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Trabajo Prctico N 2 Potencial Hdrico

Introduccin: La distribucin de los vegetales en el suelo est controlada por la disponibilidad de agua; adems, existe una importante relacin suelo - planta - atmsfera que origina un flujo de agua a favor de gradientes de potencial qumico. Se entiende por potencial qumico a la energa libre por mol de sustancia. Cuando la sustancia considerada es el agua, el potencial qumico se denomina Potencial Agua. Los componentes del Potencial Agua son:

w = p + s + m
p: Potencial de pared; expresa la reaccin de la pared a la entrada y salida de agua; aumenta la energa libre del agua y su valor es positivo. s: Potencial de soluto, o potencial osmtico; expresa el efecto de los solutos en la solucin vacuolar, disminuye la energa libre del agua, su valor es negativo. m: Potencial mtrico; expresa el efecto de retencin de agua por los coloides celulares, la energa libre del agua celular disminuye, su valor es negativo. El potencial mtrico adquiere fundamental importancia en el proceso de imbibicin, en el cual las sustancias coloidales cargadas elctricamente fijan agua o iones en su superficie. Los p y s tienen importancia en la absorcin y prdida de agua por parte de la planta. La diferencia entre la entrada y la salida de agua en la planta se conoce como balance hdrico de la planta (absorcin - transpiracin).

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Llamamos dficit hdrico al fenmeno por el cual la prdida de agua por transpiracin supera a la ganancia por absorcin y se evidencia por una prdida de turgencia de las clulas y tejidos. Se distinguen dos tipos de dficit:

Marchitez temporaria o dficit al medioda: fenmeno que ocurre cuando la transpiracin supera a la absorcin, an cuando el suelo est bien provisto de agua. Est relacionado con las tardes calurosas de verano, por un exceso temporario de transpiracin. El sntoma ms aparente es el cierre total o parcial de los estomas durante este perodo. Durante la noche, la turgencia se recupera debido a la menor prdida de agua por el cierre de estomas, por la humedad relativa ms alta y la menor carga energtica.

Marchitez permanente: este fenmeno ocurre por factores edficos y depende fundamentalmente del potencial suelo y del potencial mtrico de la raz. La recuperacin noctura del estado hdrico de la planta es posible mientras se mantenga el gradiente entre raz y suelo. Si no se resuministra agua al suelo y la sequa edfica se acenta, el agua no se mover del suelo a la planta ni an durante la noche. En este caso: punto de marchitez permanente, las hojas marchitas (por dficit hdrico) no se recuperan de su marchitez ni an colocndolas en una atmsfera saturada de humedad, a menos que la deshidratacin celular no haya sido severa, se agregue agua al suelo y se vuelva a crear un gradiente que permita la absorcin radical de agua.

El agua disponible o agua til es aquella que se halla entre el potencial de capacidad de campo (-0,2 atm) y el potencial de PMP (-15 atm). El potencial de los suelos salinos es muy bajo (-100 a 200 atm). Las especies adaptadas a este habitat (plantas halfitas) poseen un potencial osmtico (Salicornia sp, Atriplex sp.) o un potencial mtrico (cactceas) muy reducido que les permite extraer agua del suelo an ante esa situacin tan desfavorable. En el caso de las cactceas por ejemplo, el potencial suelo en lugares ridos no es inferior a 14 atm mientras el potencial mtrico es muy negativo (-250 atm).

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Tcnicas para medir potencial hdrico en materiales vegetales Mtodos Mtodo de Volumen constante Cmara de presin Osmmetro Sicrmetros Sonda de presin

Cmara de presin Un mtodo rpido para medir el potencial hdrico de trozos grandes de tejidos, tales como ramas y hojas es utilizando la cmara de presin de Scholander. La cmara de presin mide la presin hidrosttica negativa (tensin) que existe en el xilema de muchas plantas. Se asume que el potencial hdrico del xilema es muy cercano al potencial hdrico promedio de todo el rgano. En sta tcnica, se separa de la planta el rgano a ser medido, se introduce en una cmara de presin sellada, se aplica una presin con N2 comprimido, hasta que el agua en el xilema aparece de nuevo en la superficie cortada. La presin necesaria para restaurar la columna lquida, se llama presin de balance. La presin de balance es igual en magnitud pero de signo contrario, a la tensin que exista en el xilema, antes de cortar el rgano.

