MICROBIOLOGA PESQUERA Teora 1ra. Semana Introduccin a la microbiologa. Referencias histricas. Rol de los microorganismos en los diferentes ambientes. Importancia de su estudio en microbiologa pesquera: diversidad microbiana y tamao de los microorganismos 2da. Semana. Estructura de la clula bacteriana: pared celular, membrana citoplasmtica, citoplasma, y formaciones nucleares. Capsulas y capas mucosas . Prcticas 1. Medidas de Bioseguridad en el laboratorio. 2. Seleccin y acondicionamiento de materiales. Esterilizacin. 3. Medios de Cultivo. Preparacin, Esterilizacin y Conservacin 4.Tcnicas de siembra de microorganismos. Aislamiento. Caractersticas culturales y numeracin.
Definicin de microbiologa
Ciencia que estudia los seres vivos que no se pueden ver a simple vista mikros (pequeo)
Esta definicin implica que su objeto de estudio est determinado por la metodologa:
laboratorio etc.
Ramas que estudia la microbiologa: facilitar su estudio Bacteriologa ( bacterias y arqueobacterias) Micologa Hongos (unicelulares y filamentosos) Virologa ( parasito intracelular) Virus, priones
DIVERSIDAD MICROBIANA
TIPO CLULAR ACELULAR
VIRUS
PROCARIOTA BACTERIA ARQUEA EUCARIOTA HONGOS PARASITOS PROTOZOOS METAZOOS
PRIONES
Procariontes Ausente
Desnudo y circular nico Fisin binaria Ausente. Los procesos bioqumicos equivalentes tienen lugar en la membrana citoplasmtica 70S (50S + 30S) De murena Ausentes Ausente Flagelos (s/9+2)
Eucariontes Presente
con histonas Mltiples Mitosis o Meiosis Presentes (con ribosomas 70S) en clulas vegetales (con ribosomas 70S) 80S (60S + 40S) De celulosa (vegetales) Presentes Presente Cilios y flagelos (9+ 2)
rbol filogentico Universal establecido por Carl Woese y su discpulo Gary Olsen que muestra los tres Dominios El termino "dominio" refiere a un nuevo taxn filogentico que incluye tres lneas primarias: Archaea, Bacteria y Eucarya; y en lnea descendente siguen seis Reinos: I-Moneras, II-Arqueobacterias (obviamente separadas de Moneras), III-Protistas, IV-Hongos, V-Plantas, VIAnimales.
E u c a ry a
N o E n l. e ster 8 0 S M e tionin a S
Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya Propiedad Membrana nuclear Organelos Tamao ribosoma Peptidoglicano en la pared Bacteria NO NO 70S SI Eucarya SI SI 80S NO Archaea NO NO 70S NO
NO
(hopanoides)
SI
SI
Eter, ramificados
Organismos que viven como clulas aisladas o entidades que contienen cidos nucleicos capaces de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.
Incluidos: algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.
DESARROLLO HISTRICO DE LA MICROBIOLOGA. Siguiendo el ya clsico esquema de Collard (l976), podemos distinguir cuatro etapas o periodos en el desarrollo de la Microbiologa:
Siglo XIX Primer periodo
eminentemente especulativo
Tercer periodo
Finales siglo XIX
Cuarto periodo
Principios del siglo XX
Antigedad
Primeros microscopistas
Leeuwenhoek (l675).
cultivo de microorganismos
Pasteur y Koch
Microbiologa como ciencia experimental
(1546)
Introduccin en Europa de la sfilis La cosa que se transmite en la enfermedad sigui siendo objeto de conjeturas durante mucho tiempo.
et contagionis
Renuncian a invocar causas sobrenaturales Enfermedad con la necesidad de contacto para su contagio
Enfermedades contagiosas se deben a grmenes vivos que pasan de diversas maneras de un individuo a otro.
