LABORATORIO DE ANALISIS QUIMICO II

LICENCIATURA EN QUMICA

UACJ
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ICB
PROGRAMA DE QUMICA
ANALISIS QUMICOS II
Universidad Autnoma de Ciudad Jurez Instituto de Ciencias Biomdicas Departamento de Ciencias Qumica Biolgicas

Manual
Q. B. P. ARMANDO MARQUEZ

Cd. Jurez Chihuahua Fecha:

Contenido

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PRACTICA 1: MAXIMO DE ABSORCION Y CURVAS DE CALIBRACION ---------------- 3 PRACTICA 2: DETERMINACION DE FENOLES TOTALES POR ESPECTROFOTOMETRIA------------------------------------------------------------------------------- 5 PRACTICA 3: DETERMINACION DE NITROGENO (NITRITO) EN AGUA------------------ 7 PRACTICA 4: DETERMINACION DE FIERRO----------------------------------------------------- 9 PRACTICA 5: NITROGENO DE NITRATO, METODO ESPECTOFOTOMETRICO ULTRAVIOLETA SEGN LA NORMA MEXICANA NMX-AA-082-1986 (MODIFICADA)---------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11 PRACTICA 6: PRINCIPIO ACTIVO DE UN MEDICAMENTO COMERCIAL--------------- 14 PRCTICA 7: DETERGENTES EN MUESTRAS ACUOSAS------------------------------------16 PRCTICA 8: DETERMINACION DE CALCIO EN UNA MUESTRA DE AGUA MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA (EAA)-------------- 18 PRCTICA 9: DESPLAZAMIENTO DE MAXIMOS DE ABSORCION EN ESPECTROS UV-Vis------------------------------ ------------------------------------------------------------------------20 PRCTICA 10: ANLISIS DE CADMIO EN AGUA POR FLUORESCENCIA MOLECULAR----------------------------- ----------------------------------------------------------------23 PRCTICA 11: FOSFORO INORGANICO EN SUERO HUMANO---------------------------- 25 PRCTICA 12: ESPECTROFOTOMETRIA DE INFRARROJO EN LA IDENTIFICACIN DE COMPUESTOS ORGANICOS--------------------------------------------------------------------- 27 PRCTICA 13: PROCESOS DE EMISION MOLECULAR (LUMINISCENCIA)------------- 29 ACTIVIDAD PRELIMINAR POR PARTE DEL ALUMNO---------------------------------------30

PRACTICA No. 1 MAXIMO DE ABSORCION Y CURVAS DE CALIBRACION

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OBJETIVO Determinar el mximo de absorcin y elaborar la curva de calibracin para una solucin de nitrato de cobalto. Mejorar las habilidades en el manejo de espectrofotmetros de visible. FUNDAMENTO TEORICO CURVAS ESPECTRALES La ley de Beer es de gran importancia en anlisis cuantitativo debido que muestra que le variacin de A es directamente proporcional a la concentracin de un soluto. Para aplicar la ley de Beer debe SELECCIONARSE LA LONGITUD DE ONDA OPTIMA, y para este propsito se determina la curva espectral. En la prctica cada por ciento de transmitancia (%T) o Absorbencia (A) se grafica como una funcin de la longitud de onda., manteniendo la concentracin C y el espesor de celda (b) constantes. Las curvas resultantes se llaman espectros de transmitancia y espectro de absorcin respectivamente. Las curvas espectrales son caractersticas de le sustancia absorbente, y por tanto estas curvas pueden ser utilizadas para el anlisis cualitativo de un soluto en particular. Algunas sustancias tienen espectros con muchos picos. Las sustancias orgnicas generalmente tienen curvas espectrales ms complicadas. El espectro en le regin IR son altamente discretas y por tanto especialmente tiles para el anlisis cualitativo. Para el anlisis cuantitativo se seleccione una longitud de onda donde el soluto absorbe fuertemente y las sustancias interferentes absorben mnimamente. PRUEBA DE LA LEY DE BEER Para usar la ley de Beer en anlisis exactos de un material homogneo, siempre se debe probar la validez (u obediencia) de la ley para dicho material y en general esto se aplicar mientras no se conozcan les desviaciones de la ley de Beer por un material homogneo. Para probar la ecuacin A = EbC se prepara una serie de soluciones de concentraciones conocidas, dentro de un rango que se crea cubre las concentraciones de muestras desconocidas y se determina la absorbancia A para cada una de las muestras a espesor y longitud de onda constantes. Las absorbencias medidas son graficadas como una funcin de la concentracin. Si la ley de Beer es obedecida en los rangos de concentracin probados, se obtendr una lnea recta que parte del origen. Las desviaciones de la ley son designadas como positiva o negativa de acuerdo a que la curva este arriba o abajo de la lnea recta. PROCEDIMIENTO Preparar una solucin 0.2 M de nitrato de cobalto. A partir de la solucin anterior prepare soluciones a 0.1, 0.05, 0.025 y 0.0125 M de dicha sustancia para elaborar su curva estndar. Encienda el instrumento espectrofotmetro de visible, djelo calentar por 20 minutos y fije en cero de absorbancia y/o 100 % de transmitancia contra un blanco de agua destilada. Con la solucin 0.2 M mida la absorbancia en intervalos de 40 nm desde 400 hasta 700 nm, grafique longitud de onda contra concentracin y determine el mximo de

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absorcin, haga dos medidas ms en + - 20 nm con respecto al mximo de absorcin identificado y establezca el mximo de absorcin optimo. Fije la longitud de onda al mximo de absorcin, ponga a cero de absorbancia contra el blanco y mida las absorbancias de las muestras estndar, grafique concentracin contra absorbancia y obtenga su curva de calibracin respectiva. Mediante el programa Excel obtenga el coeficiente de correlacin y la ecuacin de su curva. Todas las medidas se deben hacer contra un blanco del solvente utilizado en la preparacin de muestras.

