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Principios de toxicologa

INTRODUCCIN A LA TOXICOLOGA La toxicologa es el estudio de los efectos adversos de sustancias qumicas sobre los organismos vivos. Un toxiclogo est capacitado para examinar la naturaleza de esos efectos (incluso sus mecanismos de accin celulares, bioqumicos y moleculares) y valorar la probabilidad de aparicin. Los principios de toxicologa son esenciales para el uso apropiado de la ciencia en el proceso que suele denominarse "valoracin de riesgo", por el cual se hacen estimados cuantitativos de los efectos potenciales sobre la salud humana y la importancia ambiental de varios tipos de exposiciones a sustancias qumicas (p. ej., residuos de plaguicidas en alimentos, contaminantes en el agua para bebidas). Diferentes reas de la toxicologa Un toxiclogo descriptivo se dedica principalmente a efectuar pruebas de toxicidad, lo que proporciona informacin para la valoracin de seguridad y los requisitos de regulacin. La preocupacin puede limitarse a efectos en seres humanos, como es el caso de los frmacos y los aditivos para alimentos, o a efectos potenciales sobre peces, aves y plantas, as como otros factores que podran alterar el equilibrio del ecosistema. Un toxiclogo mecnico se dedica a identificar y entender los mecanismos por los cuales las sustancias qumicas ejercen efectos txicos sobre organismos vivos. En la valoracin de riesgo, los datos mecnicos pueden ser muy tiles para demostrar que un fenmeno adverso observado en animales de laboratorio tiene o no importancia directa para seres humanos. Los datos mecnicos tambin son tiles en el diseo y la produccin de sustancias qumicas ms seguras y en el tratamiento racional para intoxicacin por sustancias qumicas y teraputica de enfermedad. Una comprensin de los mecanismos de accin tpica contribuye al conocimiento de la fisiologa, farmacologa, biologa celular y bioqumica bsicas. Un toxiclogo regulador tiene la responsabilidad de decidir, con base en los datos proporcionados por toxiclogos descriptivos y me-

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cnicos. si un frmaco u otra sustancia qumica posee un riesgo suficientemente bajo como para comercializarse para un propsito establecido. Los toxiclogos reguladores tambin ayudan a establecer estndares para la cantidad de sustancias qumicas permitidas en el aire ambiente, atmsferas industriales y agua para beber; a menudo integra informacin cientfica proveniente de estudios de toxicologa mecnica y descriptiva bsica con los principios y mtodos utilizados para la valoracin de riesgo. La toxicologa tiene cuatro reas especializadas: La toxicologa forense estudia principalmente los aspectos mediclegales de los efectos dainos de sustancias qumicas sobre seres humanos y animales, establece las causas de muerte, y determina sus circunstancias en una investigacin post mortem (cap. 30). La toxicologa clnica estudia la enfermedad causada por sustancias txicas, o relacionada de manera singular con estas ltimas (cap. 31). Los esfuerzos se dirigen a atender pacientes intoxicados con frmacos u otras sustancias qumicas y a la creacin de nuevas tcnicas para tratar esas intoxicaciones. La toxicologa ambiental se enfoca en el impacto de contaminantes qumicos que se encuentran en el ambiente sobre organismos biolgicos, con mayor frecuencia en organismos no humanos, como peces, aves y animales terrestres. La ecotoxicologa es un rea especializada dentro de la toxicologa ambiental que se enfoca de manera ms especfica en el impacto de las sustancias txicas sobre la dinmica de poblacin en un ecosis tema. Espectro de la dosis txica Un veneno podra definirse como cualquier agente capaz de producir una respuesta nociva en un sistema biolgico, lo que lesiona gravemente la funcin o produce la muerte. Esta no es una definicin bsica muy til, por la simple razn de que casi toda sustancia qumica conocida tiene el potencial de producir lesin o muerte si se encuentra en una cantidad importante. Entre las sustancias qumicas hay una amplia gama de dosis necesarias para producir efectos nocivos, lesin grave, o muerte. Las medidas de la letalidad aguda pueden no reflejar con exactitud el espectro completo de toxicidad relacionado con la exposicin a una sustancia qumica. Por ejemplo, algunas sustancias qumicas con toxicidad aguda baja pueden tener efectos carcingenos o teratgenos en dosis que no producen datos de toxicidad aguda.

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CLASIFICACIN DE LOS AGENTES TXICOS En este texto, los agentes txicos se comentan en trminos de sus rganos blanco, usos, fuentes y efectos. "Toxina" por lo general se refiere a sustancias txicas que se producen de manera natural. "Txico" denota sustancias txicas que se producen por actividades antropgenas (realizadas por seres humanos) o son un subproducto de las mismas. Los agentes txicos tambin pueden clasificarse en trminos de su estado fsico (gas, polvo, lquido), sus requisitos de etiquetado (explosivo, inflamable, oxidante), propiedades qumicas o potencial de intoxicacin. La clasificacin de los agentes txicos con base en sus mecanismos de accin bioqumicos por lo general proporciona ms informacin que la clasificacin por trminos generales, como irritantes y corrosivos. Los sistemas de clasificacin que toman en consideracin tanto las propiedades qumicas como las biolgicas de un agente, y las caractersticas de exposicin tienen ms probabilidades de resultar tiles para propsitos legislativos o de control. CARACTERSTICAS DE LA EXPOSICIN Los efectos adversos o txicos en un sistema biolgico no se producen por una sustancia qumica, a menos que el agente o sus productos de desintegracin metablica (biotransformacin) alcancen sitios apropiados en el organismo a una concentracin y durante un tiempo que basten para producir una manifestacin txica. Para caracterizar por completo el peligro potencial de un agente qumico especfico, es necesario conocer no slo qu tipo de efecto produce y la dosis necesaria para producir ese efecto, sino tambin informacin acerca del agente, la exposicin y su disposicin por el sujeto. Va y sitio de exposicin Las principales vas por las cuales los agentes txicos tienen acceso al organismo son el tubo digestivo, pulmones, piel y otras vas parenterales. Los agentes txicos regularmente producen el mayor efecto y la respuesta ms rpida cuando se administran de manera directa en el torrente sanguneo. Las otras vas, en orden de eficacia descendente aproximado, seran: por inhalacin, intraperitoneal, subcutnea, intramuscular, intradrmica, oral y drmica. El "vehculo" (el material en el cual est disuelta la sustancia qumica) y otros factores de la formulacin pueden alterar mucho la absorcin despus de la ingestin, inhalacin o exposicin tpica. Adems, la va de administracin puede influir sobre la toxicidad de los agentes.

