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DIAGNSTICO INMUNOLOGICO

Dra Ma Elena Tosello

El diagnstico inmunomicolgico : diagnstico presuntivo de la infeccin seguimiento de terapia antifngica en las micosis oportunistas ayuda a dar significado clnico del hallazgo del agente en Ex. directo y Cultivos

Del estado inmunolgico del hospedador

TECNICAS INMUNOLGICAS

Ac Ag
Hongos patgenos u oportunistas

Histoplasma capsulatum Paracoccidioides brasiliensis Coccidioides posadasii

Cryptococcus neoformans Aspergillus fumigatus y otras especies Candida albicans y otras especies Otros hongos emergentes

Coccidioides immitis

TECNICAS INMUNOLGICAS
Con un hospedador inmunocompetente

Ac
Inmunodifusin (ID)
TECNICAS MAS USADAS

Contrainmunoelectroforesis (CIE)

Con un hospedador inmunocomprometido

Ag
SE HAN DESARROLLADO DISTINTAS TECNICAS ESPECFICAS DE ESPECIES

TECNICAS INMUNOLGICAS

SIMILITUDES Y DIFERENCIAS
ID CIE

Ambas se realizan a TEMPERATURA AMBIENTE Agar precipitinas


Resultado en 72 hs Econmica

Agarosa
Resultado en 2 hs Menos econmica

Se pueden realizar en cualquier Laboratorio

TIPOS DE ANTIGENOS USADOS


EXOMETABOLITOS
Antgenos que pueden ser protenas o glicoprotenas que son excretadas en el medio de cultivo

Histoplasma capsulatum Paracoccidioides brasiliensis Coccidioides posadasii / C. immitis Aspergillus fumigatus / A. flavus / A. niger / A. terreus

CITOPLASMATICOS
Candida albicans

Antgenos que son obtenidos por ruptura de la pared celular fngica

Cultivos en medio lquido en reposo

INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIN


S AS S

AS

Ag Ag

AS

IDENTIDAD NO IDENTIDAD
Ag

IDENTIDAD PARCIAL

TECNICAS INMUNOLOGICAS
Paracoccidioidomicosis
Deteccin de componentes antignicos de pared
ELISA
Distintas fracciones

43kDa
27kDa

Reacciones cruzadas con histoplasmosis

HSP60

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Histoplasmosis
Deteccin de componentes antignicos de pared
ELISA suero orina

Detecta Ag polisacrido de Histoplasma capsulatum

Reacciones cruzadas

Falsos positivos

TECNICAS INMUNOLOGICAS
Coccidioidomicosis
Deteccin de componentes antignicos de pared
Protena de 47kDa con epitopes de fijacin del complemento y actividad quitinasa Reacciones cruzadas Histoplasmosis Blastomicosis

ELISA

Elguezabal 2005

TECNICAS INMUNOLOGICAS Criptococosis


Deteccin de Ag
Reaccin de aglutinacin de partculas de latex

Detecta en forma cualitativa o semicuantitativa de antgeno polsacrido de pared de Cryptococcus neoformans LCR SUERO

TECNICA DE GRAN ESPECIFICIDAD Y SENSIBILIDAD

TECNICAS INMUNOLOGICAS Criptococosis


Pacientes con septicemia

Falsos positivos

Pacientes con infeccin diseminada por otros hongos Pacientes con artritis reumatoidea
Se corrige con pronasa

Falsos negativos

Inmunocomplejos circulantes Fenmeno de prozona

TECNICAS INMUNOLOGICAS
Infecciones fungicas invasivas (IFI)
Deteccin de componentes no antignicos
1,3 D glucano MARCADOR PANFUNGICO
Aspergillus

Fusarium
Scedosporium Acremonium

Candida
UBICUA Contaminacin en el laboratorio Material descartable libre de hongos y endotoxinas de bacterias

TECNICAS INMUNOLOGICAS
Aspergilosis invasiva
Deteccin de componentes antignicos de pared
Deteccin de galactomanano

Antgeno de pared celular del gnero Aspergillus

Platelia Aspergillus BioRad Francia

ELISA doble sandwich que utiliza Ac monoclonales EB-A2

TECNICAS INMUNOLOGICAS
Candidiasis invasiva
Para fines diagnstico la deteccin de Ag se combina con la de Ac

Deteccin de componentes antignicos de pared


Platelia Candida Ag ELISA -manano ELISA que detecta -manano- Ag mayoritario de pared celular de Candida-

Candida albicans IFA IgG


(Lab Vircell)

Detecta Ac anti-micelio de C. albicans

Deteccin de anticuerpos
Enolasa recombinante del Candida enolasa ELISA Ig G kit (Lab Vircell)

TEST DE EXOANTIGENO
Cuando en los cultivos no desarrollan estructuras de fructificacin especficas

P. brasiliensis H. capsulatum Aspergillus spp Coccidioides spp Sporotrix schenckii merthiolate 0,02% o azida sdica 0,02% 24 hs en heladera

Cultivo del hongo

Se repica e incuba a 28C por 7 a 10 das

EXOANTGENO Inmunoidentificacin de especie fngica Se extrae el lquido, se concentra 25 a 50 veces

Banda de Identidad a las 72 hs

Inmunodifusin con Ag y Ac especficos

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