Tema 7: Enzimas.

Enzimologa Clnica

TEMA 7: ENZIMAS. ENZIMOLOGA CLNICA Propiedades Generales de las Enzimas: 1- Presentan un sitio activo Las molculas de enzimas contienen hendiduras o cavidades denominadas sitio activo. El sitio activo est formado por las cadenas laterales de residuos especficos, lo que ocasiona que tenga un arreglo tridimensional particular, diferente al resto de la protena. Este sitio es afn por la estructura tridimensional del sustrato: El sitio activo la enzima (E) une al substrato (S) formando un complejo enzima-substrato (ES). En el complejo ES, E transforma a S en l o los productos, formando el complejo enzima-producto (EP), finalmente la enzima libera del sitio activo un producto (P). Se regenera la enzima.

E+S

[ES ]

E+P

2- Eficiencia cataltica (mayor velocidad de reaccin) La mayora de las reacciones catalizadas por enzimas son muy eficientes y transcurren desde 106 hasta 1014 veces ms rpido que la misma reaccin no catalizada. Tpicamente, cada molcula de enzima es capaz de transformar cada segundo de 100 a 1000 molculas de substrato en producto. El nmero de estas molculas transformadas a producto por molcula de enzima en cada segundo, se conoce como el nmero de recambio. 3-Condiciones de reaccin (t, pH y presin) compatible con la vida 4- Especificidad Las enzimas son muy especficas por el substrato de la reaccin que catalizan. Interactan con una o muy pocas molculas y catalizan nicamente un tipo de reaccin. 5- Grupos prostticos Algunas enzimas se asocian con molculas de carcter no proteco que son necesarias para el funcionamiento de la enzima, estas molculas se denominan grupos prosteticos. Comnmente, los cofactores son iones metlicos como el Zn2+ o el Fe2+, tambin pueden ser molculas orgnicas que se denomina coenzimas como el NAD+, FAD, la coenzima A y la vitamina C, generalmente las coenzimas son derivados de las vitaminas.

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6- Regulacin de su actividad La actividad enzimtica puede ser regulada, esto quiere decir que dependiendo de los requerimientos metablicos, las enzimas son activadas o inhibidas, para acelerar o disminuir la velocidad con la que catalizan la reaccin, respondiendo as a las diferentes necesidades de sus productos en la clula. La regulacin ms comn es modificando la concentracin de su(s) substrato(s). 7- Localizacin celular: Muchas enzimas se localizan en organelas especficos de la clula. Esta compartamentalizacin ayuda a aislar los substratos de la reaccin o productos de la misma, de tal forma que no hay competencia de reacciones, de esta manera se provee un medio favorable para la reaccin, de tal forma que es posible localizar diferentes partes del metabolismo en diferentes organelos, haciendo a la clula una entidad organizada en donde simultneamente funcionan miles de enzimas. Isoenzimas Las isoenzimas son protenas que difieren en la secuencia de aminocidos pero que catalizan la misma reaccin, estando presentes en la misma especie. Estas enzimas poseen diferentes propiedades fsicas y qumicas determinadas genticamente (punto isoelctrico, especificidad de sustrato y cofactor, etc), suelen mostrar diferentes parmetros cinticos (i.e. diferentes valores de Km), o propiedades de regulacin diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer las necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo. Por ejemplo, la creatina quinasa (CK) presente en el cerebro difiere fisicoqumicamente de sus isoenzimas especficas de msculo cardaco y esqueltico. Asimismo, las isoenzimas pueden tener distinta localizacin subcelular como por ejemplo la glutmico oxalactica transaminasa (GOT) presente en mitocondria difiere de la citoslica. En cambio las diferentes isoenzimas de la lctico deshidrogenasa (LDH) estn presentes en compartimientos citoslicos. En trminos muy generales, las diferencias en el contenido enzimtico son puramente cuantitativas, es decir, las mismas enzimas estn presentes en su mayora en diversos tejidos, pero sus actividades relativas muestran grandes diferencias de rgano a rgano.

