Biologia GUIA 2013

Universidad Nacional del Nordeste Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura
Biologa Celular y Molecular

* 201 201 *
FACENA-UNNE
A. PRESENTACIN DE LA ASIGNATURA I. Introduccin El presente curso de Biologa Celular y Molecular intenta proporcionar al estudiante una visin esencial de los patrones de estructura, funcin y organizacin de las clulas. Se procurar que el alumno conozca y aplique el mtodo cientfico, poniendo especial nfasis en el concepto de que el conocimiento cientfico es provisorio y sometido a constante revisin. En el transcurso del cursado de la asignatura se presentar al alumno una visin de la estructura y ultraestructura celular, los distintos niveles de organizacin y tipos de clulas, la relacin entre forma y funcin, el metabolismo de las clulas y la reproduccin celular. II. Objetivos Al finalizar el cursado de la asignatura, se pretenden alcanzar los siguientes objetivos, que los docentes de la ctedra tratarn de promover activamente. Desarrollar destreza en el manejo de los instrumentos de laboratorio, tcnicas empricas y microscopa. Conocer los fundamentos, resultados y limitaciones de los principales mtodos empleados para el estudio de las clulas, sus productos y sus interacciones. Reconocer las caractersticas fundamentales de las clulas, patrones, diversidad de formas, actividad metablica y regulacin. Conocer las bases moleculares del funcionamiento celular. Establecer relaciones integradoras entre la estructura y la funcin de las clulas. Examinar a la clula como un organismo autnomo, consolidando el concepto de niveles de organizacin subcelular. Instruirse en el empleo de la terminologa bsica de las ciencias biolgicas, tanto en su expresin grfica, como escrita y oral. Estimular el desarrollo del pensamiento reflexivo sobre la base del mtodo cientfico. Desarrollar la capacidad de obtener, seleccionar y registrar la informacin biolgica pertinente.
III. Programa Analtico 1. Introduccin al estudio de la biologa celular. La biologa celular dentro de las ciencias biolgicas. Historia e importancia de su conocimiento. Descubrimiento de la estructura microscpica. Morfologa al microscopio ptico y electrnico. El concepto de la relacin estructura-funcin. 2. Mtodos de estudio en biologa celular. Anlisis de la estructura y ultraestructura celular. Microscopa ptica y electrnica. Citoqumica e histoqumica. Fraccionamiento celular. Cromatografa. Electroforesis. Cultivo de tejidos. Ultracentrifugacin. Inmunohistoqumica. Autorradiografa. Inmunofluorescencia.
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3. Caractersticas generales de las clulas. La clula como unidad funcional y estructural de la vida. Teora celular. Clulas procariotas y eucariotas. Caractersticas de las clulas vegetales y animales. Organizacin general de las clulas eucariotas. Compartamentalizacin. Virus. Viroides. Priones. 4. Membrana Celular. Composicin molecular de las membranas biolgicas. Tipos de protenas, lpidos e hidratos de carbono. Estructura. Modelos de membranas. Propiedades de las membranas. Diferenciaciones de la membrana. Interacciones de las clulas entre s y con las matrices extracelulares. Molculas de adhesin celular. Uniones celulares. Cubiertas externas. 5. Transporte a travs de la membrana. Permeabilidad de la membrana. Transporte activo y pasivo. Difusin simple y facilitada. Osmosis. Transporte de iones y macromolculas. Bombas o ATPasas. Cotransporte. Protenas transportadoras. 6. Citosol o Matriz citoplasmtica. Citoesqueleto: caractersticas generales y organizacin. Microtbulos. Microfilamentos. Filamentos intermedios. Estructura y composicin molecular. Organoides microtubulares. Movimiento celular. Cilios y flagelos. 7. Organelos citoplasmticos. Organelos membranosos y no membranosos. Retculo endoplasmtico liso y rugoso. Aparato de Golgi. Distribucin y exportacin de protenas. Ribosomas. Vesculas con cubierta. Lisosomas. Mecanismo de transporte de vesculas. Peroxisomas. Descripcin y funciones. Endocitosis especfica e inespecfica. Fagocitosis. 8. Mitocondrias. Aspectos generales. Membrana interna y externa. Composicin y estructura molecular de las membranas. Transporte interno. Internalizacin de protenas. Sistema gentico. Acoplamiento quimiosmtico. Fosforilacin oxidativa. 9. La clula vegetal. Morfologa y fisiologa. Organizacin interna. Pared celular: composicin y estructura. Interaccin y comunicacin entre clulas vegetales. Puntuaciones. Plasmodesmos. Perforaciones. Plstidos. Vacuolas. Cloroplastos: modelos estructurales y metabolismo. 10. Ncleo interfsico. Descripcin general. Envoltura nuclear. Las bases qumicas de la herencia. Estructura del ADN. Modelo de Watson y Crick. Formas alternativas del ADN. Cromatina. Nucleosomas. Protenas histnicas y no histnicas. Replicacin del ADN. Cromosomas: morfologa y estructura. Eucromatina y heterocromatina. 11. Mitosis. Ciclo celular. Descripcin detallada de la mitosis. Consecuencias genticas. Aspectos moleculares. Aparato mittico en clulas vegetales y animales. Huso acromtico. Migracin de cromosomas. Cinetocoros. Citocinesis. Control del ciclo celular. Regulacin molecular de los procesos mitticos. 12. Meiosis y Reproduccin Sexual. Descripcin detallada de la meiosis. Consecuencias genticas. Recombinacin. Metabolismo del ADN en la meiosis. Recombinacin a nivel molecular. Estructura de la cromatina en espermatozoides. Dominio fsico de los proncleos masculino y femenino en las primeras clulas del embrin. 13. El material gentico en accin. Funcin del ADN. Transcripcin. Tipos de ARN: estructura y funcin. Sntesis, regulacin y maduracin de los ARN. Composicin del nuclolo. 14. Sntesis de protenas. Traduccin del ARN mensajero. Ribosomas en procariotas y eucariotas. Ensamblaje de los ribosomas. Estructura proteica. Cdigo gentico. Sntesis de protenas citoslicas y membranosas.
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IV. Bibliografa General Alberts, B., A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & P. Walter. 2004. Biologa Molecular de la Clula. 4 edicin. Ed. Omega, Barcelona. (2) Alberts, B., D. Bray, K. Hopkin, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & P. Walter. 2007. Introduccion a la Biologa Molecular. 2 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. (6). De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. (1). Karp, G. 1998. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. (2) Karp, G. 2005. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. (3) Lodish, H., A. Berk, S.L Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Panamericana, Buenos Aires (2) Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C. A. Kaiser, M. Krieger, M. P. Scott, S. Zipursky, S. Lawrence & J. Darnell. 2008. Biologa Celular y Molecular. 5 edicin. Ed. Panamericana, Buenos Aires. (7) Purves, W. K., D. Sadava, G. H. Orians & H. C. Heller. 2006. Vida : la ciencia de la biologa. 6 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. (6) Watson, J. D., T. Baker, S. P. Bell, A. Gann, M. Levine & R. Losick. 2005. Biologa molecular del gen. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. (3) V. Bibliografa Especfica Beadle, G. W. 1961. Las bases fsicas y qumicas de la herencia. Ed. Eudeba, Buenos Aires. Bianchi, N. O. 1978. Duplicacin cromosmica y heterocromatina a nivel molecular citolgico. OEA. Serie de Biologa. Monografa N 19. Burns, G. W. 1983. The science of genetics: An introduction to heredity. Ed. Macmillan & Co., New York. Gardner, E. J., M. J. Simmons & D. P. Snustad. 1998. Principios de Gentica. 4 edicin. Ed. Limusa-Wiley. Mxico. Griffiths, A. J. F., J. H. Miller, D. T. Suzuki, R. C. Lewontin & W. M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lacadena, J. R. 1988. Gentica. Ed. Agesa, Madrid. Lacadena, J. R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense, Madrid. Puertas, M. J. 1992. Gentica: fundamentos y perspectivas. 1 edicin. Ed. McGraw - Hill Interamericana, Madrid. Sanchez-Monge, E. & N. Jouve. 1989. Gentica. Ed. Omega, Barcelona. Sinnott, E. W., Dunn, L. C. & T. Dobzhansky. 1961. Principios de Gentica. Ed. Omega. Barcelona. Stern, C. 1963. Principios de gentica humana. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Strickberger, M. W. 1978. Gentica. 2 edicin. Ed. Omega, Barcelona. Thompson, J. S. & M. W. Thompson. 1977. Gentica humana. Ed. Salvat, Buenos Aires. 4
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VI. Programa de Examen Bolilla 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 2 5 1 2 1 Temas 11 12 12 11 7 6 7 6 4 2 14 13 14 13 10 9 8 8 9 10
B. ORGANIZACIN DE LA ASIGNATURA I. Personal Docente Profesor Titular Dr. Massimiliano Dematteis Jefes de Trabajos Prcticos Dra. Mara de las Mercedes Sosa Dra. Mara Betiana Angulo Auxiliares Docentes de Primera Adscriptos Lic. Gabriela E. Farco Lic. Carolina Brem Auxiliar Docente de Segunda Srta. Iliana de los ngeles Araujo II. Caractersticas Generales El curso comprende la realizacin de clases tericas y prcticas, realizndose 3 evaluaciones parciales con sus respectivos recuperatorios y un recuperatorio extraordinario. III. Clases Tericas Las clases tericas estn destinadas al conjunto de los alumnos y constituyen una actividad no obligatoria, dnde se desarrollan los aspectos fundamentales y la orientacin general de la materia. Para facilitar la comprensin de los contenidos desarrollados durante las clases tericas, es importante la lectura o estudio previo de los temas dictados. IV. Clases Prcticas Las prcticas de laboratorio o trabajos prcticos son una actividad obligatoria para todos los alumnos inscriptos y se desarrollan dos veces por semana, guiados por uno o ms auxiliares de docencia. Las bases conceptuales de los temas de los trabajos prcticos son desarrolladas previamente en las clases tericas. Para poder integrar los conocimientos 5
