INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA

DIANA PATRICIA CARDONA S.

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

QUE ES CROMATOGRAFIA?
La cromatografa es, esencialmente, un mtodo fsico de separacin, en el cual los componentes a separar se distribuyen en dos fases, la fase estacionaria, de gran rea superficial y la fase mvil que se hace pasar a lo largo de la fase estacionaria.

Analizar
Separacin

Identificar Purificar Cuantificar

Mezcla

Componentes

CLASIFICACION DE LOS METODOS CROMATOGRAFICOS

FASE FASE ESTACIONARIA L FASE MOVIL L Cromatografa Liquida CLASIFICACION FASE MOVIL FUERZAS DE ATRACCION Reparto Adsorcin Reparto Intercambio inico Exclusin Molecular Afinidad Adsorcin Exclusin molecular

L S Especies orgnicas enlazadas a una superficie slida

G G Fluido supercrtico

Cromatografa Gaseosa Cromatografa Fluido supercrtico

CROMATOGRAFIA LIQUIDA

CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA LIQUIDA

http://www.waters.com/watersdivision/Conten tD.asp?watersit=JDRS-5LTGBH&WT.svl=1

http://www.charltonsci.co.uk/charlton_ scientific011001.jpg

http://www.separationsnow.com/FCKeditor/UserFiles/Image/sepNOW_ advertorials/0601_HPLC_Agilent/0601_hplcad_agilent_fig1.jpg

CROMATOGRAFIA LIQUIDA CROMATOGRAFIA PAPEL

Cada compuesto migra a una velocidad que refleja el tamao de sus molculas y su solubilidad en el solvente

CROMATOGRAFIA LIQUIDA CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

http://images.bestwebbuys.com/muze/books/96/9781588904096.jpg

DETECCION: UV y Reveladores

CROMATOGRAFIA CAPA FINA TIPOS DE SEPARACION

BAJA POLARIDAD

F. ESTACIONARIA

ALTA A MEDIA
POLARIDAD DE SUSTANCIAS

F. MVIL

Fase Normal

F. Estacionaria Polar (Silica gel) F. Mvil No Polar F. Estacionaria No Polar (silica modificada) F. Mvil Polar

BAJA A MEDIA
BAJA POLARIDAD

Fase Reversa

FASE NORMAL

CROMATOGRAFIA CAPA FINA TIPOS DE SEPARACION

LA FASE ESTACIONARIA (SILICA) ES MAS POLAR QUE LA FASE MOVIL LOS COMPONENTES QUE MIGRAN PRIMERO SON LOS MAS APOLARES LOS COMPONENTES QUE MIGRAN AL FINAL SON LOS DE MAYOR POLARIDAD (MAS POLARES)
APOLAR SILICA GEL (FASE ESTACIONARIA POLAR POLAR PUNTO DE SIEMBRA

Glass TLC Plates, Silica gel 60 F254 20x20cm Aluminium TLC Plates, Silica gel 60 F254 20x20cm

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE REVERSA
SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LA FASE ESTACIONARIA PRESENTA UNA BAJA POLARIDAD; LOGRADO MEDIANTE UN PROCESO DE DERIVATIZACION Slice derivatizada superficialmente: C8 C18
Glass TLC Plates, Silica gel 60 RP-8 F254 20x20cm Aluminium TLC Plates, Silica gel 60 RP-8 F254 20x20cm Glass TLC Plates, Silica gel 60 RP-18 F254 20x20cm Aluminium TLC Plates, Silica gel 60 RP-18 F254 20x20cm

CROMATOGRAFIA CAPA FINA TIPOS DE SEPARACION

RESUMEN

CARACTERISTICAS FASE ESTACIONARIA FASE MOVIL PRIMEROS EN MIGRAR ULTIMOS EN MIGRAR

FASE NORMAL POL AR (SILICA GEL) APOLAR APOLARES POLARES

FASE REVERSA APOLAR POLAR POLARES APOLARES

CROMATOGRAFIA LIQUIDA CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

Ingreso de muestra

El tipo de separacin se puede dar por: Color Afinidad Polaridad Peso molecular (GPC y GFC)