Nomenclatura de las enzimas: Las enzimas se denominan por el agregado del sufijo asa al nombre del sustrato o a la reaccin que cataliza. Ejemplo: la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea. La Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular (IUBMB) creo un sistema basado en las reacciones que catalizan. Hay 6 clases principales, ver cuadro.

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1. Oxidorreductasas: Actan en reacciones de oxidorreduccin (Ej.: deshidrogenasas, oxidasas). 2. Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo qumico de una sustancia a otra. Ej: aminotransferasas o transaminasas. 3. Hidrolasas: Producen hidrlisis (fosfatasas, peptidasas). 4. Liasas: Actan al aadir grupos a ligaduras dobles o quitar grupos del sustrato y provocar la aparicin de dobles ligaduras (fumarato-hidrasas). 5. Isomerasas: Su accin catalizadora provoca la transformacin de un sustrato en un ismero. Son mutasas cuando producen una transferencia intramolecular (fosfoglucomutasa) y racemasas o epimerasas cuando provocan la inversin de grupos asimtricos. 6. Ligasas o sintetasas: Estas enzimas catalizan la unin de dos molculas.

Cofactores y Coenzimas Las enzimas al igual que otras protenas tienen pesos moleculares que van desde 12,000 hasta ms de un milln de kD. Algunas requieren de grupos diferentes a los aminocidos para realizar su catlisis. Otras requieren de un cofactor que puede ser uno o ms iones inorgnicos. Otras enzimas requieren de una coenzima. Apoenzima (inactiva) + Grupo Prosttico Holoenzima (activa)

Grupo prosttico: cofactores (in metlico) o coenzima unido covalentemente a la enzima. Son de caractersticas no proteicas Holoenzima: es una enzima cuya actividad cataltica depende de tener unido de manera covalente a su grupo prosttico. Esto quiere decir que bajo ciertas condiciones el grupo prosttico puede ser removido de la enzima, por motivos regulatorios, o bien existen estados en los cuales la enzima carece de este grupo, por ejemplo recin sintetizada la cadena de aminocidos; la presencia del grupo prosttico es una modificacin postraduccional. Al estado de la enzima que carece del grupo prosttico se le denomina apoenzima.

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Ejemplo del Ion que acta como Enzima Cofactor Fe 2+ o Fe3+ citocromo oxidasa, catalasa, peroxidasa, ferroquelatasa K+ Piruvato Quinasa Mn 2+ Hexoquinasa, Glucosa-6-Fosfatasa, Mg2+ Arginasa 2+ Ni Ureasa Zn2+ Pirofosfatasa

Ejemplo de Coenzima Tiamina Pirofosfato Flavina adenina dinucletido: FAD Nicotinamida Adenina + dinucletido: NAD Coenzima A Fosfato de Piridoxal Tetrahidrofolato Coenzimas de Cobalamina

Grupo que transfiere Aldehdos Electrones. Oxidacin Reduccion Transferencia de tomos de hidrogeno. Oxidacin Reduccion Acilos Grupos amino Un grupo C Alquilo e Hidrogeno

Precursor dietario Tiamina (Vitam. B1) Riboflavina (Vit. B2) Acido Nicotnico (Niacina, Vit. B ) Acido Pantotnico Piridoxina (Vit. B6) Acido Flico Cobalamina (B12)

ENZIMAS DE IMPORTANCIA CLNICA Las enzimas son empleadas en los laboratorios clnicos y en las investigaciones biomdicas como reactivos biolgicos para la determinacin de analitos, y la medicin de sus niveles de actividad en el suero u otras muestras biolgicas constituyen herramientas eficaces en el diagnstico y pronstico de una enfermedad. Enzimas presentes en el plasma sanguneo Se ha definido el plasma sanguneo como un receptculo pasivo que recibe las enzimas procedentes de los tejidos y de los elementos formes (clulas) de la sangre. Con respecto a su clasificacin fisiolgica, Buecher haba sugerido una agrupacin en: a- Enzimas del plasma especficas b- Enzimas del plasma no especficas a- Las enzimas del plasma especficas son componentes funcionales de la sangre. Estn por lo comn all y en un nivel de actividad superior al de los tejidos, siendo mantenido su nivel constante por secrecin activa de uno o ms rganos. A este grupo pertenecen la seudocolinesterasa, ceruloplasmina, lipoproteinlipasa, as como las enzimas que intervienen en la coagulacin sangunea. La determinacin de la actividad de estas