PRACTICA No. 2

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DETERMINACION DE FENOLES TOTALES POR ESPECTROFOTOMETRIA OBJETIVO Mediante espectrofotometra visible determinar la cantidad de fenoles totales en una muestra problema. FUNDAMENTO TEORICO Mtodo aprobado por la EPA para la determinacin de fenoles totales en muestras de diversos orgenes como aguas residuales, industriales, domsticas, salinas y superficiales. Este mtodo no diferencia entre distintos tipos de fenoles, solo se reporta la concentracin de fenoles totales en la muestra. Los compuestos tipo fenlico reaccionan con la 4-aminoantipirina en presencia de ferricianuro de potasio a un pH de 10, dando lugar a un compuesto colorido (rojo-caf). La cantidad de color producido es una funcin de la concentracin de fenol en la muestra. El fenol puro es un compuesto blanco, slido, que se licua (fenol lquido) al agregar 5% de agua. Un gran nmero de derivados del fenol se han usado como antispticos, desinfectantes, germicidas, anestsicos locales, antioxidantes y conservadores. El fenol altera y precipita las protenas celulares envenenando as directamente todas las clulas. PROCEDIMIENTO 1.- Preparar las siguientes soluciones: aminoantipirina al 2 % en agua destilada. Ferricianuro de potasio K3Fe(CN)6 al 8 % en agua destilada. Buffer pH = 10: 16.9 gr de NH4Cl en 143 ml de NH4OH concentrado y diluir a 250 ml con agua destilada; 2.0 ml de esta solucin deben de poder ajustar el pH de 100 ml a 10. Solucin patrn de fenol al 0.1 % en agua destilada. 2.- A partir de la solucin patrn de fenol prepare la siguiente disolucin: diluya 10.0 ml de la sol. patrn a un matraz aforado de 100 ml y afore con agua destilada, de esta ltima dilucin preparar los siguientes estndares de calibracin: Concentracin (microgramos/L) Volumen de solucin 50.0 0.5 ml 100.0 1.0 ml 200.0 2.0 ml 500.0 5.0 ml 800.0 8.0 ml 1000.0 10.0 ml 0.0 blanco (0.0 ml) 3.- A cada una de las soluciones estndar preparadas anteriormente se les agrega lo siguiente (en ese orden): i) 2.0 ml de la solucin amortiguada; verifique que el pH sea 10. ii) 2.0 ml de la solucin de aminoantipirina y se mezcla. 6

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iii) 2.0 ml de la solucin de ferricianuro de potasio y se mezcla. iiii) Despus de 15 min. Se lee la absorbancia a 510 nm. 4.- Sobre su muestra problema repita del paso no. 3 en adelante. 5.- Haga una grafica de absorbancia contra concentracin y determine la concentracin de su muestra problema.

PRACTICA No. 3 DETERMINACION DE NITROGENO (NITRITO) EN AGUA

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OBJETIVO Determinar la viabilidad de un acuario por medio de la cuantificacin de nitrgeno de nitritos presentes en una muestra problema. FUNDAMENTO TEORICO

El ion nitrito puede ser determinado indirectamente por espectroscopia de absorcin molecular (visible) mediante la reaccin con un reactivo revelador (de color). Nitritos.- En algunos casos, los nitratos como el nitrato de bismuto o los nitratos del agua de pozo pueden ser convertidos en nitritos por la accin de las bacterias intestinales. Los nitritos pueden entonces causar envenenamiento. Los nitritos se usan tambin para conservar el color de la carne en los procesos de encurtido y salado de la misma. El residuo de nitrito permisible en los alimentos es de 0.01%. Las concentraciones de nitritos en agua de pozo mayores de 10 ppm, pueden producir metahemoglobinemia en los lactantes. Los nitritos pueden interactuar con las aminas libres o en sistemas biolgicos para formar nitrosaminas, que son carcingenas en las animales y se cree que tambin lo sean para los seres humanos. Estas nitrosaminas se encuentran en las superficies acuticas como resultado de la contaminacin.

PROCEDIMIENTO Reactivo revelador.- Preparado al mezclar: 1.0 gr de sulfanilamida, 0.1 gr de N-(1.naftil)etilendiamina hidrocloruro y 10 ml de cido fosfrico concentrado (85%), se aforan a 100 ml con agua destilada, colquese esta solucin en frasco mbar a resguardo de la luz y en refrigeracin para evitar la descomposicin fotoqumica y termal. Patrn de nitrito.- Disolver 0.125 gr de nitrito de sodio en 0.1 lt, de esta solucin tome 2.5 mL y afore a 25 mL, calcule la concentracin de nitrito de sodio y de nitrgeno en ppm. Curva estndar.- Preparar 25 ml de cada una de las siguientes concentraciones: 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 y 5.0 ppm. partiendo de la solucin patrn de nitrito De estas soluciones tome 2.5 ml de cada una y afrelas a 25 ml con agua destilada. A cada una de las soluciones adicione 1.0 ml del reactivo revelador, espere 10 min y lea la absorbancia a 543 nm. Blanco de referencia.- A 25 ml de agua destilada agregue 1.0 ml de reactivo revelador y espere 10 min, calibre a 100 % T y 0 de absorbancia. Calcular la cantidad de nitrgeno presente en la muestra como nitrito en ppm (mg/lt)

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PRACTICA No. 4

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DETERMINACION DE FIERRO OBJETIVO Determinar y comprobar mediante espectrofotometra visible la cantidad de fierro en forma ferrosa contenido en una tableta vitamnica comercial FUNDAMENTO TEORICO HIERRO El hierro es un mineral responsable de ayudar a la creacin de hemoglobina. Por lo que una deficiencia provoca anemia, fatiga y baja las defensas. Alrededor de dos terceras partes del hierro en el cuerpo se utiliza para la produccin de hemoglobina, y el resto se encuentra en enzimas, msculo y otros tejidos. Funcin El hierro combinado con el oxgeno genera la hemoglobina. Esta transporta el oxgeno desde nuestros pulmones hasta cada una de las clulas de nuestro cuerpo. Deficiencia Anemia, fatiga, depresin, palpitaciones y bajas resistencias a las infecciones. Exceso Altos ndices de este elemento pueden aumentar el riesgo de enfermedades del corazn. Fuentes Hgado, carne magra, sardinas, yema de huevo, vegetales de hoja verde, dtiles, higos secos y cereales enriquecidos.