EL PERIODO DE LOS PRIMEROS MICROSCOPISTAS Siglo XIV , invencin primeras lentes para corregir la visin Siglo XVI aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento 1ra referencia sobre el microscopio (1621) Cornelis Drebbel instrumento magnificador:microscopium Descubrimiento de los microorganismos Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), Fabric unos cuatrocientos microscopios simples aumentos de casi 300 dimetros. En 1675 descubri que en una gota de agua de estanque variedad de pequeas criaturas animlculos. En 1683 descubre las bacterias padre de la Microbiologa. Describi protozoos (Giardia) Estructura estriada del msculo La circulacin capilar Descubri los espermatozoides y los glbulos rojos Estructuras de las semillas y embriones de plantas. Animlculos, en vinagre, placa dental, etc
EL PERIODO DE LOS PRIMEROS MICROSCOPISTAS Robert Hooke (1635-1703) Us microscopios compuestos Describi los hongos filamentosos (1667) Descubri la estructura celular de las plantas (Micrographia, 1665), acuando el trmino clula. Pero el trabajo con microscopios compuestos aplicados al estudio de los animlculos" languideci durante casi 200 aos, debido a sus imperfecciones pticas, hasta que hacia 1830 se desarrollaron las lentes acromticas.
EL DEBATE SOBRE LA GENERACIN ESPONTNEA. la Edad Media y Renacimiento Galeno, Plinio y Lucrecio
Aristteles Biblia
Algunos seres vivos podan originarse a partir de materia inanimada, o bien a partir del aire o de materiales en putrefaccin
1668 , Desacredit la teora de la generacin espontnea para los animales y plantas, pero no todos estaban dispuestos a admitir el ms amplio Omne vivum ex vivo aplicado a los microorganismos. Un siglo ms tarde Lazzaro Spallanzani (1729-1799) sostuvo una disputa con J.T. Needham (1713-1781)
Spallanzani demostr que los infusorios no aparecan en muestras de maceraciones animales o vegetales sometidas durante tiempo suficiente a ebullicin en frascos hermticamente cerrados, pero volvan a aparecer si se abran y se expona al aire.
Los preformacionistas (Needham) con argumentos vitalistas dijo que el calor haba destruido la fuerza vegetativa de las infusiones y haba cambiado la cualidad del aire dentro de los frascos.
Primer tercio del siglo XIX Oxgeno: importancia para la vida Reactivacin de doctrina de la arquegnesis o generacin espontnea concepto de transmutacin
Experimentos de Spallanzani se interpretaron como que al calentarse las infusiones, el oxgeno del aire se destrua, y por lo tanto desapareca la fuerza vegetativa que originaba la aparicin de microorganismos.
EL DEBATE SOBRE LOS FERMENTOS El establecimiento de la relacin que une ciertas transformaciones qumicas que se dan en las infusiones con el crecimiento de los grmenes en ellas existentes contribuy al nacimiento de la ciencia microbiolgica Berzelius, Wohler y Liebig, (1840) teora mineral sobre la nutricin de las plantas se consideraba a las levaduras como plantas microscpicas Cagniard-Latour en 1836, y Schwann y Ktzing en 1837
levaduras causantes de la fermentacin alcohlica El azcar pasa a Etanol y CO2 PASTEUR, 1857 demostr que los agentes de la fermentacin lctica eran microorganismos. Observ que la fermentacin alcohlica puede ser sustituida por una fermentacin lctica. Identific distintos microorganismos responsables de diferentes clases de procesos fermentativos
Los procesos de fermentacin y putrefaccin se deban a fenmenos qumicos de descomposicin y muerte teora mineral de la fisiologa vegetal
Pasteur
Bioqumica
enzimologa
En 1870:carbunco infeccioso o ntrax slo se desarrollaba en los ratones cuando el material inyectado en su torrente sanguneo contena bastones o esporas viables del Bacillus anthracis. Mostr cmo trabajar con dichos microorganismos, cmo obtenerlos a partir de animales infectados, cmo cultivarlos artificialmente y cmo destruirlos. En 1881: la tuberculosis aislamiento del bacilo de la tuberculosisi. 1883 epidemia clera, India. Identific al bacilo causante y descubri la transmisin a los seres humanos a travs del agua. frica: causas de las enfermedades transmitidas por insectos. Desde 1891 1904 fue director Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berln creado para la investigacin mdica, En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina. Muri el 27 de mayo de 1910.
Bacillus anthracis
Postulados de Koch
Ferdinand Julius Cohn (1828-1898) Considerado fundador de la microbiologa moderna y padre de la bacteriologa. En 1872 propuso la clasificacin de las bacterias: gnero, especie y variedades.
Describi otros microorganismos patgenos transmitidos por agua contaminada generamente llamada Vibrionia (diferente a V. cholerae) Descubri la formacin de esporas en Bacillus subtilis.
