Espectro De Absorci on De La Clorola.

L opez Hern andez Leonardo.

Laboratorio de F sica Moderna, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Aut onoma de M exico, Ciudad Universitaria, 04510, D.F., M exico. Noviembre 20, 2013

Resumen
Se estudia el espectro de absorci on de la clorola obtenida de una muestra de 3 gr. aproximadamente de espinacas, el proceso se llev o a cabo en varias etapas, utilizando eter de petr oleo, alcohol met lico, eter et lico y agua destilada. Se obtuvo el espectro de absorci on de la clorola utilizando un espectrofot ometro y midiendo la transmitancia a varias longitudes de onda, quitando la contribuci on de la transmitancia debida al eter de petr oleo y alcohol met lico seg un se ten a clorola o clorola . Se cencontr o que la clorola tiene un m aximo en (435 1)nmyotroen(670 1)nm, mientrasquelaclorof ila tiene sus m aximos en (455 1)nmy (660 1)nm.

1.

2.

La clorola absorbe la energ a solar para iniciar el ciclo fotosint etico, la principal propiedad sicoqu mica responsable de esto es la elevada absorbancia que presenta la Obtener a partir de una muestra de hojas de esclorola en el intervalo de longitudes de onda entre 400 pinacas clorola y clorola , utilizando eter de nm y 700 nm. La mol e cula de clorolaa puede absorber un pretr oleo, alcohol met lico y eter et lico. fot on de estas longitudes de onda al excitar un electr on Obtener el espectro de absorci on de ambas clorolas. de los que ocupan los orbitales moleculares que forman dobles enlaces conjugados C=C y C=N de la estructura central que rodea al atomo de magnesio.

Objetivos

Introducci on

Un pigmento es cualquier sustancia capaz de absorber la luz o parte de ella. Como es bien sabido, la luz blanca esta compuesta de varias longitudes de onda que caracterizan a los colores. La mayor a de los pigmentos absorben ciertas longitudes de onda y reejan otras, el espectro es caracter stico de cada pigmento.

3.2.

Diferencia Entre Clorola y

La clorola, es el pigmento verde com un a todas las c elulas fotosint eticas, absorbe todas las longitudes de onLa clorola en disoluci on alcoh olica presenta m axida del espectro visible, sin embargo, reeja la longitud de mos de absorci on en 430 nm y 662 nm, mientras que la onda correspondiente al verde detectado por los ojos. clorola los presenta en 453 nm y 642 nm. La posici on exacta de estos m aximos depende del disolvente que se utilice.

La presencia de un grupo CH3 o CHO en uno de los anillos C4 N diferenc a a la clorola y , respectivamente. La presencia de este grupo funcional altera ligeramente la estructura y energ a de los dobles enlaces conjugados, dando lugar a espectros de absorci on distintos para cada clorola.

3.

Marco Te orico

3.1.

Clorola Y Fotos ntesis

La clorola es una mol ecula compleja, formada por cuatro anillos pirr olicos, un atomo de magnesio y una cadena de tol larga (C20 H39 OH ). En las plantas y otros organismos fotosint eticos existen diferentes tipos de clorolas. La clorola se encuentra en todos los organismos fotosint eticos (plantas, ciertos protistas, proclorobacterias y cianobacterias). Los pigmentos accesorios absorben energ a que la clorola es incapaz de absorber; estos incluyen a la clorola y los carotenos. La clorola absorbe las longitudes de ondas correspondiente al violeta, azul, anaranjado-rojizo, rojo y pocas radiaciones de las longitudes de onda intermedias.

Figura 1: Espectro de absorci on de la clorola y . 1

3.3.