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tericos y prcticos, que conduzcan a la comprensin global de la materia, es imprescindible que los alumnos concurran a los trabajos prcticos habiendo estudiado o preparado previamente el tema a desarrollar. Las clases tendrn una duracin aproximada de 2 horas, aunque ocasionalmente algunos prcticos puedan demandar mayor o menor cantidad de tiempo. Los temas a desarrollar en los prcticos, as como los materiales necesarios y actividades, se detallan en la gua de trabajos prcticos. Al final de cada prctico, en la gua de actividades prcticas se incluyen referencias bibliogrficas a las que el alumno podr recurrir para aclarar conceptos o estudiar el tema. Para cada clase prctica el alumno deber concurrir conociendo la finalidad del trabajo y trayendo la gua de trabajos prcticos y los materiales necesarios mencionados en la misma. Se recomienda el uso de guardapolvo o chaquetilla durante los prcticos, pero su empleo no es obligatorio. La realizacin de cada trabajo prctico implica la comprensin de los principios tericos del fenmeno en estudio, el adiestramiento manual del alumno, la prctica en el manejo instrumental y entrenamiento en la presentacin de datos e interpretacin de resultados. Al finalizar cada trabajo prctico, el alumno deber entregar en forma individual las actividades realizadas durante la clase para su evaluacin (ilustraciones, respuestas del cuestionario, problemas resueltos, etc.). Si dicho informe se presenta en estado deficiente o incompleto se considerar que no ha cumplido con la clase prctica. Igualmente, cuando el alumno se encuentre ajeno al trabajo, sea por ignorar los fundamentos tericos o por permanecer inactivo en la prctica, se considerar que no ha cumplido esa clase prctica. V. Evaluaciones Estarn destinadas a determinar el grado de comprensin de los diferentes temas por parte de los alumnos y evaluar el grado en que los objetivos propuestos por la asignatura se cumplen. a.- Evaluaciones de las Actividades Prcticas: tienen como objetivo determinar si el grado de comprensin de los fundamentos del tema es satisfactorio y verificar si el alumno es capaz de aplicar dichos conocimientos en la resolucin de problemas hipottico-deductivos. La evaluacin de las mismas se realizar a partir de los trabajos o problemas realizados por los alumnos, que sern entregados al finalizar cada clase. b.- Evaluaciones Parciales: se realizarn tres evaluaciones parciales, que comprendern temas estrechamente relacionados, cuya comprensin es fundamental para la correcta asimilacin de los temas posteriores. Los parciales tendrn como objetivo fundamental evaluar la capacidad de anlisis y de las diferentes situaciones que pudieran plantearse. Todos los parciales se desarrollarn por escrito. Los mismos se considerarn aprobados con una calificacin de 6 (seis) o superior. Dentro de los 7 das posteriores a cada evaluacin se realizar el recuperatorio correspondiente, el cual tendr modalidad escrito y con preguntas a desarrollar. VI. Regularizacin de la Asignatura Sern considerados alumnos regulares los que cumplieran con las siguientes exigencias: a) Alcanzar el 75 % de asistencia en las clases prcticas. b) Aprobar el 75% de las clases prcticas. c) Aprobar el 100% de las evaluaciones parciales con calificacin 6 (seis) o superior. 6
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Los alumnos que no alcanzaran al 75% de aprobacin de las clases prcticas o no aprobaran los parciales con un mnimo de 6 (seis) sern considerados alumnos libres. VII. Promocin sin Examen Final Para lograr la promocin sin examen final de la asignatura (Resol. C.D. 0217/11), los alumnos debern cumplir los siguientes requisitos: a) Alcanzar el 75 % de asistencia a las clases prcticas. b) Aprobar el 75 % de las clases prcticas. c) Aprobar las evaluaciones parciales en primera instancia, obteniendo un promedio de 7 (siete) o superior al finalizar el cursado. Los alumnos que no obtuvieran un promedio mnimo de 7 (siete) en las evaluaciones parciales y/o no alcanzaran al 75 0% de aprobacin de las clases prcticas, pero cumplimenten los restantes requisitos para regularizar la asignatura sern considerados alumnos regulares. VIII. Horarios de Consultas Las consultas que quieran realizar los alumnos, tanto sobre temas tericos como prcticos, las debern efectuar al Profesor responsable de la asignatura los das mircoles y viernes de 14 a 15 hs., previos al inicio de las clases tericas. Cualquier duda que surgiera los das restantes, las consultas podrn ser realizadas en el Instituto de Botnica del Nordeste, Sargento Cabral 2131, de 8 a 10 hs. IX. Cronograma de Actividades Clases tericas:
Clase 1 Fecha 15/03/2013 Mdulo/Tema Introduccin al estudio de la biologa celular. La biologa celular dentro de las ciencias biolgicas. Historia e importancia de su conocimiento. Mtodos de estudio en biologa celular. Anlisis de la estructura y ultraestructura celular. Microscopa ptica y electrnica. Fraccionamiento celular. Cromatografa. Electroforesis. Cultivo de tejidos. Ultracentrifugacin. Histoqumica. Inmunohistoqumica. Autorradiografa. Inmunofluorescencia. Teora celular. Clulas procariotas y eucariotas. Caractersticas de las clulas vegetales y animales. Morfologa y fisiologa de las clulas. Envejecimiento, degeneracin y muerte de las clulas. Feriado Viernes Santo Membrana Celular. Composicin molecular de las membranas biolgicas. Modelos de membranas. Propiedades de las membranas. Diferenciaciones de la membrana. Interacciones de las clulas entre s y con las matrices extracelulares. Cubiertas externas. Transporte a travs de la membrana. Permeabilidad de la membrana. Transporte activo y pasivo. Bombas o ATPasas. Protenas transportadoras. Docente/s Dematteis, Massimiliano
20/03/2013
Dematteis, Massimiliano
22/03/2013
27/03/2013
29/04/2013 03/04/2013
Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano
05/04/2013
10/04/2013
FACENA-UNNE
8 9
12/04/2013 17/04/2013
10
19/04/2013
11
24/04/2013
12
26/04/2013
13 14 15
01/05/2013 03/05/2013 08/05/2013
16
10/05/2013
17
15/05/2013
18 19
17/05/2013 22/05/2013
20 21
24/05/2013 29/05/2013
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31/05/2013
23
05/06/2013
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07/06/2013
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12/06/2013 19/06/2013 26/06/2013
Primer Parcial Citosol o Matriz citoplasmtica. Citoesqueleto: caractersticas generales y organizacin. Microtbulos. Organoides microtubulares. Microfilamentos. Filamentos intermedios. Movimiento de las clulas. Cilios y flagelos. Organelos citoplasmticos. Organelos membranosos y no membranosos. Retculo endoplasmtico liso y rugoso. Aparato de Golgi. Ribosomas. Vesculas con cubierta. Lisosomas. Peroxisomas. Descripcin y funciones. Endocitosis especfica e inespecfica. Fagocitosis. Mitocondrias. Aspectos generales. Membrana interna y externa. Transporte. Composicin y estructura molecular de las membranas. Acople de la cadena respiratoria. Fosforilacin oxidativa. Da del trabajador- Feriado Nacional Feriado Provincial Ncleo interfsico. Descripcin general. Envoltura nuclear. Las bases qumicas de la herencia. Estructura del ADN. Modelo de Watson y Crick. La clula vegetal. Morfologa y fisiologa. Pared celular: composicin y estructura. Organizacin interna. Plstidos. Vacuolas. Cloroplastos. Cromatina. Nucleosomas. Empaquetamiento. Protenas histnicas y no histnicas. Replicacin del ADN. Cromosomas. Eucromatina y heterocromatina. Segundo Parcial. Mitosis. Ciclo celular. Descripcin detallada de la mitosis. Consecuencias genticas. Aparato mittico en clulas vegetales y animales. Cinetocoros. Citocinesis. Aspectos moleculares. Control del ciclo celular. Protenas reguladoras. Meiosis y Reproduccin Sexual. Descripcin detallada de la meiosis. Consecuencias genticas. Recombinacin. Metabolismo del ADN en la meiosis. Recombinacin a nivel molecular. Estructura de la cromatina en espermatozoides. Dominio fsico de los proncleos masculino y femenino en las primeras clulas del embrin. El material gentico en accin. Funcin del ADN. Tipos de ARN. Sntesis, regulacin y maduracin de ARN. Composicin del nuclolo. Cdigo gentico. Sntesis de protenas. Traduccin del ARN mensajero. Ribosomas en procariotas y eucariotas. Ensamblaje de los ribosomas. Estructura proteica. Sntesis de protenas citoslicas y membranosas. Tercer Parcial Recuperatorio Tercer Parcial Recuperatorio Extraordinario
Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano
Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano
Clases Prcticas:
Clase 1 Fecha 20/03/2013 Mdulo/Tema Microscopa ptica y electrnica Docente/s Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes
22/03/2013
Tcnicas citoqumicas
FACENA-UNNE
27/03/2013
Electroforesis
29/03/2013
Feriado
03/04/2013
Clula
05/04/2013
Membrana plasmtica
10/04/2013
Transporte de membrana
12/04/2013
Primer parcial
10
17/04/2013
Citoesqueleto
11
19/04/2013
Organelos citoplasmaticos
12
24/04/2013
Estructura de organelos membranosos
13
26/04/2013
Clula vegetal I
14
01/05/2012
Feriado
15
03/05/2013
Feriado
16
08/05/2013
Clula vegetal II
17
10/05/2013
Estructura y funcin de los cromosomas
18
15/05/2013
Cariotipo
19
17/05/2013
Segundo parcial
20
22/05/2013
Mitosis
21
24/05/2012
Recuperatorio Segundo Parcial
22
29/05/2013
Meiosis
23
31/05/2013
Gametognesis
Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes
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24
05/06/2013
Accin gnica: sntesis de ARNr
25
07/06/2013
Cdigo gentico
25
12/06/2013
Tercer Parcial
26
19/06/2013
Recuperatorio Tercer Parcial
27
26/06/2013
Recuperatorio Extraordinario
Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes Angulo, Mara Betiana Coulleri, Juan Pablo Sosa, Mara de las Mercedes
Parciales
Actividad 1 Examen parcial Recuperatorio 1 examen parcial 2 Examen parcial Recuperatorio 2 examen parcial 3 Examen parcial Recuperatorio 3 examen parcial Recuperatorio Extraordinario Fecha 12/04/2013 19/04/2013 17/05/2013 24/05/2013 12/06/2013 19/06/2013 26/06/2013 Horario 15-17 19-20 15-17 17-19 15-17 17-19 15-17 Docente responsable Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano Dematteis, Massimiliano
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TRABAJOS PRCTICOS
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Trabajo Prctico N 1 MICROSCOPA PTICA Y ELECTRNICA El microscopio ptico o fotnico de campo claro est compuesto por una parte mecnica o estativo y por un sistema ptico que incluye fuente de luz, condensador, diafragma, objetivos y oculares, a travs de los cuales se refractan los rayos luminosos provenientes del objeto en estudio para proporcionar una imagen final de mayor tamao, invertida y virtual. Para ello, el objeto estudiado debe ser transparente y poseer suficiente contraste para poder discriminar sus componentes. La transparencia se logra mediante la realizacin de cortes muy delgados del material en estudio o bien realizando extendidos celulares. El contraste adecuado se alcanza por medio de diferentes tipos de coloraciones o por medio de sistemas pticos particulares (por ejemplo: microscopio de contraste de fases). El microscopio de campo claro es de gran utilidad para el estudio de clulas y tejidos previamente fijados (muertos) y coloreados. La coloracin de las preparaciones citohistolgicas tiene por finalidad provocar la absorcin diferencial de luz, con el propsito de visualizar las diversas estructuras en distintos colores. Por el contrario, para estudiar clulas u organismos vivos que no se pueden colorear, es necesario recurrir casi siempre a otros sistemas pticos especiales, como el microscopio de contraste de fases o el microscopio de interferencia. En estos dos casos, se aprovecha una caracterstica propia de los diferentes componentes celulares, que aunque son transparentes a la luz, poseen densidades relativas distintas.