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enzimas tiene inters clnico en le evaluacin tanto de la funcin propia de la enzima en el estudio como de la funcin del tejido que la sintetiza. b- Las enzimas del plasma no especficas: no desempean funcin biolgica en el plasma; no son, por tanto, constituyentes funcionales plasmticos y slo se aprecia una muy pequea actividad en condiciones normales, debido a la renovacin celular natural o pequeos traumatismos espontneos. Su presencia en plasma en niveles ms altos de lo normal sugiere un aumento en la velocidad de destruccin celular y tisular. La determinacin de estos niveles de enzimas plasmticas puede proveer informacin valiosa para diagnstico y pronstico. Sin embargo, niveles elevados de enzimas en plasma no slo pueden ser interpretados como evidencia de necrosis celular ya que tambin la realizacin de ejercicio vigoroso libera cantidades significativas de enzimas musculares. Las enzimas del plasma no especficas: pueden clasificarse en: Enzimas de secrecin, que ejercen su actividad fuera de las clulas que las originaron, por ejemplo se producen en glndulas excrinas, como pncreas (enzimas o fermentos digestivos) y prstata, as como en tejidos como mucosa gstrica y hueso. En adenocarcinoma y osteosarcoma se observa un aumento importante de la actividad plasmtica de las fosfatasas cida y alcalina Enzimas celulares del Metabolismo Intermedio, que son las que se ubican en los distintos componentes celulares y cuya salida se produce cuando una causa determinada altera la estructura de la clula. La concentracin en los tejidos de estas enzimas es miles de veces ms alta que en el plasma. Un dao puede conducir a un aumento en la permeabilidad de la membrana plasmtica con su consecuente liberacin a la circulacin general. Algunas de las enzimas que corresponden a este grupo son: aspartato amino transferasa (AST) o glutmicooxalactico transaminasa (GOT), alanina amino transferasa (ALT) o glutmico pirvico transaminasa (GPT), lactato deshidrogenasa (LDH), creatn quinasa (CK), amilasa, -glutamiltranspeptidasa (-GT), 5nucleotidasa y aldolasa (ALS). A veces la alteracin consiste en un simple cambio a nivel de la membrana celular, que posibilita la salida de aquellas enzimas presentes en el citoplasma de la clula. Otras veces, determinadas estructuras intracelulares, como las mitocondrias por ejemplo, resultan daadas y permiten la salida de enzimas que tienen esa localizacin. Cuanto mayor sea el rea lesionada y ms intensa la agresin, ms debe esperarse el incremento de la actividad enzimtica en el suero. Aun cuando desde el punto de vista biolgico son muchas las enzimas importantes, el inters clnico se centra en el estudio de aquellas cuyas variaciones que son caractersticas, es decir, indicadoras de enfermedad o por lo menos, de determinadas alteraciones funcionales. Las mismas acontecen en el transcurso de diversas noxas, por lo cual las enzimas adquieren valor diagnstico y a veces pronstico. Distribucin de las enzimas en las clulas: hay enzimas 100% citoplasmticas es decir que solo se encuentran en el citosol (lctico deshidrogensa, GPT). Hay otras enzimas que estn en un cierto porcentaje en una organela y otro porcentaje en el citoplasma: por ejemplo la GOT (60% en citoplasma y 40% en mitocondria); la malato deshidrogenasa 50% en citoplasma y 50% en mitocondria); otras solo mitocondriales (glutamato deshidrogenasa)

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Definicin: Noxas: (la palabra noxa proviene del latn demage : dao). Noxa significa Dao. Se denomina noxa a cualquier elemento que produce un dao sobre la integridad de una clula u organismo. Las causas pueden ser fsicas, qumicas, bacteriolgicas, virales o parasitarias.