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La exposicin ocupacional a agentes txicos sobreviene con mayor frecuencia por respirar aire contaminado o contacto directo y prolongado de la piel con la sustancia, en tanto la intoxicacin accidental o con fines suicidas ocurre ms a menudo por ingestin. Los efectos txicos a cualquier va de exposicin tambin pueden estar influidos por la concentracin del agente en su vehculo, volumen total de este ltimo y propiedades del vehculo al cual est expuesto el sistema biolgico, y la tasa a la cual ocurre la exposicin. Duracin y frecuencia de exposicin Los toxiclogos por lo general dividen la exposicin de animales a sustancias qumicas en cuatro categoras: aguda, subaguda, subcrnica y crnica. La exposicin aguda se define como la exposicin a una sustancia qumica durante menos de 24 horas. La exposicin aguda se refiere a exposicin repetida a una sustancia qumica durante un mes o menos, la subcrnica durante uno a tres meses, y la crnica durante ms de tres meses. Para muchos agentes, los efectos txicos que aparecen luego de una exposicin nica difieren mucho de los que se producen por exposicin repetida. La exposicin aguda a agentes que se absorben con rapidez tienen probabilidades de generar efectos txicos inmediatos, pero tambin puede suscitar toxicidad tarda que puede ser similar o no a los efectos txicos de la exposicin crnica. Es evidente que se necesita informacin no slo para los efectos de una dosis nica (agudos) y a largo plazo (crnicos), sino tambin para exposiciones de duracin intermedia. El otro factor relacionado con el tiempo que es importante en la caracterizacin temporal de la exposicin es la frecuencia de administracin. Una sustancia qumica que produce efectos graves con una dosis nica puede no tener efecto si la misma dosis total se administra en varios intervalos. Por supuesto, es posible que ocurra dao celular o hstico residual con cada dosis, aun cuando la sustancia qumica en s no se est acumulando. La consideracin importante, entonces, es si el intervalo entre las dosis es suficiente para permitir la reparacin completa del dao de tejidos. ESPECTRO DE EFECTOS INDESEABLES El espectro de efectos indeseables de las sustancias qumicas es amplio. Algunos efectos son nocivos, no as otros. En teraputica, por ejemplo, cada frmaco produce diversos efectos, pero por lo general no slo un efecto se relaciona con el objetivo primario de la teraputica; todos los otros efectos se denominan indeseables o secundarios de ese frmaco, para esa indicacin teraputica. Aun as, algunos de estos efectos secundarios pueden ser deseables para otra indicacin

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teraputica. Algunos nunca son deseables y siempre son nocivos para el bienestar de seres humanos. Estos se denominan efectos adversos, nocivos o txicos del frmaco. Reacciones alrgicas La alergia qumica es una reaccin adversa medida por mecanismos inmunitarios a una sustancia qumica, que sobreviene por sensibilizacin previa a esa sustancia qumica o a una similar desde el punto de vista estructural. El trmino "hipersensibilidad" se utiliza con mayor frecuencia para describir este estado alrgico, pero la "reaccin alrgica" y la "reaccin de sensibilizacin" tambin describen esta situacin cuando se requiere exposicin previa de la sustancia qumica para que se produzca el efecto txico. Una vez que ha ocurrido sensibilizacin, las reacciones alrgicas pueden sobrevenir por exposicin a dosis muy bajas de sustancias qumicas, y por ende rara vez se han obtenido curvas de dosis-respuestas basadas en la poblacin para reacciones alrgicas. Como quiera que sea, para un individuo alrgico dado, estas ltimas se relacionan con la dosis. Las reacciones de sensibilizacin a veces son muy graves y pueden ser letales. El tamao de casi todas las sustancias qumicas y sus productos metablicos no basta como para que el sistema inmunitario las reconozca como sustancia extraa; de este modo, deben combinarse primero con una protena endgena para formar un antgeno (o inmungeno). Una molcula que debe combinarse con una protena endgena para desencadenar una reaccin alrgica se denomina hapteno. El complejo de hapteno-protena (antgeno) es entonces capaz de desencadenar la formacin de anticuerpos, y por lo general se requieren al menos una o dos semanas para la sntesis de cantidades importantes de anticuerpos. La exposicin subsiguiente a la sustancia qumica da por resultado una interaccin entre antgeno y anticuerpo, que desencadena las manifestaciones tpicas de alergia. Estas pueden afectar varios sistemas, y la gravedad vara desde alteracin cutnea menor hasta choque anafilctico letal. El tipo de respuesta alrgica difiere en diversas especies. En seres humanos, la afeccin de la piel (p. ej., dermatitis, urticaria y escozor) y de los ojos (p. ej., conjuntivitis) es ms frecuente. Reacciones idiosincrsicas Idiosincrasia a sustancias qumicas se refiere a reactividad anormal, determinada por factores genticos, a una sustancia qumica. La respuesta que se observa regularmente es similar desde el punto de vista cualitativo a la que se observa en todos los individuos, pero adopta la forma de sensibilidad extrema a dosis bajas o insensibilidad extrema a dosis altas de la sustancia qumica.

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Toxicidad inmediata en contraposicin con tarda Los efectos txicos inmediatos pueden definirse como aquellos que ocurren o aparecen con rapidez despus de una administracin nica de una sustancia, en tanto los efectos txicos tardos son los que ocurren despus de transcurrido algn tiempo. Los efectos carcingenos de las sustancias qumicas por lo general tienen un periodo de latencia prolongado, a menudo de 20 a 30 aos despus de la exposicin inicial, antes que se observen neoplasias en seres humanos. Efectos txicos reversibles en contraposicin con irreversibles Algunos efectos txicos de sustancias qumicas son reversibles, y otros son irreversibles. Si una sustancia qumica produce lesin patolgica a un tejido, la habilidad de ese tejido para regenerarse determina si el efecto es reversible o irreversible. Los efectos carcingenos y teratgenos de las sustancias qumicas, una vez que ocurren, regularmente se consideran efectos txicos irreversibles. Toxicidad local en contraposicin con sistmica Los efectos locales se refieren a los que ocurren en el sitio del primer contacto entre el sistema biolgico y el txico, y se producen por ingestin de sustancias custicas o por la inhalacin de materiales irritantes. La alternativa para los efectos locales son los efectos sistmicos, que requieren absorcin y distribucin de un txico desde su punto de entrada hasta un sitio a distancia donde se producen efectos nocivos. Casi todas las sustancias, salvo los materiales muy reactivos, producen efectos sistmicos. Para algunos materiales, es posible demostrar ambos efectos. Si el efecto local es notorio, tambin puede haber efectos sistmicos indirectos. Casi todas las sustancias qumicas que producen toxicidad sistmica no causan un grado similar de toxicidad en todos los rganos. En su lugar, por lo general desencadenan su principal toxicidad en slo uno o dos rganos. Estos sitios se denominan rganos blanco de la toxicidad de una sustancia qumica particular. El rgano blanco de toxicidad a menudo no es el sitio de la concentracin ms alta de la sustancia qumica. El rgano blanco afectado con mayor frecuencia en la toxicidad sistmica es el sistema nervioso central (SNC). Le sigue en orden de frecuencia de afeccin en toxicidad sistmica el aparato circulatorio; el sistema sanguneo y hematopoytico; rganos viscerales como el hgado, riones, pulmones y piel. Los msculos y huesos son con menor frecuencia los tejidos blanco para efectos sistmicos. Con las sustancias que tienen un efecto predominantemente local, la frecuencia con la cual reaccionan los tejidos depende en gran parte del lugar de entrada.