Existen bsicamente dos tipos de microscopio electrnico: el microscopio electrnico de barrido o tridimensional (MEB) y el microscopio electrnico de transferencia (MET). Estos microscopios, a diferencia del microscopio ptico, forman imgenes a partir de una radiacin de electrones emitida por un filamento de tungsteno y un sistema de electroimanes que funcionan como lentes. Otra de las caractersticas es que proporcionan una resolucin mayor que el microscopio ptico, requieren de procedimientos ms elaborados para la preparacin del material y slo se pueden examinar clulas deshidratadas y muertas. El MET se utiliza ampliamente para examinar la estructura interna de la clula, mientras que el MEB examina con detalle la superficie de las muestras, las cuales se observan tridimensional mente debido a la profundidad de foco que posee este ltimo tipo de microscopio. Tanto el MET como el MEB son indispensables para el estudio de la biologa celular y molecular. El microscopio electrnico de transmisin es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Debido a que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho 12
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ms pequeas, tiene un lmite de resolucin de cerca de 2 nm. Un MET mira clulas muertas, despus de haber sido fijadas y teidas con iones de metales pesados Las partes principales de un microscopio electrnico son: Can de electrones, que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada. Lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones. Sistema de vaco es una parte muy importante del microscopio electrnico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, se debe hacer un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Placa fotogrfica o pantalla fluorescente que se coloca detrs del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada. Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una computadora.
El microscopio electrnico de barrido (MEB) tambin tiene un lmite de 2 nm. El MEB permite mirar a clulas muertas, despus de haber sido fijadas y teidas con iones de metales pesados. Con esta tcnica los electrones son reflectados sobre la superficie del espcimen.
El presente Trabajo Prctico tiene la finalidad de observar las partes integrantes y el 13
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funcionamiento del microscopio ptico y un microscopio electrnico, que son los ms utilizados en el rea de las ciencias biolgicas. Objetivos: Reconocer las diferentes partes que componen un microscopio. Analizar las caractersticas del instrumental ptico Adquirir destreza en el uso del microscopio ptico. Aprender las normas bsicas para su cuidado y manejo. Conocer las caractersticas del microscopio electrnico. Entender las aplicaciones de la microscopa electrnica de transmisin y barrido.
Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.) Papel tissue Actividades: 1. En primera instancia se deber indicar en el esquema proporcionado las partes que componen un microscopio ptico y una lupa. El esquema deber ser entregado al finalizar la clase prctica. 2. Posteriormente, se observarn preparaciones cito-histolgicas a los efectos de instruirse en la utilizacin del microscopio ptico hasta adquirir relativa destreza. Para ello se sugiere seguir el procedimiento que se detalla a continuacin, hasta que el enfoque de una preparacin sea una maniobra automtica y sencilla. Encender la luz del microscopio, colocar el objetivo de menor aumento (5x o 10x) en el eje ptico, subir el condensador hasta el tope superior y abrir completamente el diafragma. Colocar la preparacin sobre la platina con el cubreobjetos hacia arriba y el material en el orificio de la platina. Acercar el objetivo al preparado mediante el control o tornillo macromtrico, mirando desde el costado del microscopio hasta llegar casi hasta el tope o a unos 4-5 mm del preparado. Mirar por el ocular y separar lentamente el objetivo hasta visualizar la preparacin. Completar el enfoque mediante el control micromtrico. Regular la iluminacin ajustando la altura del condensador y la apertura del diafragma. Para pasar a objetivos de mayor aumento, bajar un poco la platina. Si se trata de un objetivo de inmersin, colocar una gota de aceite sobre el preparado y mirar desde el costado acercando el objetivo con el tornillo macromtrico hasta hacer contacto con la gota de aceite. Se debe actuar con precaucin para evitar la rotura del portaobjetos del preparado o de la lente frontal del objetivo. Mirar por el ocular y maniobrar con el control micromtrico hasta visualizar la preparacin y enfocar correctamente. Al finalizar las observaciones se debe apagar la luz del microscopio, separar el objetivo de la platina y colocar el objetivo de menor aumento. Si se utiliz aceite de inmersin se debe limpiar el preparado con xilol y las lentes con papel (especial para lentes). Una vez terminado esto, se deben guardar los preparados en la caja correspondiente y 14
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cubrir el microscopio con la funda o estuche. Para el adecuado uso de un microscopio ptico, tambin pueden ser importantes algunas de las recomendaciones que se detallan a continuacin: Antes de comenzar a trabajar con un microscopio binocular se debe ajustar el sistema ptico a sus ojos. Si utiliza anteojos correctores de miopa, no necesita usarlos para mirar al microscopio. En cambio, si emplea anteojos para astigmatismo, si es necesario utilizarlos. Los microscopios utilizados para las clases prcticas varan en cuanto a la forma y posicin de sus controles de acuerdo a la marca y el modelo del microscopio. Solicite ayuda siempre al JTP sobre las semejanzas y diferencias para su uso. Recuerde siempre que, cuanto mayor es el aumento utilizado, menor es el campo microscpico observado. En todos los casos, se debe empezar a observar una preparacin con el objetivo de menor aumento. 3. Se deber observar el esquema que se encuentra a continuacin que indica las partes que componen un microscopio electrnico de barrido y de transferencia.
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4. Comparar dichos esquemas indicando las similitudes y diferencias que puede observar entre los dos tipos de microscopios. 5. Examinar las fotografas que se hallan a continuacin e indique en cada caso que tipo de microscopio fue utilizado. 6. Explicar qu tipo de informacin brinda la utilizacin de cada uno de estos microscopios.
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Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1987. Invitacin a la Biologa. Ed. Mdica Panamericana, Mxico. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1993. Biologa. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 2 TCNICAS CITOQUMICAS El propsito inmediato de la citoqumica consiste en la identificacin y localizacin de los diferentes compuestos qumicos dentro de la clula. La histoqumica hace lo propio a nivel tisular. Este propsito es tanto cualitativo como cuantitativo. Puede realizarse con fines diagnsticos, y en tal sentido debemos sealar que los procedimientos cito-histoqumicos (en especial los referidos a la inmunohistoqumica) se convirtieron en un instrumento invalorable en el diagnstico o pronstico de innumerables alteraciones histopatolgicas. Las tcnicas cito-histoqumicas como instrumento de investigacin involucran el estudio de los cambios dinmicos en la organizacin citoqumica durante los distintos estadios funcionales. En tal sentido, es posible establecer el papel que desempean los diferentes componentes celulares en los procesos metablicos de la clula. El mtodo citohistoqumico en sentido estricto es microscpico, porque comprende una serie de procedimientos qumicos y fsicos que se emplean para individualizar con el microscopio diferentes componentes qumicos en el interior de las clulas o en las matrices extracelulares. Deteccin de almidn Los azcares, glcidos o hidratos de carbono son compuestos formados por tomos de carbono, hidrgeno y oxgeno. Representan la principal fuente de energa de los organismos y adems son parte de la extensa variedad de componentes estructurales de la pared celular y de las sustancias intercelulares. De acuerdo al nmero de molculas que la componen, se clasifican en: monosacridos, disacridos, trisacridos, oligosacridos (de cuatro a diez), polisacridos (ms de diez). Estos junto con las protenas y los cidos nucleicos forman las macromolculas. Entre estos compuestos se encuentran la glucosa, fructosa, sacarosa, almidn, glucgeno, celulosa, quitina, etc. Materiales: Almidn de origen vegetal, suspendido en agua al 10 %. Reactivo de Lugol (Iodo en solucin de Ioduro de potasio). Tres tubos de ensayo. Papa, arroz, trigo, etc. Agua destilada.
Procedimiento: Rotular con nmeros los tres tubos de ensayo. Agregar al Tubo 1: 4 ml de agua destilada + tres gotas de solucin de Lugol. Al Tubo 2 incorporar 4 ml de suspensin de almidn al 10% + tres gotas de Lugol. En el Tubo 3 poner 4 ml de agua destilada + cantidad necesaria de arroz, trigo o raspado de papa + tres gotas de Lugol. 5. Agitar los tres tubos durante unos segundos. 6. Observar, dibujar e interpretar los resultados. Las molculas de yodo se intercalan en los bucles de la hlice de amilosa formando un complejo de color azul-violceo. Con los resultados observados, elabore un informe sinttico detallando las sustancias detectadas, los reactivos utilizados y las caractersticas de la reaccin. 1. 2. 3. 4.