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Resumen Mtodo rpido, comnmente usado El equipo puede ser usado en campo; aunque puede ser pesado y voluminoso Se aplican niveles peligrosos de presin en la cmara

Mtodo de Volumen constante El mtodo del volumen constante usa los potenciales hdricos conocidos de soluciones molares para estimar el potencial hdrico de tejidos vegetales. Este mtodo asume dos cosas. Primero, que la presin hidrosttica es cero ya que el tubo se encuentra abierto a la atmsfera y no se aplica presin extra; y segundo, se asume que el potencial hdrico del tejido vegetal es igual al potencial hdrico de la solucin cuando no hay movimiento neto de agua entre ambos. Note que aunque no haya movimiento neto de agua, el movimiento del agua no cesa, solo que la cantidad de agua que se mueve entre el tejido vegetal y la solucin es similar.

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El mtodo del volumen constante es una tcnica muy sencilla para estimar el potencial hdrico de tejidos vegetales; se requiere un mnimo de equipo y es muy barato. Sin embargo, la resolucin de sus resultados es muy baja.

Resumen Es un mtodo simple Requiere un equipo mnimo Resultados de baja resolucin

Osmmetro El Osmmetro Crioscpico estima el potencial hdrico de tejidos vegetales evaluando el potencial osmtico de la savia celular. Este mtodo se basa en las Propiedades Coligativas de las Soluciones, que sealan que conforme la concentracin de solutos de una solucin se incrementa, el punto de congelamiento se reduce. Cuando se usa este mtodo, se asume que el potencial hidrosttico (YP) en las clulas es cero por el dao que el congelamiento causa en las membranas. El Osmmetro Crioscpico consiste de un componente de temperatura controlada incorporado a un microscopio. Una gota de savia celular es depositada en un pequeo hueco del componente trmico. Se agrega aceite para evitar la evaporacin. La temperatura es disminuida rpidamente para congelar la savia celular. Enseguida, se eleva la temperatura lentamente a la vez que la fusin de la savia es observada por el microscopio hasta que el ltimo cristal de savia se derrite. Cuando esto ocurre, se registra la temperatura. Debe recordarse que los puntos de fusin y congelamiento son los mismos. El potencial osmtico de la savia se calcula usando la disminucin en el punto de congelamiento El Osmmetro Crioscpico es un instrumento muy costoso, que solo puede ser operado en condiciones de laboratorio por tcnicos capacitados. La presencia de sustancias anticongelantes en las clulas puede afectar las estimaciones del potencial osmtico basadas en la disminucin del punto de congelamiento.

Resumen Instrumento costoso Solo tcnicos capacitados lo usan bajo condiciones de laboratorio Sustancias anticongelantes en las clulas pueden afectar la estimacin de YS

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Psicrmetros Psicro viene del griego y significa enfriar. El psicrmetro estima el potencial hdrico midiendo el cambio de temperatura debido a la evaporacin o condensacin del agua. Es una aplicacin del efecto Peltier a la medida de parmetros hdricos, concretamente para medir el potencial hdrico de tejidos, fragmentos de rganos y pequeos rganos enteros. Son medidas destructivas. El Psicrmetro consiste de una cmara sellada con un termopar conectado a un medidor de temperatura. Una gota de una solucin estndar de potencial hdrico conocido es colocada en el termopar y un segmento de tejido vegetal es depositado en el fondo de la cmara. La cmara es sellada. Se permite que la gota de solucin y el tejido vegetal entren en equilibrio. Si la gota de solucin en el termopar presenta un potencial hdrico mayor que el del tejido vegetal, el agua se mover de la solucin al tejido causando una disminucin de la temperatura debido al enfriamiento evaporativo. Aqu, el agua se mueve de la gota de solucin al tejido, siguiendo el potencial hdrico ms bajo. La evaporacin enfra al termopar. Si el tejido tiene un potencial hdrico mayor que el de la gota de solucin, el agua se mover del tejido vegetal y se condensar sobre la gota de solucin, causando un incremento en la temperatura Aqu, el agua se mueve del tejido a la gota de solucin, siguiendo el potencial hdrico ms bajo. La condensacin calienta el termopar En el punto en el que no se detectan cambios de temperatura se asume que los potenciales hdricos de la gota de solucin y del tejido vegetal son iguales.