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INTERACCIN DE SUSTANCIAS QUMICAS Debido al gran nmero de sustancias qumicas diferentes con las cuales un individuo puede entrar en contacto en cualquier momento dado, es necesario considerar de qu modo las sustancias qumicas diferentes pueden interactuar entre s. Se sabe que las interacciones qumicas ocurren por diversos mecanismos, como alteraciones de la absorcin, de la unin a protenas y de la biotransformacin y excrecin de uno o ambos de los txicos que interactan. Adems de estos modos de interaccin, la respuesta del organismo a combinaciones de txicos puede estar aumentada o disminuida debido a respuestas toxicolgicas en el sitio de accin. Los efectos de dos sustancias qumicas que se administran de manera simultnea pueden ser: Aditivos, cuando el efecto combinado de dos sustancias qumicas es igual a la suma de los efectos de cada agente administrado solo. Sinrgicos, cuando el efecto combinado de dos sustancias qumicas es mucho mayor que la suma de los efectos de cada agente administrado solo. Potenciacin, cuando una sustancia no tiene un efecto txico sobre un cierto rgano o sistema, pero cuando se agrega a otra sustancia qumica hace que esa sustancia qumica sea mucho ms txica. Antagonismo, cuando dos sustancias qumicas administradas jun tas interfieren mutuamente con sus efectos, o una interfiere con la accin de la otra. Antagonismo funcional, cuando dos sustancias qumicas se contra pesan entre s al producir efectos opuestos sobre la misma funcin fisiolgica. Antagonismo qumico o inactivacin, una reaccin qumica entre dos compuestos que produce un producto menos txico. Antagonismo de disposicin, cuando la absorcin, biotransformacin, distribucin o excrecin de una sustancia qumica est altera da de modo que la concentracin o duracin de la sustancia qumica en el rgano blanco est disminuida. Antagonismo de receptor, cuando dos sustancias qumicas que se unen al mismo receptor producen un efecto menor cuando se administran juntas que la adicin de sus efectos separados o cuando una sustancia qumica antagoniza el efecto de la segunda sustancia qumica; los an tagonistas de receptor a menudo se denominan bloqueadores.
TOLERANCIA

Es un estado de decremento de la capacidad de respuesta a un efecto txico de una sustancia qumica originado por exposicin previa a

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esa sustancia qumica o a una sustancia qumica relacionada desde el punto de vista estructural. La tolerancia depende de dos mecanismos principales: cantidad disminuida del txico que llega al sitio donde se produce el efecto txico {tolerancia de disposicin) y capacidad de respuesta reducida de un tejido a la sustancia qumica. RESPUESTA A LA DOSIS Las caractersticas de la exposicin y la gama de efectos se unen en una relacin correlativa que se denomina habitual mente relacin entre dosis v respuesta: a la respuesta de un individua a dosis variables de una sustancia qumica suele llamarse "gradual" porque el efecto medido es continuo en una gama de dosis. La relacin puede describir la distribucin de respuestas a diferentes dosis en una poblacin de individuos. Las relaciones entre dosis y respuesta individuales se caracterizan por un incremento (relacionado con la dosis) de la gravedad de la respuesta. En general, la respuesta observada a dosis variables de una sustancia qumica en el organismo entero suele complicarse por el hecho de que la mayor parte de las sustancias txicas tienen mltiples sitios o mecanismos de toxicidad, cada uno con su propia relacin entre "dosis y respuesta" y efecto adverso subsiguiente. Forma de la curva de dosis-respuesta La forma de la relacin entre dosis y respuesta tiene muchas repercusiones importantes en la valoracin de la toxicidad. Por ejemplo, para sustancias que se requieren para funcin fisiolgica normal y la supervivencia (p. ej., vitaminas y oligoelementos esenciales como cromo, cobalto y selenio), la forma de la relacin "gradual" entre dosis y respuesta en un individuo en todo el lmite de dosis en realidad tiene forma de U. Es decir, a dosis muy bajas, hay un alto nivel de efecto adverso, que disminuye con una dosis cada vez mayor. Esta regin de la relacin entre dosis y respuesta para nutrimentos esenciales suele denominarse deficiencia. Conforme aumenta la dosis hasta un punto en el cual ya no hay deficiencia, no se detecta respuesta adversa y el organismo se encuentra en un estado de homeostasia. Sin embargo, conforme la dosis se aumenta hasta cifras anormalmente altas, aparece una respuesta adversa (por lo general diferente desde el punto de vista cualitativo de la que se observa ante dosis eficientes), y aumenta de intensidad con la dosis cada vez mayor, justo como con otras sustancias txicas. Otro aspecto importante de la relacin entre dosis y respuesta a dosis bajas es el concepto del umbral. Desde hace mucho se ha reconocido que las respuestas toxicolgicas agudas se relacionan con umbrales; o sea, hay alguna dosis por debajo de la cual la probabili-