ENZIMAS CELULARES DEL METABOLISMO INTERMEDIO: MECANISMOS DE LIBERACIN AL PLASMA SANGUINEO La membrana plasmtica constituye un medio de retencin de las enzimas intracelulares. El mantenimiento de la integridad de la membrana plasmtica depende en gran medida de la actividad metablica, la cual genera la energa necesaria para los diferentes procesos vitales que se realizan en la clula. Si por cualquier causa se altera la produccin de energa, ya sea por una disminucin de los sustratos oxidables o de oxgeno, o bien por errores metablicos congnitos que impidan un metabolismo normal, se promueve el recambio celular o el escape de las enzimas de clulas sanas. Entre las principales noxas que causan dao o muerte celular se encuentran las siguientes: Hipoxia Presencia de microorganismos (bacterias, parsitos, virus) Agentes qumicos, fsicos y farmacolgicos Mecanismos inmunitarios Trastornos nutricionales Hipoxia: La hipoxia (o falta de tensin celular de oxigeno) en las clulas o tejidos puede atribuirse a diferentes causas, por ejemplo la deficiencia en el transporte del oxgeno como sucede en las anemias; oxigenacin deficiente debida a un fallo cardiorespiratorio, por estrechamiento (ej. aterosclerosis) o bloqueo (trombosis) de las arterias o venas. Presencia de microorganismos: la presencia de bacterias, virus, hongos, as como protozoos y helmintos. El ataque directo de ellos sobre las membranas celulares promover tambin la salida de enzimas intracelulares a la circulacin sangunea. Agentes qumicos, fsicos y farmacolgicos: la contaminacin ambiental es fuente de agentes qumicos que resultan inhibidores de diversos procesos metablicos, por ejemplo mercurio y plomo. El alcoholismo y el tabaquismo pueden conducir a una alteracin de los niveles sricos de las enzimas. Por ejemplo en el alcoholismo se observa el fenmeno de la induccin enzimtica (mayor sntesis de protena enzima), que puede aumentar la produccin de enzimas como la GGT (gama glutamil transferasa) y por tanto la elevacin de sus niveles sricos. Los frmacos tambin pueden alterar los niveles sricos de las enzimas al actuar por diferentes mecanismos: liberacin de enzimas de membrana, induccin o represin de la sntesis enzimtica o por modificaciones del flujo biliar. Un ejemplo del primer caso es la imipramina que por su accin detergente sobre las membranas de los hepatocitos provoca un aumento de la GGT srica; en el caso del fenobarbital se induce la sntesis de la GGT y se perturba el flujo biliar, desorganizando las estructuras lipdicas de las membranas de los hepatocitos; y por ltimo, los anticonvulsivos al igual que la mayora de los frmacos liposolubles son inductores enzimticos y producen un aumento de ms de un 70% de la ALT srica y ms de un 200% de la GGT.