PROCEDIMIENTO Reactivo Hidroquinona.- Preparar 50.0 ml de hidroquinona con una concentracin de 10.0 gr/L. Reactivo O-fenantrolina.- Pesar 0.125 gr de O-fenantrolina, disolverlos en 5.0 ml de etanol y aforar a 50.0 ml con agua destilada. [Citrato trisdico.- Preparar 50 ml de citrato trisdico con una concentracin de 25.0gr/L, (nota.- cido ctrico)]. Estndar de fierro.- Preparar 100.0 ml de sulfato de amonio y fierro hexahidratado con una concentracin de 0.04 gr de fierro/L. Disuelva la sal de fierro en agua en un matraz volumtrico que contenga 0.2 ml de cido sulfrico concentrado. Curva estndar.- En un matraz aforado de 50.0 ml poner 5.0 ml de la sol. estndar de fierro y [aadir a gotas solucin de citrato trisdico hasta pH = 3.5 despus] agregar 1.0 ml de la solucin de hidroquinona y 1.5 ml de la solucin de Ofenantrolina y aforar a 50 ml con agua destilada. Prepare otras tres soluciones ahora 10

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con 2.5, 1.0 y 0.5 ml de la solucin estndar de fierro de la misma manera que para la de 5.0 ml, [tomando en cuenta que ahora el volumen de citrato de sodio es proporcional al volumen de estndar]. Muestra problema.- Colocar una tableta de vitamina en una vaso de precipitado de 200.0 ml y agregar 25.0 ml de cido clorhdrico 6M y hervir durante 15 min. De preferencia en la campana de extraccin. Filtrar esta solucin directamente a un matraz aforado de 100.0 ml (recuerde hacer 2 a 3 lavados sobre el vaso y el filtro con 5 a 10 ml de agua destilada), dejar enfriar y aforar a 100.0 ml con agua destilada. Diluir 5.0 ml de la solucin anterior a 100.0 ml con agua destilada en un matraz aforado (en caso de que la vitamina comercial a determinar indique que contiene menos de 15.0 mg, tome 10.0 ml en vez de 5.0 ml). de esta ultima dilucin tome 5.0 ml y [agregue gota a gota citrato de sodio hasta pH = 3.5] despus aada 1.0 ml de solucin de hidroquinona, 1.5 ml de O-fenantrolina y afora a 50.0 ml con agua destilada y deje reposar por 10 minutos. Blanco de referencia.- A 5.0 ml de agua destilada [agregue citrato de sodio hasta un pH = 3.5 despus] aada 1.0 ml de solucin de hidroquinona, 1.5 ml de Ofenantrolina y afora a 50.0 ml con agua destilada. Construir su grafica de absorbancia contra concentracin y calcular la cantidad de fierro en la tableta. Leer a 540 nm.

PRACTICA No. 5

NITROGENO DE NITRATO METODO

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ESPECTROFOTOMETRICO ULTRAVIOLETA SEGN LA NORMA MEXICANA NMX-AA-082-1986 (modificada)

OBJETIVO Determinar la cantidad de N como nitrato por espectrofotometra de u ultravioleta. Mejorar las habilidades en el manejo de espectrofotmetros de ultravioleta. FUNDAMENTO TEORICO Aunque los nitratos son un producto normal del metabolismo humano el agua con altas concentraciones en nitratos representa un riesgo para la salud, especialmente en los nios. Si se bebe agua con elevadas concentraciones de nitratos la accin de determinados microorganismos en el estmago puede transformar los nitratos en nitritos, que al ser absorbido en la sangre convierte a la hemoglobina en metahemoglobina. La metahemoglobina se caracteriza por inhibir el transporte de oxgeno en la sangre. Aunque la formacin de metahemoglobina es un proceso reversible, si puede llegar a provocar la muerte, especialmente en nios (sndrome del beb azul"). Pero tambin los nitratos pueden formar nitrosaminas y nitrosamidas compuestos que pueden ser cancergenos. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) fija el lmite de nitrato en el agua de consumo humano en 50 mg/l de nitrato (como N). En cambio, la Agencia para la Proteccin del Medio Ambiente Norteamrica (EPA) sita este lmite en 10 mg/l de nitrato. Por su parte, la Comunidad Europea fijan los niveles mximos permitidos de nitratos en 50mg/l de N. La concentracin de nitratos en una muestra de agua se determina midiendo la absorbancia en el mbito de ultravioleta a 220 nm y comparndola con una curva de calibracin. La relacin entre absorbancia y concentracin es lineal hasta una concentracin de 11 g/L. El mnimo detectable es de 0.01 g /L. El mtodo es rpido y adecuado para pruebas de control rutinario. Nota.- la Norma ha sido modificada para adecuarla a volmenes menores. REACTIVOS Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado analtico a menos que se indique otra cosa. Solucin madre de nitratos Pesar 0.0722 g de nitrato de potasio anhidro y diluir a 100 mL con agua destilada. Preservar con 0.2 mL de cloroformo (CHCl3); 1 mL = 100 g N_NO3. Esta solucin es estable por seis meses. Solucin patrn de nitrato Diluir 5 cm3 de solucin madre de nitratos a 50 cm3 con agua destilada; 1 cm3 = 10 g NNO3. Solucin de cido clorhdrico (densidad 1.19 g/cm3) 1N