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dad de que un individuo mostrar respuesta es de 0. Es obvio que la identificacin de un umbral depende de la respuesta particular que se mide, la sensibilidad de la medicin y el nmero de sujetos estudiado. Para la relacin individual entre dosis y respuesta, ciertamente casi todos los efectos txicos tienen umbrales, aunque la variabilidad interindividual de la respuesta y los cambios cualitativos del modelo de respuesta con la dosis dificultan establecer un umbral "sin efectos" verdadero para cualquier sustancia qumica. Por supuesto, es imposible probar desde el punto de vista cientfico la ausencia de un umbral. Al valorar la forma de la relacin entre dosis y respuesta en poblaciones, es realista considerar inflexiones en la forma de la curva de la dosis-respuesta, ms que umbrales absolutos; es decir, la pendiente de la relacin entre dosis y respuesta a dosis altas puede ser muy distinta de la pendiente a dosis bajas, por lo general debido a diferencias de disposicin en la sustancia qumica. La saturacin de vas de biotransformacin, sitios de unin a protena, o receptores, y la disminucin de cofactores intracelulares representan algunas razones por las cuales pueden ocurrir inflexiones agudas en la relacin entre dosis y respuesta. Algunas respuestas txicas, ms notablemente la aparicin de cncer luego de la administracin de carcingenos genotxicos, a menudo se consideran lineales a dosis bajas y, as, no muestran un umbral. En esas circunstancias, no hay una dosis con riesgo de "cero", aunque el riesgo disminuye de manera proporcional con una disminucin de la dosis. Suposiciones al deducir la relacin entre dosis y respuesta Es necesario considerar diversas suposiciones antes que las relaciones entre dosis y respuesta puedan usarse de manera apropiada. 1. La respuesta se debe a la sustancia qumica que se administra. 2. La magnitud de la respuesta en realidad est relacionada con la dosis. Hay uno o varios sitios moleculares o receptores con los cuales la sustancia qumica interacta para producir la respuesta. La produccin de una respuesta y el grado de respuestas se relacionan con la concentracin del agente en el sitio receptor. La concentracin en el sitio se relaciona, a su vez, con la dosis. 3. Hay tanto un mtodo cuantificable de medicin como un medio preciso de expresar la toxicidad. En etapas tempranas de la valoracin de toxicidad, por lo general se dispone de poca informacin mecnica; de este modo, casi siempre re-

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sulta imposible establecer una relacin entre dosis y respuesta con base en el mecanismo de accin molecular; en realidad, podra no ser accesible incluso para txicos bien conocidos. En ausencia de un criterio ideal molecular mecnico de toxicidad, se busca una medida de toxicidad que sea inequvoca y claramente pertinente para el efecto txico. La seleccin de un punto terminal txico para la medicin no siempre es tan sencilla. Conforme se recolectan ms datos que sugieren un mecanismo de toxicidad para cualquier sustancia, pueden seleccionarse otras medidas de toxicidad. Aunque muchos puntos terminales son cuantitativos y precisos, suelen ser mediciones indirectas de la toxicidad. Muchas mediciones directas de los efectos tampoco se relacionan por necesidad con el mecanismo por el cual una sustancia produce dao a un organismo, pero plantean la ventaja de permitir establecer una relacin causal entre el agente y su accin. Con una sustancia nueva, el punto de inicio habitual en la valoracin toxicolgica utiliza la letalidad como un ndice. La valoracin de la letalidad es precisa, cuntica e inequvoca; por ende, es til por derecho propio, aunque slo para sugerir el nivel y la magnitud de la potencia de una sustancia. La letalidad proporciona una medicin de la comparacin entre muchas sustancias cuyos mecanismos y sitios de accin pueden ser muy diferentes. Adems, a partir de estos estudios, se obtienen indicios para la direccin de estudios adicionales. Una observacin cuidadosa, disciplinada y detallada del animal in tacto, desde el momento de la administracin de txico hasta la muerte del animal, puede generar datos inmensamente informativos. El examen histolgico de los principales tejidos y rganos para buscar anormalidades puede proporcionar informacin ms especfica respecto a los fenmenos que dan pie al efecto letal, los rganos blanco afectados, y a menudo una sugerencia en cuanto al posible mecanismo de toxicidad a un nivel relativamente fundamental. Valoracin de la relacin entre dosis y respuesta Cualquiera que sea la respuesta que se seleccione para medicin, el vnculo entre el grado de respuesta del sistema biolgico y la cantidad de txico administrado adopta una forma que ocurre de manera tan constante como para considerarla clsica y fundamental, y se denomina la relacin entre dosis y respuesta. La determinacin de la dosis letal media (LD50) regularmente es el primer experimento que se efecta con una nueva sustancia qumica. La LD50 es la dosis nica (deducida con mtodos estadsticos) de una sustancia, que puede esperarse que produzca la muerte en 50% de los animales probados. Si se utiliza un gran nmero de dosis con un gran nmero de animales por dosis, se observa una curva de dosis respues-

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ta sigmoidea. La dosis mnimamente eficaz de cualquier sustancia qumica que desencadena una respuesta de todo o nada sealada se denomina la dosis umbral aun cuando no puede determinarse con estudios experimentales. Las respuestas cunticas a dosis, en las cuales el efecto definido est presente o ausente, como la letalidad, muestran una distribucin normal o gaussiana. Nmeros ms grandes de animales responden a dosis intermedias entre esos dos extremos, y la frecuencia mxima de respuesta ocurre en la porcin media del lmite de dosis. De este modo, se tiene una curva en forma de campana conocida como una distribucin de frecuencia normal. La razn de esta distribucin normal es que hay diferencias de la susceptibilidad a sustancias qumicas entre los individuos. Esto se conoce como variacin biolgica. Los animales que muestran respuesta en el extremo izquierdo de la curva se denominan hipersusceptibles, y los que estn en el extremo derecho se llaman resistentes. La determinacin de la LD50 se ha convertido en un tema pblico debido a preocupacin cada vez mayor por el bienestar de los animales de laboratorio y la proteccin de los mismos. La LD50 no es una constante biolgica. Muchos factores influyen sobre la toxicidad y, as, pueden alterar la estimacin de la LD50 en cualquier estudio particular. Se ha demostrado que los factores como la cepa del animal, edad y peso, tipo de alimentacin, tipo de alojamiento en jaula, tiempo de ayuno antes del estudio, mtodo de administracin, volumen y tipo de medio de suspensin, y duracin de la observacin, influyen sobre las respuestas adversas a sustancias txicas. Varios mtodos tradicionales determinan la LD50 y su lmite de confianza de 95%, as como la pendiente de la lnea de probit. Los probit son unidades de probabilidad, derivadas a partir de una transformacin matemtica que linealiza la curva de dosis-respuesta. Estos mtodos tradicionales para determinar la LD50 exigen un nmero relativamente grande de animales (40 a 50). Se dispone de otras tcnicas estadsticas que requieren menos animales, como el mtodo de "mover promedios", pero no proporcionan lmites de confianza para la LD50 y la pendiente de la lnea de probit. En casi todas las circunstancias, un estimado adecuado de la LD50, y una aproximacin de los intervalos de confianza de 95% pueden obtenerse con apenas seis a nueve animales por medio del mtodo "incremento-disminucin" (up-and-down method). Cuando los animales quedan expuestos a sustancias qumicas en el aire que respiran o el agua en la que viven (peces), por lo general se desconoce la dosis que reciben. Para estas situaciones, regularmente se estima la concentracin letal 50 (LC50): es decir, la concentracin de sustancia qumica en el aire o el agua, que produce la muerte de 50% de los animales. Al informar una LC50, es indispensable indicar el tiempo de exposicin.

