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Cancro do castanheiro disperso da doena em Portugal.

Caso-estudo para determinao de factores de disperso


Helena Bragana, Sofia Simes e Nuno Onofre
Estao Florestal Nacional, Quinta do Marqus 2784-505 Oeiras, Portugal
(helena.braganca@efn.com.pt)

O cancro do castanheiro, doena provocada pelo fungo patognico Cryphonectria parasitica (Murrill) Barr. uma das principais causas de declnio em soutos e castinais no nosso Pas. No mbito de um trabalho que visou um levantamento nacional da situao relativamente a esta doena, foram efectuadas prospeces em 185 parcelas dispersas por todo o territrio, incluindo as Regies Autnomas dos Aores e da Madeira. Avaliou-se a distribuio da doena, tendo sido caracterizados 606 isolados de C. parasitica. Os resultados mostraram que a doena se encontra disseminada em todo o Pas e as informaes recolhidas permitiram verificar que houve uma disperso muito rpida desde o aparecimento da doena nos anos 80. Com o objectivo de avaliar os factores que poderiam estar envolvidos na disperso da doena, intensificou-se a prospeco na Regio Demarcada da Padrela, em Trs-os-Montes, por ser a zona do Pas onde o castanheiro tem maior representatividade. Relativamente a estes factores (exposio da posio do cancro na rvore, exposio da parcela, altitude e dimetro altura do peito [DAP]), no se detectaram de uma forma geral influncias significativas. O conhecimento veiculado imprescindvel para o controlo de populaes de C. parasitica, quer pela divulgao de prticas culturais destinadas preveno e reduo da disperso da doena, quer como base para a implementao de um programa de luta biolgica, atendendo a que no se conhecem tratamentos fitossanitrios eficazes para o combate a esta doena. Palavras chave: Cryphonectria parasitica, Cancro do castanheiro, Castanea sativa

INTRODUO
O Cancro e a Tinta, doenas causadas, respectivamente, pelos fungos Cryphonectria parasitica (Murrill) Barr. e Phytophthora spp. (principalmente P. cinnamomi), so as doenas que mais danos causam no castanheiro europeu (Castanea sativa Mill), havendo no entanto outras doenas que aparecem pontualmente a afectar o castanheiro, como o caso dos cancros difusos (Abreu & Gomes, 1989) ou a podrido agrica da raiz. No nosso pas, se a situao relativamente tinta vem sendo descrita em vrios trabalhos cientficos, o impacte do cancro tem sido relativamente minimizado quando comparado com aquela doena. Nos ltimos anos porm, tm-se desenvolvido vrios trabalhos no sentido de esclarecer o papel do cancro nesta espcie vegetal e os resultados at agora encontrados revelam infelizmente que se trata de uma doena amplamente disseminada no pas, causando nalguns casos, importantes danos e cuja disperso se verificou num perodo relativamente curto desde o seu aparecimento (Abreu, 1992; Anastcio et al., 2001; Bragana et al.2001; Machado et al. 2001). A doena foi detectada pela primeira vez em 1904 no Estados Unidos, quando se observaram necroses e leses afectando tronco e ramos de Castanea dentata (Marsh) Borkh, levando ao desaparecimento quase total do castanheiro neste pas. Na Europa, a doena foi descoberta em 1938 no norte de Itlia (Roane et al., 1986; Anagnostakis, 1982), observando-se um avano rpido, com mais de 120 000 ha afectados no incio dos anos 50 (Baldacci & Orsenigo, 1952). No entanto, quer a existncia de fenmenos de hipovirulncia, quer o facto 1