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Diluir 8.3 cm3 de cido clorhdrico concentrado (HCl) a 100 cm3 con agua destilada. CURVA DE CALIBRACION Diluir los siguientes volmenes de la solucin patrn y completar a 5 cm 3, 0, 0.1, 0.3, 0.7, 1.0, 1.5, 2.0, 3.0 y 3.5 cm3 obtenindose las siguientes concentraciones; 0, 0.2, 0.6, 1.4, 2.0, 3.0, 4.0, 6.0, y 7.0 g de N_NO3/cm3 ( de 0 a 35.0 g de N_NO3). Aadir 0.1 cm3 de solucin de HCl 1N a cada una de las soluciones de la curva y agitar vigorosamente. Trazar la curva de calibracin graficando las absorbancias obtenidas contra las concentraciones correspondientes. INTERFERENCIAS Interfiere la materia orgnica disuelta, detergentes, nitritos y cromo hexavalente. Los nitratos absorben la luz a 220 nm, la materia orgnica absorbe la luz tanto a 220 como a 275 nm, por lo que una segunda medicin a 275 nm se usa para corregir los valores de nitrgeno de nitratos. MUESTREO Y ALMACENAMIENTO Las muestras deben ser representativas de las condiciones que existan en el punto y hora de muestreo y tener el volumen suficiente para efectuar las determinaciones correspondientes. Para el caso de pozos y tanques elevados se deja fluir el agua de 5 a 10 minutos con el fin de desalojar el agua estacionada en la tubera. Posteriormente se recoge la muestra en recipientes de vidrio o plstico, y debe ser analizada lo ms pronto posible. En caso de requerir almacenamiento, mantener en refrigeracin por un mximo de 48 horas entre 275 y 278 K (2 y c). PROCEDIMIENTO Tomar 5.0 cm3 de muestra clara, filtrar si es necesario, primero por el papel de poro fino y posteriormente a travs del filtro de membrana. Aadir 0.1 cm3 de solucin de HCl 1N y agitar vigorosamente. Hacer las lecturas de absorbancia en la misma forma que la curva de calibracin. Leer las absorbancias de las muestras a 275 nm, para determinar interferencias debidas a materia orgnica. CALCULOS Correccin por materia orgnica disuelta. Restar dos veces la lectura de absorbancia a 275 nm (A 275) de la lectura de absorbancia a 220 nm (A 220). Si el valor de la lectura a 275 nm es mayor del 10% del valor de la lectura a 220 nm, este mtodo no es aplicable. AC = A 220 - 2 A 275 Leer en la curva de calibracin la concentracin correspondiente a las observancias ya corregidas de las muestras y determinar el contenido de nitrgeno de nitratos en g N_NO3/cm3. En caso de haber trazado la curva de calibracin graficando las absorbancias obtenidas contra los g correspondientes (de 0 a 35.0 g), el contenido en g N_NO3/cm3 se determina mediante la siguiente frmula: ug N - NO-3/cm3 = C / V Donde: C = g ledos de la curva. V = Volumen de muestra en cm3 para el anlisis.

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PRACTICA No. 6

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PRINCIPIO ACTIVO DE UN MEDICAMENTO COMERCIAL

OBJETIVO Determinar y comprobar mediante espectrofotometra ultravioleta el contenido real del principio activo de un medicamento comercial. FUNDAMENTO TEORICO Las especies que absorben en el UV o VIS es un proceso de dos etapas, que implican una excitacin electrnica cuyo tiempo de vida es del orden de 10 8 s, al cabo del cual termina por algn proceso de relajacin, siendo el ms comn como calor. La absorcin de radiacin UV - VIS es causa de la excitacin de los electrones enlazantes, por lo tanto est en funcin de los tipos de enlaces en las especies en estudio. Clasificacin de las especies absorbentes en base a transiciones que implican: 1) electrones y n, 2)electrones d y f, y 3)electrones de transferencia de carga. Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber REM, ya que todos contienen electrones de valencia que pueden ser excitados. Energa de los electrones de enlaces sencillos son altas (UV vaco) < 185. En el UV VIS grupos funcionales con electrones de valencia con energa de excitacin bajas. El propranolol pertenece al grupo de medicamentos llamados bloqueantes beta. Se usa para tratar la presin alta, para aliviar la angina (dolor de pecho) y en los pacientes con ataque al corazn para ayudar a prevenir ms ataques al corazn. El propanolol tambin se usa para corregir latidos irregulares, prevenir migraas y tratar temblores. PROCEDIMIENTO Estndar: disuelva el estndar en 100 mL de agua destilada a una concentracin de 400 ppm. Problema: triture el numero de tabletas equivalente a 400 mg de propanolol, transfiralas a un matraz de 500 mL y disulvalas con 350 mL de cido clorhdrico 1:100 en agitacin constante, afore a 500 con el mismo cido, centrifuge aproximadamente 20 mL de esta solucin. Ensayo: transfiera 5 mL de cada una de las soluciones anteriores y agrgueles lo siguiente: 10 mL de agua destilada. 1 mL de Hidrxido de sodio al 20 % 25 mL de heptano. Agite durante 5 min. y deje separar las capas. Determine la absorbancia de la fraccin no polar de cada una de las soluciones a una longitud de onda de 293 nm, use como blanco heptano.

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Calcule la concentracin o cantidad del principio activo de las tabletas a partir de la ecuacin. Cp = 0.5 Cs (Ap / As) Medicamento: INDERALICI Clorhidrato de propranolol...........40.0 mg Excipiente c.b.p. ........................1 tab.

