Rhizobium etli, una bacteria benfica de frjol

Enviado por syanez 1. Resumen 2. Introduccin y Antecedentes 3. Material y Mtodos

4. Resultados y discusin

5. 6. iteratura consultada Resumen Rhizobium etli es una rizobacteria benfica del frjol porque fija N2 en los ndulos de sus races, cuando estas plantas se siembran en el suelo sin suficiente nitr eno inor !nico combinado, que supla la demanda nutricional del frjol. "ientras que para e#itar que insectos$pla a anulen este efecto positi#o de R. etli en la le uminosa. %n la a ricultura con#encional es necesario aplicar pesticidas para proteccin de los culti#os #e etales. &os resultados de este trabajo indican la factibilidad de seleccionar R. etli que conser#e su capacidad de nodular ' fijar N2, al mismo tiempo que sea tolerante a pesticidas, lo que ase ure su efecto positi#o en la produccin sostenible de frjol. !alabra clave" (imbiosis, ndulo, pla as, eficacia. Introduccin y Antecedentes &a fijacin biol ica de nitr eno atmosfrico )*+N,, constitu'e una fase cla#e del ciclo del nitr eno en la naturaleza, su forma molecular N2 no es absorbida por los eucariotes como las plantas e-cepto por ciertos procariotes, aunque las le uminosas lo .acen directamente en simbiosis con la bacteria del nero Rhizobium )/le-ander 1011, 1011,. &a simbiosis representa un a#ance e#oluti#o trascendental aplicable a la a ricultura para el apro#ec.amiento racional de recursos naturales. (in embar o la produccin sostenible ' se ura de frjol requiere pesticidas que eliminen los insectos$pla a que lo atacan, peor que no afecten la acti#idad de beneficios de R. etli. /l respecto la informacin sobre R etli es contradictoria )2larid e ' (c.imitz 10134 *er uson ' 5orte 1011,. 6a que se reporta que R. etli se in.ibe con concentracione bajas de 778 ' *olidol, inferiores a las que se recomienda en el campo para el control de insectos$pal a, en contraste se reporta que otras bacterias del suelo, los metabolizan al usarlos como fuente de carbono ' ener a )9uplal ' (a-ena, 1032,, como los neros:

Pseudomonas, Streptomyces, Micromospora, Thermoactinomyces, Nocardia ' Mycobacterium )7as ' "ur.erjee 2;;;4 5antac.ote et. al. 2;;1,. /corde con estos reportes la nodulacin por Rhizobium en las le uminosas se anula o reduce por pesticidas )/le-ander, 1011, 1011,, porque en principio stos afectan la #iabilidad de la bacteria adem!s de la capacidad de 9 etli para ndular races, en consecuencia la posibilidad de la *+N )(ommer#ille ' <rea#es, 1031,. &os objeti#os de este trabajo fueron aislar ' seleccionar Rhizobium etli benfico para frjol resistente a diazinn. Material y Mtodos =.$ >ri en ' mantenimiento de R.etli: &os aislados de R. etli resistentes a pesticidas, se obtu#ieron de frjol de acuerdo al criterio de ?incent, )1015, colectados del campo a rcola e-perimental del 9o +ra#o )2/%9=+,, del =N=*/@, de 9o +ra#o, 8amaulipas, "-ico, se desi naron con las cla#es: 2$6, <$2 ' 9$=, 1. &os aislados se resembraron en / ar %-tracto de le#adura manitol 9ojo 2on o )/%&"92, A&: 52B@>C ;.54 " (>C ;.24 Na2l ;.14 manitol 1.;4 e-tracto de le#adura 1.;4 rojo con o 1;.; mlA& )de una solucin 145;;,4 a ar$a ar 2;.;4 a ua destilada 1;;;.; ml4 pB 1.; #uadro $o% &% 2aractersticas de Rhizobium etli sil#estre de este trabajo pre#io a su seleccin natural para tolerar pesticidas, infecti#os ' efecti#os. /islados )cla#e desi nada, No. de nduloAplanta /ltura de planta )cm, 2olor de .ojas 2$6 D21c 23c 2$2 23c 23c 9$1 C;E 3;c ?erde intenso

#erde intenso #erde

Dletras i uales son estadsticamente similares se Fn 8uje' )pG;.;5,. nH1;. 2. /cti#acin de aislados de R. etli %n este ensa'o se utilizaron tres pesticidas de uso comFn en 9o +ra#o, 8am. "-ico, 7iazinn );,;$7ietil, ;$2, isopropil, C$mentil pirimidil, 6$ fosforotionato, I 5e#in )= $ Nap.'l IN$ met.'carbamato,, cApesticida se a re al /%&"92 en concentracin de: 25;, 3;;, 5;; ' 1;; ppm. &os aislados de R. etli se sembraron en matraz nefelomtrico, se incubaron de 2C a 36 ., en a itacinA2;; rpm, paralelamente se obser#: la forma, el color ' el tamaJo de as colonias en /%&"92 al tolerar los pesticidas. &a adaptacin de R. etli a cApesticida se lo ro por incremento radual, que es una estrate ia de seleccin natural de mutantes.

