Sangre
Agua 90% Fraccin Lquida (Plasma)
Plasma 55% Elem cel 45%
Slidos 10%
Composicin
Glbulos Rojos
Glbulos Blancos Plaquetas
2
Elementos Celulares
Plaquetas
150.000-250.000/ mm3
3
Cadena
Hemoglobina
Estructura
Globina
Fraccin proteica constituida por 4 cadenas polipeptdicas.
Fe
Cadena
Hemo
Hemo
-Ncleo porfirnico formado por 4 pirroles unidos por puentes de meteno (=C) -1 tomo de hierro ligado a los cuatro nitrgenos en el centro del anillo.
Molcula de Hemoglobina
1. Observacin de las muestras 2. Ensayos preliminares 3. Ensayos confirmatorios 4. Investigacin de especie 5.Tipificacin de la mancha de sangre humana 6. ADN
5
2. Ensayos preliminares
Peroxidasa (HEMO)
Donor reducido + H2O2 <=> Donor oxidado + 2 H2O Incoloro Color o luminiscencia
Van Deen (1861): Resina de guayaco en etanol
Adler (1904): Bencidina en cido actico glacial Medinger: Leucobase del verde de malaquita en cido actico y agua Kastle Meyer: Fenolftalena reducida en medio alcalino Luminol: 3-aminoftalhidrazida en medio alcalino
2. Ensayos preliminares
2. Ensayos preliminares
Falsos negativos
La mancha puede ser tan vieja o diluida que no produce reaccin. Sin embargo el anlisis de ADN puede ser todava posible.
HEMO
Al
/HEMO
10
3. Ensayos confirmatorios
Mtodos microscpicos Mtodos microcristalogrficos Teichmann (cristales de hemina). Takayama (cristales de piridina-hemocromgeno)
11
4.Investigacin de especie
Antisuero humano
Sangre no humana
Por electroforesis
Ctodo Anodo
12
Antgenos en la superficie Ag y Ac de la sangre ABO, Rh, MN Otros sistemas: Kell, Lewis, Kidd, P
Ag A Ag B Ag Rh
Sistema ABO
Grupo A
Ag o aglutingenos en GR Ac o aglutininas en suero A anti B
Grupo B
B anti A
Grupo AB
A y B ----
Grupo O
---anti A y anti B y
Aglutininas y Aglutingenos
13
Ag A
NAG Gal Fuc NAG Gal Fuc NAGA
Sustancia H
NAG
Gal
Fuc
Gal
Ag B
14
15
1 2 Muestra 1:
Escamitas de la mancha
Escamitas de la mancha
Escamitas de la mancha
GR A
GR B
GR O
Unin GR A-anti A
Unin GR B-anti B
Muestra 2:
Unin GR A-anti A
grupo B
Aglutinacin con los GRA Aglutinacin con los GRB
Unin GR A-anti A
Unin GR A-anti B
grupo O
17
Absorcin-inhibicin
Absorcin-elucin
18
Tcnica de absorcin-inhibicin
Muestra Muestra
1/2 1/4
1/8
1/16
1/32
Policubetas de Kline
Blanco
Blanco
1 Muestra y blanco 2 Anti A y anti B ttulo 32 3 Trizar 4 En cmara hmeda 1h Retitular el As (anti a y anti B) despus de estar en contacto con la muestra 5 Solucin fisiolgica en las concavidades restantes 6 Diluir As 7 Policubeta A agregar GR A (1,5 %) y a la policubeta B GR B (1,5%) (NO donde estn trozos de tela) 8 En cmara hmeda 30 min, observar cada 10 min
19
Absorcin- elucin
Anti A Anti B Lectina anti H
Controles
Anti A
Anti B
Lectina anti H
M1
B1
M2
B2
20
Absorcin- elucin
2. Lavar
3. Calentar (elucin)
4. Agregado de GR
21
20 %
22
Factores que pueden afectar los resultados Antigedad de la muestra Condiciones ambientales: luz, calor y humedad Naturaleza del sustrato
Contaminacin bacteriana
Manipular las muestras sin guantes
23
24
Genotipos: AA, AB, AO, BB, BO, OO. Son 6 Fenotipos: A , AB, A
(grupos)
,B , B , O
. Son 4
MN. Son 3
25
Sistema Rh MN
(por absorcin-elucin)
c/u de los genes controla la presencia de su Ag, excepto el d Wiener: 1 slo locus y 8 alelos r, r, r, ry, R0, R1, R2, Rz
26
Grupo sanguneo Rh
Orden de frecuencia
CDe/cDE
CDe/cde CDe/CDe Cde/cde cDE/cde cDE/cDE cDe/cDe cdE/cde cde/cde
R1R2
R1r R1R1 rr R2r R2R2 R0 rr rr
+
+ + + -
+
+ + + + + + +
+
+ + + + + -
+
+ + + -
+
+ + + + + + +
13,34
34,89 18,50 0,76 11,75 2,33 2,06 0,92 15,10
4
1 2 9 5 6 7 8 3 27
Protenas polimrficas -
Isoenzimas
Fosfoglucomutasa (FGM)
Esterasa D (EsD) Adenilato quinasa (AQ)
Fosfoglucomutasa (FGM)
Tejidos y fluidos biolgicos: sangre semen y secreciones vaginales 3 locus: 1; 2 y 3 Locus 1 Tiene 2 alelos: FGM1 y FGM2
28
Grupo ABO (ciudad autnoma de Bs. As.) O 47,2 % A 39,6 % B 9,6 % AB 3,6 % Fosfoglucomutasa (ciudad autnoma de Bs. As.) FGM1 57,0 % FGM2-1 35,7 % FGM2 7,3 %
Factor Rh Rh + 85 % Rh15 %
Esterasa de D (ciudad autnoma de Bs. As.) EsD1 76,4 % EsD2-1 22,3 % EsD2 1,3 %
29
Utilidad de la tipificacin
Grupo AB
3,6 %
15
7,3 % 22,3 %
30
Cada nuevo individuo es nico en su informacin gentica, de aqu el trmino de individualidad biolgica. En cualquier parte del organismo siempre se encuentra el mismo material gentico, propio de cada individuo y diferente de cualquier otro, excepto en el caso de gemelos monocigotos.
Zannoni Primarrosa 1999
31
6. Anlisis de ADN
32
Protoporfirina + Fe(III) + Cl
Protoporfirina + Fe(II) + otra sust.
HEMINA
HEMOCROMOGENO
Protoporfirina + Fe(II) + globina (imidazol de una histidina) HEMOGLOBINA Protoporfirina + Fe(II) + globina + O2 Protoporfirina + Fe(II) + globina + CO2 Protoporfirina + Fe(III) + globina METAHEMOGLOBINA
33