PRACTICA No. 7

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DETERGENTES EN MUESTRAS ACUOSAS OBJETIVO Conocer y aplicar tcnica de separacin por extraccin. Realizar una prueba del contenido de detergentes a una muestra de agua residual. FUNDAMENTO TEORICO A mediados del siglo XX los detergentes comenzaron a ser usados como productos limpiadores en sustitucin de los jabones comunes y pronto su demanda se multiplic al grado que en la actualidad una gran variedad de ellos son los agentes de limpieza ms populares tanto en uso domstico como industriales. Son muchas las dificultades causadas por un alto contenido de los detergentes en aguas y aguas residuales, en primer lugar es indeseable la formacin de espuma en los ros desde el punto de vista esttico y a su vez la toxicidad de los surfactantes que contienen representan un serio peligro a la flora y fauna acutica; sin dejar de pensar que esta agua al ser utilizadas para irrigacin contaminen los suelos y por lo consiguiente los cultivos. La formacin de espuma en las corrientes dificulta la transferencia del oxgeno atmosfrico en el agua, lo que tambin ocurre en las unidades de aeracin de plantas de tratamiento. Los detergentes contienen un elevado porcentaje de fosfatos los cuales son nutrientes, que estando presentes en un cuerpo de agua contribuyen a una superpoblacin de la flora acutica, que al morir, por accin degradativa de los microorganismos ocasionan una mayor demanda de oxgeno perjudicial para los peces y para el propio cuerpo de agua; este fenmeno se conoce como eutroficacin. En los Estados Unidos Mexicanos el surfactante ms ampliamente utilizado es el sulfonato de alquil benceno ABS, por lo que es utilizado para estandarizar los siguientes mtodos analticos: Mtodo colorimtrico del Azul de Metileno. El mtodo se basa en la formacin de una sal, cuando el azul de metileno reacciona con los surfactantes (ABS, otros sulfonatos y steres sulfatados). La sal es soluble en cloroformo y la intensidad del color es proporcional a su concentracin. La intensidad es medida espectrofotomtricamente. PROCEDIMIENTO El procedimiento requiere que la muestra se encuentre libre de color y de turbiedad; lo cual se logra adicionando 25 ml de suspensin de hidrxido de aluminio y aproximadamente 150 ml. de muestra y filtrando a travs de papel filtro. En un embudo de separacin tomar 100 ml. de muestra o parte alcuota aforada a 100 ml. con agua destilada. Correr un testigo de agua destilada. Adicionar unas gotas de fenolftalena para estimar si la muestra est cida (incolora) o alcalina (color rosa). Neutralizar a pH de 7 con NaOH o H2SO4 1N. Extraer con 25 ml de la solucin de azul de Metileno y 10 ml de cloroformo (cuidado con la presin generada). Transferir la capa de cloroformo a un segundo embudo de separacin.

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Repetir esta operacin de extraccin dos veces ms, cada una con 10 ml de cloroformo. Adicionar 50 ml de solucin de lavado al segundo embudo de separacin (el que contiene los 3 extractos de cloroformo), agitar vigorosamente por 30 segundos, dejar escapar el gas, para luego separar las fases (Nuevamente, cuidado con la presin generada). Transferir la capa de cloroformo a un matraz aforado de 100 ml filtrando a travs de un embudo de tallo largo que contenga lana de vidrio. Repetir la extraccin de la solucin de lavado dos veces ms, usando 10 ml de cloroformo en cada ocasin. Diluir con cloroformo hasta la marca del matraz de 100 ml y agitar bien. Leer absorbancia de la a 652 nm contra un testigo de cloroformo. RESULTADOS. Compile sus resultados de absorbancia en una tabla. Realice clculos para obtener los miligramos de detergentes en la muestra Calcular las ppm de ABS con la siguiente ecuacin. ppm (ABS) = En donde: A.- mg. De ABS ledos en la curva de calibracin. V1.-Volumen de muestra. 1000.- Factor de conversin. A x 1000 V1

PRACTICA No. 8

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DETERMINACION DE CALCIO EN UNA MUESTRA DE AGUA MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA (EAA)

OBJETIVO Conocer y aplicar la tcnica la adicin del estndar. Describir la instrumentacin, los componentes y el funcionamiento bsicos de un equipo de absorcin atmica. Aplicar los principios fundamentales de la EAA en la determinacin del calcio en una muestra de agua. FUNDAMENTO TEORICO

Calcio. El calcio es uno de los elementos que hace parte de la dureza del agua. Existe principalmente en forma de bicarbonatos. Las aguas potables de buena calidad contienen de 100 a 140mg/L del calcio. Las aguas que sobrepasan los 200mg de calcio presentan inconvenientes para los usos domsticos e industriales. Principios generales de la EAA. Los mtodos espectroscpicos se basan en la medida de la radiacin electromagntica emitida o absorbida por la materia; los mtodos de emisin utilizan la radiacin emitida cuando un analito es excitado por energa trmica, elctrica o radiante; los mtodos de absorcin estn basados en la disminucin de la potencia de la radiacin electromagntica como consecuencia de la absorcin que se produce en su interaccin con el analito. Las interferencias existentes en EAA se clasifican como: Interferencias debidas a la llama Interferencias de ionizacin. Interferencias debidas a la matriz Interferencias qumicas Interferencias espectrales. Este mtodo consiste en la medicin de las especies atmicas por su absorcin a una longitud de onda particular. La especie atmica se logra por atomizacin de la muestra, siendo los distintos procedimientos utilizados para llegar al estado fundamental del tomo lo que diferencia las tcnicas y accesorios utilizados. La tcnica de atomizacin ms usada es la de A.A con llama, que nebuliza la muestra y luego la disemina en forma de aerosol dentro de una llama de aire acetileno u xido nitroso-acetileno.

PROCEDIMIENTO

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Consulte en el manual de instrucciones del equipo, las condiciones estndares para el calcio. Gire cada uno de los controles en sentido opuesto de las manecillas del reloj. Coloque la cabeza del quemador para la llama aire-acetileno. Encienda el equipo Coloque la lmpara de ctodo hueco de calcio y aplique la corriente que recomienda el fabricante. Deje que se estabilice la corriente, durante aproximadamente 10 minutos. Optimice la longitud de onda. Alinee la lmpara para conseguir la ganancia ptima del equipo. Ajuste la posicin del quemador. Conecte los gases aire y acetileno y ajuste el flujo de cada uno de ellos. Prenda el quemador. Aspire un blanco y ponga en cero el instrumento. Aspire la solucin de sensibilidad para el calcio y ajuste la velocidad de aspiracin de nebulizador para obtener la mxima ganancia. Ajuste los gases combustible y oxidante para obtener tambin una mxima ganancia. Aspire un blanco y ponga de nuevo en cero el instrumento. Agregue 10ml de la solucin de xido de lantano al 5% P/V a 100ml de la muestra y de los estndares; proceda al anlisis de la muestra.

