Ceux qui veulent opposer le Laboratoire la Clinique et la Clinique au Laboratoire nont rien compris ni la Clinique ni au Laboratoire.
C. RIcHET, LIO INAUGUrAl NA FAcUlDADE DE MEDIcINA DE PArIS
Eletroforese de Protenas
1. Histrico
O termo protena foi criado por Mulder, em 1839, referindo-se s substncias qumicas que integravam a matria viva, tanto animal como vegetal. O nome se originou do grego proteios, que signica primrio, essencial, em funo da sua signicncia biolgica, j na poca apontada pelo autor. Alguns anos mais tarde, em 1851, utilizando uma tcnica de precipitao com cido actico, Panum conseguiu separar uma frao das protenas, que designou casena do soro, sendo, posteriormente, em 1862, chamada de globulina ou substncia broplstica, por Schimidt. Em 1866, Kuhne foi o primeiro a citar as fraes proticas, obtendo duas partes, uma atravs da precipitao com anidro carbnico, que denominou de paraglobulina, e outra com cido actico, que denominou de alcalialbuminato, tendo sido posteriormente denominada de seroglobulina, por Weil e Hynius. A comprovao de que as partculas coloidais, no caso concreto as protenas, podem ser separadas atravs das suas caractersticas de mobilidade frente a campos eltricos, constituindo o fundamento da eletroforese, teve incio com os estudos de Michaelis, em 1909, que idealizou o tubo em U. A tcnica foi aperfeioada por Sverdberg e Scott (1924), Sverdberg e Tiselius (1926) e Theorell (1935). O desenvolvimento de metodologias para a medio dos componentes proticos no sangue teve incio no nal do sculo XIX, com a publicao, em 1878, do Trait pratique et elementaire de chimie mdicale (Tratado prtico e elementar de qumica mdica), por Mehu, um qumico francs do Hospital Necker de Paris, que propunha um mtodo para a quanticao do que designou de albumina ou albuminides. O mtodo que veio a se tornar a base para o sistema atual de eletroforese para a separao de protenas foi desenvolvido no incio dos anos 1930 por Arn Tiselius, ganhador do prmio Nobel
2. Conceitos
Eletroforese um termo bastante amplo, que se refere migrao de solutos e partculas em um meio lquido, sob inuncia de um campo magntico. As protenas possuem cargas positivas e negativas, sendo sua mobilidade eletrofortica diretamente proporcional carga da partcula e inversamente proporcional viscosidade do meio. Existem atualmente dois tipos de metodologia de eletroforese: 2.1 Eletroforese convencional por zona Existem atualmente dois tipos de metodologia de Eletroforese. Na metodologia convencional, de eletroforese por zona, as protenas migram em meio de suporte poroso como acetato de celulose, gel de agarose ou poliacrinamida, gerando um eletroferograma por zonas de protenas. 2.2 Eletroforese capilar A eletroforese capilar baseia a separao das protenas pelo seu tamanho e outras propriedades fsico-qumicas, atravs do uxo em um tubo capilar. O mtodo semelhante HPLC (Cromatograa Lquida de Alta Performance) , que utiliza colunas similares agarose, fornecendo resultados comparveis eletroforese em gel de agarose. Devido sua alta resoluo, a eletroforese capilar permite a separao de bandas pouco visveis no mtodo convencional, como os picos de Beta1 (transferrina e hemopexina) e Beta2 (complemento C3), resultando em um padro de seis bandas. Estas caractersticas permitem ganho adicional na avaliao de pacientes com gamopatias monoclonais.
Estudos clnicos demonstram uma maior sensibilidade da eletroforese capilar (93 a 95%) para a ELeTROfeROGRAMA POR ANLISe CAPILAR, MOSTRANDO deteco de gamopatias monoclonais, em relao AS DIfeReNTeS ZONAS De PROTeNAS. eletroforese por zona em gel de agarose (86 a 91%). A eletroforese capilar particularmente mais sensvel deteco de componentes monoclonais em pequenas concentraes, especialmente IgA ou cadeias leves, que podem no ser detectadas pela tcnica em gel de agarose, devido co-migrao com a transferrina e o C3. Outra vantagem a no deteco dos picos de brinognio pela eletroforese capilar, que uma constante fonte de resultados falsamente positivos quando se utiliza a metodologia convencional de eletroforese por zona. O brinognio, normalmente ausente nas amostras de soro, pode ser detectado em casos de coagulao incompleta do sangue (amostra processada em tempo insuciente) ou quando o paciente se encontra sob utilizao de drogas anticoagulantes. O aumento da sensibilidade com a eletroforese capilar, permite ainda uma maior deteco dos casos de bisalbuminemia adquirida, que pode ter relevncia em algumas situaes clnicas como em casos de fstulas pancreticas, presena de ascite e uso de antibiticos. Outra vantagem do mtodo por capilaridade a possibilidade de automao total do processo, que garante maior qualidade e rapidez de resultados.
FIGURA 1
FIGURA 2
ZONAS De eLeTROfOReS COM CORReLAO COM AS DIfeReNTeS PROTeNAS.
Nota:
Pre A = pr-Albumina Alb = albumina a1 Ac = alfa1-Antiquimiotripsina a1 Ag = alfa1-glicoprotena cida a1 At = alfa1-antitripsina a2M = alfa2-macroglobulina aLp = alfa-lipoprotena
Pl = plasminognio Hpx = hemopexina Hpt = haptoglobina AT3 = pr-Albumina b Lp = beta-lipoprotena C1q; C1r, C1s, C3, C4, C5, C1inh = complemento
Cer = ceruloplasmina CRP = protena C reativa Fibr = brinognio IgA, IgD, IgE, IgG, IgM = imunoglobulinas Tf = transferrina FB = fator B
RICHET NOUVELLES
vrios antgenos e s podem ser identicadas quando so utilizadas metodologias de alta resoluo, como a eletroforese capilar. Geralmente, estas imunoglobulinas correspondem a: - Doenas auto-imunes: artrite reumatide, sndrome de Sjgren, lupus eritrematoso, esclerose sistmica progressiva. - Anticorpos contra protenas virais: HIV, hepatite viral, meningite, infeco por citomegalovirus. - Resposta auto-imune em pacientes transplantados sob terapia imunossupresora. - Resposta imune em indivduos normais: 1 a 5% dos indivduos normais podem apresentar forma oligoclonal sem signicado clnico. Este tipo de elevao monoclonal geralmente est presente em baixas concentraes e de forma transiente.
Concluses
A eletroforese de protenas permanece como uma forma fcil e comum de investigao, sendo de utilidade para a conrmao de caos de estados inamatrios ou infecciosos, com respectivas elevaes poli ou monoclonais de gamaglobulinas. A eletroforese capilar torna o teste mais sensvel e especco, possibilitando a deteco de alteraes que no poderiam ser vistas atravs das tcnicas tradicionais.
Referncias Bibliogrcas
1. Didier Le Carrer, Serum protein Electrophoresis Immunoxation, Edition FM-BIO, Vanves, 2005. 2. J. Villar Caso, Las protenas Del Plasma, Editorial Cientco-Mdica-Barcelona, 1950. 3. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz, Fundamentals of Clinical Chemistry 5th Ed., 2001.
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