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Aunque por s mismos los valores de LD50 y LC50 tienen importancia limitada, los estudios de letalidad aguda son esenciales para caracterizar los efectos txicos de sustancias qumicas y su peligro para seres humanos. La informacin cientfica ms significativa derivada a partir de pruebas de letalidad aguda proviene de observaciones clnicas y el examen post mortem de animales, ms que del calor de LD50 especfico. La respuesta cuntica de todo o nada no se limita a la letalidad. Pueden construirse curvas de dosis-efecto similares para cncer, lesin heptica y otros tipos de respuestas txicas, as como para respuestas teraputicas beneficiosas como la anestesia. En tanto algunas respuestas txicas y teraputicas, como la anestesia, son de todo o nada, otras respuestas graduadas, como la presin arterial, pueden transformarse en respuestas cunticas. Esto por lo general se efecta al cuantificar un parmetro particular en un gran nmero de animales testigo, y determinar su desviacin estndar, que es una medida de su variabilidad. Mediante una serie de dosis de la sustancia qumica, es posible construir una curva de dosis-respuesta cuntica similar a la descrita para letalidad. Tambin podra considerarse que la dosificacin con base en el peso corporal es menos apropiada que con base en otros parmetros, como el rea de superficie, que es aproximadamente proporcional al (peso corporal)2/3. El rea de superficie no es directamente proporcional al peso. En tanto el peso de un ser humano es 3 500 veces mayor que el de un ratn, el rea de superficie de seres humanos slo es de alrededor de 390 veces mayor que la del ratn. Las sustancias qumicas por lo general se administran en estudios toxicolgicos como mg/kg. La misma dosis administrada a seres humanos y ratones con base en el peso (mg/kg) sera unas 10 veces mayor en seres humanos que en ratones si esa dosificacin se expresara por rea de superficie (mg/cm2). Comparacin de respuestas a dosis En la figura 2-1 se ilustra la curva de dosis-respuesta cuntica para un efecto deseable (ED) de una sustancia qumica, como un anestsico; un efecto txico (TD), como lesin heptica, y la dosis letal (LD). Como se describe en la figura 2-1, queda de manifiesto un paralelismo entre la curva para la dosis eficaz y la curva que describe la mortalidad. Es tentador considerar a las curvas de dosis-respuestas paralelas como indicativas de identidad de mecanismos, es decir, concluir que la letalidad es una extensin simple del efecto teraputico. Aunque esta conclusin por ltimo puede resultar correcta en cualquier caso particular, no se asegura nicamente con base en las dos lneas paralelas. La misma admonicin se aplica a cualquier par de curvas de

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Fig. 2-1. Comparacin de las dosis eficaz (ED), txica (TD) y letal (LD). El grfico es de logaritmo de dosificacin contra el porcentaje de la poblacin que muestra respuesta en unidades probit (probability units).

"efecto" paralelas, o cualquier otro par de curvas de toxicidad o letalidad. Indice teraputico
Las curvas hipotticas de la figura 2-1 ilustran otros dos puntos interrelacionados: la importancia de la seleccin del criterio txico y la interpretacin del efecto comparativo. El ndice teraputico (TI) en su sentido ms amplio se define como la proporcin de dosis necesaria para producir un efecto txico, y la dosis necesaria para desencadenar la respuesta teraputica deseada. De modo similar, un ndice de toxicidad comparativa se obtiene mediante la proporcin de dosis de dos materiales diferentes para producir una respuesta idntica, o la proporcin de dosis del mismo material necesarias para generar efectos txicos diferentes. El ndice del efecto de uso ms frecuente, sea beneficioso o txico, es la dosis mediana: la dosis necesaria para producir una respuesta en 50% de una poblacin (o para producir 50% de una respuesta mxima). El ndice teraputico de un frmaco es una afirmacin aproxi-

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mada acerca de la seguridad relativa de un frmaco, expresada como la proporcin entre la dosis letal o txica y la teraputica:

A partir de la figura 2-1 es posible aproximarse a un "ndice teraputico" al usar estas dosis medianas. Cuando la proporcin es ms grande, la segundad relativa tambin lo es. Aun as, el uso de las dosis eficaz y letal medianas plantea ciertas desventajas, porque las dosis medianas dicen nada acerca de las pendientes de las curvas de dosisrespuesta para efectos teraputicos y txicos. Margen de seguridad Un mtodo para superar esta deficiencia es utilizar la ED99 para el efecto deseado, y la LD1 para el efecto no deseado, con el fin de calcular el margen de seguridad:

Con todo, para sustancias qumicas para las cuales no hay una dosis beneficiosa o eficaz, y es probable que ocurran exposiciones repetidas veces, la proporcin entre LD1 y ED99 tiene poca importancia. De este modo, para sustancias qumicas que no son frmacos, el trmino "margen de seguridad" ha encontrado uso en procedimientos de valoracin de riesgo como un indicador de la magnitud de la diferencia entre una dosis expuesta estimada a una poblacin de seres humanos y la dosis no txica ms alta determinada en animales de experimentacin. Una medida del grado de acumulacin de una sustancia qumica, o sus efectos txicos o ambos, tambin puede estimarse a partir de datos de toxicidad cuntica. El ndice de cronicidad de una sustancia qumica es un valor sin unidad que se obtiene al dividir su LD50 de una dosis entre su LD50 de 90 dosis (90 das), ambas expresadas en miligramos por kilogramo por da. Procedimientos estadsticos similares que se utilizan para calcular la LD50 tambin pueden usarse para determinar el tiempo letal 50 (LT50) o el tiempo necesario para que fallezca la mitad de los animales. Potencia en contraposicin con eficacia Para comparar los efectos txicos de dos o ms sustancias qumicas, es necesario establecer la respuesta a la dosis hasta los efectos txicos de cada sustancia qumica. Entonces es posible comparar la potencia y la eficacia mxima de las dos sustancias qumicas para producir un efecto txico. Estos dos trminos importantes pueden explicarse al

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consultar la figura 2-2, que describe curvas de dosis-respuesta a cuatro sustancias qumicas para la frecuencia de un efecto txico particular, como la produccin de neoplasias. Se dice que la sustancia qumica A es ms potente que la sustancia qumica B debido a sus posiciones relativas a lo largo del eje de dosificacin. As, potencia se refiere al lmite en los cuales una sustancia qumica produce respuestas cada vez mayores. De este modo, A es ms potente que B. y C es ms potente que D. La eficacia mxima refleja el lmite de la relacin entre dosis y respuesta sobre el eje de la respuesta a una cierta sustancia qumica. Las sustancias qumicas A y B tienen igual eficacia mxima, en tanto la eficacia mxima de C es menor que la de D.