Separacin, Columna

Deteccin de Componentes

Coleccin de fracciones

CROMATOGRAFIA LIQUIDA CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

CROMATOGRAFIA FLASH

http://www.buchi.com/uploads/pics/flashchromatography.jpg

HPLC

http://www.waters.com/watersdivision/ContentD.asp?watersit=JDRS -5LTGBH&WT.svl=1

EXTRACCION FASE SOLIDA

http://www.charltonsci.co.uk/charlton_scientific011001.jpg http://www.separationsnow.com/FCKeditor/UserFiles/Image/sepNOW_advertorials/060 1_HPLC_Agilent/0601_hplcad_agilent_fig1.jpg

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

BAJA POLARIDAD

Fase Normal

F. ESTACIONARIA

ALTA A MEDIA
POLARIDAD DE SUSTANCIAS

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar

F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Fase Reversa

F. MVIL

Par Inico Cromatogrfico P.I.C. Intercambio Inico Permeacin por Gel (polmeros) Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

BAJA A MEDIA
BAJA POLARIDAD

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

Fase Normal

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar

Fase Reversa

F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Par Inico Cromatogrfico P.I.C Intercambio Inico Exclusin por tamao: - Permeacin por Gel (polmeros) - Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE NORMAL
Ingreso de muestra

COMP. POLAR

3 2 1
1

Separacin, Columna

FASE ESTACIONARIA POLAR

LA FASE ESTACIONARIA(SILICA) ES MAS POLAR QUE LA FASE MOVIL LOS COMPONENTES QUE ELUYEN PRIMERO SON LOS DE MENOR POLARIDAD LOS COMPONENTES QUE ELUYEN AL FINAL SON LOS DE MAYOR POLARIDAD

COMP. APOLAR

Coleccin de fracciones

APOLAR

POLAR PUNTO DE SIEMBRA

SILICA GEL (FASE ESTACIONARIA POLAR

CCF (FASE NORMAL)

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE NORMAL

LA COLUMNA SE PUEDE CONTAMINAR EN FORMA IRREVERSIBLE CON PRODUCTOS QUE CONTENGA LA MUESTRA QUE PRESENTEN ALTA POLARIDAD TALES COMO AZUCARES.

ESTE MECANISMO SE UTILIZA CUANDO SE VA A ANALIZAR MUESTRAS QUE CONTENGAN PRINCIPIOS DE BAJA POLARIDAD

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

Fase Normal

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Fase Reversa

Par Inico Cromatogrfico P.I.C Intercambio Inico Exclusin por tamao: - Permeacin por Gel (polmeros) - Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE REVERSA

SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LA FASE ESTACIONARIA PRESENTA UNA BAJA POLARIDAD; LOGRADO MEDIANTE UN PROCESO DE DERIVATIZACION

Slice derivatizada superficialmente: C18 C8 C4 FENIL AMINO CIANO

FASE REVERSA
Ingreso de muestra

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

COMP. APOLAR

Separacin, Columna

FASE ESTACIONARIA APOLAR

2
1
1
Coleccin de fracciones
APOLAR

COMP. POLAR

LA FASE ESTACIONARIA ES MENOS POLAR QUE LA FASE MOVIL LOS COMPONENTES QUE ELUYEN PRIMERO SON LOS DE MAYOR POLARIDAD LOS COMPONENTES QUE ELUYEN AL FINAL SON LOS DE MENOR POLARIDAD

POLAR

SILICA GEL RP18 (FASE ESTACIONARIA APOLAR

APOLAR PUNTO DE SIEMBRA POLAR

SILICA GEL (FASE ESTACIONARIA POLAR

CCF (FASE REVERSA)