3. (eleccin de R. etli mutante resistente a pesticidas: C. @rueba de infecti#idad ' efecti#idad de los mutantes de R. etli resistentes a diazinn. &os mutantes de R. etli adaptados al pesticida que conser#aron su capacidad de nodular ' de fijar biol icamente N2, se incubaron en semillas de frjol con el pesticida, pre#ia desinfeccin, se sembraron en jarras de &eonard )?icent, 1015,. &a planta se alimento con una solucin mineral para #e etales. %st! se prepar de la si uiente manera: 1 molar de 52B@>C, 5B2@>C, 2a2l2, " (>C, B2>, trazas de *e(>C41 ml de solucin de elementos menores en 1;;; ml de a ua destilada4 pB 1 ' se pasteuriz )0;K2A1;min, en in#erandero por C5 dias, para ello la planta se saco completa de la jarra, ' se determino el nFmero de ndulos efecti#os en la raz, as como el peso fresco ' seco de esos ndulos, incluso se midi la altura de la planta. %stas #ariables$respuesta se usaron como indicacin de la conser#acin de la infecti#idad e efecti#idad en el R. etli seleccionado por su m!-ima tolerancia a diazinon. 1.C %#idencia de que R. etli coometabolizo el diazinn en el medio de culti#o. R. etli resistente se inocul en matraz con caldo e-tracto le#adura manitol rojo con o )2%&"92, ' el pesticida, el matraz se coloco en a itacin constante 3;;rpm .asta que alcanzar la fase estacionaria a las 3;.. Resultados y discusin" =.$ >btencin de mutantes R. etli resistentes a diazinon: %n este trabajo se aislaron mutantes de R. etli resistentes a diazinn que mantu#ieron su infecti#idad ' efecti#idad en el frjol como se muestra en el cuadro 2, lo que su iere que la bacteria se adaptado al pesticida, 'a que este no caus perdida de los pl!smidos dependientes con la nodulacin ' fijacin biol ica del N2 )5antac.ote et al., 2;;3,. #uadro $o% '. =nfecti#idad ' efecti#idad de Rhizobium etli tolerante a diazinn. (enolo)a 7i!metro de la .oja )cm., /ltura de la planta )cm., NFmero de ndulosAplanta @eso seco de raz ) ., @eso seco de ndulos )m ., 52;b 530a 12;c 516b 53Ca 1;0c 23b 21b C.3b 3;a C;a C.0b 5.3b 23b 23b 5.Ca C.2c 13.1c 10c C.3b 5.;b 25.2b 33a 3.5c C.;c 10.;c 12c 5.3a 3.0c R. etli silvestre 2$6 2.1bD 9$1 3.5a <$2 3.Ca R. etli mutante 2$6 2.1b 9$1 3.6a <$2 3.2a

@eso seco del follaje ) ., 6.;a

D&etras i uales sin diferencia estadstica si nificati#a );G;.5, se Fn 8uLe'. nH2;, %n el cuadro 3 se muestra que los mutantes de R. etli resistentes a diazinn, produjeron un nFmero similar de colonias en /%&"92 sin el pesticida, en donde no se re istr diferencia entre R. etli sil#estre ' su mutante resistente a diazinn, lo cual apo'a la factibilidad de seleccionar Rhizobium a este tipo de pesticidas )(mit. et al., 2;;;,. #uadro $o% * %stabilidad de resistencia de Rhizobium etli a diazinn Aislado +clave, 2$6 9$1 <$2 AE MR# con diazinn AE MR# sin diazinn 23c 32c C0b 31c 30c 61a

Mnidades formadoras de colonias -1;2Aml D/%&"92H/ ar e-tracto le#adura manitol rojo con o. D&etras i uales sin diferencia si nificati#a )G;.;5, se Fn 8uLe'. %n el cuadro No. C se muestra que R. etli fue tolerante a diazinn por su capacidad de adaptacin fisiol ica al pesticida, lo que prueba que esta resistencia de Rhizobium a diazinn, puede ser usada para re istrar su comportamiento en el campo, en zonas a rcolas donde las le uminosas tienen problema con los insectos$pla as de raz ' ello limita su produccin )/le-ander, 10114 7as ' "uL.erjee, 2;;;,. #uadro $o% - Mtilizacin de diazinn como Fnica fuente de carbono por Rhizobium etli. Aislados +clave, 2$6 9$1 <$2 AE R# sin diazinn 33c C;b 50a AE R# con AE MR# con AE MR# sin .iazinn 3;c 31c 5;a manitol y diazinn 1;d 3d 13d manitol ni diazinn 1 ; 2