VARIACIN DE LAS RESPUESTAS TOXICAS Toxicidad selectiva Significa que una sustancia qumica produce lesin a una clase de materia viva sin daar a otra forma de vida aun cuando las dos pueden existir en contacto ntimo. La materia viva que queda lesionada se denomina \a forma no econmica (o indeseable), y la materia protegida se llama forma econmica (o deseable). Pueden relacionarse entre s como parsito y husped, y pueden ser dos tejidos en un organismo. Esta diversidad biolgica interfiere con la habilidad de los toxiclogos para predecir los efectos txicos en una sustancia qumica en una especie (seres humanos) a partir de experimentos efectuados en otra especie (animales de laboratorio). Sin embargo, al aprovechar la diversidad biolgica, es posible crear agentes que son letales para una especie indeseada e innocuos para otra especie. Los frmacos y otras sustancias qumicas que se utilizan para propsitos txicos selectivos lo son por una de dos razones: 1) la sustancia qumica es equitxica para clulas tanto econmicas como no econmicas, pero la acumulan principalmente las clulas no econmicas, o 2) reacciona de manera bastante especfica con una caracterstica citolgica o bioqumica que no se encuentra, o no tiene una funcin importante, en la forma econmica. La selectividad originada por diferencias de la distribucin regularmente depende de disimilitudes de la absorcin o excrecin del txico. Una razn importante por la cual las sustancias qumicas son txicas para un tipo de tejido, no as para otro, es que hay diferencias de la acumulacin del compuesto txico final en diversos tejidos. Esto, a su vez, puede deberse a diferencias de la habilidad de diversos tejidos para biotransformar la sustancia qumica hacia el producto final. La toxicidad selectiva puede originarse por disimilitudes de citologa comparativa, o por una diferencia de la bioqumica en los dos tipos de clulas.

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Diferencias de especie Si bien un principio bsico de la toxicologa es que "los resultados experimentales en animales, cuando se califican de manera apropiada, son aplicables a seres humanos", es importante reconocer que puede haber diferencias tanto cuantitativas como cualitativas de la respuesta a sustancias txicas entre diferentes especies. La extrapolacin de datos en animales de laboratorio para inferir el riesgo de cncer en seres humanos en la actualidad es un componente clave de la toma de decisiones reguladoras. La validez de este mtodo depende, por supuesto, de la pertinencia del modelo en animales de experimentacin para los seres humanos. Con cierta frecuencia se observan grandes diferencias de la respuesta carcingena entre especies de animales de experimentacin. La identificacin de la base mecnica para las diferencias de especie de la respuesta a sustancias qumicas es una parte importante de la toxicologa porque slo por medio de una comprensin a fondo de estas diferencias puede verificarse la pertinencia de los datos en animales para la respuesta en seres humanos. Diferencias individuales de la respuesta Incluso dentro de una especie, puede haber diferencias interindividuales grandes de la respuesta a una sustancia qumica debido a disimilitudes genticas sutiles. Las diferencias hereditarias en un gen nico se denominan polimorfismo gentico y pueden ser la causa de reacciones idiosincrsicas a sustancias qumicas. El polimorfismo gentico en genes que tienen importancia fisiolgica puede ser la causa de disimilitudes de las respuestas txicas entre individuos. A medida que se comprenda ms el genoma humano, se descubrirn ms genes de "susceptibilidad", y probablemente se demostrar que la causa de muchas enfermedades crnicas se relaciona con una combinacin de aspectos genticos y ambientales. Por ltimo es posible crear pruebas sanguneas simples para permitir a un individuo enterarse de si puede ser en particular susceptible a frmacos o contaminantes ambientales especficos. Aunque este tipo de informacin podra ser muy importante para la salud pblica, la revelacin de esa informacin suscita muchos temas ticos y legales de importancia que deben abordarse antes del uso de esas pruebas. PRUEBAS DESCRIPTIVAS DE TOXICIDAD EN ANIMALES Dos principios importantes fundamentan todas las pruebas descriptivas de toxicidad en animales. El primero es que los efectos producidos por un compuesto en animales de laboratorio, cuando se califican

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de manera apropiada, son aplicables a seres humanos. Con base en dosis por unidad de superficie corporal, los efectos txicos en seres humanos suelen encontrarse dentro del mismo lmite que los que se observan en animales de experimentacin. Con base en el peso corporal, los seres humanos por lo general son ms vulnerables que los animales de experimentacin, quiz por un factor de alrededor de 10. Cuando se tiene conciencia de estas disimilitudes cuantitativas, pueden aplicarse factores de seguridad apropiados para calcular dosis relativamente seguras para seres humanos. Todos los carcingenos qumicos conocidos en seres humanos, con la posible excepcin del arsnico, son carcingenos en algunas especies, pero no en todos los animales de laboratorio. No se conoce con certeza si lo contrario es cierto (que todas las sustancias qumicas carcingenas en animales tambin lo son en seres humanos), pero esta suposicin sirve como la base para las pruebas de carcinogenicidad en animales. Esta variacin de especie en la respuesta carcingena parece deberse en muchas circunstancias a disimilitudes de la biotransformacin del procarcingeno hacia el carcingeno final. El segundo principio es que la exposicin de animales de experimentacin a agentes txicos en dosis altas es un mtodo necesario y vlido para descubrir posibles peligros en seres humanos. Este principio se basa en el concepto de dosis-repuesta cuntica de que la incidencia de un efecto en una poblacin es mayor conforme aumenta la dosis o la exposicin. Las consideraciones prcticas en el diseo de sistemas de modelos experimentales exigen que el nmero de animales usado en experimentos de toxicologa siempre sea menor que el tamao de las poblaciones de seres humanos en riesgo. La obtencin de resultados vlidos desde el punto de vista estadstico a partir de esos grupos pequeos de animales requiere dosis relativamente grandes, de modo que el efecto ocurrir con una frecuencia suficiente como para que se detecte. Las pruebas de toxicidad no estn diseadas para demostrar que una sustancia qumica es segura, sino para caracterizar los efectos txicos que una sustancia qumica puede producir. No hay pruebas de toxicologa establecidas que tengan que efectuarse en cada sustancia qumica que se tiene el propsito de comercializar. Dependiendo del uso final de la sustancia qumica, los efectos txicos producidos por anlogos estructurales de la misma, as como los efectos producidos por la sustancia qumica en s, contribuyen a la determinacin de qu pruebas de toxicologa deben practicarse. Letalidad aguda La primera prueba de toxicidad que se realiza en una nueva sustancia qumica es la de toxicidad aguda. La dosis letal para 50% de los indi-