Siglo XX
Aerobiosis y anaerobiosis En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la invencin del microscopio electrnico.
En las dcadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y se determinaron sus caractersticas fsicas y qumicas. Diversas tcnicas innovadoras: microscopio electrnico de barrido o las tcnicas de secuenciacin del cido desoxirribonucleico (ADN).
Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa (simples protenas desprovistas de material gentico) En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)
Alexander Fleming (1881-1955) Descubri que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo Penicillium Realiz la extraccin del compuesto activo: penicilina
Microscopios
Ojo humano 0.2 mm.
Microscopios
AGRICULTURA Y GANADERA
con
ASPECTOS NEGATIVOS Organismos patgenos ASPECTOS POSITIVOS
INDUSTRIA
Con utilidades como
SALUD
Estudiando los agentes infecciosos la
LIXIVIACIN MICROBIANA
OBTENCIN DE ENERGAS
MICROBIOLOGA CLNICA
FERMENTACIONES
BIOTECNOLOGA
INDUSTRIA ALIMENTARIA
INDUSTRIA FARMACUTICA
INDUSTRIA FARMACUTICA
ANTIBITICOS:
Las bacterias con estos fragmentos extra de ADN se reproducen y clonan el gen recibido
BIODEGRADACIN Uso de microorganismos para degradar materiales diversos Degradacin de petrleo en mareas negras
PROCARIOTA
BACTERIA
ARQUEA
Methano espirillus
TAXONOMA
Rama de la biologa que se ocupa de Nombrar, Organizar y Mostrar
La Identificacin
IDENTIFICACIN
DIVISIN
CLASE
ORDEN
GENOTIPICAS FENOTIPICAS
FAMILIA
GENERO
ESPECIE
Escherichia coli
Clasificacin POLIFSICA
Es la tendencia moderna. Consenso en la integracin de distintos tipos de caracteres:
Fenotpicos:
- clsicos (morfologa, nutricin, etc) - marcadores quimiotaxonmicos - perfil de protenas totales y enzimas
Genotpicos: clsicos: % G+C hibridacin DNA-DNA nuevos: fingerprinting (ej. perfiles moleculares por restriccin o amplificacin de ADN)
Treponema pallidum
Clasificacin cientfica Reino Bacteria
Philo
Clase
Spirochaete
Schizomycetes
Orden
Familia genero especie Nombre binomial
Spirochaetales
Siprochaetaceae Treponema T.pallidum Treponema pallidum
Los agentes causales de enfermedades infecciosas humanas pertenecen a : Bacterias Parsitos : protozoos y metazoos
Hongos virus
Las bacterias
son ms grandes y complejas que los virus (0.1 a 5 ms m de longitud).
DNA y RNA, pero sin ncleo. Corresponde al dominio bacteria algunos requieren clula husped y son por lo tanto parsitos intracelulares estrictos (p.ej. Chlamydia, rickettsias, etc.).
Aunque incluyen muchos tipos fisiolgicos distintos, y por lo tanto pueden vivir en cualquier tipo de ambiente, evidentemente a nosotros nos interesan las que pueden colonizar el cuerpo humano.
Por lo general, ms pequeo que el de las clulas eucariticas Pero existen bacterias Gigantes (>0,5 mm) Enanas (<0,1 micra) Untamaotpico: 0,5 x 3 micras
Diversidad de procariotas
Morfologa bacteriana
ESFRICA O ELIPSOIDAL : COCOS Son ms resistentes a los cambios adversos del ambiente como la desecacin. CILNDRICA: BACILOS Pueden tomar ms fcilmente los nutrientes en solucin diluida
Bacilo nico
Vibrio
Diplobacilos
Estreptobacilos
Espirilo
Cocobacilos Espiroqueta
Estreptobacilos
cocobacilos
ESTRUCTURA BACTERIANA
Las estructuras bacterianas las podemos clasificar, por razones didcticas, en estructuras constantes o accesorias.
Las estructuras constantes son las estructuras esenciales para la vida de la bacteria e incluyen el citoplasma Cromosoma bacteriano la membrana celular la pared celular.
Las estructuras accesorias: estn presentes slo en algunas de ellas y aunque no son indispensables para la vida, otorgan extraordinarias ventajas adaptativas a las bacterias que las poseen. cpsula, flagelos , esporas , fimbrias, etc.
