FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS, BIOQUIMICAS Y BIOTECNOLGICAS UNIVERSIDAD CATLICA DE SANTA MARIA

Evaluacin de la actividad enzimtica a partir de los desechos de la quinua (Chenopodium Quinoa) utilizando dos cepas fngicas aisladas de suelos agrcolas de la ciudad de Arequipa Per

Ing. Jos Daniel Vizcarra Llerena,

Ing. Mara Mercedes Vargas Vilca Ing. Domnica Dongo Martnez Ing. Marcos Rueda Enrquez

Arequipa Per

Introduccin
En la actualidad, la sociedad demanda cada vez ms el desarrollo de procesos para la obtencin de productos de utilidad, amigables con el Medio Ambiente.

La tecnologa enzimtica ocupa un lugar importante dentro de la biotecnologa y especficamente, dentro del sector industrial.

Alrededor de un 65% de las enzimas que se producen industrialmente estn de una u otra manera relacionadas con la industria debido a su alta eficiencia y bajo costo de las mismas; por lo que puede considerarse que los diferentes procesos biotecnolgicos, que emplean bacterias y hongos para la obtencin de enzimas, en los que se metabolizan sustratos para elaborar aditivos destinados a la industria.

Los residuos de la cosecha de la quinua propiamente, de la seleccin del grano y eliminacin de los tallos y hojas ya sea para darles una aplicacin como es en la obtencin de harinas, ensilaje, ensaladas crudas o cocidas, concentrado para animales, obtencin de ceniza o materia prima para la fabricacin de papel y carbn, o botarlo sin darle uso alguno e incrementar la contaminacin ambiental; y dado que en el presente ao el gobierno peruano est estimulando la cosecha de la quinua para su exportacin siendo uno de los principales productores de sta el Per, es por ello que:

En el presente proyecto se busca utilizar dichos residuos para la extraccin de metabolitos secundarios, lo que permitira el aprovechamiento al mximo y sostenible de nuestros recursos naturales, as como brindar productos ms amigables al medio ambiente.

A 68 km de la Ciudad de Arequipa se encuentra el distrito de Majes, uno de los veinte distritos que conforman la provincia de Caylloma en el Departamento de Arequipa, bajo la administracin del Gobierno regional de Arequipa, en el sur del Per. Limita por el noreste con el distrito de Lluta; por el sureste con los distritos de Santa Isabel de Siguas y San Juan de Siguas; por el sur con los distritos de Quilca y Samuel Pastor; por el noroeste, con el Distrito de Nicols de Pirola de la provincia de Caman y los distritos de Uraca y Huancarqui de la provincia de Castilla. El Pedregal se encuentra en una altura 1410 m.n.s.m, su suelo es arenoso y presenta un pH de 8.1 que lo hace apto para el crecimiento de la quinua y otros cultivos. El clima es clido moderado, ligeramente hmedo con escasas precipitaciones estacionales de verano, se caracteriza por la presencia de sol en casi todo el ao.

Un catalizador es una sustancia que acelera una reaccin qumica, hasta hacerla instantnea o casi instantnea al disminuir la energa de activacin. Actan en pequea cantidad y se recuperan indefinidamente (Obregn, 2008).

No llevan a cabo reacciones que sean energticamente desfavorables, ni tampoco modifican el sentido de los equilibrios qumicos, sino que aceleran su consecucin.

Qumicamente son protenas que actan como potentes y eficaces catalizadores.

Las dos caractersticas ms destacadas de las enzimas, en su papel de catalizadores son: alta actividad y su especificidad.

Enzimas Fngicas

Objetivos
O Brindar un valor agregado a los residuos de la quinua

(rastrojo)
O Recolectar muestras de las diferentes especies de

quinua sembradas en El Pedregal Arequipa.

O Extraer y medir la actividad celuloltica y pectinoltica

a partir de los residuos de la quinua (rastrojo).