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Deteccin de ADN Los cidos nucleicos son macromolculas de gran importancia biolgica, debido a que contienen la informacin para codificar la sntesis de protenas. Todos los organismos vivos contienen cidos nucleicos en forma de cido desoxirribonucleico (ADN) y cido ribonucleico (ARN); algunos virus contienen solo ADN y otros solo ARN. Los cidos nucleicos resultan de la polimerizacin de nucletidos. Los nucletidos son las unidades estructurales de los cidos nucleicos y estn formado por tres subunidades: una base nitrogenada ligada a un azcar (pentosa), que se combina a su vez con una molcula de cido fosfrico. Las pentosas pueden ser la ribosa en el ARN o la desoxirribosa en el ADN. Las bases nitrogenadas son molculas cclicas y estn formadas por carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno. Existen dos tipos de bases nitrogenadas, las pirimdicas que se llaman citosina, timina y uracilo; y las pricas que son la adenina y la guanina. Las bases pirimdicas estn formadas por una sola molcula cclica, mientras que las pricas tienen dos anillos fusionados en su molcula. Las bases pricas se encuentran en todos los cidos nucleicos, en cambio la timina se halla solo en el ADN y el uracilo solo en el ARN, salvo contadas excepciones. Los nucletidos se unen entre s formando enlaces entre el fosfato de uno y la pentosa del siguiente, formando largos polmeros que estn integrados solo por ribonucleicos en el ARN o desoxirribonucleicos en el ADN. Las funciones de ambos tipos de cidos nucleicos estn vinculadas a la codificacin de la informacin gentica y la sntesis de protenas. Materiales: Portaobjetos y cubreobjetos 2 Pinzas de diseccin Papel secante 1 Aguja histolgica Elementos de dibujo
Procedimiento: 1. Colocar las races previamente pretratadas y fijadas en un tubo de ensayo con cido clorhdrico 1N. 2. Incubar en bao mara a 60C durante 8 minutos. 3. Pasar las races a otro tubo de ensayo que contenga reactivo de Schiff. 4. Inmediatamente despus, colocar el tubo en cmara oscura durante unos 20 o 30 minutos. Luego de transcurrido ese lapso controlar las races y verificar si han tomado color. 5. Una vez realizada la tcnica de Feulgen se podr observar coloreada en color violeta la zona de activo crecimiento de la raz. 6. Colocar las races bajo la lupa e ilustrar detalladamente lo observado. 7. Bajo la lupa, en primer lugar se deber retirar la cofia de la raz (que cubre la regin meristemtica). 8. Posteriormente se debe cortar una solamente la parte coloreada que corresponde al pice de la raz (unos 2 o 3 mm). 9. Una vez cortado el extremo se debe colocar sobre un portaobjetos y agregarle una gota de orcena actica o cido actico. 10. Macerar suavemente la regin meristemtica utilizando una varilla de vidrio o la parte posterior de una aguja histolgica. 11. Por ltimo colocar el cubreobjetos y realizar el aplastado o squash. 12. Observar en el microscopio el aspecto de las clulas y esquematizar una que se encuentre en divisin. 19
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Es importante tener cuidado con el reactivo de Schiff porque colorea todo tipo de elemento, por ello se debe utilizar una pinza especfica para cada caso. La hidrlisis cida extrae las purinas a nivel de la unin desoxirribosa purina del ADN y de esa manera libera los grupos aldehdos de la desoxirribosa. Los grupos aldehdos libres reaccionan con el reactivo de Schiff. Cuando se aplica a la clula, la reaccin es positiva en el ncleo y negativa en el citoplasma. El nuclolo es Feulgen negativo. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1987. Invitacin a la Biologa. Ed. Mdica Panamericana, Mxico. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1993. Biologa. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 3 ELECTROFORESIS La electroforesis es una tcnica de separacin o resolucin de molculas de una mezcla por aplicacin de un campo elctrico. Constituye uno de los mtodos ms aplicados en Biologa Celular cuando se necesita separar, aislar y/o identificar componentes subcelulares o macromolculas. En la electroforesis, la separacin aprovecha una caracterstica de la mayora de los compuestos biolgicos: la de poseer carga elctrica. Por lo tanto, colocados bajo la influencia de un campo elctrico de corriente continua, esos compuestos son capaces de desplazarse en forma caracterstica sobre un soporte mantenido en condiciones definidas. Las molculas disueltas se desplazan o migran a una velocidad determinada por la relacin entre sus cargas. Por ejemplo, si dos molculas tienen masa y formas iguales, la de mayor carga neta se desplazar con mayor velocidad hacia un electrodo. La separacin de molculas pequeas como los aminocidos y los nucletidos, es una de las muchas aplicaciones de la electroforesis. En este caso se deposita una pequea gota de muestra sobre una tira de papel de filtro u otra sustancia porosa, que luego es embebida en una solucin conductora. Cuando se aplica un campo elctrico sobre los extremos de la tira, las molculas pequeas disueltas en la solucin conductora se desplazan a lo largo de la tira, en correspondencia con la magnitud de su carga. As, las molculas biolgicas pueden ser separadas y caracterizadas segn la velocidad con que se mueven y esta propiedad puede ser utilizada para aislar cidos nucleicos, alcaloides, protenas, etc. de una mezcla compleja, determinar el PM, identificar molculas similares con diferente carga neta, determinar la pureza de una fraccin molecular, aislar diferentes compuestos, etc. Existen varios sistemas electroforticos, aunque el ms usado es la llamada electroforesis zonal. En este sistema la muestra es sembrada en un soporte semislido (papel) o gelatinoso (almidn, agar, poliacrilamida) que, al someterse a un campo elctrico, permite que las molculas migren a travs de ellos. Objetivos: Comprender los fundamentos de las tcnicas electroforticas.
Actividades: 1. Observar la fotografa de la corrida electrofortica y determinar las bandas proteicas en la muestra. 2. Medir las distancias relativas de migracin (Rf) de cada una de las muestras y del marcador de peso molecular. 3. A partir de los datos obtenidos, calcular el peso molecular de la muestra. Rf (muestra) yo * Rf a - yo * Rf PM
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4. Contestar las siguientes preguntas: a- Cules son las aplicaciones de la cromatografa y la electroforesis? b- Qu tcnicas de separacin de componentes celulares se conocen? Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. Acquaah, G. 1992. Practical protein electrophoresis for genetic research. Dioscorides Press, Oregon. Avers, C. J. 1991. Biologa Celular. Ed. Iberoamrica, Mxico. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Lehningher, A., D.L. Nelson & M. Cox. 1995. Principios de Bioqumica. 2 ed. Ed. Omega. Barcelona. Lodish, H., A. Berk, S.L Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 ed. Ed. Panamericana. Espaa. Puertas, M. J. 1992. Gentica: fundamentos y perspectivas. 1 edicin. Ed. McGraw - Hill Interamericana, Madrid.
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Trabajo Prctico N 4 CLULA La teora celular fue formulada a principios del siglo XIX antes de la presentacin de la teora de la evolucin de Darwin, pero estas dos grandes teoras estn estrechamente vinculadas. Las similitudes entre las clulas nos permiten hacer una rpida mirada a la historia evolutiva que vincula a los organismos actuales con las primeras clulas que se originaron hace 3500 m.a. La teora celular se ha modificando a lo largo del tiempo y se han agregado o modificado algunos puntos. La teora actual considera que: la clula constituye la unidad estructural y funcional de todos los seres vivos las propiedades de un organismo dependen de las propiedades individuales de sus clulas las clulas se originan nicamente a partir de otras clulas preexistentes por medio de divisin celular la unidad ms pequea de vida es la clula La teora celular es de una importancia enorme para la biologa porque hace nfasis en la similitud de los sistemas vivos y por lo tanto brinda la base para unificar una gran variedad de estudios que implican a muchas clases de organismos diferentes. Objetivos: Asimilar el concepto de clula como unidad estructural y funcional de los seres vivos. Reconocer las diferencias entre clulas procariotas y eucariotas. Distinguir las caractersticas especiales de las clulas. Relacionar las estructuras observadas con la funcin que cumplen.
Materiales: Portaobjetos y Cubreobjetos Pinzas y Agujas Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.) Observaciones: Para la observacin de clulas procariotas se analizarn las bacterias presentes en el yogur, para ello se deber colocar una gota de yogur en un portaobjetos y se colocar una gota de agua. Luego de ello, se observar a distintos aumentos. El reconocimiento de clulas eucariotas se realizar a partir de preparaciones provistas por la ctedra y otras realizadas por los alumnos. Para la realizacin de preparados se requerir de cebolla (bulbo), hojas de Elodea sp. o Vallisneria sp. Para la observacin se deber desprender una porcin del material y colocar con una gota de agua, sobre el portaobjetos, luego se coloca el cubreobjetos. Una vez realizada la muestra se lleva al microscopio y observa en distintos aumentos. En ambos casos se deber esquematizar las clulas y tejidos. Actividades: 1. Esquematizar los diferentes tipos de clulas observadas durante el trabajo prctico e indicar las semejanzas y diferencias que pueden apreciarse. 2. Hacer un cuadro comparativo con las diferencias entre clulas procariotas y eucariotas. 3. Resumir los postulados de la teora celular indicando los autores de la misma. 23
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Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1993. Biologa. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 5 MEMBRANA PLASMTICA Las clulas tienen una composicin qumica diferente al medio que la rodea y dicha diferencia es mantenida durante toda la vida por la membrana plasmtica o celular, que es la encargada de regular el intercambio de iones y molculas entre la clula y el medio extracelular. Debido a ello la comprensin de la estructura y funcionamiento de la membrana plasmtica resultan fundamentales para la comprensin de la mayora de las actividades celulares. Objetivos: Reconocer las partes constitutivas de la membrana plasmtica. Asimilar el concepto de Modelo de Mosaico Fluido.
Actividades: 1. Completar con referencias el esquema de la membrana plasmtica de acuerdo al modelo actual e indicar los diferentes componentes que puede presentar.
