OBSERVACIONES Equipo Reactivo ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) 1 Glucosa 6.4 6.14 5.81 5.65 5.

54 5.45 Glucosa + 2 NaCN 7.43 6.82 7.18 6.89 6.7 6.6 Glucosa + 2,4 3 dinitrofenol 6.1 5.9 5.77 5.61 5.57 5.47 Glucosa + 4 Gramicidina 5.91 5.75 5.62 5.53 5.46 5.43 pH(6) pH(7) 5.37 5.29 6.6 5.37 5.41

NOTA: el intervalo de medicin de cada reactivo fue de un lapso de tiempo de 5 minutos Glucosa al 10% PROCEDIMIENTO: 1. Disolucin de 5 ml de suspensin de levadura con 40 ml de agua destilada 2. Adicionar 5 ml de glucosa al 10% 3. Determinacin del pH en un lapso de 5 minutos durante 40 min 4. Observar RESULTADOS Equipo Reactivo 1 Glucosa ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) 6.4 6.14 5.81 5.65 5.54 5.45 5.37 5.29

CAMBIO DE PH GLUCOSA: se observo una disminucin considerable al pH durante el lapso de tiempo de medicin. Podemos hacer notar que la disminucin del pH al agregar 5 ml de glucosa a la solucin donde se encontraba la levadura del tipo Saccharomyces cereviciaer, se debe a la degradacin de la glucosa por parte de las levaduras ya que al momento de ponerse en contacto una con la otra las enzimas son activadas, donde la glucosa se introduce en su membrana mediante el gradiente de protones, llevando a cabo el proceso de glucolisis con el seguimiento de ciclo de Krebs, generando la produccin de NADH.H el cual se dirigir a cadena respiratoria para proceder al proceso de fosforilacion oxidativa realizando la captacin de electrones por los distintos complejos localizados en la membrana interna

mitocondrial y como consecuencia permitiendo la salida de H+ hacia el medio extracelular generando la disminucin de pH, el cual fue captado por el potencimetro. Por lo que se puede concluir que la degradacin de la glucosa por medio de levaduras produce la expulsin de iones H+ al medio provocando que este aumente su acidez. 2,4 dinitrofenol DESACOPLANTE PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. Disolucin de 5ml de suspensin de levaduras con 40 ml de agua Adicionar 5 ml de glucosa al 10% Adicin de 0.2 ml de dinitrofenol 40mM(concentracin final de 200 mM) Determinacin de pH de la solucin en un intervalo de 5 minutos durante 7 veces 5. Observar RESULTADOS Equipo Reactivo ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) Glucosa + 2,4 3 dinitrofenol 6.1 5.9 5.77 5.61 5.57 5.47 5.37 Es observado claramente una disminucin del pH debido a que como ya sabemos el dinitrofenol acta como un desacoplante al aproximarse a la membrana interna y protonarse, debido al pH ms bajo existente en esta zona. Esta protonacion aumenta la hidrofobicidad (no reaccin con el agua) lo que permite que se difunda en la membrana y la atraviese. Una vez adentro el pH ms alto hace que el hidroxilo fenlico de la sustancia se desprotone. Como consecuencia provoca el transporte de H+ nuevamente hacia la matriz, evitando que los electrones fluyan hacia el canal protnico de la ATPasa y no se d la sntesis de ATP, es por ello que se observa un descenso en el pH ya que el aumento de iones hidrgenos produce que el ambiente intracelular est cido.

2,4 dinitrofenol (DESACOPLANTE)

Espacio intermembranico

Protn ionizable

Matriz mitocondrial

Acido

Alcalino

Carga negativa deslocalizada Forma de anin Diferencial de pH de aproximadamente 0,5 unidades de pH carga

Gramicidina PROCEDIMIENTO 1. Disolucin de 5 ml de suspensin de levaduras previamente preparado con 40 ml de agua destilada 2. Adicion de 5 ml de glucosa al 10% 3. Adicionar antibitico gramicidina a una concentracin de 4. Observar

RESULTADOS Equipo Reactivo ph(0) pH(1) pH(2) pH(3 ) pH(4) pH(5) pH(6) pH(7) Glucosa + 4 Gramicidina 5.91 5.75 5.62 5.53 5.46 5.43 5.41 Al tener el conocimiento de que la gramicidina es un desacoplante el cual funciona embebindose en la bicapa lipdica de la membrana mitocondrial interna, formando conductos hidroflicos (poros) a travs de los cuales pueden pasar iones como Na+, K+ y H+. La entrada de estos iones no slo disminuye el potencial de membrana, sino adems el ingreso de H+ disminuye el potencial electroqumico total , disminuyendo la sntesis del ATP. Por lo que se comprueba experimentalmente al observar la disminucin continua del pH significando esto la entrada de protones al espacio extracelular en este caso nuestro vaso de precipitados.

CONCLUSION Mediante esta prctica pudimos aplicar experimentalmente los conocimientos adquiridos sobre los diferentes procesos acoplados energticamente mediante los cuales se da sntesis de ATP en organismo aerobios, como es la fosforilacion oxidativa. Adems de los modos de accin con los cuales algunos compuestos qumicos son dainos en las funciones de dicho proceso; por parte de los desacoplantes al desacoplar el proceso endergonico del exergonico provocan la perdida del potencial electroqumico por lo que como consecuencia se disminuye la sntesis de

ATP, dando paso los agentes desacoplantes al paso de H+ observando por medio del decrecimiento de pH. Mientras que los inhibidores detienen totalmente el proceso de fosforilacion oxidativo, al impedir el transporte de electrones por lo que las reacciones de oxidoreduccion cesan la produccin de ATP