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Aqu, el agua est en equilibrio entre la gota de solucin y el tejido. Por lo tanto, no hay un cambio de temperatura. El psicrmetro puede ser usado para estimar el potencial hdrico de segmentos de tejidos vegetales intactos y de soluciones. El equipo es muy sensible a los cambios de temperatura y debe ser operado bajo condiciones controladas constantes en laboratorio.

Resumen Estima YW de segmentos de tejidos vegetales intactos y de soluciones El equipo es muy sensitivo a las fluctuaciones de temperatura Se usa bajo condiciones controladas de laboratorio

Algo ms sobre los psicrmetros

Peltier (1834) descubri que cuando se hace circular una corriente elctrica a travs de un termopar o unin de dos metales en una direccin, uno se calienta y el otro se enfra, si la direccin de la corriente se invierte se produce un efecto contrario en el calentamiento y enfriamiento. Actualmente los psicrmetros constan de una pequea cmara donde se sita la muestra vegetal (o una solucin de referencia) y el termopar conectado exteriormente a una fuente y un registrador de voltaje. El termopar se construye con alambres de cromel (aleacin cromo-nquel) y de constantan (aleacin cobre-nquel), protegidos del exterior por una pequea malla de acero inoxidable o una copa cermica que permita entrar el vapor del agua. En El funcionamiento del psicrmetro de termopar es de la siguiente manera: Por medio de la induccin de un pequeo voltaje, la temperatura del termopar se reduce hasta el punto de roco, de tal manera que el vapor de agua de la atmsfera de la cmara del aparato se condensa en la unin metlica o termopar (efecto Peltier). El enfriamiento se detiene (cortando el paso de corriente elctrica) y la temperatura de la unin metlica es medida con un microvoltmetro mientras el agua de la gota formada sobre la unin se va evaporando. La temperatura de la unin depende de la velocidad de evaporacin (a mayor evaporacin mayor descenso de temperatura de la unin metlica), la cual a su vez depende de la humedad relativa del ambiente, que est directamente relacionada con el potencial hdrico del tejido. Las lecturas registradas por los psicrmetros son microvolts (v) generados por la diferencia de temperaturas de la unin de referencia y la unin de medicin. Para convertir las lecturas a valores de potencial hdrico ser necesario realizar una curva de calibracin con la respuesta del psicrmetro a diferentes concentraciones de disoluciones de potencial hdrico

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conocido. Comnmente se utilizan disoluciones de cloruro de sodio a diferentes concentraciones, a menor potencial hdrico.

Sonda de presin Microcapilar que es introducido en una clula viva para medir la turgencia celular. Mide utilizando un sensor de presin.

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Objetivo: Estimar en forma indirecta el potencial hdrico de tejido vegetal. Determinar en forma directa el potencial hdrico de tejido vegetal. Determinar y comparar el contenido relativo de agua en diversos tejidos vegetales.