2. La unidad estructural de las membranas biolgicas son los lpidos, de los cuales los ms abundantes son los fosfolpidos. Hacer un esquema representando la estructura de un fosfolpido tpico, indicando sus componentes mediante flechas. 3. Segn el modelo del mosaico fluido, los lpidos constituyen la unidad estructural de la membrana, pero la unidad funcional son las protenas. Describir las propiedades de los tres tipos diferentes de protenas de membrana, indicando las diferencias y similitudes de unas con otras.
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Bibliografa: ALBERTS, B., D. BRAY, J. LEWIS, M. RAFF, K. ROBERTS & J. D. WATSON. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. DE ROBERTIS, E.M.F., J. HIB & R. PONZIO. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. LODISH, H., A. BERK, S. L. ZIPURSKY, D. BALTIMORE & J. DARNELL. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. VILLEE, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 6 TRANSPORTE DE MEMBRANA Como resultado de las diferencias en la concentracin de solutos a ambos lados de la membrana plasmtica, el agua tiende a entrar o a salir de la clula por smosis. Si el medio extracelular tiene una concentracin ms alta de sales, o sea es hiperosmtico o hipertnico, el agua tiende a salir de la clula y por lo tanto el volumen celular disminuye. Por el contrario, si el medio extracelular tiene una concentracin menor de sales, es hiposmtico o hipotnico con respecto al citoplasma y el agua tiende a ingresar a la clula. Cuando el medio extracelular posee la misma concentracin de sales que el citoplasma, los compartimentos son isosmticos o isotnicos y no se modifica el volumen de la clula. Objetivos: Asimilar los distintos mecanismos de transporte a travs de la membrana plasmtica Comprender la naturaleza dinmica de la membrana.
Observaciones: Con ayuda de un bistur cortar un fragmento pequeo de hoja de la planta acutica Vallisneria sp. (Hydrocharitaceae). Colocar en el portaobjetos, agregar una gota de agua y poner el cubreobjetos. Observar en el microscopio e ilustrar las clulas, poniendo especial atencin al volumen celular. Por otro lado, sumergir unos minutos las hojas de Vallisneria sp. en una solucin salina. Posteriormente realizar el paso 2 y 3 descriptos anteriormente.
Actividades: Una vez realizadas las observaciones y los dibujos correspondientes, conteste las siguientes preguntas: 1. Qu sustancia/s han atravesado la membrana plasmtica? 2. Cmo es el medio extracelular en ambos casos? es hipertnico, hipotnico o isotnico con respecto al citoplasma? 3. Las sustancias transportadas se movilizaron a favor o en contra de su gradiente de concentracin? 4. Analizar las caractersticas de los distintos mecanismos de transporte a travs de la membrana plasmtica (difusin simple, difusin facilitada, smosis, transporte activo) y realizar un cuadro comparativo indicando las particularidades de cada uno en cuanto a consumo de energa, gradiente de concentracin y las molculas involucradas en el transporte. 5. Hacer un cuadro con los diferentes tipos de bombas o ATPasa, sealando su estructura, sustancia que transportan y localizacin ms frecuente. 6. Una solucin es hipertnica respecto a otra cuando posee:
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a) b) c) d) 7
Menor concentracin de soluto. Mayor concentracin de soluto. Igual concentracin de soluto. Mayor demanda de soluto.
Una clula vegetal colocada en un medio cuya concentracin de solutos es menor que la de la clula:
a) b) c) d) e) 8
Se plasmoliza. Aumenta su presin de turgencia. Pierde sus solutos por difusin. Activa su sistema de vacuolas contrctiles. No experimenta ningn cambio.
Indique que ocurrir respecto al movimiento de solutos y agua, si: a) b) c) d) e) f) g) Se somete a un glbulo rojo a una solucin hipertnica. Se somete a un glbulo rojo a una solucin isotnica. Se somete a un glbulo rojo a una solucin hipotnica. Se somete a un glbulo rojo a una solucin muy hipotnica. Se coloca a un alga marina en agua destilada. Se sumerge una planta de Vallisneria sp. en una solucin salina hipertnica. Se coloca una planta de Vallisneria sp. en una solucin hipotnica.
Un recipiente se halla dividido por una membrana semipermeable delimitando dos compartimentos: A y B. En A se coloca una solucin de glucosa 3 M y se le agrega almidn, que conforma una suspensin. En B se coloca agua destilada. Indique qu cambios espera observar en cuanto al movimiento de solutos y de solvente, y los cambios esperables en la variacin de volmenes de solvente en ambos compartimentos.
Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
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Trabajo Prctico N 7 CITOESQUELETO El citoesqueleto es un sistema citoplasmtico de fibras, esencial para la movilidad y estructura celular. Est constituido por tres tipos de fibras citoslicas: microfilamentos (filamentos de actina), filamentos intermedios y microtbulos. Estas fibras citoesquelticas estn compuestas por polmeros bien ordenados, construidos a partir de pequeas subunidades proteicas que se mantienen unidas mediante enlaces no covalentes. El citoesqueleto no es una estructura esttica, sino que est sometido a reordenamientos constantes, capaces de producir movimientos. Desempea un papel estructural importante, al sostener la membrana plasmtica y formar carriles a lo largo de los cuales se pueden desplazar las organelas y otros elementos del citosol. As, el citoesqueleto interviene en el mantenimiento de la forma celular, la movilidad celular y los cambios coloidales que experimenta el citoplasma. Objetivos: Analizar los distintos componentes del citoesqueleto. Comprender las funciones de los diferentes elementos del esqueleto celular. Reconocer los mecanismos bsicos de movimiento de las clulas. Observacin de elementos del citoesqueleto en microscopio ptico Actividades: Para el presente prctico se observarn preparados permanentes y realizarn preparaciones para microscopio ptico a los efectos de observar diferentes elementos del citoesqueleto. Los materiales a observar en cada caso, se detallan a continuacin: 1. Colocar una gota de agua de charco sobre un portaobjetos y colocar el cubreobjetos. Observar detenidamente el preparado hasta hallar algn organismo ciliado o flagelado. Esquematizar y colocar las referencias pertinentes. 2. Observar los preparados de espermatozoides de Mamferos provistos por la ctedra. Analizar la preparacin y esquematizar detalladamente los flagelos. 3. Observar preparados permanentes de corte transversal de trquea. Esquematizar las clulas ciliadas. 4. Observar clulas en divisin mittica de Allium cepa con y sin pretratamiento. Analizar y esquematizar las clulas. Observacin de elementos del citoesqueleto en microfotografas electrnicas Actividades: En la presente clase se observarn microfotografas electrnicas de distintos organelos y de componentes del citoesqueleto. En las mismas se deber identificar el componente del citoesqueleto de que se trata e indicar las diferentes partes que lo componen. 29
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5. Microfotografa electrnica de un corte transversal de la cola de un espermatozoide humano.
6. Microfotografa electrnica de cilios, en cortes longitudinal y transversal y del cuerpo basal
7. Centrolo
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Contestar el siguiente cuestionario: 1. En qu fases del ciclo celular encontramos mayor cantidad de tubulina polimerizada? 2. En qu etapa de la divisin de una clula animal, y de qu manera, se organiza el huso mittico? Compare con lo que ocurre en clulas vegetales. 3. Qu funcin de la actividad celular se vera alterada por la accin de la colchicina? 4. Seale las principales diferencias estructurales y funcionales entre un cilio y un flagelo. Menciones ejemplos de tipos celulares donde se encuentran. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1994. Biologa molecular de la clula. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona, Espaa. Avers, C. J. 1991. Biologa Celular. Ed. Iberoamrica, Mxico. Cooper, G. M. 2002. La Clula. 2 Edicin. Ed. Marbn, Espaa. De Robertis, M. F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Lodish, H., A. Berk, S.L Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 ed. Ed. Panamericana. Espaa.
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Trabajo Prctico N 8 ORGANELOS CITOPLASMATICOS La mayor parte de las clulas eucariotas contienen abundantes membranas internas que cierran compartimentos especficos, las organelas, y los separa del resto del citoplasma, la regin de la clula que est por fuera del ncleo. Casi todas las organelas estn rodeadas por una nica membrana fosfolipdica, pero varias de ellas, entre ellas el ncleo, estn encerradas por dos membranas. Cada tipo de organela desempea una funcin singular en el crecimiento y metabolismo de la clula, y cada una contiene un conjunto de enzimas especficas que catalizan las reacciones qumicas requeridas. Las membranas que definen estos compartimentos subcelulares controlan su composicin inica interna, de manera que estas suelen ser diferente a la del citosol y a las otras organelas. Objetivos: Conocer la morfologa de los organelos membranosos presentes en eucariotas. Relacionar la morfologa con la fisiologa de dichos organelos. el tipo de clula en que se encuentran presentes. Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.). Pinzas de diseccin Portaobjetos y cubreobjetos. Gotero Hoja de afeitar o bistur
Actividades: Durante la clase prctica se efectuar la observacin de diferentes tipos de organelos citoplasmticos. Pare ello se realizarn preparaciones para microscopio ptico que sern examinadas detenidamente. En todos los casos se debern esquematizar las clulas con cada organelo observado indicando sus respectivas referencias. Una vez finalizado el trabajo prctico, se debern entregar los dibujos realizados. 1. Cloroplastos La observacin de cloroplastos se efectuar en hojas de Vallisneria, para lo cual se deber seguir procedimiento que se detalla a continuacin: 1. Tomar una hoja de la planta y cortarla mediante un bistur. 2. Colocar el fragmento sobre un portaobjetos. 3. Agregar una gota de agua y colocar encima un cubreobjetos. 4. Observar en el microscopio, primero con el menor aumento y luego pasar a 40x. 5. Examinar detenidamente, esquematizar las clulas con cada organelo e indicar las respectivas referencias. En las clulas se podr observar, la pared celular, los cloroplastos, que rodea la zona de las vacuolas. El ncleo no se observa con facilidad debido a su transparencia y a la abundancia de cloroplastos que lo enmascaran. 2. Ncleo y nuclolo Para la visualizacin de ncleos y nuclolos se emplearn clulas de la epidermis 32
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interna de la tnica reservante de Allium cepa (Liliaceae) o sea la cebolla. El procedimiento a realizar es el siguiente: 1. Tomar un trozo de tnica reservante con una pinza de puntas finas y arrancar de la cara cncava una parte de la epidermis. 2. Colocar la epidermis sobre un portaobjetos. 3. Agregar una gota de safranina. 4. Colocar el cubreobjetos y observar en el microscopio. 5. Examinar detenidamente, esquematizar las clulas con cada organelo e indicar las respectivas referencias. Con menor aumento podr observar la forma de las clulas, con mayor aumento podr ver el ncleo coloreado de rojo y uno o ms nuclolos. En el citoplasma podr observar inclusiones lipdicas, que se presentan como grnulos refringentes. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1994. Biologa molecular de la clula. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona, Espaa. Cooper, G. M. 2002. La Clula. 2 Edicin. Ed. Marbn, Espaa. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Lodish, H., A. Berk, S.L Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 ed. Ed. Panamericana. Espaa.
