INFORME EJECUTIVO DEL PROYECTO EVALUACION DE LOS REGULADORES DE CRECIMIENTO ANA/BAP/KIN EN EL ESTABLECIMIENTO IN VITRO DE LA PLANTA Ortiga (Urtica urens

L.) MEDIANTE ORGANOGENESIS DIRECTA A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES. Medelln jueves 13 De febrero De 2014 -Objetivo: Este informe ejecutivo se realiza con el fin de tener una evidencia de que se lleva acerca del proyecto y que esperamos para este ao, que logros queremos obtener, nuestro cronograma y presupuesto del proyecto. -Cmo surgi? El proyecto se vena trabajando desde los ya graduados, estudiantes de la primera generacin del colegio Loyola, Andrs Zapata, Juan Pablo Molina, Daniela Jimnez Guzmn y Santiago Echeverri, los cuales al dejar el colegio dejaron el Proyecto en manos del Profesor y asesor William Enrique Prez Ocampo, que a su vez estuvo buscando integrantes para formar un grupo de investigacin que quisiera continuar con el proyecto. -Pregunta que Orienta la investigacin Cul es la relacin entre las diferentes concentraciones de los reguladores de crecimiento ANA, BAP Y KIN en el establecimiento in vitro de la planta Ortiga (Urtica urens L.) mediante organognesis directa a partir de segmentos nodales? -Objetivo de la investigacin Evaluar los reguladores de crecimiento ANA/BAP/KIN en el establecimiento in vitro de la planta ortiga (Urtica Urens L.) mediante organognesis directa a partir de segmentos nodales -Resumen En la presente investigacin se va a describir el proceso de estandarizacin de la tcnica del cultivo in vitro de la planta ortiga (Urtica urens L.) Se utilizar la tcnica de organognesis directa, es decir, los rganos se originan directamente desde el explante. La tcnica del cultivo in vitro en la ortiga hasta hoy no se ha realizado. Se llevar la planta al sistema in vitro, para ello se tendrn en cuenta cuatro fases. La primera fase consisti en establecer las plantas madres, dichas plantas de obtuvieron en fincas y en viveros; una vez establecida la planta madre, se extrajeron los segmentos nodales y se les realiz un proceso desinfeccin en donde se probaron diferentes concentraciones de NaClO para determinar cul es la cantidad a la que el explante responde mejor en porcentajes de contaminacin y necrosis. En esta fase se hicieron seis repeticiones por cada tratamiento.

Una vez desinfectado el material se continuar con la induccin, en esta fase se realizar la composicin del medio de cultivo MS, en el cual se evaluarn las concentraciones necesarias de reguladores de crecimiento BAP y KIN, aqu tambin se deben hacer al menos tres pruebas por cada concentracin. Luego se proceder a la fase siguiente: La multiplicacin. En esta fase se probaran distintas concentraciones del regulador de crecimiento ANA (cido Naftilactico) con el que mejor tenga resultado en la fase de induccin, por ltimo se tomara le mejor resultado obtenido de la fase de induccin para determinar que concentraciones son ms aptas para la multiplicacin de la Ortiga. Por ltimo se proceder a la fase de aclimatizacin, en esta etapa las plntulas obtenidas se adaptaran a vivir en condiciones naturales. -Cul fue la metodologa utilizada? Establecimiento de las plantas madres: 16 plntulas de ortiga, las cuales se llevaron a un lugar adecuado para su sostenimiento, ah se multiplicaron por medio de esquejes, para poder establecer una gran cantidad de plantas madre. Las plantas fueron controladas en cuanto, plagas, humedad, temperatura. Desinfeccin: Primero se cortaron los segmentos nodales para luego lavarlos con agua corriente, para retirar restos de tierra u otras partculas. Luego se introdujeron los segmentos nodales en etanol al 70% por no ms de 5 segundos para luego dejarse evaporar. Despus de este proceso se sumergieron los segmentos nodales en una solucin de hipoclorito de sodio en distintas concentraciones (Ver tabla 1.1) donde se dejaron 1, 2 y 3 minutos en distintas pruebas. Seguido se enjuagaron los segmentos nodales con agua esterilizada 4 veces.

