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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO FACULDADE DE ARQUITETURA, ENGENHARIA E TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA SANITRIA E AMBIENTAL ENGENHARIA SANITRIA E AMBIENTAL

ANTIBIOGRAMA PELO MTODO DE KIRBY-BAUER

PALOMA DONDO TONELLO PEDRO RAFAEL DE BONA RODRIGUES

CUIAB-MT 2013

ROTEIRO PRTICO
1. INTRODUO

Em 1928, Alexander Fleming observou que um fungo contaminante de ambientes estava se desenvolvendo em uma placa de cultivo, deixada aberta por descuido, e que as colnias de estafilococos que cresciam ao redor desse fungo estavam sofrendo lise. Fleming corretamente deduziu que o fungo, posteriormente identificado como Penicillium notatum, produzia uma substncia bacterioltica que se difundia no meio de cultura e era capaz de matar os estafilococos. Este antibitico desconhecido de Fleming foi mais tarde chamado de penicilina, anunciando um dos maiores adventos da era moderna: a era dos antibiticos (VERMELHO, 2006, p. 197). Os antibiticos so substncias antimicrobianas que possuem toxicidade seletiva, isto , so capazes de atuar sobre alvos especficos na estrutura dos microorganismos (VERMELHO, 2006, p. 202). Fleming associou suas descobertas e desenvolveu o primeiro mtodo na tentativa de estudar a suscetibilidade microbiana aos antibiticos, dando incio prtica do que hoje se denomina antibiograma ou teste de sensibilidade a antimicrobianos (VERMELHO, 2006, p. 198). Antibiogramas so testes com o objetivo de verificar a sensibilidade de determinado micro-organismo a vrios antibiticos mediante comparao usando um padro preestabelecido. Uma das funes mais importantes dos laboratrios de anlises clnicas e laboratrios hospitalares so a de detectar por intermdio desses testes qual a sensibilidade/resistncia do micro-organismo que est causando infeco diante de vrios antibiticos, de modo a escolher o antimicrobiano mais adequado. Basicamente existem dois mtodos para determinar a sensibilidade de uma bactria aos agentes antimicrobianos: mtodo da diluio em tubo e mtodo da difuso em disco (VERMELHO, 2006, p. 198). Nesta prtica de antibiograma o mtodo utilizado fora apenas o mtodo da difuso em disco, ou mtodo de Kirby-Bauer. Este amplamente utilizado como mtodo-padro para a realizao dos antibiogramas. tipicamente utilizado para

medir a eficcia de uma variedade de antibiticos sobre uma espcie de microorganismo (VERMELHO, 2006, p. 199). No teste de Kirby-Bauer, uma srie de antibiticos impregnados em pequenos discos circulares de papel so colocados sobre uma placa contendo meio de cultura crescido com a bactria inoculada de forma homognea, como se fosse um tapete sobre a superfcie do meio. As placas so incubadas em temperatura e tempo adequados para permitir o crescimento da bactria e tambm para que os antibiticos possam difundir-se no interior do aguar. Se um organsmo suscetvel a um antibitico, uma zona clara aparece ao redor do disco, onde o crescimento do organismo foi inibido. O tamanho dessa zona de inibio depende da sensibilidade da bactria a um antibitico especfico e da habilidade de difuso atravs do gar do antibitico contido no disco.

2. OBJETIVO GERAL

Verificar a ao de substncias antimicrobianas no crescimento de bactrias, usando o mtodo de Kirby-Bauer.

3. OBJETIVO ESPECFICO

Verificar a ao de substncias antimicrobianas, em especfico cefoxitina e tobramicina no crescimento de bactrias Escherichia coli, usando o mtodo de KirbyBauer. Sendo este mtodo padronizado e tipicamente utilizado para medir a eficcia de antibiticos, determinando a suscetibilidade do micro-organismo diante dos antibiticos, e assim fornecer orientao para a prescrio, na prtica mdica, da maioria dos antibiticos usados na terapia das infeces.

4. PROCEDIMENTOS

A amostra contendo em especfico Escherichia coli foi disponibilizada pelo laboratrio, e a partir desta foi retirado atravs de uma pipeta automtica 0,1 mL, que foi transferido a 2 (duas) placas de Petri j contendo o meio de cultura (gar). Aps transferncia, fora necessrio retirar a ala de Drigalsky emergida no lcool e realizar a flambagem, para assim homogeneizar a alquota.

Aps trmino da preparao das placas de Petri, foi necessrio atravs de uma pina, previamente flambada, retirar de um frasco o disco contendo o antibitico, primeiramente o cefoxitina, e posteriormente o tobramicina. Estes antibiticos foram introduzidos cada um em uma placa de Petri, na parte centralizada da mesma. Assim, as placas de Petri foram levadas incubadora, sendo incubadas temperatura de 37 C, pelo perodo de 48 horas.

5. RESULTADOS E DISCUSSES

Tanto o antibitico cefoxitina como o tobramicina possuem especificaes previamente estabelecidas quanto aos halos registrados.
Tabela 1 Informaes para interpretao do dimetro da zona (halo) de inibio. Agente Antimicrobiano Cefoxitina Tobramicina Resistente 14 12 Dimetro do halo (mm) Intermedirio 15-17 13-14 Sensvel 18 15

Fonte: Prticas de microbiologia, 2006.

Na anlise das placas de Petri, primeiramente contendo o antibitico cefoxitina foi registrado o dimetro de 15 mm no halo, ou zona de inibio. J no caso do antibitico tobramicina fora registrado no halo, ou zona de inibio, o dimetro de 13 mm. Assim, ao analisar a tabela 1, verificou-se que a bactria Escherichia coli, em relao tanto ao cefoxitina como ao tobramicina, possui uma resistncia intermediria, ou seja, no resistente nem sensvel. Aps verificao, as placas de Petri foram devidamente descartadas. 6. CONCLUSO

A orientao fornecida pelo mtodo de Kirby-Bauer permite que este avalie a maior ou menor eficcia de determinada droga contra um agente infeccioso, o que

de grande valia, visto que diferentes espcies bacterianas podem mostrar diferentes nveis de sensibilidade a uma mesma droga. A formao de um halo transparente sobre a superfcie do meio, ao redor de um disco de antibitico, indica uma regio com ausncia de crescimento bacteriano, revelando a ao inibitria do agente antimicrobiano sobre a bactria ensaiada. Com a cefoxitina e a tobramicina, observou-se que ambas apesar de no serem os antibiticos ideais para a Escherichia coli, ainda so capazes de proporcionar um halo transparente considervel, proporcionando assim uma eficincia notria para este tipo de bactria.

7. REFERNCIAS

CASE, C. L.; FUNKE, B. R.; TORTORA, G. J. Microbiologia. 6 ed. So Paulo: ARTMED, 2000, 827p.

HARVEY, R. A.; CHAMPE, P. C. e FISHER, B. D. Microbiologia ilustrada, 2 Ed., Editora Artmed, 2008.

VERMELHO, A. B.; COELHO, R. R. R.; PADRN, T. S. Prticas de microbiologia. So Paulo: Guanabara Koogan, 2006.