Metodologa
1.- Obtencin de las enzimas de inters Produccin enzimtica
Esterilizacin y pesado del rastrojo Inoculacin del hongo Agregado de la solucin de induccin Agregar buffer acetato ph 4.8 Incubar a temperatura ambiente por 1 semana Mantener en agitacin constante

2.- Extraccin de las enzimas de Inters

Extraccin enzimtica

Lavado con cloruro de sodio al 0.9% Centrifugado a 1000 rpm por 5 min

Filtrado al vacio

Medir la actividad especifica enzimtica

Tabla N 1. Sistemas FES para la extraccin enzimtica

MUESTRA (Rastrojo) Quinua Blanca Quinua Blanca Quinua Blanca Quinua Blanca Quinua Roja Quinua Roja Quinua Roja Quinua Roja INDUCTOR Pectina Pectina CMC CMC Pectina Pectina CMC CMC Solucin de lavado Tween 80 Buffer Tween 80 Buffer Tween 80 Buffer Tween 80 Buffer Aspergillus niger X X X X X X X X Trichoderma sp. X X X X X X X X

3.- Medicin de la Actividad

O Somogy O Mtodo de

Nelson

Bradford
Azucares reductores en las pectinasas.

Actividad especifica de las enzimas para medir azucares reductores

O Kit de glicemia enzimtica

Azucares reductores de las celulasas determinando glucosa como producto final

Resultados

Tabla N2. Sistemas de FES y su produccin enzimtica

Sistemas FES QrPN Buffer QrPN Tween QbPT Buffer QbPT Tween QbCN Tween QbCN Buffer QbPN Tween QrCN Tween QrCN Buffer QbPN Buffer QbCT Buffer QbCT Tween QrPT Buffer QrPT Tween QrCT Buffer QrCT Tween Peso Bruto (g) 48.32 44.80 40.36 39.18 34.94 44.20 36.92 37.38 39.40 37.66 29.14 34.86 37.82 35.52 43.16 36.38 Peso Placa/Tapa(g) 27.12 34.28 27.12 34.28 6.92 6.42 34.28 34.28 27.12 34.28 6.42 6.92 6.42 6.92 27.12 34.28 Peso Neto (g) 21.20 10.52 13.24 4.90 28.02 37.78 2.64 3.10 12.28 3.38 22.72 27.94 31.40 28.60 16.04 2.10 Volumen Enzimas (ml) 13.00 12.00 13.00 12.00 11.00 13.00 12.00 10.00 11.00 12.00 11.00 11.00 11.00 11.00 11.00 13.00

(*) Qr: Quinua Roja, Qb: Quinua Blanca, C: Celulosa, P: Pectina, T: Trichoderma, N: Nger

Actividad enzimtica Pectinoltica del sistema QbNP vs Tiempo

4.00 3.50 (U/mg) U/mg) Actividad Enzimtica ( 3.00 2.50 2.00 Sin tween 1.50 1.00 0.50 0.00
0 20 40 60 80

3.700

2.371

con tween

-0.50

Tiempo (min)

Actividad enzimtica Celuloltica del sistema QrNC vs Tiempo

0.600 0.524 0.477 0.469 0.500 Actividad enzimtica (UA/ml)

0.400

0.300

con tween Sin tween

0.200

0.100

0.000 0 10 20 30 40 Tiempo (min) 50 60 70 80

Actividad enzimtica Celuloltica del sistema QrTC vs Tiempo

20.00 18.00 18.14

(U/mg) U/mg) Actividad enzimtica (

16.00 14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 0 10 20 30 40 50 60 70 80 9.524

sin tween Con tween

Tiempo (min)

Actividad enzimtica Celuloltica del sistema QbTP vs Tiempo

3.500

3.000

2.981

Actividad enzimtica (UA/ml)

2.500

2.000 Sin tween 1.500 Con tween

1.000

0.500

0.000 0 10 20 30

Tiempo (min) 40

50

60

70

80

Conclusiones
O Los rastrojos de la quinua son una fuente alternativa

para la obtencin de enzimas como las celulasas y pectinasas dndole un valor agregado a stos.
O Se recolect rastrojo de Quinua Blanca rosacea y de

Quinua roja.
O La mayor actividad enzimtica del extracto celuloltico

fue a partir de quinua roja, utilizando el Trichoderma sp. y para el extracto pectinoltico fue a partir de quinua blanca utilizando Aspergillus Niger.

FONDECYT - CONCYTEC por financiar el presente proyecto de investigacin. Centro Interdisciplinario de Investigacin de la Catlica (CICA) de la Universidad Catlica de Santa Mara, que brinda el laboratorio y apoyo. Agricultores de El Pedregal por brindarnos las muestras de quinua. Al QF Fernando Torres quien apoya y contribuye de este proyecto.