do castanheiro europeu ser mais tolerante doena, ajudaram a que na Europa a situao no chegasse aos nveis de gravidade dos Estados Unidos. Em Portugal, a forma anamrfica do fungo foi identificada por Sousa da Cmara (1929) em material recolhido na Beira Baixa (Alcaide) por Branquinho de Oliveira em ramos e tronco de Castanea crenata Siebol & Zuccarini. Contudo s a partir de 1989 comeam a surgir alertas sobre a presena da doena que conduziram posteriormente sua confirmao oficial (Abreu, 1992). Actualmente, para alm dos cuidados preventivos, as nicas armas de que dispomos, capazes de controlar este patognio, so o melhoramento gentico e a aplicao de programas de controlo biolgico adequados a cada regio. Tendo em conta os estudos que esto a ser levados a cabo em numerosos pases europeus e as boas perspectivas que existem para a efectiva realizao de programas de controlo biolgico desta doena, recorrendo a estirpes hipovirulentas, era urgente prospectar e caracterizar as estirpes de Cryphonectria parasitica existentes em Portugal. Os trabalhos desenvolvidos quer no mbito do projecto PAMAF 4022 Cultura do Castanheiro, Melhoramento e Proteco Integrada, quer no mbito do projecto PRAXIS XXI/BIO/1072/95 Conservao e melhoramento dos recursos genticos do Castanheiro (Castanea sativa Mill.), permitiram identificar o problema e caracterizar grupos de compatibilidade na regio norte. No entanto era urgente alargar a prospeco ao resto do Pas, o que foi amplamente alcanado com o Projecto PIDDAC 204 Cancro do castanheiro: caracterizao de estirpes de Cryphonectria parasitica e bases para um programa de luta biolgica, cujos objectivos principais foram a identificao dos grupos de compatibilidade vegetativa existentes no pas e a sua comparao com os grupos europeus, a deteco de formas hipovirulentas compatveis e o estabelecimento de um programa de controlo biolgico.

MATERIAL E MTODOS
1 - DISPERSO DA DOENA NAS REAS DE DISTRIBUIO DO CASTANHEIRO A seleco das parcelas a prospectar procurou abranger as reas mais importantes de castanheiro no Pas, tendo havido no entanto o cuidado da recolha do mximo de informao sobre os registos de aparecimento de cancro junto dos Servios Estatais de Agricultura (DRAs e IFADAP), Parques Naturais, Associaes de Produtores e Agricultores individuais. A prospeco foi efectuada com a ajuda das Direces Regionais de Agricultura e Parques Naturais em Portugal continental, da Direco Regional de Agricultura e Regional de Florestas, na Madeira e do Servio de Desenvolvimento Agrrio e Direco de Servios de Proteco de Culturas, nos Aores. A localizao cartogrfica dos locais de amostragem foi realizada a partir de Cartas Militares e Ortofotomapas (material obtido a partir do Programa Informtico Arc View GIS 3.2). Nas propriedades visitadas efectuou-se um percurso aleatrio para observao geral do estado sanitrio da parcela e procedeu-se a uma anlise visual das rvores a fim de detectar sintomas de cancro (copa afectada, fendilhamento da casca, rebentao adventcia exuberante - Figuras 1 e 2), ou sinais do fungo (miclio, picnideos e peritecas), sendo recolhida uma amostra nica nas rvores onde se observou ou suspeitou da presena do patognio. As recolhas foram efectuadas at um mximo de 10 rvores por propriedade visitada e exceptuando o caso de Trs-os-Montes (onde a prospeco foi mais intensa), as parcelas escolhidas distanciavam pelo menos 5Km entre si (baseado em Robin et al. 2000).

Figura 2

1 Figuras 1 e 2 Castanheiros com sintomas de cancro

A compatibilidade vegetativa (CV) das culturas isoladas a partir das amostras recolhidas foi determinada de acordo com a resposta Barreira versus Fuso proposta por Anagnostakis (1988) e adaptada por Bissegger et al. (1997), Cortesi et al. (1998) e Rigling (2000).

2 - AVALIAO

DA INTENSIDADE DE ATAQUE E ESTUDO DE FACTORES (EXPOSIO DA POSIO DO CANCRO NA RVORE, EXPOSIO DA PARCELA, ALTITUDE E DIMETRO ALTURA DO PEITO - DAP) NA REGIO DEMARCADA DA PADRELA

Com o objectivo de estimar a proporo de rvores doentes e para a avaliao dos factores que poderiam estar envolvidos na disperso da doena, escolheu-se a Regio Demarcada da Padrela, em Trs-os-Montes, por ser uma zona do Pas muito importante do ponto de vista de produo e muito afectada pela doena. Intensificou-se a o estudo, tendo sido prospectadas 35 parcelas em 4 freguesias do concelho de Valpaos. Para o tratamento de dados usaram-se apenas 33 parcelas pelo facto de faltarem ainda dados em duas delas. Foram elaboradas fichas de caracterizao geral de cada parcela e das rvores dentro da parcela. Para estimar a proporo de rvores doentes no povoamento fez-se uma amostragem em grupos, tratada como uma amostragem por razes visando a avaliao de caractersticas individuais. Considerou-se que a unidade de amostragem (o grupo) para a avaliao dessas caractersticas seria 50% da parcela prospectada. Tendo as parcelas visitadas em mdia um compasso de 10 x 10m, foram consideradas todas as rvores em faixas alternadas segundo o alinhamento dos soutos. Sendo mi = n total de rvores amostradas da parcela i (grupo i), Ci = n total de rvores com cancro no grupo i, n = n de grupos e M = n mdio de rvores por grupo, a equao utilizada para estimar a proporo populacional de rvores afectadas foi a seguinte: pc =