Transmitancia Y Absorbancia

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad I0 incide perpendicularmente sobre una disoluci on de un compuesto qu mico que absorbe luz, el compuesto absorber a una parte de la radiaci on incidente (Ia ) y dejar a pasar el resto (It ), de forma que se cumple: I0 = Ia + It (1)

El proceso de obtenci on de la clorola se hizo en los siguientes pasos: 1.- Se lavaron y quitaron las nervaduras de las hojas de espinacas hasta obtener 3 gr. aproximadamente de espinacas desnervadas. 2.- Se moli o la espinaca en el mortero y se mezcl o con 40 ml de acetona diluida al 80 %. Una vez que la acetona adquiri o un color verde oscuro se ltro la mezcla en un embudo de separaci on. Obteniendo un extracto con los pigmentos de la espinaca. 3.- Al extracto con los pigmentos se le agregaron 50 ml de eter de petr oleo y se mezcl o rotando lentamente el embudo. Se le agregaron 70 ml de agua destilada procurando que resbalara por las paredes del embudo, mientras este u ltimo se manten a en rotaci on hasta obtener una fase superior de un verde intenso. Una vez separadas las dos fases se desech o la parte inferior. 4.- La fase superior que conten a eter de petr oleo se limpi o a nadiendo 50 ml de agua destilada y rotando el embudo hasta que se obtuvieron dos fases. la parte inferior se desech o. Este paso se repiti o dos veces. 5.- Se mezclaron 46 ml de alcohol met lico con 4 ml de agua destilada, y se le agreg o al embudo mezcl andose por rotaci on con la soluci on de eter de petr oleo, form andose dos fases. 6.- Se separaron ambas fases en vasos de precipitado diferentes, la fase superior conten a eter de petr oleo, clorola y carotenos, mientras que la fase inferior conten a alcohol met lico, clorola y xantola. 7.- Se colocaron 50 ml de la soluci on de alcohol met lico en el embudo de separaci on y se le agregaron 50 ml de eter et lico, mezclando por rotaci on. Se a nadieron 5 porciones de agua destilada, procurando que resbalara por las paredes del embudo, hasta que aparecieran dos fases bien denidas. La parte inferior se desech o. 8.- Se colocaron en dos tubos de ensayo 30 ml de la soluci on de eter de petr oleo y de alcohol met lico por searado. Se prepar o una mezcla de 9 ml de alcohol met ilico y 21 mg de hidr oxido de potasio. La mezcla se dividi o por la mitad y se le agreg o a cada tubo de ensayo, se mezcl o agitando un poco. 9.- Se a nadieron 30 ml de agua destilada a cada tubo de ensayo y se mezcl o hasta obtener dos fases en cada tubo. 10.- Se Separaron y se colocaron en recipientes diferentes. El espectro de absorci on de cada clorola se obtuvo empleando un espectrofot ometro Spectronic 21D, colocando parte de las muestras en los recipientes del dispositivo. Se introduc a la muestra con solvente ocupado se tomaba la medic on y se sustitu a por la muestra de la clorola correspondiente y se tomaba la medici on. Esto se hizo 2

La transmitancia (T) de una sustancia en soluci on es la relaci on entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector, que a su vez ha atravesado la muestra, It , y la cantidad de luz que incidi o sobre ella, I0 :

T =

It I0

(2)

La absorbancia (A) es un concepto m as relacionado con la muestra, puesto que indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se dene como el logaritmo de 1/T:

A = Log10 (

1 It ) = Log10 ( ) I0 T

(3)

Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (I0 =It ), la transmitancia es del 100 % e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y por tanto A=0.

4.

Desarrollo Experimental

Para el proceso de la obtenci on de las clorolas y sus correspondientes espectros se utilizaron: Hojas de espinacas, aprox. 3 gr. Acetona Agua destilada Eter de petr oleo Eter et lico Alcohol Met lico Hidr oxido de potasio Embudo de separaci on Vasos de precipitado Mortero Tubos de ensayo Espectrofot ometro SPectronic 21D L ampara de luz oscura

para ambas clorolas. Las mediciones tomadas fueron he- cada una de las clorolas utilizando la ecuaci on (3), los chas sobre la transmitancia de las muestras puesto que la datos de la absorbancia se presentan en el anexo. La gr aabsorbancia se saturaba r apidamente. ca de cada uno de los espectros de absorci on se dan a continuaci on:

Figura 5: Espectro de absrci on para la clorola .