CCF (FASE NORMAL)

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE REVERSA MUESTRAS CON COMPUESTOS ACIDOS DEBILES

PRINCIPIO DE LECHATELIER EFECTO DEL ION COMUN

PRACTICAMENTE SE ADICIONA ACIDO ACETICO AL 1% A LA FASE MOVIL

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

Fase Normal

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Fase Reversa

Par Inico Cromatogrfico P.I.C Intercambio Inico Exclusin por tamao: - Permeacin por Gel (polmeros) - Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

FASE REVERSA: MECANISMO DE PAR IONICO CROMATOGRAFICO (PIC)

APLICACIN: MUESTRAS CON COMPUESTOS ACIDOS Y BASES DEBILES

PIC A: PARA COMPUESTOS DE CARACTERISTICAS ACIDAS: FOSFATO DE TETRABUTIL AMONIO

PIC B: PARA COMPUESTOS DE CARACTERISTICAS BASICAS PIC B5 (ACIDO PENTANO SULFONICO)

PIC B6 (ACIDO HEXANO SULFONICO) PIC B7 (ACIDO HEPTANO SULFONICO) PIC B8 (ACIDO OCTANO SULFONICO)

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

Fase Normal

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Fase Reversa

Par Inico Cromatogrfico P.I.C Intercambio Inico Exclusin por tamao: - Permeacin por Gel (polmeros) - Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

INTERCAMBIO IONICO Proceso de separacin de molculas basados en la diferencia en la carga neta. Se utiliza para analisis de compuestos que tengan caracteristicas ionicas (aniones o cationes)

ANIONICAS DEBILES ANIONICAS FUERTES CATIONICAS DEBILES CATIONICAS FUERTES

INTERCAMBIO IONICO
Proteinas con una carga neta positiva sern retenidos en las columnas con un empaque cargado negativamente (ej. Carboximetilcelulosa), eluyendo los otros componentes que tienen carga neta negativa. Proteinas con una carga neta negativa sern retenidos en columnas con un empaque cargado positivamente (ej: dietilaminoetil-celulosa)

Polos opuestos se atraen

http://www.dbs.umt.edu/courses/fall2006/bioc380/lectures/008/lecture.ht ml

Amino Acidos con dos grupos ionizables

http://www.dbs.umt.edu/courses/fall2006/bioc380/lectures/008/lecture.html

http://www.ucl.ac.uk/~ucbcdab/enzpur/ionX.htm

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

Fase Normal

F. Estacionaria Polar F. Mvil No Polar F. Estacionaria No Polar F. Mvil Polar

Fase Reversa

Par Inico Cromatogrfico P.I.C Intercambio Inico Exclusin por tamao: - Permeacin por Gel (polmeros) - Filtracin en gel
pH Fuerza Inica

CROMATOGRAFIA COLUMNA TIPOS DE SEPARACION

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION POR TAMAO (SEC)

Es una tcnica que permite separar las moleculas de acuerdo a su tamao, gracias al intercambio repetitivo entre las moleculas del soluto, la fase mvil y la cantidad remanente de solvente en los poros del empaque de la columna. Las molculas de mayor peso molecular eluyen primero y las de menor eluiran al final

http://www.ucl.ac.uk/~ucbcdab/enzpur/gelexcl.htm

CLASIFICACION DE LA CROMATOGRAFIA DE EXCLUSION POR TAMAO (SEC)

Cromatografa de Permeacin en Gel (GPC): SEPARACION DE POLIMEROS ORGANICOS

Cromatografa de Filtracin en Gel (GFC): SEPARACION DE POLIMEROS SOLUBLES EN AGUA, PROTEINAS, AZUCARES ENTRE OTROS, SE DENOMINA CROMATOGRAFIA DE FILTRACION EN GEL

SEPARACION DE LOS COMPONENTES DE UN POLIMERO