PRACTICA No. 9 DESPLAZAMIENTO DE MAXIMOS DE ABSORCION EN ESPECTROS UV-Vis

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OBJETIVO Comprobar mediante adiciones de una base los desplazamientos batocromicos / hipsocromicos en un sistema absorbente en funcin del pH y la formacin de complejos de transferencia de carga. FUNDAMENTO TEORICO Transiciones n * se observan entre 150 y 250 nm. Las absortividades molares relacionadas a este tipo de transicin son de baja magnitud (100 a 3000 L/cm mol), los disolventes polares desplazan el mximo de absorcin a mas cortas. Al aumentar la polaridad del disolvente los picos n * se desplazan hacia el azul, por el contrario la transicin * se desplaza hacia el rojo. Los mximos de absorcin de alguno cromforos pueden servir para la identificacin de grupos funcionales, considrese el efecto del disolvente y la estructura molecular. La conjugacin de cromforos tiende a desplazar hacia el rojo los mximos de absorcin. Conjugacin entre el oxgeno de doble enlace en aldehdos, cetonas y cidos carboxlicos y un doble enlace tiene el mismo efecto.

PROCEDIMIENTO Preparar 100 ml de disolucin CuCl2 0.05M a partir de CuCl2 2H2O slido Poner 10 ml de esta disolucin en cinco tubos de ensayo numerados del 1 al 5, a los que debe aadir 0, 1, 2, 4 y 15 gotas, respectivamente, de la disolucin acuosa de amoniaco.

10 ml de CuCl2 0.05 M
1 gota NH3(ac) 2 gotas NH3 (ac) 4 gotas NH3(ac) 15 gotas NH3(ac)

Seguidamente registrar los espectros de absorcin de los tubos 1 (10 ml de CuCl 2 0.05 M) al 5 (10 ml de CuCl2 0.05 M + 15 gotas de NH3(ac)), con un barrido desde = 400 nm hasta = 850 nm y determinar los mximos de absorcin que se alcanzan. Tubo n 1: segn el espectro:

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Amax = al

max

nm

Tubo n 5: segn el espectro: Amax

max

nm

A continuacin repetir el experimento empleando NiNO3 en lugar de CuCl2 y nuevas cantidades de NH3(ac) en los tubos de ensayo. Preparar 100 ml de disolucin de NiNO3 0.08M a partir de NiNO3 6H2O slido, Depositar 10 ml de esta disolucin en cinco tubos de ensayo numerados del 1 al 5, a los que se aaden 0, 1, 2, 10 y 25 gotas, respectivamente, de la disolucin acuosa de NH3. Graficar los Espectros: 1 CuCl2 2 NiNO3

10 ml de NiNO3 0.08 M
1 gota NH3(ac) 2 gotas NH3 (ac) 10 gotas NH3 (ac) 25 gotas NH3 (ac)

Correr los espectros de absorcin de los tubos 1 (10 ml de NiNO 3 0.05 M) al 5 (10 ml de NiNO3 0.05 M + 25 gotas de NH3(ac)), con un barrido desde = 400 nm hasta = 850 nm y determinar los mximos de absorcin que se alcanzan: Tubo n 1: segn el espectro: Amax al Tubo n 5: segn el espectro: Amax 22
max max

nm

nm

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Graficar los Espectros: 1 CuCl2

2 NiNO3

PRACTICA No. 10 ANLISIS DE CADMIO EN AGUA POR FLUORESCENCIA MOLECULAR

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OBJETIVO Describir la instrumentacin, los componentes y el funcionamiento bsico de un equipo de emisin molecular. Aplicar los principios fundamentales de la fluorescencia molecular para la determinacin del cadmio en una muestra problema.

FUNDAMENTO TEORICO Elemento qumico relativamente raro, smbolo Cd, nmero atmico 48; tiene relacin estrecha con el zinc, con el que se encuentra asociado en la naturaleza. Es un metal dctil, de color blanco argentino con un ligero matiz azulado. Es ms blando y maleable que el zinc, pero poco ms duro que el estao. Peso atmico de 112.40 y densidad relativa de 8.65 a 20C (68F). Su punto de fusin de 320.9C (610F) y de ebullicin de 765C (1410F) son inferiores a los del zinc. Cuando la gente respira el Cadmio este puede daar severamente los pulmones. Esto puede incluso causar la muerte. El Cadmio primero es transportado hacia el hgado por la sangre. All es unido a protenas para formar complejos que son transportados hacia los riones. El Cadmio se acumula en los riones, donde causa un dao en el mecanismo de filtracin. Esto causa la excrecin de protenas esenciales y azcares del cuerpo y el consecuente dao de los riones. Lleva bastante tiempo antes de que el Cadmio que ha sido acumulado en los riones sea excretado del cuerpo humano. Las aguas residuales con Cadmio procedentes de las industrias mayoritariamente terminan en suelos. Las causas de estas corrientes de residuos son por ejemplo la produccin de Zinc, minerales de fosfato y las bioindustrias del estircol. El Cadmio de las corrientes residuales pueden tambin entrar en el aire a travs de la quema de residuos urbanos y de la quema de combustibles fsiles Determinacin de cadmio por fluorescencia molecular con el reactivo 5-sulfnico-8hidroxiquinolena. El mtodo investigar la influencia que sobre la seal analtica poseen distintas variables (pH, concentracin de reactivo, temperatura, etc.) en orden a conseguir la mejor sensibilidad posible. A continuacin se evaluarn las caractersticas analticas del mtodo y finalmente se aplicar la metodologa desarrollada al anlisis de muestras reales. Se llevar a cabo siguiendo el mtodo con una concentracin constante de analito dentro del intervalo lineal. Los principales aspectos a tener en cuenta en la optimizacin del mtodo para cinc son: Efecto del pH de la disolucin reguladora (hay que prestar atencin a los "blancos" y a la longitud de onda del mximo que puede desplazarse al cambiar el valor del pH). Efecto de la fuerza inica de la disolucin reguladora. Efecto de la concentracin de reactivo. Efecto del tiempo de formacin del complejo y estabilidad del mismo.