Tabla 1.1

Induccin: En esta fase se empezar por preparar la composicin del medio de cultivo (MS) en el cual se probarn distintas concentraciones de reguladores de crecimiento los cuales van a ser Furfurilaminopurina (Kinetina) y Benzil Aminopurina (BAP) (ver tabla 1.2.1 y tabla 1.2.2). Las concentraciones de vitaminas, sales y carbohidratos no sern modificados, se usaran las concentraciones del medio de cultivo (MS). Se utilizar el gelificante agar en una concentracin de 0,6 - 1%

Tabla 1.2.1

Tabla 1.2.2

Multiplicacin: En esta fase se probarn distintas concentraciones del regulador de crecimiento ANA (cido Naftilactico) con el que estadsticamente obtenga un mejor tenga resultado en la fase de induccin (X1) (ver tabla 1.3)

Tabla 1.3

Enraizamiento Para esta fase del proceso para poder enraizar los explantes despus de haber pasado por cada una de las anteriores fases. Se utilizan principalmente vitro plantas individuales de un tamao aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin se pasaran a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo de

las auxinas (BAP) en diferentes concentraciones Donde se evaluar la longitud y el nmero de races que broten de dicho explante.

-Resultados Obtenidos (por los autores anteriores). Este ao (2013) Se comenz con la primera fase del proyecto, de acuerdo con los ensayos que se hicieron de desinfeccin se obtuvieron los siguientes resultados: - Ensayo # 1: Con respecto a la contaminacin, el mayor porcentaje se observ en el tratamiento control (T0) con un 100 % de contaminacin, seguido de tratamiento T2 (1,0% NaClO) 75%, los mejores resultados se obtuvieron en los tratamientos T1 (0,5% NaClO) con 12,5 %, T3 (1,5% NaClO) con 25%, y T4 (2,0% NaClO) 25%. En la necrosis de los tejidos se presentaron datos similares con valores que superan el 65%. - Ensayo # 2: El tratamiento T2 (1,0% NaClO) presento el menor porcentaje de contaminacin (25%), mientras que los dems presentaron valores superiores al 50%. Con respecto a la necrosis de los explantes T1 presento el mejor resultado con 37%, seguido de T3 y T4 con 50% y los tejidos donde ms se observ este fenmeno fueron los tratamiento T0,T2 con valores de 66,6% y 75 % respectivamente. - Ensayo # 3: Todos los tratamientos muestran porcentajes de contaminacin superiores al 50%. Los tratamientos T0, T2 y T4 obtuvieron un 33% de necrosis y T1 y T3 un 50%. El promedio de los porcentajes de contaminacin de todos los ensayos mostro que los mejores resultados para los tratamientos T3 y T4 los cuales presentan las concentraciones ms elevadas de NaClO , mientras que la necrosis presento resultados muy similares para todos los tratamientos. Por la semejanza de los resultados se consider no aplicar la prueba de anlisis de varianza, que es la ms adecuada para establecer si hay diferencias significativas en los tratamientos, estadsticamente hablando.

-Que contina Para este ao, se piensa cumplir algunos de los objetivos especficos, adems de realizar y terminar algunas tablas, de desinfeccin, multiplicacin y enraizamiento para asi avanzar una gran y difcil parte del proyecto. -Resultados esperados Debido al comportamiento del material biolgico las fases de induccin est en experimentacin, esperamos poder obtener diferencias significativas entre los tratamientos planteados al igual que en la etapa de multiplicacin, enraizamiento y aclimatizacin. Estas fases sern realizadas por nuestros compaeros del grado noveno que pertenecen al proyecto. Esperamos estandarizar la tcnica del cultivo in vitro para ortiga menor y as poder trabajar en otras fases posteriores en la obtencin directa de metabolitos secundarios y proponer el cultivo de ortiga como una alternativa para los agricultores del pas, as como tambin otra alternativa para los campesinos que pertenecen a los programas estatales de sustitucin de cultivos ilcitos.

CRONOGRAMA AQU
-Presupuestos Pues la verdad el proyecto no representa muchos gastos, ya que todos los reactivos necesarios para la desinfeccin, lo nico que nos hace falta es adquirir las plantas, y para estas seria un costo muy bajo, ya que cada una se estima que tiene un valor aproximado a 5000$, esto significara que si cada integrante de la mesa colabora con 10.000$ podramos comprar 8 plantas, de las cuales podramos sacar un # no muy exacto de segmentos nodales, mnimo podramos sacar unos 2 o 3 de cada planta y esto ya sera un gran avance para el proyecto.