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Trabajo Prctico N 9 ESTRUCTURA DE ORGANELOS MEMBRANOSOS La clula eucaritica tiene un alto grado de organizacin estructural. Una vasta red membranosa de tbulos, vesculas y sacos aplanados subdivide al citoplasma en dos compartimentos fundamentales: uno comprendido dentro de las membranas y el otro situado por fuera de ellas (matriz citoplasmtica o citosol). Las membranas internas proporcionan a las clulas un soporte para la localizacin ordenada de mltiples sistemas enzimticos diferentes y de subcompartimientos funcionales cerrados (organelas), cada uno de ellos con estructura, dotacin enzimtica y propiedades funcionales que lo caracterizan, tales como: a) separacin y asociacin de sistemas enzimticos, b) digestin intracelular de sustancias, c) distribucin de las diferentes protenas hacia sus destinos finales, d) regulacin de potenciales de membrana de gradientes inicos y de diferentes valores de pH intracelular, etc. Objetivos: Entender las funciones de los organelos citoplasmticos membranosos y no membranosos. Conocer la estructura de los diferentes organelos. Relacionar la morfologa y fisiologa de dichos organelos con el tipo de clula en que se encuentran presentes. Actividades: 1. Se debern observar detenidamente las ilustraciones y fotografas que se encuentran a continuacin. 2. En cada caso se deber indicar el organelo citoplasmtico de que se trata. 3. Posteriormente se colocarn las respectivas referencias. 4. Describir la funcin de cada uno de los organelos dentro de la clula. a-
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Cuestionario: 1. Cules son los organelos membranosos que puede tener una clula eucariota?. 2. Qu organelos no forman parte del sistema de endomembranas? Qu actividades desempean dichos organelos?. 3. Las mitocondrias, cloroplastos y peroxisomas estn rodeados por membrana Por qu no se los considera parte del sistema de endomembranas?. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Esau, K.1982. Anatoma de las plantas con semillas. Ed. Hemisferio Sur S. A. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. Selosse, M. A. & S. Loiseaux-de Gor. 1997. La saga de la endosimbiosis. Mundo Cientfico 179: 436-441. Strasburger, E., 1986. Tratado de Botnica.8va. ed. Ed. Omega S. A. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico: N 10 CLULA VEGETAL I Una de las caractersticas ms sobresalientes de las clulas vegetales es la presencia de una pared celular, la cual tiene diversas funciones. La pared celular protege los contenidos de la clula, da rigidez a la estructura celular, provee un medio poroso para la circulacin y distribucin de agua, minerales, y otras pequeas molculas nutrientes; adems de contener molculas especializadas que regulan el crecimiento de la planta y la protegen de las enfermedades. De afuera hacia dentro de la clula presenta varias capas que se desarrollan con la maduracin celular: la laminilla media, la pared primaria y la pared secundaria. En la pared primaria es dominante la matriz amorfa, formada por hemicelulosas y polisacridos no celulsicos. En la pared secundaria domina la fase fibrilar (celulosa, 60%) y la matriz amorfa est formada por hemicelulosas y lignina (30%). Las comunicaciones intercelulares como los plasmodesmos, puntuaciones y perforaciones permiten que los protoplastos de las clulas vegetales puedan intercambiar material y funcionar de forma armnica. Los plasmodesmos son conexiones citoplasmticas que atraviesan la pared celular entre clulas contiguas. Estos plasmodesmos comnmente estn agrupados en zonas adelgazadas, deprimidas de las paredes primarias, constituyendo un campo primario de puntuacin o puntuacin primordial. En el lmite del campo primario de puntuacin, las microfibrillas se disponen paralelamente, formando un crculo u valo. Las puntuaciones son discontinuidades en la deposicin de la pared secundaria a nivel de un campo primario de puntuacin, aunque tambin pueden diferenciarse en zonas donde no haba campos primarios. Se distinguen dos tipos principales de puntuaciones, las simples donde la pared secundaria se interrumpe abruptamente y se presenta en clulas parenquimticas, fibras y esclereidas; y las areoladas o rebordeadas que son aquellas en las que la pared secundaria, al depositarse, hace un reborde o arola formando la cmara de la puntuacin que se abre al lumen celular a travs de la abertura de la puntuacin; este ltimo se presenta principalmente en fibrotraqueidas y elementos conductores del xilema. En las perforaciones hay una interrupcin de la pared primaria y laminilla media, adems de la discontinuidad de pared secundaria y se presenta en clulas de los tejidos de conduccin, en los vasos del xilema, donde constituyen las placas de perforacin. Objetivos: Reconocer la clula como unidad estructural de los tejidos vegetales. Identificar las partes constitutivas de la pared celular. Reconocer los tipos de comunicaciones intercelulares a travs de la pared celular.
Actividades: 1. Observar, analizar y dibujar: a) Puntuaciones simples y ramificadas en esclereidas (braquiesclereidas) a partir de extendido de parnquima de fruto de pera (Pyrus communis). b) Puntuaciones areoladas en corte longitudinal o tangencial de rama joven de pino (Pinus sp.). c) Perforaciones en corte tangencial o radial de tallo de fresno (Fraxinus sp.). 2. Colocar las referencias: 36
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a)- Porcin de pared entre dos clulas
b)- Plasmodesmos
c) Puntuaciones
c) Perforaciones
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Bibliografa: Cortes, F. 1980. Histologa Vegetal Bsica. 1 edicin. Ed. Blume, Madrid. De Robertis, M. F., J Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. 12 edicin. Ed . El Ateneo, Buenos Aires. Esau, K. 1976. Anatoma Vegetal. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Raven, P. H., Evert, R. F. & Einchhorn, S. E. 1992. Biologa de las Plantas. Ed. Revert S.A., Barcelona. Strasburger, E., Noll, F. Schench, H. & Schimper, A. F. W. 1994. Tratado de Botnica. 2 ed. Ed. Omega.
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Trabajo Prctico: N 11 CLULA VEGETAL II La clula vegetal est formada tpicamente de una pared celular ms o menos rgida y un protoplasto. El protoplasto o protoplasma contiene al citoplasma y el ncleo. El citoplasma incluye distintas entidades u orgnulos y sistemas membranas. Adems incluye a la matriz citoplasmtica o citosol que es una masa coloidal qumicamente muy compleja donde se hallan inmersos los orgnulos y el sistema de membranas. La matriz citoplasmtica est frecuentemente en movimiento, fenmeno que se denomina flujo citoplasmtico o ciclosis. Las clulas vegetales se caracterizan por poseer dentro de su citoplasma una o ms cavidades llenas de lquido denominadas vacuolas, que pueden ocupan casi todo el interior de la clula. Esta vacuola est delimitada por una membrana llamada tonoplasto. El contenido de la vacuola es el jugo celular y est constituido por agua y una variedad de compuestos orgnicos e inorgnicos, de reserva (como azcares y protenas); de desecho (como cristales y taninos); venenos (alcaloides y determinados glucsidos); pigmentos hidrosolubles como antocianos (rojo, violeta, azul), etc. Las vacuolas son importantes porque dan rigidez tisular, degradan de macromolculas y reciclan sus componentes dentro de la clula. Tambin actan como lisosomas, orgnulos digestivos capaces de descomponer y reciclar los componentes de orgnulos innecesarios. Las sustancias ergsticas son productos del metabolismo celular, de reserva o de desecho, que se acumulan en la pared celular, en las vacuolas o en plstidos. Ejemplos de sustancias ergsticas constituyen los granos de almidn (amiloplastos), cristales (vacuolas), pigmentos antocianicos, gotas de aceites, resinas, gomas, etc. Entre los cristales los ms conocidos son los de oxalato de calcio y de carbonato de calcio. Los cristales de oxalato de calcio tienen forma de arena cristalina, de agujas (rafidios), de columnas (estiloides), prismticas (drusas). Los cristales de carbonato de Ca generalmente estn asociados con las paredes celulares formando cistolitos, sobre un pednculo celulsico silicificado. Junto con las vacuolas y la pared celular, los plastos son un componente caracterstico de las clulas vegetales. Los plastos estn rodeados por una envoltura formada por dos unidades de membrana y se clasifican segn los tipos de pigmentos que contiene. Pueden ser con pigmentos: como los cloroplastos, gerontoplastos y cromoplastos; y los sin pigmentos como los leucoplastos. Los leucoplastos son plstidos no coloreados que muchas veces almacenan ciertos productos vegetales: almidn (amiloplastos), protenas (proteinoplastos) y grasas (elaioplastos u oleoplastos). Se hallan en rganos incoloros o no expuestos a la luz.