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Influencia de la temperatura tanto en la formacin del complejo (fuera del compartimento de medida) como en la intensidad de fluorescencia del mismo (dentro del compartimento de medida). PROCEDIMIENTO Condiciones iniciales de trabajo Concentracin de cadmio: 0,3 ppm pH reguladora: 2 (probar entre 2 y 8) Concentracin de reguladora (efecto de la fuerza inica): 0,1 M (probar hasta 2M) Concentracin de reactivo: 10-2 M (probar hasta 10-4 M) Patrones y reactivos. Patrones de Cd(II): Preparacin a partir de una disolucin patrn de Cd(II) de 1.000 mgL-1. Las disoluciones de trabajo se preparan cada da por dilucin adecuada con la concentracin ptima de reguladora. Disolucin reguladora: Las disoluciones reguladoras se prepararn por disolucin de la sal (p.ej. acetato sdico), en concentracin seleccionada, en agua desionizada y adicin de la cantidad de cido (p.ej. cido actico) correspondiente hasta alcanzar el pH apropiado. Disolucin de 5-sulfnico-8-hidroxiquinolena: disolucin "madre" 0,01 M del reactivo en agua desionizada. Precauciones: Se ha de poner especial cuidado en la preparacin y conservacin de las disoluciones, cuidando de modo especial la limpieza de los contenedores de las disoluciones al objeto de evitar contaminaciones cruzadas. Para ello es absolutamente necesario lavar los matraces utilizados con cido ntrico al 10% dejndolos toda la noche. Anlisis de muestra problema. Se llevar a cabo el anlisis de contenido en Cd(II) en agua residual sin tratar (se recomienda las tcnicas de calibrado: con patrones externos y con adiciones estndar. Las muestras deben ser preparadas en una disolucin reguladora similar a la utilizada en los patrones, por lo tanto, al objeto de diluirlas al mnimo se les debe aadir una reguladora concentrada hasta alcanzar la concentracin final ptima. Con el o los mximos de absorcin/emisin elaborar curva de calibracin y reportar concentracin de la muestra problema.

PRACTICA No. 11 FOSFORO INORGANICO EN SUERO HUMANO

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OBJETIVO Determinar la cantidad de fosforo presente en una muestra sangunea de un paciente sano y uno con deficiencia de fosforo. FUNDAMENTO TEORICO Este macromineral est presente en todas las clulas y fluidos del organismo, y su presencia en el cuerpo ronda los 650 mg. Participa de la divisin de las clulas y por tanto del crecimiento, por tanto su presencia es fundamental. El fsforo interviene en la formacin y el mantenimiento de los huesos, el desarrollo de los dientes, la secrecin normal de la leche materna, la formacin de los tejidos musculares y el metabolismo celular Fosfatos: Los fosfatos tienen muchos efectos sobre los organismos. Los efectos son mayormente consecuencias de las emisiones de grandes cantidades de fosfatos en el ambiente debido a la minera y los cultivos. El incremento de la concentracin de fsforo en las aguas superficiales aumenta el crecimiento de organismos dependientes del fsforo, como son las algas. Estos organismos usan grandes cantidades de oxgeno y previenen que los rayos de sol entren en el agua. Esto hace que el agua sea poco adecuada para la vida de otros organismos. El fenmeno es comnmente conocido como eutrofizacin. Determinacin de fsforo a partir de un filtrado libre de protenas que reacciona con molibdato de amonio en condiciones reductoras para dar un producto de color azul en funcin de la cantidad de molibdeno V. El fsforo inorgnico reacciona con molibdato de amonio para formar un complejo de coloracin intensa despus de que ste es reducido. La primera reaccin produce fosfomolibdato de amonio que al reducirse produce un complejo de molibdeno V conocido como azul de molibdeno. Reaccin: 7 PO4-3 + 12 (NH4)6Mo7O24 + 36 H2O OH7 (NH4)3PO4 . 12MoO3 + 51 NH4+ + 72

7 (NH4)3PO4 . 12MoO3 + Agente reductor

Mo (V) Especie azul

PROCEDIMIENTO Preparacin de reactivos: Acido tricloroactico al 5 % (200 mL). 26

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Acido sulfrico 5 M (50 mL) Acido aminonaftilsulfnico reducido.- pesar 0.5 gr de cido aminonaftilsulfnico y diluir en 5 mL de solucin al 20% de sulfito de sodio (Na2SO3); una vez disuelto aadirlos a 195 mL de solucin al 15% de bisulfito de sodio (NaHSO3). Solucin estndar de fsforo (100 mg/dL).- pesar 0.439 gr de fosfato dicido de potasio (KH2PO4) y diluirlo a 100 ml con agua destilada Curva de fsforo.- Tomar 1 ml de la solucin estndar y aforarlo a 100 mL con cido tricloroactico al 5%, esto da una concentracin de 1mg/dL de P, marque la solucin como no. 1. De esta ltima solucin tome 2 y 5 mL y dilyalos a 10 mL con cido tricloroactico al 5% cada uno para as obtener 0.2 mg/dL y 0.5 mg/dL de concentracin respectivamente y mrquelos como nos. 2 y 3. Molibdato de amonio.- pese 2.5 gr de molibdato de amonio [(NH4)6Mo7O24.4H2O], diluir en 80 mL de agua destilada y adicionar 30 mL de cido sulfrico (H 2SO4) 5 M. No debe de presentar coloracin azul.

Tratamiento de la muestra problema (suero): Agregue a un tubo de ensayo 9.5 mL de cido tricloroacetico al 5% mas 0.5 mL de suero, mezcle y deje reposar por 5 min. Centrifugue a 1500 rpm durante 5 min; en caso de no contar con centrifuga, filtre con papel filtro No. 42. Tome 5 ml del sobrenadante y depostelo en un tubo de ensayo, mrquelo como muestra problema con el numero 5. Blanco.- ponga 5 mL de cido tricloroactico al 5% en un tubo de ensayo y mrquelo como no. 4.