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Mecanismos inmunitarios: Los procesos autoinmunes, alergias, anafilaxis, generan citotoxicidad y formacin de complejos inmunitarios con destruccin de tipos celulares especficos. Trastornos nutricionales: Por ejemplo en la malnutricin proteico-calrica, y en las deficiencias de vitaminas y/o minerales. FACTORES QUE DETERMINAN LA CONCENTRACION Y ACTIVIDAD ENZIMATICA EN SUERO Al producirse el dao o la muerte celular, las molculas pequeas son las primeras en liberarse y escapar a la circulacin, posteriormente las macromolculas, entre las que se encuentran las enzimas, y finalmente todo el contenido celular. La liberacin y velocidad de aparicin de las enzimas en la circulacin depende de la localizacin intracelular y de las caractersticas del rgano o tejido daado. La aparicin o aumento en suero de las enzimas del citosol refleja solo un dao de la membrana, mientras que el aumento de las enzimas localizadas en organelas, aporta informacin acerca de procesos destructivos y necrosis celular. La aparicin de las enzimas en el suero depende de la forma en que logren el paso desde el lquido intersticial a la sangre, lo que vara de un tejido a otro. Por ejemplo, el hgado es un rgano altamente vascularizado con capilares muy permeables por lo que permite el paso directo de las enzimas a la sangre, mientras que en el caso del msculo esqueltico con capilares muy poco permeables, las enzimas pasan a la sangre a travs de la linfa. Adems de conocer la localizacin intracelular de las enzimas y su paso a la sangre, es importante tambin cmo se realiza el proceso de clarificacin de las enzimas que llegan al torrente circulatorio. Clarificacin o depuracin de las enzimas volcadas al plasma por noxas celulares: El peso molecular de la mayora de las enzimas impide que puedan ser filtradas por el glomrulo en los riones sanos, por lo que la excrecin a travs de la orina no es la va principal de eliminacin de las enzimas presentes en el plasma. Una excepcin la constituye la amilasa de gran valor en las enfermedades pancreticas, que por su pequeo peso molecular (40 kDa) atraviesa los glomrulos renales y aumenta su excrecin por la orina. En definitiva, las vas de eliminacin de enzimas sricas son: a- Eliminacin renal: se cumple para aquellas de bajo peso molecular. Ej: amilasa y algunas fosfatasas b- Inactivacin srica: existen inactivadores o inhibidores para varias enzimas: Ej: tripsina, quimiotripsina. Luego son eliminadas rpidamente, con la participacin del sistema retculo endotelial en un proceso de endocitosis mediada por receptor. c- Para algunas enzimas existe recaptacin por parte de los tejidos convalecientes, al restablecerse anatmica y fisiolgicamente. Esta pequesima parte de las enzimas previamente liberadas sera utilizada, no para su funcin primitiva, sino como integrante de un pool (reservorio) de aminocidos. La cantidad y duracin de la actividad enzimtica suministran datos acerca del alcance del dao del tejido. Una actividad enzimtica aumentada durante un tiempo prolongado sugiere un dao crnico, por el contrario en el caso de las enfermedades agudas tiene lugar un rpido aumento y un rpido descenso de la actividad enzimtica. La utilizacin

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de las enzimas en el diagnstico clnico depende de su vida media despus de su salida del interior de la clula. La vida media de las enzimas en el plasma vara de 6 a 48 h.

ENZIMAS FRECUENTEMENTE ANALIZADAS: Transaminasas hepticas (ALT o GPT y AST o GOT) alfaAmilasa Creatn fosfoquinasa (CPK) Fosfatasa cida (AcP) Fosfatasa alcalina (ALP) Gama glutamil transpeptidasa (GGT) Lctico deshidrogenasa (LDH) 5-nucleotidasa (NTP) Lactato deshidrogenasa (LDH) Los niveles sricos aumentados de LDH se observan en muchas circunstancias como ser anemias megaloblsticas, infarto de miocardio y pulmonar, etc. El gran nmero de situaciones que aumenta la actividad de LDH hace relativa su utilidad diagnstica. Sin embargo, es muy til en el seguimiento de la quimioterapia del cncer puesto que la respuesta en la teraputica se acompaa por una disminucin del nivel srico de esta enzima. La determinacin de la actividad de LDH es til en el diagnstico del infarto de miocardio y pulmonar. Son muy caractersticos los niveles de LDH elevados en los casos de infarto de miocardio y se observan valores altos ya a las pocas horas del comienzo del aparente infarto. Por si sola, la determinacin de LDH no es determinante de lesin de ningn rgano en particular. Hay que tener en cuenta que es necesario evitar la hemlisis de la muestra de sangre, para una correcta determinacin. Transaminasas La GOT est elevada en suero en pacientes con enfermedades hepatobiliares, cardiovasculares y miopatas. La GPT est elevada en el suero de enfermos hepticos.