Objetivos: Reconocer la clula como unidad estructural de los tejidos vegetales. Identificar las partes constitutivas y los orgnulos que componen la clula vegetal. Reconocer las estructuras en que se acumulan sustancias ergsticas en la clula vegetal. Diferenciar los diferentes tipos de plastos que se conocen en el Reino Vegetal. Actividades: 1. Observar, analizar y dibujar las siguientes estructuras: a) Drusas y rafidios en corte transversal de pecolo de sandalia de pescador (Philodendron sp.) 39
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b) Idioblatos con cistolito de Carbonato de Calcio en corte transversal de hojas de gomero (Ficus elastica) c) Cloroplastos en hojas de Vallisneria sp. d) Cromoplastos en corte transversal de pericarpio de pimiento (Capsicum annuun) e) Amiloplatos en extendidos de tubrculo de papa (Solanum tuberosum)
2. Responder el siguiente cuestionario: a) Realice un esquema de un cloroplasto indicando sus membranas y compartimientos. b) Qu caractersticas de la estructura del cloroplasto son especialmente importantes para la fotosntesis? c) Indique las mltiples funciones de una vacuola. Bibliografa: Cortes, F. 1980. Histologa Vegetal Bsica. 1 edicin. Ed. Blume, Madrid. Esau, K. 1976. Anatoma Vegetal. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona. Karp, G. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed McGraw-Hill Interamericana, Mxico. Raven, P. H., Evert, R. F. & Einchhorn, S. E. 1992. Biologa de las Plantas. Ed. Revert S.A., Barcelona. Strasburger, E., Noll, F. Schench, H. & Schimper, A. F. W. 1994. Tratado de Botnica. 2 ed. Ed. Omega.
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Trabajo Prctico N 12 ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LOS CROMOSOMAS El trmino cromosoma (del griego chromo = color y soma = cuerpo) es utilizado para referirse a los filamentos del ncleo que se tien con colorantes bsicos y que son los portadores de los genes. Actualmente se lo define como una molcula de ADN asociado a protenas, que porta informacin gentica dispuesta en secuencia lineal. En el caso de los procariotas solamente hay un cromosoma circular, mientras que en los eucariotas hay varios cromosomas lineales, cada uno compuesto siempre por una sola cadena de ADN. Antes de la divisin celular cada cromosoma eucaritico se encuentra formado por dos cromtidas hermanas genticamente idnticas ya que una es la copa exacta de la otra. Cada cromtida se encuentra formada por una nica hebra de ADN que se extiende desde un extremo a otro del cromosoma. Cada uno de estos extremos se denomina telmero. El punto en que se encuentran unidas las dos cromtidas hermanas es la constriccin primaria o centrmero. El centrmero contiene una regin especial llamada cinetocoro que es la que se une a las fibras del huso acromtico durante la divisin celular. Algunos cromosomas suelen presentar una constriccin secundaria tambin llamada regin organizadora de nucleolos (NOR) debido a que es donde se encuentran los genes que sintetizan el ARNr. La posicin de la constriccin secundaria determina la existencia de un satlite que es la parte distal del brazo que lleva la constriccin secundaria. El centrmero divide al cromosoma en dos brazos cromosmicos y determina la forma del cromosoma. Objetivos: Comprender la estructura de los cromosomas. Conocer las diferentes formas de cromosomas. Materiales: Lpiz negro y goma Hojas blancas Actividades: Se proveer a los alumnos de preparados permanentes de cromosomas mitticos de diferentes organismos. A partir de los mismos, debern realizar las siguientes actividades: 1. Determinar el nmero de cromosomas caracterstico de la especie analizada. 2. Esquematizar una metafase mittica de cada preparado observado. 3. Segn la morfologa de los cromosomas, determinar los distintos tipos que presenta cada especie. Bibliografa: Gardner, E.J., M.J. Simmons & D.P. Snustad. 1998. Principios de Gentica. 4. ed. Ed. Limusa Wiley. Mxico. Lacadena, J.R. 1988. Gentica. 4 edicin. Ed. Agesa, Madrid. Strickberger, M.W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona. 41
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Trabajo Prctico N 13 CARIOTIPO La representacin grfica o fotogrfica de los cromosomas somticos caractersticos de una especie determinada se conoce como cariotipo. A travs de este se puede establecer el nmero, tamao y forma de los cromosomas, e identificar los miembros de cada par de cromosomas homlogos. Muchas especies poseen cromosomas bastante semejantes en su morfologa, por lo que se utilizan tcnicas de bandeo cromosmico para posibilitar la distincin de los cromosomas del mismo tamao e identificar los homlogos. El cariotipo se determina a partir de los cromosomas que estn en metafase mittica, cada uno de los cuales est formado por dos cromtidas hermanas unidas a la altura de sus centrmeros. El conocimiento del cariotipo de una especie posibilita la deteccin de ciertas enfermedades genticas que son causadas por anormalidades en el nmero o en la estructura de los cromosomas. Objetivos: Comprender la importancia del cariotipo. Conocer los pasos para la realizacin de un cariotipo. Actividades: Se proveer a los alumnos de fotografas de clulas vegetales en metafase mittica, a partir de las cuales se confeccionar el cariotipo. El primer lugar se les deber asignar un nmero arbitrario a cada cromosoma y se medir el brazo corto y el largo total de cada uno, calculando el correspondiente ndice centromrico (brazo corto x 100 / largo total del cromosoma). Luego se formarn los pares de cromosomas de acuerdo a los parmetros obtenidos anteriormente; se recortar cada cromosoma y de construir el cariotipo. Para ello se colocarn en primer trmino los cromosomas m, luego los sm, los st, los ac y por ltimo los t. Dentro de cada grupo, sern ordenados de acuerdo a su tamao, en forma decreciente (de mayor a menor). Una vez finalizado el trabajo prctico se deber entregar los cariogramas realizados, incluyendo las medidas de los pares de cromosomas de cada especie y las respuestas de las preguntas que se detallan a continuacin. 1. Qu se representa a travs del cariotipo? 2. Indique los pasos para la realizacin de un cariotipo. 3. En qu etapa de la mitosis se encuentran los cromosomas observados en el cariotipo y como se los observa? Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. Curtis, H. & N. S. Barnes. 1993. Biologa. 5 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Lacadena, J. R. 1988. Gentica. Ed. Agesa, Madrid. 42
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Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. Strickberger, M.W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 14 MITOSIS Los organismos pluricelulares forman su cuerpo mediante divisiones celulares sucesivas, a partir de una sola clula original, el cigoto, el cual porta dos dotaciones cromosmicas, una derivada del padre y otra de la madre. El fenmeno de la divisin celular es denominado mitosis y se la divide convencionalmente en cuatro fases diferentes, aunque los acontecimientos que se suceden ocurren en forma continua. Las etapas se denominan: profase, metafase, anafase y telofase. Durante la mitosis ocurren una serie de cambios caractersticos dentro de la clula y especialmente en los cromosomas. Estos comienzan a contraerse por condensacin de la cromatina, hasta llegar a individualizarse (profase a metafase), luego se ordenan en la placa ecuatorial (metafase), separan sus cromtidas y migran a polos opuestos (anafase); por ltimo se reconstituye la membrana nuclear alrededor de cada polo (telofase). La clula finalmente se divide por invaginacin de la membrana citoplasmtica en el caso de los animales, o por formacin de un tabique en las clulas vegetales. Objetivos: Comprender el mecanismo de divisin celular. Distinguir las distintas fases de la mitosis. Interpretar el mecanismo de distribucin de los cromosomas durante la divisin mittica. Observar el efecto de las sustancias qumicas sobre la proliferacin celular. Establecer la duracin comparativa de las diferentes etapas de la mitosis. Determinar en forma indirecta la duracin del ciclo celular en el meristema radical de la especie estudiada.
Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.) Calculadora Observaciones: Se debern observar los preparados de mitosis provistos por la ctedra y diferenciar los distintos estadios de la mitosis. Se deber poner especial nfasis en los fenmenos que ocurren en cada fase de la divisin mittica. Una vez finalizado el trabajo prctico, se debern entregar los dibujos realizados, junto con las respuestas que se detallan a continuacin. Actividades: 1. Dibujar por separado cada estadio de la mitosis observado en el microscopio ptico. 2. Indicar cuantos cromosomas se pueden distinguir en el material estudiado. 3. En qu fase resulta ms fcil el recuento de los cromosomas? 4. Cuales son las diferencias entre los preparados con pretratamiento y sin pretratamiento? 5. Determinar la proporcin de clulas en interfase y en divisin celular y la proporcin de clulas en cada fase de la mitosis. Para ello, elegir al azar varios campos de la preparacin y contar entre 200 clulas la cantidad de stas que se encuentran en: interfase, profase, 44
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metafase, anafase y telofase. Con los datos obtenidos, se deber calcular el Indice Mittico (IM), que es la razn entre el nmero de clulas que se encuentran en divisin y el nmero total de clulas observadas, multiplicado por 100. IM = N cl. en divisin x 100 = N de cl. observadas 6 Tambin se deber calcular el Indice de Fases (IF), que es la razn entre la cantidad de clulas en cada fase y el nmero total de clulas en divisin, multiplicado por 100. IF = N cl. en una fase x 100 = N de cl. en divisin Una vez finalizado el trabajo prctico, se deben entregar todos los datos obtenidos y las respuestas que se detallan a continuacin. 7. Cul es el porcentaje de clulas que se encuentran en divisin en cada caso? 8. Cul es la fase ms frecuente? 9. Qu proporcin de clulas se observan en cada fase de la mitosis? Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Gardner, E. 1971. Principios de Gentica. Ed. Limusa-Wiley. Mxico. Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lacadena, J.R. 1988. Gentica. 4 edicin. Ed. Agesa, Madrid. Lacadena, J.R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense. Madrid. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires. Strickberger, M. W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona. Villee, C. A. 1996. Biologa. 8 Edicin. Ed. McGraw-Hill Interamericana, Mxico.
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Trabajo Prctico N 15 MEIOSIS La meiosis es un tipo especial de divisin celular que ocurre en los organismos superiores durante la formacin de las gametas. La palabra meiosis significa reduccin o disminucin, debido a que su funcin es la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad. En la meiosis ocurren una serie de fenmenos caractersticos y particulares: la disminucin del nmero cromosmico a la mitad, el apareamiento y recombinacin entre cromosomas homlogos y la distribucin al azar de los cromosomas a las clulas hijas. Objetivos: Reconocer las distintas fases de la divisin meitica. Observar el apareamiento de los cromosomas homlogos. Visualizar la forma que adoptan los cromosomas meiticos. Esquematizar todas las etapas de la divisin meitica.
Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.) Observaciones: Se realizar la observacin de preparados meiticos provistos por la ctedra y dibujarn la mayor cantidad posible de estadios diferentes de la meiosis. Se debern localizar y analizar detenidamente cada una de las etapas de la divisin meitica. Los eventos a observar en cada caso son los siguientes: Primera divisin:
Profase I Leptotene: los cromosomas aparecen como hilos independientes, delgados y con poca capacidad de tincin. Cigotene: los cromosomas homlogos comienzan a aparearse (sinapsis), formndose los bivalentes. Paquitene: los cromosomas homlogos terminan de aparearse y cada uno se hiende longitudinalmente, formando dos cromtidas hermanas, para cada par de cromosomas homlogos (bivalentes); hay cuatro cromtidas, conjunto que se llama ttrada. En ese momento se produce el intercambio de ADN entre cromtidas no hermanas de cromosomas homlogos, proceso llamado crossingover. Diplotene: los cromosomas toman formas espiraladas, se van acortando y aparecen los quiasmas o entrecruzamientos de las cromtidas en el lugar donde hubo crossingover. Cada cromosoma se separa de su homlogo, salvo donde se hallan los quiasmas, que comienzan a desplazarse hacia los extremos (terminalizacin). Diacinesis: los cromosomas se siguen acortando, y el nuclolo que se percibe en todos los pasos anteriores, casi ha desaparecido. Contina la terminalizacin de los quiasmas. Durante este perodo los cromosomas no tienen una ubicacin determinada en el ncleo. Metafase I: los cromosomas se ubican en el ecuador de la clula, aparece el huso acromtico y el nuclolo ha desaparecido. Anafase I: los cromosomas homlogos se separan, yendo a polos opuestos de la clula, se 46
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produce as la reduccin del nmero de cromosomas a la mitad. Telofase I: los cromosomas llegan a los polos.
Interfase: el huso desaparece, el nuclolo reaparece y quedan constituidos dos ncleos hijos que contienen un nmero n de cromosomas. Algunos lo llaman perodo de reposo, pero es en realidad un verdadero estado metablico debido a que las funciones celulares continan. Segunda divisin:
Profase II: las cromtidas de cada cromosoma aparecen unidas casi exclusivamente por el centrmero, observndose los cromosomas en forma de X. Metafase II: cada cromosoma se ubica en el ecuador de la clula. Anafase II: dividiendo el centrmero del cromosoma, cada una de las cromtidas se dirige a un polo. Telofase II: cada cromtida llega al polo correspondiente. En cada polo el nmero de cromosomas es igual a n, la mitad del que posea la clula somtica que le dio origen. Una vez finalizado el trabajo prctico, se debern entregar los dibujos de meiosis realizados, junto con las respuestas de las preguntas que se detallan a continuacin. Actividades: 1. Esquematizar cada una de las etapas de la meiosis observada. 2. Indicar cuantos bivalentes se observan durante diacinesis y metafase I en el material estudiado. 3. Calcular cuantas clulas y con cuantos cromosomas se obtendrn al final de la meiosis del material estudiado. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lacadena, J.R. 1988. Gentica. 4 edicin. Ed. Agesa, Madrid. Lacadena, J.R. 1996. Citogentica. 1 edicin. Ed. Complutense. Madrid. Strickberger, M.W. 1988. Gentica. 3 edicin. Ed. Omega, Barcelona.
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Trabajo Prctico N 16 GAMETOGNESIS En los animales la reproduccin ocurre mediante la formacin de gametos haploides que se unen en el proceso de fecundacin formando un cigoto diploide. El proceso de fecundacin puede ser externo o interno. En la fecundacin externa, como ocurre en los anfibios y peces, los gametos son liberados al exterior y all se ponen en contacto. En la fecundacin interna se produce la unin de los gametos dentro del tracto genital femenino. La fecundacin interna constituye una adaptacin a la vida terrestre presente en muchos animales, principalmente los vertebrados superiores. Tanto en la fecundacin externa como la interna, se distinguen dos tipos de gametos, el gameto masculino o espermatozoide que es mvil y de tamao pequeo, y el gameto femenino llamado vulo que tiene mayor tamao y es inmvil. La gametognesis es el proceso por el cual se producen los gametos masculinos y femeninos. La gametognesis incluye a la meiosis y la diferenciacin de las clulas resultantes en vulos y espermatozoides. Los vulos animales se caracterizan por acumular nutrientes para el posterior desarrollo del embrin, mientras que los espermatozoides generalmente desarrollan un flagelo que le permite moverse y fecundar al vulo. Objetivos: Reconocer las distintas fases de la gametognesis. Visualizar diferentes estados de la espermatognesis y ovognesis. Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpiz negro, goma, etc.) Actividades: 1. Se observarn los preparados provistos por la ctedra (cortes de ovarios y testculos) y dibujarn la mayor cantidad posible de estadios diferentes de la gametognesis. 2. Indicar en el siguiente diagrama los diferentes estados de la ovognesis y espermatognesis.
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Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
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Trabajo Prctico N 17 ACCIN GNICA: SNTESIS DE ARNr Adems de la constriccin primaria o centrmero, algunos cromosomas suelen presentar una constriccin secundaria conocida como Regin Organizadora Nucleolar (NOR). Mediante las tcnicas citolgicas convencionales, esta regin aparece como una zona heteropicntica negativa (sin teir) ubicada generalmente en posicin subterminal en el brazo del cromosoma, denominndose satlite a la parte distal del brazo. Por la presencia de dicho satlite, a los cromosomas que llevan la regin NOR se los denomina tambin cromosomas SAT o satelitados. En las regiones NOR se encuentran los genes que codifican el ARN ribosmico (ARNr), el cual formar parte de los ribosomas. Estos genes ribosmicos se hallan reunidos en clusters o grupos que contienen numerosas copias y forman la regin NOR. La cantidad de copias de los genes ribosmicos presentes en el genoma vara entre diferentes organismos. Por ejemplo en la bacteria Escherichia coli hay de 5 a 10 copias, en la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster hay unas 130 copias y en el anfibio Xenopus laevis alrededor de 400 o 500 copias por genoma haploide. Las regiones organizadoras de nuclolo, que portan los genes ribosmicos, pueden detectarse mediante la tincin con nitrato de plata (NO3Ag). Una particularidad importante de la tincin con plata o tincin argntica, es que solamente se tien los NORs que estuvieron activos durante la interfase anterior. Ello significa que, la tincin argntica puede ser usada para analizar la actividad gnica en las regiones organizadoras de nuclolo. Objetivos: Comprender las caractersticas y fundamentos de la tincin argntica. Identificar los genes que sintetizan el ARNr mediante la tincin argntica. Observar la estructura de los nucleolos. Materiales: Elementos para dibujar (hojas blancas, lpices, etc.) Actividades: En el desarrollo del trabajo prctico se observarn preparaciones de cromosomas en mitosis, teidas mediante la tcnica de impregnacin con nitrato de plata o tincin argntica. Se debern esquematizar clulas en interfase con el/los nucleolos y adems metafases en dnde se observen los cromosomas portadores de los genes ribosmicos o regiones NOR. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
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Trabajo Prctico N 18 CDIGO GENTICO Las reacciones que ocurren en los organismos vivos estn siempre mediadas por enzimas, las cuales son protenas. Una protena es un polmero de subunidades menores (monmeros) llamados aminocidos. Cada enzima consiste de un determinado nmero de aminocidos, unidos en una secuencia especfica. En las protenas naturales se observan un total de 20 aminocidos, que de acuerdo a como se ordenen, formarn los diferentes tipos de protenas. El molde para formar las protenas esta codificado en la cadena de ADN. Cada aminocido es codificado por 3 nucletidos, los cuales constituyen un codn. Debido a que existen cuatro bases diferentes (A, T, C, G) el nmero posible de combinaciones y por ende de aminocidos sera 43=64. Como los aminocidos son solamente 20, se deduce que existe ms de un codn para la mayora de los aminocidos. La informacin del ADN es transcripta primeramente a ARNm, utilizando al primero como molde. El mensajero pasa del ncleo al citoplasma, donde ocurrir la sntesis proteica. La lectura del mensajero es mediada por otro tipo de ARN, llamado ARN de transferencia (ARNt), que posee una secuencia complementaria a cada codn, llamada anticodn. Debido a que cada codn posee una secuencia especfica, existen tantos ARNt como aminocidos. Objetivos: Asimilar los conceptos de transcripcin y traduccin. Comprender la naturaleza y caractersticas del cdigo gentico. Entender el mecanismo por el cual se transmite la informacin del ADN hasta las protenas. Materiales: Elementos de dibujo (hojas blancas, lpices, etc.) Fibras de diferentes colores Un libro de texto de Gentica general Actividades: A partir de la secuencia hipottica de ADN entregada por la Ctedra, los alumnos debern transcribir el ARN mensajero correspondiente. Suponiendo que este no posee intrones, se deber formar un polipptido valindose de una tabla con los codones que codifican cada tipo aminocido. Se deber tener en cuenta que la lectura se realiza en direccin 5-3 y que el codn de inicio es siempre AUG. La tabla se extraer del captulo correspondiente a accin gnica y sntesis de protenas de algn libro de Gentica de texto. Resultados: Se deber detallar mediante un esquema el ARN mensajero resultante. Tambin se deber especificar e ilustrar a que aminocidos corresponden los codones, utilizando un color diferente para cada uno de ellos. Por ltimo, mediante un esquema se detallar la cadena polipeptdica resultante. Bibliografa: Alberts, B., D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts & J. D. Watson. 1989. Molecular biology of the Cell. 2 edicin. Ed. Garland Publ. Inc., New York. 51
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De Robertis, E.M.F., J. Hib & R. Ponzio. 1996. Biologa Celular y Molecular. Ed. El Ateneo, Buenos Aires. Griffiths A.J.F., J.H. Miller, D.T. Suzuki, R.C. Lewontin & W.M. Gerbart. 1996. An Introduction to Genetic Analysis. 6 edicin. Ed. Freeman & Co., New York. Lodish, H., A. Berk, S. L. Zipursky, D. Baltimore & J. Darnell. 2002. Biologa Celular y Molecular. 4 edicin. Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires.
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