Serie IV

PROBLEMAS CINTICA ENZIMTICA Bioqumica y Biol. Mol. I (Curso 2013/2014)

1. Una enzima con una Km de 2.6 10-3 M se ensay con una concentracin inicial de sustrato de 0,3 M. La velocidad observada fue de 5.9 10-5 M min-1. Si la concentracin inicial de sustrato fuera 2 10-5 M, Cul ser la concentracin de producto tras 5 y 10 minutos? Sol: 2.25x10-6 M; 4.5 x10-6 M 2. Una enzima cuya Km es 2.4 10-4 M se ensaya con las siguientes concentraciones de sustrato: a) 2 10-7 M, b) 6.3 10-5 M; c) 10-4 M; d) 5 10-2 M. La velocidad medida en la reaccin con 5 10-2 M de sustrato fue de 0.128 mmoles/min. Calcular las velocidades iniciales en los dems casos. Sol: 0.106 moles/min; 26.6 moles/min; 37.7 moles/min 3. Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35 moles/min cuando la concentracin de sustrato es 0,01 M. La Km para el sustrato es 2 x 10-5 M. Cul ser la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3,5 x 10-3 M; b) 2 x 10-4 M; c) 2 x 10-6 M Sol.: a) 34,8 moles/min; b) 31,8 moles/min; c) 3,18 moles/min; 4. Qu informacin puede obtenerse a partir de una representacin de Lineweaver-Burk cuando la recta obtenida, convenientemente extrapolada, corta al eje de abscisas en -40 mol/litro? Sol.: Km= 25 mM 5. Calcular la Ki de un inhibidor no competitivo si 2 10-4 M del Inhibidor da lugar a un 75% de inhibicin de una reaccin enzimtica Sol: Ki = 6.66 10-5 M 6. Al representar por el mtodo de los dobles inversos la cintica de la enzima fosfatasa alcalina (en una suspensin de 8 g/ml) y en presencia de pnitrofenil fosfato, se obtiene una recta que corta al eje de ordenadas en 1/300 min/M, y una pendiente de 0.05 min. Calcular: a) Vmax; b) Km; c) Nmero de recambio (PM 80000 D). - Al ensayar en presencia de 60 M de glicerol fosfato, y haciendo la misma representacin grfica, el punto de corte con el eje de ordenadas es el mismo, mientras que la pendiente es de 0.1 min, d) De qu tipo de inhibidor se trata? e) Calcular Km, Vmax y Ki; f) Determinar el grado de inhibicin en estas circunstancias si estamos en presencia de 45 M de p-nitrofenil fosfato.

7. Al ensayar una enzima en presencia y ausencia de un inhibidor se btuvieron los siguientes datos: v (moles/min) [S] (M) [I]=0 [I]=1mM

_______________________________________________ 1x10-3 0.5x10-3 0.33 x10-3 0.25 x10-3 0.20 x10-3 250 200 166 143 125 200 143 111 91 77

Qu tipo de inhibidor es? Calcular los parmetros cinticos.

Sol: Vmax = 0.33 103 mmol/min; Km = 0.33 10-3 M; Km = 0.66 10-3 M; Ki=1mM

8. Al representar por el mtodo de Lineweaver-Burk datos obtenidos en diferentes condiciones para una reaccin enzimtica se observan 3 rectas que cortan a los ejes X,Y en los siguientes puntos: Sin I Corte ordenadas (mmol/min) -1 Corte abcisas mM-1 0.3 -3 I1 (1 mM) 0.3 -1.5 I2 (1.5 mM) 0.5 -3

Calcular las constantes cinticas y Ki de cada inhibidor

9.- A partir de los siguientes valores determinar grficamente Km y Vmx para una reaccin enzimtica: [S] (M) vi (moles P/2 min) 5,000 x 10-3 0,392 2,000 x 10-3 0,330 -3 1,420 x 10 0,278 -3 1,052 x 10 0,246 0,500 x 10-3 0,170
Sol.: Km= 1 mM; Vmx= 0,48 moles/2 min

10.- Una reaccin enzimtica se lleva a cabo a diferentes concentraciones de

sustrato, en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: [I a]= [I b]= 1.5 mM. Se pide: a) Determinar todos los parmetros cinticos de la enzima. Qu tipo de inhibidores son Ia e Ib? Sustrato (mM) v (moles/min) va (moles/min) vb (moles/min) __________________________________________________________ 0.2 1.67 0.625 0.83 0.4 2.86 1.176 1.43 0.8 4.44 2.110 2.22 1.6 6.15 3.480 3.08 3.2 7.62 5.160 3.81 Sol.: Km=Km'b= 1mM; Km'a= 3 mM; Vmax= Vmax'a = 10 moles/min; Vmax'b = 5 moles/min; Kia = 0.75 mM; Kib = 1.5 mM; el inhibidor "a" es competitivo, mientras que el "b" es no competitivo. 11. Se han obtenido los siguientes resultados al estudiar los efectos del pH sobre actividad de la fosfatasa alcalina procedente de una muestra de hueso. Determinar a qu pH la enzima tiene mxima afinidad por el sustrato
V (mmoles/min)

[S] M 0.174 10-4 0.267 10-4 0.526 10-4 1.666 10-4 4.000 10-4

pH 7.6 0.034 0.047 0.075 0.128 0.167

pH 9 0.074 0.085 0.098 0.114 -

Sol: pH:9 mayor afinidad 12. La Km de cierta enzima para su sustrato es 75 M. Cuando se ensaya con una concentracin inicial de sustrato de 50 mM, se observa que al cabo de 15 minutos se ha transformado el 30% de sustrato. a) Calcular la velocidad mxima de la reaccin. b) Cuando se ensaya la actividad con distintas concentraciones de sustrato, en presencia de un cierto inhibidor a una concentracin de 50 M, y se representan grficamente los resultados mediante la representacin de dobles inversos, la pendiente de la recta obtenida es la misma que cuando el experimento se hace en ausencia del inhibidor, pero la ordenada en el origen aumenta al doble. Qu tipo de inhibicin se ha producido? Calcular la Ki. c) Calcular el grado de inhibicin cuando el ensayo se hace con una concentracin de sustrato de 150 M, en presencia de 100 M del inhibidor anterior.

13. Qu concentracin de inhibidor competitivo se requiere para conseguir una inhibicin de 15% de una reaccin enzimtica, si la concentracin de sustrato es 1,7 mM, la Km para el sustrato es 0,24 mM y la Ki para el inhibidor 2,3 x 10-5 M? Sol: [ I ]=0.032mM

14. La actividad de una lipasa es inhibida por cido. Los resultados de velocidades para diferentes concentraciones de sustrato en ausencia y presencia de cido son: v (moles/2 min) [S] (mM) [I]=0 [I]=1mM

_________________________________________________ 6.25 0.862 0.424 0.625 0.455 0.340 0.488 0.355 0.265

Qu tipo de inhibidor es? Calcular los parmetros cinticos

16.- Se ensaya una enzima con su sustrato especfico en presencia de un inhibidor competitivo. Si la velocidad mxima de la reaccin no inhibida es de 55 moles/min, calcular la velocidad inicial de la reaccin inhibida y el grado de inhibicin, sabiendo que: [S]= Km= 2 x 10-4 M y que [I]= Ki= 2,5 x 10-3 M.
Sol.: v'= 18,33 moles/min; grado de inhibicin 33,35%