M*2 )Mnidades formadoras de coloniasAml,. D &etras i uales sin diferencia estadstica si nificati#a. )G;.;5, (e Fn 8uLe'. D /%&"92. %stos resultados muestran que el diazinn no se us como fuente de carbono, pero si se coometabolizo, pues al suprimir el manitol ' a re ar solo diazinn, el crecimiento de R. etli se in.ibi. /dem!s se encontr que los mutantes de R. etli fueron resistentes a diazinn, malat.in ' ser#in4 pesticidas aplicados en frjol, para prote erlos del ataque de insectos pla a ' que no afectan su capacidad infecti#a ' efecti#a para *+N. &a concentracin m!-ima a la cual la bacteria fue resistente a los pesticidas, fue ma'or a la aplica en el campo, por lo que el tipo de R. etli mutante es posible usarlo como

inoculante en la produccin de frjol sin nin Fn problema )7as ' "uL.erjee, 2;;;4 5antac.ote, et al 2;;1,. #onclusin &os resultados obtenidos indican que es posible diseJar un medio de culti#o selecti#o, con diazinn, para recuperar R. etli de un suelo a rcola no esterl. %sto indica que es factible resol#er el problema de la aplicacin de inoculantes a base de Rhizobium etli con el uso obli ado de pesticidas en sitios, en donde aFn no se aplica otra forma biol ica de combatir insectos$pla a. A)radecimientos /l @ro'ecto 2.1 )2;;5$2;;6, de la 2=2$M"(NB por el apo'o a esta publicacin, a Neannet. 2aicedo 9en ifo por la escritura. iteratura consultada 1.$ /le-ander, ". 1011. +ioc.emical ecolo ' of microor anisms. /nn. 9e#. "icrobiol 25:361$302 2.$ /le-ander, ". 1011. =ntroduccin a la microbiolo a del suelo. /<8 %d. pp:C63$ C31. 3.$ 2larid e, 2./. and (c.mitz, B. 1013. "icro#ial and c.emical transformations of some 12,13$%po-'tric.otec. /pp. %n#iron. "icrobiol. 36:63$61 C.$ *er uson, N. and 5orte, 5. 1011. %po-idation of aldrin to e-o aldrin b' soil bacteria. /ppl. %n#iron. "icrobiol 3C:1$13. 5.$ 9uplal 9. and (a-ena, 7."., 1032. /ccumulation metabolism and effects of or anoc.lorine insecticides on microor anisms. "icrobiol. 9e#. C6:05$121. 6.$ 7as /.2. and "uL.erjee 7. 2;;;. (oil application of insecticides influences microor anisms and plant nutrients. /ppl (oil %colo ' 1C:55$62. 1.$5antac.ote 7., Naidu, 9., (in leton =., "c2lure N. and Barc.. +. 7.. 2;;1. 9esistance of microbial populations in 778$contaminated and uncontaminated soils. 16:35$0;. 3.$ (mit. ". 7, Bartnett 7.2. and 9ice 2.O. 2;;;. %ffects of lon $term fun icide applications on microbial properties in tall ras prairie soil. (oil +iol. +ioc.em. 32:035$ 0C6. 0.$ (ommer#ille &., <rea#es, ".@., 1031. @esticide %ffects on t.e (oil "icroflora. 8a'lor and *rancis, &ondon pp:2C;. 1;.$ ?incent, N". 1015. "anual practico de 9.izobiolo a. %d Bemisferio (ur. /r entina.

.e una E, /ustavo0%, !e1a2#abriales, 3uan 3ose 00 45nchez2651ez, 3uan Manuel% 000 D"icrobiolo a =ndustrial ' del (uelo. *acultad de 2iencias +iol icas. Mni#ersidad /utnoma de Nue#o &en, "onterre', N.&. "-ico. /pdo. @ostal C1C, (an Nicol!s de los <arza. N. &, "-ico, 2@ 6C;;;. DD "icrobiolo a /mbiental. 2=N?%(8/?$=@N. Mnidad$=rapuato, =rapuato, <to. "-ico. DDD"icrobiolo a /mbiental. %d. +$1. 2.M. =nstituto de =n#esti aciones Pumico +iol icas. Mni#ersidad "ic.oacana de (an Nicol!s de Bidal o autor correspondiente, "orelia, "ic.. 2@ 53;3;. "-ico.