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Fosfatasas Fosfatasa alcalina: se encuentra aumentada en las enfermedades hepticas. Los nios en crecimiento y las mujeres embarazadas en el tercer trimestre presentan valores fisiolgicamente elevados de fosfatasa alcalina en suero. La determinacin de la fosfatasa alcalina es suero es til para reconocer las enfermedades seas, sobre todo la ostetis deformante, hipoparatiroidismo y neoplasias seas. La elevacin de la fosfatasa alcalina srica en algunas enfermedades hepticas puede ser distinguida mediante otras pruebas de laboratorio y por sus rasgos clnicos. Fosfatasa cida: se observan valores elevados en pacientes con carcinoma prosttico.

En la mayora de los casos los cambios que se observan en los niveles de actividad o la concentracin de las enzimas del plasma permiten inferir la localizacin y la naturaleza de los cambios patolgicos que se producen en determinados tejidos del cuerpo. Sin embargo, hay que tener en cuenta que muchos procesos fisiolgicos normales pueden provocar aumentos en el suero de algunas enzimas, que no se relacionan con una enfermedad. Son ejemplo de ello, el aumento en los niveles y actividad de fosfatasa alcalina (FAL) por los osteoblastos productores de hueso en los nios en estado de crecimiento, lo que debe diferenciarse de un aumento de FAL por actividad osteoblstica aumentada en varias enfermedades seas.

ENZIMOLOGA PNCREAS

DE

LAS

ENFERMEDADES

DEL

CORAZN,

HGADO

Las enfermedades del corazn, hgado y pncreas son las que con mayor frecuencia aparecen en la poblacin, por ello la importancia de la aplicacin de la enzimologa al diagnstico y evolucin de estas enfermedades.

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CORAZON: El trmino infarto agudo del miocardio (IAM) se refiere a la muerte del tejido cardiaco resultante de la ausencia del flujo sanguneo a las clulas musculares del corazn. Usualmente implica un sndrome clnico clsico, caracterizado por el comienzo sbito de los sntomas tpicos, seguidos de alteraciones electrocardiogrficas e incrementos transitorios de los niveles sricos de las enzimas liberadas por el miocardio. En dicho sndrome la oclusin trombtica sbita y total de una arteria coronaria, causa un infarto que generalmente compromete todo el espesor del segmento de la pared ventricular irrigado por la arteria comprometida.

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Cambios enzimticos en el IAM: Las clulas miocrdicas lesionadas irreversiblemente liberan ciertas enzimas a la circulacin y su medicin nos proporciona una herramienta de gran utilidad para el diagnstico del infarto agudo del miocardio. La figura nos ilustra el comportamiento general de la isoenzima MB de la creatin kinasa (CK), la lactico deshidrogenasa (LDH) y la aspartato aminotransferasa desde el comienzo del dolor precordial en los pacientes con infarto agudo. Lctico deshidrogenasa (LDH): la actividad total de esta enzima supera el rango normal a las 24-48 horas luego del comienzo del infarto, tiene un pico entre el tercero y el sexto da, para regresar a valores normales cerca del da catorce. La elevacin de esta enzima es un indicador muy sensible pero poco especifico de infarto del miocardio, pues algunas entidades pueden producir incrementos plasmticos de LDH, como sucede en los pacientes con hemlisis, anemia megaloblstica, leucemia, enfermedad o congestin heptica, enfermedad renal, tumores, embolismo pulmonar, miocarditis, enfermedades del msculo esqueltico. Existen 5 isoenzimas de LDH (numeradas de 1 a 5 de acuerdo con su capacidad de migracin electrofortica), cuya medicin puede mejorar la capacidad diagnstica del estudio, pues la LDH1 se encuentra principalmente en el corazn, mientras que la LDH4 y la LDH5 estn en el hgado y el msculo esqueltico. La elevacin de LDH1 precede a la elevacin de LDH total en aproximadamente 8 horas, sin embargo, como la hemlisis puede tambin incrementar los niveles de esta isoenzima, se debe tener mucho cuidado en el manejo de la sangre al obtener la muestra para anlisis en el laboratorio. La medicin de las isoenzimas de LDH puede ser muy til cuando se espera que los niveles de CK-MB se encuentren bajos (infartos de 2 a 4 das de evolucin), pero la titulacin rutinaria de estas isoenzimas no se justifica en todos los pacientes.