Actividad 1:

En los siguientes esquemas se pueden resumir aquellos factores que interesan para conocer la dinmica del agua en la planta. Analcelos y establezca algunas conclusiones en relacin a: la direccin del movimiento del agua en relacin a sus potenciales la modificacin del potencial hdrico con respecto a la temperatura, presin y el agregado de un soluto, un coloide o la accin de una tensin.

membrana
A A Agua pura B Agua pura A B B

a
soluto A A B B

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Actividad 2: Materiales: 11 tubos de ensayo 4 cajas de petri papel de filtro Bistur algodn estufa regla
Metodologa: Potencial Hdrico (w) 1. Preparar 50 ml de las soluciones de sacarosa mencionadas en Materiales y colocar cada solucin en tres tubos de ensayos rotulados. 2. Pelar una papa grande y cortar 11 cilindros usando el sacabocados. Luego se vuelven a cortar los cilindros, cuidando que tengan 4 cm de largo. Todos los cilindros deben cortarse de la misma papa y mantenerse en humedad (envueltos en un trapo hmedo) evaporacin a partir de las superficies cortadas. Repetir con manzana y batata. 3. Tan rpido como sea posible, se pesa cada cilindro al centigramo y se transfiere uno a cada dilucin de la serie anterior, tapando enseguida cada tubo de ensayo. 4. Se colocan en heladera durante 48 horas y luego se vuelven a pesar, secndolos previamente con papel de filtro. para evitar la

1 probeta de 25 ml sacabocados de 1 cm hojas con pecolos recin cortadas 1 papa, 1 batata y 1 manzana grandes soluciones de sacarosa: 0.6M, 0.55M, 0.5M, 0.45M, 0.4M, 0.35M, 0.3M, 0.25M, 0.2M, 0.15M, 0.1M.

Resultados y conclusiones: Confeccionar una tabla con los pesos iniciales y finales de cada cilindro, la ganancia o prdida de peso (agua) de cada uno y la ganancia o prdida de cada uno por gramo inicial de peso. Graficar el cambio de peso (%) en funcin de las variaciones en la concentracin de sacarosa. La solucin en la cual no hay ganancia o prdida de peso, es considerada igual en presin osmtica al w de las clulas de la papa. Las soluciones de igual potencial se denominan isoosmticas. Qu indican los valores encontrados en la tabla: cuando hay aumento de peso? cuando hay disminucin de peso? cuando no hay variacin de peso? Alguno de los valores obtenidos le servira para hallar el potencial hdrico del tejido de la papa? Cul? y cmo?

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Actividad 3 Medicin del potencial hdrico con una cmara de presin Scholander

Materiales: Ramas terminales de arbustos Bolsas ziploc Procedimiento 1. Cortar ramas terminales de arbustos y hojas de rboles con buen pecolo y colocar en bolsas ziploc. 2. Determinar el potencial hdrico de las muestras con la utilizacin de una cmara de presin. Se realizarn al menos 4 mediciones por especie. 3. Discutir resultados y concluir. Hojas de rboles Cmara de presin

Actividad 4 Contenido relativo de agua

El contenido relativo de agua (CRA) es otro ndice de utilidad para evaluar el estado hdrico de la planta. El CRA o TR (turgencia relativa) es el porcentaje de agua de un tejido, considerando como 100% el contenido de agua de ste en condiciones de turgencia mxima. El CRA admite comparacin entre tejidos idnticos, pero no con el de otros que poseen distinta estructura (por ej. distintas especies). Su mayor desventaja es que a menos que el dficit hdrico sea muy severo, un pequeo cambio del contenido de agua afecta mucho menos al CRA que al w. El DSH (dficit de saturacin hdrica) es la magnitud en que los tejidos difieren de la cantidad mxima de agua que pueden absorber y se calcula por la diferencia: DSH = 100 CRA

Procedimiento 1. Tomar el peso fresco (PF) de las hojas del vegetal a estudiar (por ejemplo hojas jvenes y hojas viejas, por ejemplo). 2. Llevar a cmara de humedad para lograr la saturacin hdrica, durante 1 o 2 das. Al cabo de este tiempo, tomar el peso saturado (PSat). 3. Colocar en estufa a 95 o 100 C durante 1 o 2 das 4. Registrar el peso seco de las hojas (PS).

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Resultados y conclusiones Con los valores obtenidos calcular el CRA.

