Junio de 2012
3. OBSERVAR LA MUESTRA
DESCRIPCIN DE ALGUNOS BOTONES:
Antes de observar las muestras hay que chequear varios setting del microscopio para que todo funcione bien: MICROSCOPY: z-drive: aqu se indica el movimiento del objetivo. Para moverlo ms lento o ms rpido se debe pinchar el botn de focus ubicado en el extremo derecho inferior del microscopio. Cuidado de no subir muy rpido ya que probablemente quebrars tu preparacin. Change limits: aqu puedes cambiar los lmites mximos y mnimos del movimiento en el eje Z. Hay que trabajar en los lmites que se han indicado aqu, si se trabaja por fuera dar un error. Objetives: este dispositivo cambiara el objetivo con que se quiere trabajar. 1X y 1.6 X indican el aumento, pero hay que pinchar aqu y tambin en un botn que est al lado derecho del micro. Se suele trabajar en 1X. Fluorescente turret: Hay varias opciones U/B/G: para trabajar con fluorescencia Lamp: Indica la intensidad de la lmpara. Normalmente esto no se toca. 6
ILLUMINATION SYSTEM: En illumination setting hay que pinchar una sola vez al iniciar para encender la Lmpara y al final al terminar de trabajar. Main Switch, Burner ON/Off: Para encender la lmpara MT20/MT10. Excitation: aqu tenemos el shutter. Al pinchar se abre el pas de la luz del shutter y al volver a pinchar se cierra. Intensity %: suele estar al 100%. CAMERA CONTROL: El icono que esta en el extremo superior izquierdo es la opcin live, para ver que est en el campo de observacin. El botn que esta al lado es para sacar la foto. Binning: opcin para cambiar la resolucin de la foto. Si se quiere mover en el campo de observacin.
Luego la cmara de video En el men de Camera Control Regulamos el tiempo de exposicin En el men microscopio Seleccionamos Fluorecence turret cambiamos a DIC En el microscopio hay que realizar los siguientes pasos: 7
Introducir el polarizador (arriba) Analizador y DIC puesto (analizador el de la izquierda) DIC el de la derecha con las letras hacia abajo. EL FILTRO DIC(3) Slo en caso de fluorescencia.
Con el Experiment manager que se explica ms adelante podemos hacer fotografa de diferentes filtros y despus componerlos en RGB para su examen.
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Se abre la ventana:
Con los botones siguientes establecemos las caractersticas que debe de tener nuestra pelcula (filtros, fotografa, tiempos de exposicin, veces que deben de repetirse, cuantos Z vamos a realizar, etc.)
Pinchar botn Time Lapse en Propiedades Controlar tipo de imagen y el intervalo. El icono multicolor lo nombramos y nos da el nombre del experimento Es esencial para hacer inmunofluorescencia para enlazar varios colores Comprobar que las fotos estn sacadas para hacer fotografa en fluorescencia. Se coloca el icono de cmara de fotos dentro de Time Lapse Con el botn Get Current Camera Setting coge los valores que estn en el men de Camera Control Otros botones: En Multicolor Image existe un submen => Display que si se pincha esta ventana y se pincha Display, hacemos que la imagen vaya refrescndose de la imagen que se van adquiriendo, esto se sabe ya que en el experiment Manager en el recuadro que introducimos aparece un pequeo icono con un monitor. Display nos sirve para ver en pantalla la observacin.
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Una vez realizados todos esos procesos que queramos que realice el microscopio, vamos a la ventana que aparece:
El botn
El botn
Despus de terminada la observacin se va al Data base y se observa el experimento. Se pincha dos veces la imagen adquirida y se abre la imagen en el rea de documentos.
Se determinar los frames y dems caractersticas que deseemos para la realizacin de la pelcula, as como su formato y dems.
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6. CUIDADOS:
La limpieza del microscopio es fundamental para obtener buenas fotos. La platina donde se pone la muestra tiene que limpiarse con etanol y no dejar aceite de inmersin en ninguno de los dos lados. Dejar los polarizadores para el DIC afuera, ya que si alguien que no sabe que existen no podr sacar fotos. No almacenar las fotos en el disco duro, ya que ocupan mucho espacio. Tratar de llevar un disco duro externo y transferirlo una vez terminado el experimento.
Jose Luis Luque Ojeda Agradecimientos Jean Mathieu Bart Jenny Campos 15
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