Rango Normal

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Perfil plasmtico tpico de las enzimas liberadas durante un infarto agudo del miocardio: Aspartato aminotransferasa (AST): los niveles plasmticos de esta enzima (anteriormente conocida como transferasa srica del cido glutmico oxalactico GOT) se empiezan a elevar a las 8 a 12 horas del infarto, alcanzan un pico a las 18 a

Creatin kinasa (CK): la actividad de esta enzima supera el rango normal entre 4 y 8 horas de iniciados los sntomas de infarto agudo del miocardio, declinando a valores bsales cerca del tercero o cuarto da. El pico enzimtico es variable, pues puede ser precoz (8 horas) o muy tardo (58 horas). Aunque la media del pico de actividad de CK es de 24 horas. Aunque la elevacin plasmtica de los niveles totales de CK es muy sensible para el diagnstico de infarto, existen cerca de un 15% de falsos positivos que se presentan en pacientes con enfermedades musculares, intoxicacin alcohlica, diabetes, trauma msculo-esqueltico, ejercicio extenuante, convulsiones, inyecciones intramusculares, embolismo pulmonar, etc. Por lo cual se recurre a las isoenzimas de CK como ayuda diagnstica de invaluable utilidad hoy en da. Las tcnicas de electroforesis han permitido indicar tres isoenzimas de CK: MM, BB y MB; la BB se encuentra principalmente en rin y cerebro, la MM en el msculo esqueltico, mientras que la isoenzima MB se detecta principalmente en el corazn. La medicin de esta isoenzima contina siendo el mtodo bioqumico ms aceptado para el diagnstico del infarto agudo del miocardio.

HIGADO Dao Heptico agudo: por ejemplo durante la infeccin con el virus de la Hepatitis A (VHA) - Enzimas plasmticas usadas como marcadoras de inflamacin: ASAT (GOT) y ALAT (GPT): La concentracin de estas enzimas en el interior del hepatocito es muy elevada y cada vez que se altera difusamente la permeabilidad de la membrana citoplasmtica, sea por necrosis o por inflamacin, las transaminasas experimentan un aumento de actividad en sangre perifrica. Los requisitos indispensables para una elevacin cuantitativamente importante de transaminasas son que el dao sea difuso y agudo. Constituyen el examen de mayor utilidad frente a la sospecha de una inflamacin heptica y habitualmente ponen el sello del diagnstico de un dao heptico agudo. La actividad en plasma alcanza niveles sobre 500 mU/ml y habitualmente sobre 1000 mU/ml. Su normalizacin completa es posterior a la desaparicin de la ictericia. Ver figura.

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GOT GPT

Enzimas marcadoras de colestasia: - Las fosfatasas alcalinas hepticas (FA) son un grupo de enzimas ubicadas preferentemente en la membrana canalicular del hepatocito. Su sntesis est regulada por la presencia de sales biliares; un aumento de la concentracin intracelular de sales biliares estimula la sntesis de FA y por esta razn se elevan en la colestasia intra o extracelular. En ambos casos existe un incremento de la concentracin intracelular de sales biliares. Pueden elevarse en procesos expansivos locales (tumorales o inflamatorios), en los que la concentracin de sales biliares aumenta en forma sectorial. En la hepatitis aguda, es corriente encontrar discretas alzas en la concentracin de FA como expresin de mayor o menor grado de colestasia que siempre est presente. Sin embargo, una elevacin importante de FA debe hacer pensar en un dao heptico predominantemente colestsico o en una obstruccin al flujo biliar. - La GGT o gama glutamil transferasa se eleva por mecanismos no bien establecidos pero probablemente similares a los de las FA. Es adems inducible por agentes externos. Se trata de un marcador muy sensible pero de poca especificidad. El alcohol induce manifiestamente su sntesis por lo que es de utilidad en el control de la abstinencia alcohlica.