CRA

PF PS .100 Psat PS

Comparar los valores obtenidos entre hojas jvenes y hojas viejas, por ejemplo. Elaborar conclusiones en relacin a los tipos de hoja analizados.

Bibliografa: Barcelo Coll, J.; Rodrigo Gregorio, N.; Sabater Garca, B. & Snchez Tames, R.- 1992- Fisiologa Vegetal- Editorial Pirmide. Madrid- 211 ppGua de Trabajos Prcticos de Fisiologa vegetal y fitogeografa. 1997. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales U.N.L.P. Salisbury, F. & Ross, C.- 1994- Fisiologa Vegetal- Ed. Interamericana- 759 pp-

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Anexo Problemas

1. Qu presin desarrollara una solucin 0.3 M si se coloca en un osmmetro, a 25 C?. Cmo se denomina esta presin y cmo se relaciona con el potencial osmtico de la solucin?.

2. La clula A tiene un potencial hdrico = -12 atm y est sumergida en una solucin de potencial hdrico = -6 atm. La clula B tiene un potencial hdrico = -10 atm y est en una solucin de potencial hdrico = -8 atm. Suponga que ambas clulas llegan al equilibrio con las soluciones en que se encuentran, se las retira y se las pone en contacto. En qu direccin pasara el agua y por qu?.

3. Un trozo de epidermis con potencial osmtico = -8 atm y potencial de pared = 3 atm, se fracciona en tres partes y se sumergen en tres soluciones distintas, de potencial osmtico = -5, 8 y - 10 atm. Indique las magnitudes osmticas en el equilibrio en los tres casos.

4. Una clula cuya presin de pared = 2.6 atm contiene: glucosa, 0.1M; sacarosa, 0.1M y maltosa, 0.18M. Se halla sumergida en una solucin de potencial osmtico = -3 atm. La temperatura es 20C. Calcule el potencial hdrico de la clula y el potencial hdrico y de pared en el equilibrio.

5. Hay suelos que a pesar de estar a capacidad de campo, no pueden suministrar agua a las plantas. Explique por qu.

6. Trozos de tejidos de hojas fueron colocados en agua y en soluciones cuyos potenciales osmticos= -0.1, -0.3 y -0.7atm y dejados en ellas hasta alcanzar el equilibrio. En la solucin de -0.7 atm, las clulas se plasmolizaron incipientemente y el volumen disminuy un 3%. En la solucin de -0.3 atm, conservaron el mismo volumen que tenan originariamente; en la solucin de -0.1 atm y en agua pura hubo aumento de volumen. Se desea saber el valor de potencial hdrico, potencial osmtico y potencial de pared de la hoja en su estado inicial.

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Ejercicios de repaso

1. El potencial hdrico de la clula depende principalmente de los siguientes factores: a) Concentracin de solutos en la vacuola b) Presin gravitatoria c) Presin de turgor de la pared celular d) Potencial elctrico e) a y c

2. Si una clula (donde el potencial hdrico es igual a -0.3atm y el potencial osmtico es -0.8atm) es introducida en una solucin de sucrosa (presin osmtica: 0.8atm), entonces el agua: a) se mueve hacia dentro de la clula b) se mueve hacia fuera de la clula c) no hay movimiento de agua

3. Mediante el mtodo de volumen constante podemos: a) determinar el potencial de soluto de las clulas del tejido vegetal b) determinar el potencial hdrico de las clulas del tejido vegetal c) determinar el potencial de pared de las clulas del tejido vegetal d) a y c

4. Si una clula presenta plasmlisis incipiente su potencial de pared es: a) distinto de 0 b) igual a 0

5. El agua en la planta se mueve: a) de potenciales hdricos menores a potenciales hdricos mayores b) de potenciales hdricos mayores a potenciales hdricos menores

6. Si una hoja presenta un potencial hdrico de -0.7 atm, que potencial debera poseer la raz para que se evidencie flujo de agua por el tallo: a) menor b) mayor c) igual

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