Multiplication in vitro des planes

Introduction
La multiplication vgtative est le moyen de reproduire un tre vivant

sans passer par la voie sexue (graine). Certaines plantes se reproduisent naturellement par multiplication vgtative grce une

srie de mcanismes adaptatifs (stolons, tubercules, ...). Pour d'autres

espces, l'homme a dvelopp depuis des sicles, des techniques de multiplication vgtative telles que le bouturage, le marcottage ou le

greffage. Ces pratiques, aujourd'hui largement utilises en horticulture

et arboriculture, ne peuvent toutefois tre appliques avec la mme efficacit toutes les espces vgtales.

Par contre, il est aujourdhui possible de pratiquer la reproduction

vgtative en conditions artificielles pour un nombre sans cesse

croissant d'espces travers la culture in vitro.

Le concept de multiplication in vitro des plantes comprend un

ensemble de technologies (micropropagation , embryogense
somatique, germination in vitro,.) qui permettent de reproduire un

individu donn partir d'un fragment plus ou moins grand de ce

vgtal plac en condition d'asepsie sur un milieu nutritif synthtique.

 DEFINITION
Les cultures in vitro vgtales sont des cultures d' explants

de plantes, sur un milieu synthtique, dans des conditions

striles, dans un environnement contrl et dans un espace rduit.

HISTORIQUE des CULTURES IN VITRO 1902, G.HABERLANDT un autrichien, nonce le concept de la totipotence cellulaire vgtale. Il russit faire survivre in vitro, quelques mois, mais sans multiplication, de petits amas cellulaires. 1922 Aux Etats-Unis, W.J. ROBBINS et en Allemagne : W. KOTTE, obtiennent la croissance de pointes de racines pendant quelques mois seulement.

1926 E. KUROSAWA dcouvre l'action de la gibbrelline sur la croissance, c'est la premire fois qu'une substance hormonale est extraite d'une plante. 1934 P.R. WHITE (U.S.A.) russit une culture de racines de tomates.
1935 Le Professeur R.J. GAUTHERET, en France, cultive et multiplie des cellules cambiales de saule en introduisant des auxines dans le milieu. 1939 R.J. GAUTHERET russit des cultures indfinies de tissus vgtaux normaux de carotte. Aujourd'hui la souche est toujours entretenue et les cellules continuent prolifrer.

1954 W.H. MUIR et col. obtiennent les premires cultures de cellules isoles partir de cals friables cultivs en milieu liquide agit.
1955 C.O. MILLER et col. dcouvrent que les cytokinines induisent des divisions cellulaires dans des cultures de tissus de tabac. 1957 F. SKOOG et C. MILLER rgnrent des racines et des tiges partir de cals sous influence d'auxine et de cytokinine. 1962 T. MURASHIGE et F. SKOOG mettent au point pour des cultures de tissus de tabac le fameux milieu de culture M.S. utilis largement en culture in vitro . Il s'agit d'un milieu contenant des lments minraux, des vitamines du groupe B, du sucre, auxine et cytokinine.

Totipotence chez le vgtal

Les cellules vgtales, prleves sur un organe quelconque d'une plante, possdent la capacit de rgnrer un individu complet identique la plante mre.

la totipotence peut se dfinir comme la proprit quont certaines cellules de pouvoir rgnrer un individu lorsquelles sont places dans des conditions appropries, en passant ventuellement par une tape de ddiffrenciation
La totipotence implique des processus de ddiffrenciation et diffrenciation Une cellule diffrencie: perte de la capacit mitotique maturation des organites augmentation de volume Conditions de ddiffrenciation: rompre les corrlations physiques et physiologiques avec les cellules voisines culture en milieu artificiel addition dactivateurs de croissance

La ddiffrenciation cellulaire : on voit les grandes cellules diffrencies (dans les feuilles, tiges, ptales,...) perdre leurs vacuoles, leur noyau se diviser activement, et de nombreuses et trs petites cellules mristmatiques apparatre. Une cellule ddiffrencie peut alors voluer dans toutes sortes de directions.
ddiffrenciation

diffrenciation

Exemple : microbouturage du Saint Paulia

2 mois plus
tard

Principales mthodes de micropropagation

Culture de mristme

Meristme

Apex caulinaire

Tige feuille

Enracinement

Plantules

Nud

Caulogense directe Semences artificielles

Morphogense Embryogense somatique directe Explants divers

(racines, tige, feuilles)

directe

ca l Morphogense indirecte

Caulogense indirecte

Callogense

Suspensions cellulaires

Embryogens e somatique indirecte

Des cellules plus ou moins totipotentes

Les mristmes :

un rservoir de cellules totipotentes

Les autres types cellulaires :

une totipotence plus ou moins facile exprimer Utilisation de substances de croissance exognes
Variabilit interspcifique

Rgnration directe
Rgnration en passant par un stade de cal

Limites de la impossibilit technique

totipotence

Diffrentiation irrversible : xylme (!) En fonction de la mthode de prparation des protoplastes,

rcalcitrance la rgnration
Pour

beaucoup despces dintrt agronomique, les protoplastes ne sont pas totipotents (rcalcitrants) ex : Vitis

vinifera

 Variation somaclonale

Les plantes rgnres prsentent souvent des problmes Perte de caractres chimriques Aneuplodies , dltions chromosomiques Modification du caractre juvnile
Impact sur la fertilit

Pourquoi les cellules vgtales sont totipotentes : Arguments classiques

Petit nombre de types cellulaires Seulement 3 ou 4 types dorganes fondamentaux (racine, tige, feuilles) dont les fleurs, vrilles, pines, fruits et tubercules sont des drivs Grande plasticit gnomique
la croissance peut rester presque normale malgr

de profonds remaniements chromosomiques

Etapes lies la totipotence

Etape 1 :
Cellules diffrenties : ddiffrenciation ncessaire Cellules souches mristmatiques

Etape 2 : mise en route de lactivit mitotique

de substances de croissance

utilisation

Etape 3 : autonomie de la croissance tissulaire vis--vis

des substances de croissance exognes

Enjeux scientifiques actuels: Comprendre les mcanismes de ddiffrenciation Comprendre la nature des cellules souches

Comprendre les mcanismes de ddiffrenciation

Comprendre la nature des cellules souches

Notion de cellule souche en biologie vgtale Notion de niche de cellule souche en biologie

vgtale

Signification de la totipotence
F. Hall : la totipotence est une spcificit des organismes autotrophes fixs
On retrouve la totipotence des cellules chez les coraux quels sont les autres points communs coraux / plantes ?

Croissance indfinie

Zones mristmatiques Morphologie type fractales Autotrophie, faible flux nergtique Vie fixe Dure de vie potentiellement illimite
Squelette de nature excrmentielle

Deux contraintes : Autotrophie : Faible flux nergtique maximisation de la surface dans lespace croissance verticale

Dveloppement en axes ramifis

Lutte contre la croissance homothtique

Dveloppement indfini partir des mristmes

Totipotence des cellules mristmatiques

Fonctions biologiques de la totipotence

Architecture adapte lautotrophie Ractivit du dveloppement dans un contexte de vie fixe Multiplication vgtative