PANCREAS: El pncreas es un rgano muy rico en enzimas almacenadas principalmente en formas inactivas o zimgenos, que se activan en el intestino para la digestin de los alimentos. La Pancreatitis Aguda (PA) se define como inflamacin del pncreas y del tejido peripancretico en forma aguda. .

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Es importante distinguir entre su forma leve y grave. La primera se caracteriza por la presencia de inflamacin local que se traduce en edema de la glndula y con mnima repercusin sistmica. En la pancreatitis aguda grave en cambio, la glndula puede tener necrosis, formaciones de pseudoquistes o abscesos, y muchas veces aparece falla orgnica con repercusin sistmica importante. La etiologa ms frecuente de pancreatitis aguda es la biliar, por obstruccin del coldoco por clculos biliares. La segunda se debe principalmente al abuso del consumo del alcohol.

Otras causas menos frecuentes incluyen: el traumatismo abdominal, hipercalcemia, hipertrigliceridemia, frmacos, infecciones virales, transgresin alimentaria o idioptica. Es precisamente la activacin del tripsingeno en las clulas acinares del pncreas y no en el duodeno lo que favorece la activacin de otras enzimas pancreticas que inician el proceso de autodigestin del pncreas. Enzimas pancreticas en plasma: Existe un alza significativamente de la lipasa, amilasa y tripsina. En clnica un alza en la lipasemia mayor a 3 veces o de la amilasemia ms de 4 veces, tienen una alta sensibilidad y especificidad. - -Amilasa: se eleva en el plasma entre 2 a 12 veces de su valor normal en la PA. El alza es un evento precoz y transitorio, de tal forma que se eleva al inicio y dura hasta el tercer a quinto da de evolucin. Luego puede regresar a valores normales o mantenerse elevada. Es importante destacar que la amilasa puede estar distorsionada en presencia de altos niveles de triglicridos, por lo tanto la amilasemia es til en etapas precoces de la PA o arroja valores muy elevados. El hallazgo de valores normales no excluye el diagnstico y la magnitud de la amilasemia no guarda relacin con la gravedad de la PA (No es especfica, existen otras patologas que tambin provocan su elevacin, ej: cirrosis, insuficiencia renal, obstruccin intestinal). - Lipasa: su determinacin presenta una mayor especificidad para pancreatitis (96%), con

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una sensibilidad de 94%. Se eleva despus que la amilasa y permanece elevada en el plasma por ms tiempo, incluso hasta dos semanas de iniciado el cuadro. - Un marcador que se ha venido utilizando en los ltimos aos, lo constituye el tripsingeno. El tripsingeno se encuentra en dos formas isoenzimticas, el tripsingeno-1 o catinico y el tripsingeno-2 o aninico. Durante PA se favorece la salida de enzimas pancreticas a la circulacin entre las que se encuentran el tripsingeno-2 que puede ser valorado en el suero y la orina.

ENZIMURIA La utilizacin de las enzimas en la orina es limitada ya que debe asegurarse que su presencia no procede de eritrocitos, leucocitos, clulas epiteliales y microorganismos. Las enzimas presentes en la orina pueden tener por tanto diferentes orgenes: - Procedentes del rin por destruccin celular. - Reacciones de rechazo al trasplante de rin. - En un rin sano, su presencia en la orina est limitada por los pesos moleculares. Las protenas con un peso molecular menor de 60 kDa pueden ser filtradas por el rin y se excretan en la orina. La presencia de enzimas en la orina puede servir tambin como criterio de evolucin en las afecciones renales agudas.

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