C
i =1 n i =1

mi
1 M
2

(equao 1)

2 sendo a varincia da estimativa dada por p c S pc , em que p c =

( )

2 x (S C ) x cpf

(eq. 2),

com e o erro padro

(S ) =
2 C

C =
i 1

2 i

+ p c2 mi2 2 p c mi C i i =1 i =1 n 1

(equao 3)

S =

2 pc

(equao 4),

sendo que cpf , um factor de correco para populaes finitas, a ser aplicado caso a amostragem inclua 5% ou mais da populao. Para o caso particular das unidades de amostragem no terem todas a mesma dimenso, o cpf pode ser calculado atravs da expresso: cpf = 1 (rea amostrada / rea total). Neste caso o valor de cpf foi de 0,5. Para a anlise estatstica dos factores (solos, altitude, exposio e DAP) utilizaram-se os seguintes testes: 1. Na comparao da proporo de cancro de acordo com o grupo de solos (grantico vs. xistoso) utilizou-se um Teste Exacto de Mann-Whitney U. 2. Para a comparao da proporo de cancro de acordo com a altitude utilizou-se tambm um Teste Exacto baseado na estatstica de Mann-Whitney U, mas com recurso a 10.000 simulaes de Monte Carlo. 3. Para a comparao da proporo de cancro de acordo com a exposio utilizou-se Anlise de Varincia (ANOVA) de um factor. 4. Para a comparao da incidncia de cancro de acordo com as classes de DAP, usou-se tambm ANOVA de um factor e o Teste de Tukey de comparao mltipla de mdias. 5. Anlise de correlao entre a altitude e a proporo de rvores com cancro por meio de um Teste Exacto de Spearman. As variveis foram previamente estudadas do ponto de vista da sua distribuio (Teste de Shapiro-Wilk), e transformadas quando necessrio (e.g. proporo de rvores com cancro foi transformada no arcoseno da raiz quadrada da respectiva proporo). No caso da ANOVA, estudou-se a homogeneidade de varincias (Teste de Bartlett) e o comportamento dos resduos. Os programas utilizados foram o Statistica 6.1 (StatSoft, Inc. 2003) e o StatXact 5.0.3 (Cytel Software Corporation 2001).

RESULTADOS
1 - DISPERSO DA DOENA NAS REAS DE DISTRIBUIO DO CASTANHEIRO Foram prospectadas 185 parcelas em todo o pas. Em Portugal Continental as Regies corresponderam s reas afectas s seguintes Direces Regionais de Agricultura: Direco Regional de Agricultura de Trs-os-Montes e Alto Douro (DRATM), Direco Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho (DRAEDM), Direco Regional de Agricultura da Beira Interior (DRABI), Direco Regional de Agricultura do Ribatejo e Oeste (DRARO), Direco Regional de Agricultura do Alentejo (DRAAL) e Direco Regional de Agricultura do Algarve (DRAALG). Fez-se ainda prospeco nas Regies Autnomas dos Aores e da Madeira (Tabela 1). A prospeco em Trs-os-Montes teve um carcter mais intensivo pelo facto de ser a regio do Pas onde a densidade da populao de castanheiro maior e onde as referncias de casos de cancro so mais numerosas. 4

Tabela 1 Regies prospectadas em Portugal.


Direco Regional de Agricultura DRAEDM Concelho Vila Verde Amares Barcelos Guimares Chaves Valpaos Vinhais Bragana Tarouca Penedono Trancoso Guarda Manteigas Belmonte Sabugal Fundo Penamacor Castelo-Branco Idanha-a-Nova Vila Velha de Rdo Alcanena Cadaval Mafra Sintra Portalegre Castelo de Vide Marvo Monchique Madalena S. Roque do Pico Angra do Herosmo Vila Praia da Vitria Ponta Delgada Ribeira Grande Lagoa Vila Franca do Campo Nordeste Povoao Ribeira Brava Cmara de Lobos Funchal Parcelas 4

DRATM

73

Portugal Continental

DRABI

23

DRARO

DRAAL DRAALG Pico Terceira Aores S. Miguel

25 2 6 14

18

Madeira

Madeira

11

Foram observados sintomas da doena em todas as regies prospectadas embora nalguns casos no fosse possvel observar sinais da doena. Este foi o caso de Monchique, no Algarve. De referir que os Servios de agricultura j tinham, no entanto, referenciado o aparecimento de cancro na Serra de Monchique. Na zona afecta DRARO observou-se a presena de cancro apenas em Colares - Sintra e em Mafra. Os testes de compatibilidade permitiram classificar os 606 isolados em nove grupos de compatibilidade vegetativa (CV). Existe um grupo dominante no pas (CV P-2) onde se incluem 77.7% de todos isolados testados. Este grupo CV at agora desconhecido no resto da Europa. Referimos ainda que em todas as regies se verificou a existncia de mais do que um grupo, sendo Trs-os-Montes a regio a apresentar a maior diversidade.