Citoplasma
Actividad qumica y biosinttica Protenas (enzimas, complejos enzimticos, estructurales) Ribosomas (70S: 55 protenas, rRNA 5S, 16S, 23S mRNA, tRNA Otras macromolculas, solutos, agua , nutrientes , etc No tienen citoesqueleto. Nucleoide bacteriano: ADN
Inclusiones citoplasmticas
Algunas bacterias tienen estructuras internas Varian en cantidad y nmero Difieren en sus contenidos
grnulos de almacenamiento polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs), glucogeno vesculas de gas flotacin Carboxisomas, clorosomas.
Plasmidios
ADN extracromosomal
Resistencia antibioticos
Metales pesados, UV Sntesis de pigmentos
Interior compartamentalizado
Membrana celular
Composicin qumica Funciones Transporte de sustancias Barrera de permeabilidad En fottrofas: Estructuras intracitoplasmticas (fotosintesis) Respiracin celular Agentes reforzantes: esteroles Archaea, membranas adaptadas a condiciones extremas - teres de alcohol isoprenoide, algunas monocapas
PARED CELULAR
soporte fsico de la clula la estructura ms externa cuando no existe cpsula. proteccin fsica a la bacteria y tambin la protege del shock osmtico, dada la hipertonicidad celular. algunos de sus elementos participan en la interaccin agente-hospedero, facilitando la adherencia a los tejidos protegiendo la bacteria de los mecanismos inespecficos de defensas o induciendo una respuesta inflamatoria. El componente bsico de la pared celular es el peptidoglicano o murena.
OSMOSIS
Ingreso de agua
PLASMOLISIS
Salida de agua
solamente membrana celular las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de sintetizar su pared celular
Mycoplasma
B. subtilis
B. Subtilis Forma L
Esto le da al peptidoglicano su estructura de red, determinando su resistencia. La unin entre los tetrapptidos de cadenas vecinas es inhibida por los antibiticos -lactmicos. Existen diferencias en la composicin y estructura de la pared celular entre las bacterias Gram (+) y Gram (-)
Funciones: Estabilizacin del peptidoglicn Adhesin celular (Adhesina) Le dan la carga negativa a la envoltura bacteriana
La membrana externa contiene numerosas protenas, siendo las porinas las ms abundantes. El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere. Se denominan as, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplsmico. Las porinas constituyen poros de difusin inespecficos que permiten el paso de sustancias hidroflicas y no mayores de 700 daltons (aminocidos o disacridos). Las porinas ms conocidas en E. coli son OmpC y OmpF.
PARED EN GRAM -
El LPS es una molcula anfiptica que contiene tres regiones diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O. El lpido A, es un complejo de azcares, fosfatos, cidos grasos y forma una bicapa con los fosfolpidos de la membrana. Adems, es el responsable de la toxicidad del LPS. El core, es un oligosacrido de 4 a 5 azcares, algunos infrecuentes como las heptosas y un azcar de 8 carbonos, denominado ceto-deoxioctanoico (KDO) . usualmente especfico de especies El antgeno O, est formado por cadenas de 25 o ms unidades de azcares repetidas.
GRAM +
GRAM -
pseudopeptidoglicano (pseudomureina) tie G+ pseudomureina cubierta de proteina,tie G+ monocapa superficial de proteina o glicoproteina, sin pseudomureina (alg halfilos, alg.metanognicos y termoacidfilos) tie G-
caractersticas
Gram +
Gram -
Membrana externa
Pared celular Lipopolisacarido Endotoxina
Gruesa -
+
Delgada + +
Acido teitoico
Esporulacion capsula
Presente a menudo
El algunas cepas Presente a veces
Presente a veces
Lisozima
Antibacteriana penicilina Producciom exotoxina
Sensible
Mas susceptible Algunas cepas
Resistente
Mas resistente Algunas cepas
Sntesis de Peptidoglicano
Bactoprenol (C55 alcohol isoprenoide) -- carrier lipdico que transporta el disacrido-pentapeptido del citoplasma al periplasma y lo inserta en la pared celular en crecimiento La transpeptidacin, es inhibida por penicilina
Transpeptidacin
Componentes no esenciales
Fimbria
Esporas
Plasmidos
Cubiertas extracelulares
Glicocalix: Material externo a la pared celular Cpsulas - Material en la superficie celular
Capas mucilaginosas - Material adherido, menos fuertemente Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+, G- y Archaea. Pueden constituir la pared
Cubiertas extracelulares
Funciones Proteccin contra defensas del husped (fagocitosis) Proteccin contra desecacin Proteccin contra virus, toxinas Adhesin a superficies (clulas, objetos inanimados) formacin de biofilms. Protegen de protozoos , de ataques por agentes antimicrobianos,etc La mayora de las bacterias Gram (+) y Gram (-) sintetiza una cubierta de naturaleza polisacrida que las rodea. Los exopolisacridos son sintetizados en la membrana citoplasmtica, atraviesan la pared celular y se establecen afuera. Se clasifican de acuerdo a la relacin con la superficie exterior de la bacteria y a su grado de rigidez en cpsulas y glicoclix.