Figura 2: Montaje experimental, el embudo de separaci on se sujet o a un soporte universal y unas pinzas de nueces.

Figura 6: Espectro de absrci on para la clorola . Puestas ambas gr acas en una sola se puede apreciar las diferencias mostradas en el espectro de absorci on de ambas clorolas: Figura 3: Muestra de clorola puesta a la exposici on de la luz de una l ampara de luz oscura, en ella se muestra el fen omeno de uorescencia.

Figura 7: Comparaci on de los espectros de absrci on para la clorola y la . Figura 4: Muestra de clorola puesta a la exposici on de la luz de una l ampara de luz oscura, en ella se muestra el fen omeno de uorescencia.

6.

Discusi on

5.

Resultados Y An alisis

Se tomaron las mediciones de la transmitancia, con estos datos se obtuvieron los datos para la absorbancia de 3

Los datos de la absorbancia fueron obtenidos utilizando la ecuaci on (3), en la pr actica se obtuvieron los datos de la transmitancia para cada longitud de onda y para ambas muestras de clorola, teniendo cuidado de restar el efecto de la transmitancia dada por el solvente

en cada caso; es decir, se le rest o a la transmmitancia de Con esto se comprueba que las longitudes de onda que la clorola la transmitancia debida al eter de petr oleo son mejor aprovechadas por las plantas para realizar el y an alogamente se hizo con la clorola . proceso de fotos ntesis son aquellas en donde la absorc on es m axima, en esta regi on todos los fotones fotosint eticos Los picos obtenidos en las gr acas de la clorola se ser an absorbidos y se tendr a una mayor eciencia durante encuentran en (435 1) nm y en (670 1) nm, mientras el proceso. que para la clorola los m aximos se encuentran en (455 1) nm y (660 1) nm. Los picos aceptados para ambos espectros se encuentran en: 430 nm y 470 nm Referencias para la clorola , mientras que para la clorola se [1] D. Harris, Symmetry and Spectroscopy, Dover Puencuentran los m aximos en 480 nm y 630 nm. blications, 1978. El error porcentual de las mediciones es poco, para el primer y segundo pico de la clorola se tienen 1.01 % y 0 %, respectivamente, mientras que para el primer y segundo pico de la clorola se tienen 5.2 % y 4.52 % respectivamente. [2] Espectrofotometr a Espectros de Absorci on y Cuanticaci on colorim etrica de Biomol eculas; Nieves Abril D az et alt; Depto. de Bioqu mica y Biolog a molecular; Campus Universitario; Universidad de Rabanales. [3] Manual de Laboratorio de F sica Contempor anea II.

7.

Conclusiones

Se logr o obtener ambas clorolas y de una muestra de 3 gr. aproximadamente de espinacas lavadas y desnervadas, esto se comprueba observando las guras 3 y 4, en ellas se muestra que los dos tipos de clorola exhiben uorescencia, esto es caracter stico de las clorolas y otros pigmentos, es decir, ambas muestras emit an una longitud de onda diferente a la cual estaban expuestas. Tambi en se encontr o el espectro de absorci on para cada una de las clorolas, las discrepancias observadas al comparar la gura 1 con la gura 7 pueden deberse a que la concentraci on del solvente utilizado no es la misma a la utilizada en esta pr actica. Sin embargo, se observa el comportamiento debido, es decir ambas clorolas tienen un pico de m axima absorci on en longitudes de onda no correspondientes al color verde, mientras que la m nima absorci on se encuentra en el rango de las longitudes de onda correspondientes al verde, el m nimo de absorci on indica un m aximo en la transmitancia, es decir la longitud de onda incidente es reejada, de aqu que las plantas se vean de color verde pues la clorola reeja dicha longitud de onda.

[4] Intro. al an alisis gr aco de datos experimentales, Berta Oda Noda, Editorial Las Prensas De Ciencias.