fermentacin controlada.
Duncan A A A Media 0,847 0,842 0,861 Repeticiones 3 3 3 Tratamientos 2% S. cerevisiae 4% S. cerevisiae 6% S. cerevisiae

Anexo 2. Anlisis de Duncan entre las medias del porcentaje de etanol. Fermentacin controlada.
Duncan A A A Media 1,28 1,32 1,37 Repeticiones 3 3 3 Tratamientos 2% S. cerevisiae 4% S. cerevisiae 6% S. cerevisiae

Anexo 3. Anlisis de Duncan entre las medias de las densidades de etanol. Fermentacin no controlada.
Duncan A AB B Medias 0,826 0,791 0,766 Repeticiones 3 3 3 Tratamientos Coopedota Coopepalmares Coopetarraz

Anexo 4. Anlisis de Duncan entre las medias del porcentaje de etanol. Fermentacin no controlada.
Duncan A A A Medias 1,53 1,31 1,22 Repeticiones 3 3 3 Tratamientos Coopedota Coopepalmares Coopetarraz

Anexo 5. Datos climticos de tres cooperativas y del Beneficio Santa Rosa.

Cooperativas Coopepalmares Coopetarraz Coopedota Turrialba BSR Altitud (msnm) 1000 a 1200 1200 a 1700 2000 a 2100 670 Temperatura C 22 Min 21, Max 26 Min 10, Max 25 Min 22, Max 30 1565 a 2052 1924 a 2006 2200 Precipitacin anual (mm) Muclago C 5,8 5,2 7,8 3,65

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