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viduos expuestos (LD50) y otros efectos txicos agudos se determinan despus de una o ms vas de administracin (una va es la oral o la va de exposicin proyectada) en una o ms especies. Las especies de uso ms frecuentes son el ratn y la rata, pero a veces se emplean conejos y perros. Las pruebas de toxicidad aguda: I) proporcionan un estimado cuantitativo de toxicidad aguda (LD50) para comparacin con otras sustancias, 2) identifican rganos blanco y otras manifestaciones clnicas de toxicidad aguda, 3) establecen la reversibilidad de la respuesta txica y 4) proporcionan gua de lmites de dosificacin para otros estudios. Si hay una probabilidad razonable de exposicin sustancial al material por va drmica o por inhalacin, se efectan estudios de exposicin drmica y por inhalacin aguda. Irritantes de la piel y los ojos La habilidad de una sustancia qumica para irritar la piel y los ojos despus de una exposicin aguda regularmente se determina en conejos (prueba de Draize). Las controversias respecto a esta prueba han conducido al decremento del volumen de dosis, con el fin de producir menos dolor a los animales. Sensibilizacin Se necesita informacin en cuanto al potencial de una sustancia qumica para sensibilizar la piel, adems de las pruebas de irritacin para todos los materiales que entran en contacto repetidas veces con esta ltima. Se han creado muchos procedimientos para valorar el potencial de las sustancias para inducir una reaccin de sensibilizacin en seres humanos (reaccin de hipersensibilidad tarda), entre ellas la prueba de Draize, prueba epicutnea abierta, prueba de Buehler, prueba coadyuvante completa de Freund, prueba de optimacin, prueba coadyuvante dividida, y prueba de maximizacin en cobayos. Subaguda (estudio con dosis repetidas) Las pruebas de toxicidad subaguda se realizan para obtener informacin acerca de la toxicidad de una sustancia qumica despus de administracin repetida, y como un auxiliar para establecer dosis para estudios subcrnicos. Subcrnica A continuacin se determina la toxicidad de una sustancia qumica luego de exposicin subcrnica. Esta ltima puede tener diferente

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duracin, pero 90 das es la duracin ms frecuente de la prueba. Los objetivos principales del estudio subcrnico son establecer una "magnitud de efecto adverso no observado" (NOAEL, tambin denominada la "magnitud de efecto no observado", o NOEL), y para identificar y caracterizar ms el o los rganos especficos afectados por el compuesto bajo prueba luego de administracin repetida. Tambin es posible obtener una "magnitud ms baja del efecto adverso observado" (LOAEL), as como la magnitud de efecto adverso no observado para la especie probada. Las valoraciones de magnitudes de efecto adverso no observado y magnitudes ms bajas del efecto adverso observado tienen muchas repercusiones en cuanto a regulacin. Por ejemplo, la Environmental Protection Agency utiliza la magnitud de efecto adverso no observado para calcular la dosis de referencia (RfD), que puede usarse para establecer valores de regulacin para concentraciones "aceptables" de contaminantes. Una alternativa para el mtodo de magnitud de efecto adverso no observado, denominada la dosis que sirve como punto de referencia, utiliza todos los datos experimentales para adaptar una o ms curvas de dosis-respuesta. Estas curvas se utilizan para estimar la dosis que sirve corno punto de referencia, que se define como el "enlace estadstico ms bajo en una dosis, que corresponde a una magnitud de riesgo especificada". Un estudio subcrnico por lo general se efecta en dos especies (ratas y perros) mediante la va de exposicin proyectada (regularmente oral). Se emplean al menos tres dosis (una dosis alta que produce toxicidad pero no causa ms de 10% de muertes, una dosis baja que no produce efectos txicos manifiestos, y la dosis intermedia con 10 a 20 ratas y cuatro a seis perros de cada sexo por dosis). Si los seres humanos tienen probabilidades de tener exposicin importante a la sustancia qumica por contacto drmico o inhalacin, tambin pueden requerirse experimentos subcrnicos de exposicin drmica, o de inhalacin, o de ambos. Los estudios de toxicidad subcrnicos no slo caracterizan la relacin entre dosis y respuesta de una sustancia bajo prueba despus de administracin repetida, sino que tambin proporcionan datos para una prediccin ms razonable de las dosis apropiadas para estudios de exposicin crnica. Crnica Las pruebas de toxicidad crnica se realizan para valorar la toxicidad acumulativa de sustancias qumicas, pero el diseo del estudio y la valoracin del mismo a menudo incluyen una consideracin del potencial carcingeno de sustancias qumicas, de modo que no tenga que efectuarse un estudio de alimentacin de por vida separado que aborde la carcinogenicidad.

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La seleccin de la dosis es trascendental en estos estudios para asegurar que la mortalidad prematura por toxicidad crnica no limita el nmero de animales que sobreviven hasta una esperanza de vida normal. Casi todas las pautas reguladoras exigen que la dosis ms alta administrada sea la dosis tolerable mxima (MTD) estimada. Hay controversias respecto al uso de dicha dosis en estudios de carcinogenicidad. La premisa de que se requieren dosis altas para probar el potencial carcingeno de sustancias qumicas se deriva de las limitaciones estadsticas y de diseo experimental de biovaloraciones crnicas. Puesto que no es prctico utilizar el gran nmero de animales que se requera para probar la carcinogenicidad potencial de una sustancia qumica a las dosis que por lo general encuentran las personas, la alternativa es asumir que hay vnculo entre la dosis administrada y la respuesta tumorgena, y suministrar a los animales dosis suficientemente alta de la sustancia qumica para producir una respuesta tumoral susceptible de medicin en un grupo bajo prueba de tamao razonable, como 40 a 50 animales por dosis. Las valoraciones de toxicidad crnica por lo general se utilizan para valorar la oncogenicidad potencial de sustancias por prueba. Casi todas las pautas reguladoras exigen que se informen neoplasias tanto benignas como malignas en la valoracin. Los aumentos estadsticos por arriba de la incidencia control de neoplasias (sea de todas las neoplasias o de tipos especficos de las mismas) en los grupos de tratamiento se consideran indicativos de potencial carcingeno de la sustancia qumica a menos que haya factores clasificatorios que sugieran lo contrario. Los estudios de oncogenicidad crnica con diseo apropiado exigen que se utilice un grupo testigo concurrente apareado para edad, dieta, condiciones de alojamiento y otros por el estilo. Para algunos tipos de neoplasias, la incidencia "de fondo" de las mismas es sorprendentemente alta. Las neoplasias, tanto benignas como malignas, son fenmenos que se observan con cierta frecuencia en animales incluso en ausencia de exposicin a cualquier carcingeno conocido. Hay muchos tipos de neoplasias diferentes que aparecen "de manera espontnea" en ambos sexos tanto de ratas como de ratones, pero a tasas diferentes. Las neoplasias de fondo que son frecuentes en una especie pueden ser raras en otra. Incluso dentro de la misma especie y cepa, en ocasiones se observan diferencias grandes de gnero en la incidencia de fondo de neoplasias. Incluso cuando los procedimientos generales, dietas, ambiente, cepa y fuente de los animales, y otras variables son relativamente constantes, la incidencia de neoplasias de fondo puede variar mucho.