2 - AVALIAO DA INTENSIDADE DEMARCADA DA PADRELA

DE ATAQUE E ESTUDO DE FACTORES NA

REGIO

Foram processados os dados recolhidos nas parcelas da Zona da Regio Demarcada da Padrela em Trs-os-Montes com o objectivo de relacionar os vrios factores com a distribuio e propagao da doena (exposio, altitude, tipo de solos e DAP). Intensidade da doena A aplicao do mtodo para a determinao da proporo de arvoredo atacado (equao 1), deu como resultado um valor de 0,415 para a estimativa da proporo de ataque na zona estudada (33 grupos). Para um nvel de probabilidade de 95% e 32 graus de liberdade (t = 2,037), o intervalo de confiana tem como limites inferior e superior os valores de 0,35 e 0,48, pelo que com uma confiana de 95% se estima que entre 35% e 48% das rvores da rea de estudo esto afectadas. Localizao e exposio do cancro na rvore Os dados recolhidos relativamente localizao dos cancros na rvore esto ilustrados nas Figuras 3 e 4.
insero dos ramos insero dos ramos/ramos ramos toda a rvore 38.3% tronco

12.5% 21.5%

11.7% 16.0%

Figura 3 Localizao do cancro na rvore.

E N
68.8%

NE NO O S

3.3% 1.8% 5.9% 5.1% 1.8% 3.7%

4.5% 5.1%

SE SO todas as direces

Figura 4 Exposio dos cancros na rvore.

Exposio da parcela Os resultados so apresentados na Figura 5 e a ANOVA no indicou existirem diferenas nas mdias das propores (o seu arcoseno) de cancro ao longo das parcelas (bom comportamento homoscedstico e dos resduos).
300 250 200 150 100 50 0 N NE E SE S SW W NW

N rvores

Total de rvores Total de rvores afectadas

Orientao das parcelas


Figura 5 Total de rvores e nmero total de rvores com cancro vs orientao das parcelas.

Altitude De acordo com os resultados da anlise de correlao, por meio da estatstica de Spearman, tambm no se verificou haver relao entre a altitude e a proporo de rvores com cancro. Tipo de solos Os resultados esto ilustrados na Figura 6. Para os dois grupos de solos analisados, Xistosos e Granticos, os resultados do Teste de Mann-Whitney U revelam diferenas no significativas, no que se refere proporo de rvores atacadas. Contudo, estas diferenas esto muito perto de serem significativas, tendo em conta o baixo valor de p (U = 48; p = 0,064), apontando para um maior valor mdio na proporo de rvores atacadas nos solos Xistosos, conforme visvel na Figura 6.

800 700

N rvores

600 500 400 300 200 100 0

Total de rvores Total de rvores afectadas

Granito

Xistoso

Tipo de solo

Figura 6 Total de rvores e nmero total de rvores com cancro por tipo de solo.

DAPs O nmero total de rvores amostradas bem como o nmero total de rvores afectadas nas diversas classes de DAP so apresentados na Figura 7.

450 400 350


381

N rvores

300 250 200 150


1 01 238

288

Total de rvores
Total de rvores afectadas
1 88 1 41 1 25 81 53 27 1 8 32 20

100 50 0

54

<= 10

11-20

21-30

31-40

41-50

51-60

>60

Classes de DAP (cm)

Figura 7 Total de rvores e nmero total de rvores com cancro por classes de DAP.