Cpsulas: exopolisacaridos
Algunas bacterias segregan materiales mucosos: polisacridos, polipptidos y complejos de polisacridos y protenas (glucoclix) Cpsula: cuando el material est dispuesto de un modo compacto alrededor de la clula Capa mucosa: si el material es laxo, de modo que forma solo una capa difusa.
Streptococcus
Enterobacter aerogenes
A) Montrico
B) Anftrico
C) Loftrico
D) Pertrico
FIMBRIAS
tambin llamadas pili, son microfibrillas parecidas a pelos, que rodean en nmero de 100-200 a algunas bacterias Gram (-).
Endosporas
Resistencia al calor, radiacin, desecacin. principalmente por los gneros Bacillus y Clostridium supervivencia en ambientes desfavorables
DNA protegido por cido dipicolnico y protenas. Luego de la activacin por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y el crecimiento La localizacin de la espora en la clula puede ser usada para la identificacin
Clulas Vegetativas-Endoesporas
Caracterstica Contenido de Calcio Ac. dipiconlico Clula vegetativa bajo ausente Endoespora alto presente
ausentes
80-90% 7 elevada elevado
presentes
10-25% 5.5-6 baja Bajo o ausente
baja
elevada
Sensibilidad lisozima
Sensible
Resistente
LOS MICROORGANISMOS
Los microorganismos
por su organizacin son
Acelulares
como
Auttrofos
son
Eucariotas
como
Hetertrofos
Viroides
Virus
Priones
son
Arqueobacterias
Eubacterias
pueden presentar son
Algas
poseen
Protozoos
Hongos
destacan
Molculas protecas
Pared celular
Cloroplastos
contienen los
Mohos
poseen
Levaduras
Genoma vrico
constituyen la
Cpsida
Envolturas membranosas
proceden de la
Cpsula bacteriana
Membrana plasmtica Cromosoma bacteriano
presenta
Pigmentos fotosintticos
Micelios
ARN
ADN
formado por
Icosadrica
se asocian a enfermedades en
Helicoidal
Compleja
Pared bacteriana
permite diferenciar en
Plantas
CreutzfeldJakob
Gram +
con pared
Gram Mureina
con pared presentan
Monoestratificada
Biestratificada
Membrana externa
MICROORGANISMOS
Virulencia
viene dada por pueden producen
Patgenos
pueden ser
Los microorganismos
se combaten por
intervienen en los
Toxinas
Enzimas extracelulares
Epidemias
Esterilizacin
puede ser
Biotecnologa
Ciclos biogeoqumicos
destacan el del
Endotoximas
se pueden curar por
Carbono
Azufre Nitrgeno Hierro
Exotoxinas
a travs de
Heridas Aerosoles
Fsica Radiacin
Qumica
mediante
mediante
Desinfectantes
Polvo
Va sexual provocan Alimentos E.T.S
Filtracin
Calor
como la
Antispticos
Animales producen
Zoonosis
Pasteurizacin
con aplicaciones
Quimioterapia
se combaten por
Alimentarias
basadas en las
Agentes quimioteraputicos
como por ejemplo las
Industria farmacutica
Agropecuarias
Ingeniera gentica
basada en la
Medio ambiente
como la
centradas en la obtencin de
Fermentaciones
como la
Antibiticos
Vacunas
Sulfamidas
inhiben el
Manipulacin gentica
centrada en la produccin de
Lctica
Piensos
Insecticidas
Eliminacin de residuos