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La variabilidad relativamente alta de la incidencia de neoplasias de fondo entre grupos de cepas de animales saludables muy endogmicos, mantenidos con dietas equilibradas desde el punto de vista nutritivo, y constantes, en ambientes ms bien estriles, pone de relieve el dilema de la interpretacin de la importancia de resultados tanto positivos como negativos en lo que se refiere a la poblacin humana, que; es diversa en el aspecto gentico; tiene tremenda variabilidad de la dieta, estado nutricional y salud general, y vive en un ambiente lleno de sustancias en potencia carcingenas, tanto naturales como fabricadas por el ser humano. Toxicidad vinculada con el desarrollo y la reproduccin Toxicologa del desarrollo es el estudio de los efectos adversos sobre el organismo en desarrollo, que ocurren en cualquier momento durante el lapso de vida del organismo, y que pueden sobrevenir por exposicin a agentes qumicos fsicos antes de la concepcin (uno u otro progenitor), durante el desarrollo prenatal, o despus del nacimiento hasta el momento de la pubertad. Teratologa es el estudio de defectos inducidos durante el desarrollo, entre la concepcin y el nacimiento. Toxicologa de la reproduccin es el estudio de la aparicin de fenmenos adversos sobre el aparato reproductor del macho o la hembra, que pueden aparecer por exposicin a agentes qumicos o fsicos. Se utilizan cuatro tipos de pruebas en animales para examinar el potencial de un agente para alterar el desarrollo y la reproduccin. 1. Fecundidad general y desempeo de la reproduccin. Las observaciones que tpicamente se efectan son el porcentaje de hembras que quedan preadas; el nmero de descendencia que nace muerta y viva, y el peso, crecimiento, supervivencia y estado ge neral de la descendencia durante las primeras tres semanas de vida. 2. Potencial teratgeno. 3. Toxicidades perinatal y posnatal. 4. Efectos de las sustancias qumicas sobre el aparato reproductor. Se han creado muchas pruebas a corto plazo para teratogenicidad, en las que se utiliza cultivo de embrin entero, de rgano, as como de clulas primarias y establecidas, para examinar procesos vinculados con el desarrollo y estimar los riesgos teratgenos potenciales de las sustancias qumicas. En general, las valoraciones disponibles no permiten identificar teratgenos funcionales o conductuales. Mutagenicidad Mutagnesis es la habilidad de las sustancias qumicas para producir cambios en el material gentico en el ncleo de las clulas, de manera

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que permitan que los cambios se transmitan durante la divisin celular. Las mutaciones pueden ocurrir en uno de dos tipos de clulas, con consecuencias muy diferentes. Las mutaciones germinales daan el DNA en los espermatozoides y los vulos, que tienen el potencial de transmisin de mutaciones a generaciones futuras. Mutaciones somticas se refieren a mutaciones en todos los otros tipos de clulas, y no son hereditarias, sino que pueden dar por resultado muerte celular o transmisin de un defecto gentico a otras clulas en el mismo tejido por medio de divisin mittica. Puesto que se cree que el fenmeno de inicio de carcinognesis por sustancias qumicas es un fenmeno mutgeno, a menudo se utilizan pruebas mutgenas para detectar carcingenos potenciales. Se han ideado varios procedimientos in vivo e in vitro para probar la habilidad de las sustancias qumicas para producir mutaciones. Algunas alteraciones genticas son visibles con el microscopio ptico. En este caso, se utiliza anlisis citogentico de frotis de mdula sea despus que los animales han estado expuestos al agente bajo prueba. Puesto que algunas mutaciones son incompatibles con el desarrollo normal, el potencial mutgeno de una sustancia qumica tambin puede medirse mediante la prueba letal dominante. La prueba para mutagnesis que ha recibido ms atencin es la de Salmonella/microsoma, ideada por Ames y colaboradores. Otras pruebas Casi todas las pruebas descritas quedarn incluidas en un protocolo de pruebas de toxicidad "estndar", porque las exigen las diversas agencias reguladoras. Es posible que se requieran otras pruebas o se incluyan en el protocolo para proporcionar informacin acerca de una va especial de exposicin (inhalacin) o un efecto especial (conducta). La duracin de la exposicin para pruebas de toxicidad tanto por inhalacin como conductual puede ser aguda, subcrnica o crnica, pero los estudios agudos se utilizan ms a menudo en toxicologa por inhalacin, y los crnicos, en la conductual. Otros tipos especiales de pruebas de toxicidad en animales son la inmunotoxicologa, toxicocintica (absorcin, distribucin, biotransformacin y excrecin), la creacin de antdotos y regmenes de tratamiento apropiados para intoxicaciones, y la creacin de tcnicas analticas para detectar residuos de sustancias qumicas en los tejidos y otros materiales biolgicos. BIBLIOGRAFA
Albert A: Selective Toxicity. London: Chapman and Hall, 1973. Aldridge WN: The biological basis and measurement of thresholds. Annu Rev Pharmacol Toxicol 26:39-58, 1986. Allen BC, Kavlock RJ, Kimmel CA, Faustman EM: Dose-response assessment for developmental toxicity: II. Comparison of generic Benchmark Dose esti-

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mates with no observed adverse effect levels. Fundam Appl Toxicol 23:487495, 1994a. Allen BC, Kavlock RJ, Kimmel CA, Faustman EM: Dose-response assessment for developmental toxicity: III. Statistcal models. Fundam Appl Toxicol 23:496-509, 1994b. Ames B, McCann J, Yamasaki E: Methods for detecting carcinogens and mutagens with the Salmonella/mammalian microsome mutagenicity test. Mutat Res 31:347-364, 1975. Bliss CL: Some principles of bioassay. Am Sci 45:449^66, 1957. Bruce RD: A confirmatory study of the up-and-down method of acute oral toxicity testing. Fundam Appl Toxicol 8:97-100, 1987. Green T: Species differences in carcinogenicity: The role of metabolism in human risk evaluation. Teratogenesis Carcinog Mutagen 10:103-119, 1990. Haseman JD: Issues in carcinogenicity testing: Dose selection. Fundam Appl Toxicol 5:66-78, 1985. Levine, RR: Pharmacology: Drug Actions and Reactions, 5th ed. New York: Parthenon Pub Group, 1996. Loomis TA, Hayes AW (eds): Loomis's Essentials of Toxicology, 4th ed. San Diego: Academic Press, 1996.