A anlise de varincia, usando o arcoseno das propores de rvores com cancro, revelou que existem diferenas significativas na mdia da proporo de rvores com cancro entre as diferentes classes de DAP (F110,6=2,508; p = 0,026). Os resduos tm um comportamento prximo da Normal, embora o Teste de Bartlett revele alguma heterogeneidade nas varincias (6 = 29,708; p< 0,001). Contudo a ANOVA bastante robusta a desvios na homogeneidade de varincias (Zar, 1999), pelo que, embora com alguma reserva, se aceitam os resultados. Assim, na sequncia deste resultado, aplicou-se o Teste de Tukey de comparao mltipla de mdias, o qual no revelou diferenas significativas na proporo de rvores atacadas com cancro entre as seguintes classes de DAP: i) <10, 41-50, 51-60 e > 60 cm; ii) 11-20, 21-30 e 31-40; iii) 11-20 e 41-50 cm, como se ilustra na Tabela 2 e na Figura 8. Nesta figura, as 7 classes de DAP esto representadas em abcissas por ordem crescente de 1 a 7 (grfico invertido pelo facto de se terem transformado as variveis).

Tabela 2 Classes de DAP em que no se observaram diferenas entre a proporo de rvores com cancro. Classes de DAP <10 1 11-20 2 21-30 3 31-40 4 41-50 5 51-60 6 >60 7

---------- _____________________ --------------------------.. .


Legenda: Cada tipo de linha une classes de DAP em que no se verificaram diferenas pelo teste de Tukey.

Grupos; Weighted Means Current effect: F(6, 217)=10,721, p=,00000 Effective hypothesis decomposition Vertical bars denote 0,95 confidence intervals 1,6

1,5

1,4 arAC 1,3 1,2 1,1 1 2 3 4 Grupos 5 6 7

Legenda: ver na Tabela 2 a correspondncia dos grupos com as diferentes classes de DAP.

Figura 8 Variao do arcoseno da proporo de rvores afectadas nas diferentes classes de DAP.

O facto de se verificar a existncia de mais casos de cancro nas classes de DAP 21-30 e 3140 cm de certa forma esperado, pois so rvores que estando em plena produo esto simultaneamente muito submetidas interveno humana com cortes e podas, o que s por si poder ser um factor importante para a propagao da doena.

CONCLUSES
Conclui-se que a doena provocada por C. parasitica, vulgarmente designada por cancro do castanheiro, est disseminada por todo o pas. Foram encontrados 9 grupos CV, diversidade esta que no muito elevada quando comparada com os casos em estudo noutros pases como Frana ou Itlia. Este facto sugere que a doena foi introduzida h relativamente pouco tempo no nosso pas, hiptese que alis sublinhada pelo facto de ter sido oficialmente declarada apenas na dcada de 80. Existe um grupo que o mais representativo no pas (CV P-2), no havendo at ao momento nenhum grupo Europeu compatvel com este. O facto de se terem verificado casos de doena em plantaes muito jovens, onde praticamente no houve condies para a contaminao local, quer por se tratar de rvores com pouca ou nenhuma interveno humana, quer pelo facto de se verificar a inexistncia de casos de cancro na rea, levanta fortes indcios de se tratarem de casos em que as rvores j vinham contaminadas do viveiro. Na maior parte destes casos as rvores tinham sido importadas do exterior por viveiristas nacionais. No que se refere ao estudo efectuado apenas com a recolha de dados na Zona da Padrela, em que se estimou uma incidncia da doena de cerca de 40%, podemos referir que factores como o tipo de solo ou a exposio no revelaram ter uma grande importncia no aparecimento da doena, o que refora a ideia geral de que as tcnicas culturais podero ser muito relevantes na disseminao do agente causal. Esta hiptese sublinhada pelo facto dos cancros se encontrarem em maior nmero nos ramos e no haver uma direco predominante para o seu aparecimento e ainda pelo facto de serem as rvores mais sujeitas interveno 9

humana (enxertias, podas, cortes e mobilizaes), e cujo DAP um indicador indirecto, a revelarem mais casos de cancro. De referir que foram recolhidos dados relativos a caractersticas e prticas culturais (variedade, provenincia dos garfos, tipo de enxertia, periodicidade das podas, etc.), os quais, por serem de tal forma homogneos, no permitiram uma avaliao dentro do delineamento experimental deste trabalho. Atendendo ao panorama nacional, consideramos da maior urgncia o estabelecimento de regras mais apertadas no que se refere certificao de material de viveiro. Consideramos que no far sentido a partir deste momento continuar a ter este fungo na lista de quarentena (DGPC) em Portugal, sendo inclusive inadequado qualquer programa de erradicao, por j no se tratar de um foco de infeco mas sim de uma disperso generalizada em todo o Pas. A preveno e as boas prticas culturais sero de importncia fundamental para o controlo da doena em Portugal, pelo que urgente o estabelecimento de incentivos divulgao massiva dessas prticas junto dos agricultores.

BIBLIOGRAFIA
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