Tratamiento general: Tome 5 ml de las soluciones marcadas como 1, 2 y 3 y a cada una agregue 5 mL de cido tricloroactico al 5%. A todos los tubos (1, 2, 3, 4 y 5) agrgueles 1 ml de la solucin de molibdato de amonio y mezcle bien. Finalmente adicione a cada tubo 0.4 ml de la solucin de cido aminonaftilsulfnico reducido y mezcle, deje reposar de 5 a 10 min. Mida la absorbancia de todos sus tubos a 690 nm, calibrando a cero con agua destilada y restando la absorbancia del blanco (4) a las dems absorbancia medidas. Grafique las absorbancias contra concentracin y calcule la concertacin de su muestra problema (suero). Multiplique por 20 para determinar la concentracin original en suero. PRACTICA No. 12

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ESPECTROFOTOMETRIA DE INFRARROJO EN LA IDENTIFICACION DE COMPUESTOS ORGANICOS. OBJETIVO Obtener el espectro de absorcin de diversas muestras orgnicas. Conocer y preparar muestras en estado liquido, solido y gaseoso para su estudio mediante espectrofotometra de infrarrojo.

FUNDAMENTO TEORICO

ESPECTROFOTOMETRIA INFRARROJA.- Cada compuesto qumico tiene asociado un espectro infrarrojo caracterstico, donde los mximos de absorcin corresponden a determinadas energas de vibracin (tensin, flexin, etc.) de los enlaces qumicos presentes. Por tanto, esta tcnica permite detectar la presencia, en el material analizado, de diferentes impurezas, (p.e. tomos de hidrgeno formando enlaces, OH, NH, SiH....). Por ltimo, es posible cuantificar el nmero de enlaces presentes en la muestra analizada, conociendo previamente la absortividad asociada al tipo de enlace correspondiente. ESPECTROSCOPIA DEL INFRARROJO MEDIO.- la aplicacin de la espectroscopia basada en la transformada por Fourier al intervalo entre 650 y 4000 cm-1. Este mtodo tambin se ha empleado para el estudio de especies transitorias que de otra forma requerirn un barrido de longitud de onda muy rpido. En este caso, la ventaja proviene del hecho de que se puede observar todo el espectro en forma simultnea. La espectroscopia basada en la transformada de fourier, y de un solo haz proporciona un mtodo til para el estudio de las soluciones diluidas. En este caso, se obtienen los interferogramas para el disolvente y la muestra por separado. PROCEDIMIENTO Con las muestras proporcionadas elabore lo siguiente: Una pastilla de KBr para tratar la muestra solida, se deber hacer por medio del pistn de presin, se recomienda que la relacin KBr/muestra sea de 100 a 20 mgr. Esta muestra tambin deber ser procesada mediante una extraccin bsico clorofrmica.; La muestra liquida deber depositarla en la aditamento especial para lquidos (en caso de contar con un equipo ATR se le indicara lo consecuente). Para el estudio de la muestra gaseosa deber impregnar dos papeles filtro de aprox. 3 cm de dimetro y colocarla dentro de la cmara de gases Una vez obtenidas sus muestras se colocan en el rea de muestra dentro de su instrumento y se corre el escaneo de acuerdo al programa instrumental, no olvide correr un background para evitar la interferencia del bixido de carbono atmosfrico

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Una vez obtenidos los espectros respectivos identifique los grupos funcionales mediante su nmero de onda, tambin identifique las molculas con ayuda del software del equipo.

PRACTICA No. 13

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PROCESOS DE EMISION MOLECULAR (LUMINISCENCIA).

OBJETIVO Observar el fenmeno luminiscente de fluorescencia y el cambio en la eficacia o rendimiento cuntico en funcin de cambios en el pH y en la rigidez estructural. Comprobar el fenmeno del desplazamiento de Stokes. FUNDAMENTO TEORICO Cuando la REM es absorbida a cierta longitud de onda y reemitida a igual longitud de onda se observa el fenmeno de fluorescencia resonante, pero es ms comn que la misma sea reemitida a una longitud de onda ms larga que la Fluorescencia resonante, a este fenmeno se le llama desplazamiento o lneas de Stokes. Rendimiento cuntico. Relacin entre el numero de molculas que emiten luminiscencia y el nmero total de molculas excitadas, ej. la fluorescena tiende a un valor de 1. Rigidez. La Fluorescencia se favorece en molculas con estructura rgidas ej. fluoreno contra bifenilo. Al disminuir la rigidez aumenta la velocidad de conversiones interna y por la tanto aumenta la probabilidad de desactivacin sin radiacin. El pH.- Las formas cidas o bsicas estn asociadas a especies resonantes y dependiendo de estas se puede ver favorecida o no la Fluorescencia. PROCEDIMIENTO Preparar las siguientes soluciones y materiales: Fenolftalena al 2 % en solucin etanlica, 25 mL. Fluorescena al 0.5 % en solucin etanolica, acuosa, acida y amoniacal, 25 mL de cada una. Sulfato de quinina al 1% en solucin bsica, acida y neutra. Credencial de elector, billetes de diversas nominaciones. Con el material anterior proceder a irradiarlo con luz de longitud de onda de ultravioleta cercano, anotar las observaciones respectivas, a las soluciones preparadas agregar bases o cidos y anotar sus observaciones, no olvide mantener siempre bajo irradiacin ultravioleta sus muestras. Anote la longitud de onda de excitacin y deduzca las longitudes de onda de emisin para establecer si existe o no un desplazamiento de Stokes.

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TODAS LOS REPORTES DEBEN INCLUIR ADEMAS: REACCION QUIMICA (CUANDO ASI SE REQUIERA) MATERIAL Y SUSTANCIAS OBSERVACIONES RESULTADOS, CALCULOS Y GRAFICAS DISCUSIN Y CONCLUSIN BIBLIOGRAFIA

ACTIVIDAD PRELIMINAR POR PARTE DEL ALUMNO: El alumno deber elaborar su propia lista de material y reactivos (en funcin de los procedimientos a realizar), solicitarlos al almacn con sus respectivos vales y tenerlos preparados y listos para la hora o el da de prctica.

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